Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Fenotipik Analizi ve İnsan Cilt lenfosit izolasyonu

14.3K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/52564

⸱

8 Nisan 2016

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Medical Immunology, Department of Laboratory Medicine, Radboud University Medical Centre, 2Department of Dermatology, Radboud University Medical Centre

Bu makalede

Özet

Deride yerleşik T hücrelerini insan derisi biyopsilerinden etkili bir şekilde izole etmek için bir protokol açıklıyoruz. Bu protokol, akım sitometrik analizi ve ex vivo kültür için yeterli sayıda canlı insan derisinde yerleşik lenfosit sağlar.

Özet

İnsan derisi önemli bir bariyer işlevi vardır ve patojenlerin doku homeostazında ve korunmasına katkıda çeşitli bağışıklık hücrelerini içerir. Cilt erişimi nispeten kolay olduğundan, periferik immün düzenleyici mekanizmaları incelemek için ideal bir platform sağlar. aynı zamanda bağışıklık yerleşik sağlıklı deri Davranış immüno hücrelerin ancak, sedef hastalığı gibi iltihaplı deri hastalıklarının gelişiminde önemli bir rol oynar. Gelişmekte olan anlayışlar rağmen, çeşitli iltihaplı cilt hastalıkları altında yatan biyolojinin anlayışımız hala sınırlıdır. biyopsi yapılan deri numunelerinden izole kaliteli (tek) hücre popülasyonları için bir ihtiyaç vardır. Şimdiye kadar, izolasyon prosedürleri ciddi canlı hücre yeterli sayıda elde eksikliği ile engellenmiştir edilmiştir. İzolasyon ve sonraki analizler nedeniyle de elde etmek için geçerli ayrılma işlemleri nedeniyle mekanik ve kimyasal strese, immün hücre soyu belirteçleri kaybı etkilenmişTek hücre süspansiyonu. Burada, otomatik bir doku aynştıncı ve kollajenaz muamelesi ile mekanik deri ayrışmasını birleştirerek sağlıklı ve ilgili her iki psoriatik insan deri T hücrelerinin izole edilmesi için bir tadil edilmiş yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, tek hücre süspansiyonlarının hazırlanması üzerine, CD4, CD8, Foxp3 ve CD11c gibi en bağışıklık soy işaretlerinin ifadesi korur. Başarılı CD4 + T hücre izolasyonu ve sonraki fenotipik ve fonksiyonel analiz örnekleri gösterilmiştir.

Giriş

cilt, vücut ve çevre arasındaki temel arayüz olarak, dış fiziksel, kimyasal ve yaralama, ultraviyole radyasyon ve mikro-organizmalar gibi biyolojik hakaretlerle karşı ilk savunma hattını sağlar. Cilt iki bölme, epidermis ve dermiş içerir ve Langerhans hücreleri, makrofajlar, dendritik hücreler (DC) ve yaklaşık 20 milyar bellek T hücreleri dahil olmak üzere bağışıklık hücreleri, çeşitli tüm kan hacmi 1 'de yaklaşık iki katı sayıda mevcut içerir 2. Verilerin artan vücut deri doku homeostazında sırasında ve çeşitli patolojik durumlarda, hem temel immünolojik fonksiyonu vardır görüşünü desteklemektedir. Normal deride yerleşik bağışıklık hücreleri immüno 3 yapmak için düşünülen ve sedef 4 gibi iltihaplı bozuklukların gelişiminde bir rol oynadığı gösterilmiştir. Psöriatik lezyonlu deride, CD4 + ve CD8 + T hücrelerinin hem obs vardı sızmışerved ve CD4 ve CD8 oranı hastalığın durumu 5 bağlı olarak değişir gösterilmiştir. Bununla birlikte, hücrelerin bu popülasyonlar, mevcut tekniklerin sadece birkaç hücre yalıtılmasını için çalışma zordur.

İnsan derisinden T hücre izolasyonu için şu anda yaygın olarak kullanılan teknikler enzimatik tedavi ile mekanik cilt ayrışmasını birleştirir. İnsan deri biyopsileri yoğun Tripsin, kolajenaz ve / veya EDTA 6-8 gibi enzimler ile inkübe edilir. Cilt germe kuvvetleri ve mekanik ayrıştırma yüksek dirençli bir bariyer doku olduğu göz önüne alındığında, T hücre izolasyon kurulan yöntemleri bu hücre popülasyonlarının zor ve ex vivo hücre kültürü yapar çok az hücre ve canlı hücrelerin daha düşük sayıda üretilen meydan okuma.

Burada, mechan birleştirerek sağlıklı ve ilgili her iki psoriatik insan cildi lenfositlerin izole edilmesi için bir tadil edilmiş yöntem raporenzimatik sindirim kolajenaz ile birlikte otomatik bir doku Dissociator yerine yoğun kıyma kurulan yöntemi kullanarak deri iCal'ın ayrışma. DH'ler ve T hücrelerini içeren çeşitli canlı immün hücre alt tek bir hücre süspansiyonunun hazırlanması sonra görülmüştür. Önemli yüzey markörlerinin CD3, CD4 ve CD8 salgılanma iyi korunmuştur. Bu şekilde hazırlanan hücreler, ex vivo hücre kültürleri veya akış sitometrik analizinde kullanım için hazırdır. Bu protokol başarıyla sedef hastalarının lezyonlu deride türetilmiş tek cilt biyopsisi (4 mm) analizi için istihdam edilmiştir. Sonuçlar cilt ikamet hasta T hücreleri sağlıklı gönüllülere 9 karşılaştırıldığında IL-17 ve IFNy gibi daha inflamatuar sitokinler üretilen gösterdi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

NOT: sağlıklı bireylerden deri biyopsileri, bilimsel kullanım için yazılı veya sözlü aydınlatılmış onam sonra elektif plastik cerrahisi geçiren bireylerin karın cilt leftover elde edilmiştir. insan derisinin kullanımı onaylanmış ve oldu Radboud üniversite tıp merkezi, Nijmegen, Hollanda ve Almanya'nın Essen Üniversitesi insan araştırma Tıbbi Etik Komiteleri tarafından belirlenen yönetmeliklere uygun olarak.

İnsan Cilt gelen Tek Hücre süspansiyonları 1. Hazırlık (a Flow-kabinede Çalışma Steril sonraki Hücre Kültürü ise Gerekli)

  1. Hücre kültürü ortamı hazırlayın: Resim serumu RPMI 1640 + Penisilin / streptomisin (ml nihai konsantrasyonları, 100 ünite / 100 ug / ml) ile + piruvat (0.02 mM) ve Glutamax (0.02 mM) ilave edildi.
  2. Tüm kültür ortamı hazırlayın: kültür ortamı, adım 1.1 +% 10 insan toplanan serumdan (HPS) hazırlanmıştır; 4 ° C'de saklayın. Bizden önce 20 ° C ± 2 orta getiring.
  3. Bir 4mm yuvarlak biyopsi yumruk aleti kullanılarak deri biyopsisi elde edilir ve en fazla 4 saat veya 4 ° C AÇIK 20 ° C ± 2 de 1640 tam kültür ortamında saklayın. Laboratuvarda girişte en kısa sürede biyopsi işleyin.
    NOT: Derinin uzun depolama hücresi verim ve hücre canlılığı etkileyecektir.
  4. mavi kapaklı ayrışma tüp Etiket ve etiketli tüpe 5 ml tam kültür ortamı ekleyin.
  5. steril 6 oyuklu kültür plakasının (toplam 3 delikleri şeklinde), her oyuğa tam kültür ortamı içinde 2 ml ilave edilir. böylece üç durulama toplam elde, tek bir kuyunun içine biyopsi yerleştirmek durulayın, ikinci kuyunun onu taşımak ve bu adımı bir kez daha tekrar etmek steril araçlarını kullanın.
  6. Steril Petri kabı iyi durulanmalıdır deri biyopsisi transfer biyopsi üstünde tam kültür ortamı 100 ul ekleyin ve dikkatlice bir paslanmaz çelik tek kullanımlık steril neşter kullanılarak deri altı yağ dokusu kazıyın.
    NOT: Tholan kritik bir adımdır.
  7. Steril bir Petri kabı 4 küçük parçalar halinde her cilt biyopsisi kesin. Aktarım örnekleri (kadar tüp başına 4 mm biyopsi dört) tam kültür ortamı içinde 5 ml ihtiva eden hazırlanan ayrıştırma tüpüne.
  8. Sıkıca kapaklı tüpler kapatın ve otomatik doku ayrıştırıcı kovanına ters takın. Tüm örnek malzeme rotor bölgede yer olduğundan emin olun.
  9. "Program m_spleen _01" 56 sn için uygun döner hızında biyopsi ayırmak (birlikte bir program kartına cihazın dahili hafızasında veya tarafından sağlanan önceden tanımlanmış bir program) çalıştırarak ayrılma işlemini başlatın.
  10. işlendikten sonra, dissociator gelen ayrılma tüpü ayırmak ve tüm ayrışmış madde tüpün dibinde toplanan olduğundan emin olun.
  11. 37 ° C'de çalkalanan bir su banyosu içerisinde ayrıştırma tüpüne kolajenaz IA (80 mg / ml) ul 150 ilave edin ve örnek inkübe60 dakika ° C. thedissociation tüpüne DNaz I, 100 ul (5 MU / ml) ekleyin, iyice karıştırın.
    Not: kolajenaz ya da hücre canlılığında değiştirecek uzun kuluçka süresi yüksek konsantrasyonlarda eklenmiştir.
  12. Otomatik doku ayrıştırıcı kovana ayrışma tüp takın ve Biyopsiyi bir kez daha ayırmak "programı m_ dalak _01" çalıştırın.
  13. bir 50 ml Falcon tüpü üzerine 70 um naylon hücre süzgecinden yerleştirin. hücre kümeleri / doku enkaz kaldırmak için bu hücre süzgeç ayrışmış örnek malzemeleri uygulamak.
  14. Tüm kültür ortamı, 5 ml ile bir kez hücre süzgecinden yıkayın. 20 ° 'de santrifüje C ± 2, 10 dakika ve aspirat yüzer 450 x g.
  15. Yıkama adımı bir kez daha tekrarlayın. tam kültür ortamı içinde 300 ul tekrar süspansiyon hücre peletleri. Tek hücre süspansiyonları daha fazla analiz için hazırdır; ex vivo hücre kültürü için protokollerle devam etme veya akış sitometri analizine.
  16. Daha fazla i halindentracellular sitokin boyama, 37 ° C de 4 saat PMA (12.5 ng / ml), İyonomisin (500 ng / ml) ve Brefeldine A (5 ug / ml) ve hücreleri uyarır,% 5 CO2 kuluçka akış uygulamadan önce 4 saat sitometri analizi.

Cilt Resident T hücrelerinin 2. Poliklonal Aktivasyon (Ex Vivo Hücre Kültürü)

  1. Yuvarlak dipli 96 gözlü plaka içine kısım 100 ul tek hücre süspansiyonları, (adım 1.15 hazırlandı).
    Not: 4 mm deri biyopsisi her biri için, elde edilen tek hücre süspansiyonları, 96 oyuklu bir plakanın en az iki kuyu ayrılabilir.
  2. anti-CD3 / anti-CD28 mAb ile kaplanmış mikrotaneler (oyuk başına 25,000 boncuk), rekombinant insan sitokin rlL-2 (nihai konsantrasyon 25 U / ml) ve rlL-1β (nihai konsantrasyon 50 ng / ml) eklenir.
  3. % 5 CO2,% 100 nem, 37 inkübe iyi olarak işaretlenmiş levha kapak kültürü plakası Kapak C inkübatör °. orta renk sarıya döndüğünde orta değiştirin.
    Not: Açık bir hücre kolonisi hücre kültürünün 8 gün arasında gözlemlenebilir.

3. İlköğretim Sitometrisi Analizi / kültürlü Cilt Resident T hücrelerinin

  1. PBS +% 0.2 BSA: FACS tampon hazırlayın.
  2. V-tabanlı 96 oyuklu bir plakaya ilgi hücreleri aktarın. 20 ° C ± 2, 2 dakika boyunca 450 x g'de santrifüj ve aspire yüzer.
  3. 100 ul PBS içinde pelletini. 20 ° C ± 2, 2 dakika boyunca 450 x g'de santrifüj ve aspire yüzer.
  4. (: PBS kullanarak 1000 sulandırma 1), 4 ° C'de 30 dakika boyunca sabitlenebilir canlılığı boya konjüge hazırlanmış eFluorescence780 100 ul Leke hücreleri. 20 ° C ± 2, 450 2 dakika boyunca x g ve aspire yüzer FACS tamponu santrifüj 100 ul ekle.
  5. , Gerekli hücre yüzey markörü mAb seçin örneğin: CD45-BV421 (HI30, 1:20), CD3-ECD (UCHT1, 1:50), CD4-PC5.5 (1388,2, 1: 200), CD8-APC-AlexFluo700 (B9.11, 1: 400), CD14-FITC (TUK4, 1:50), CD19-APC-AlexFluo750 (13-119, 1:50), CD56-PE (MEM-188, 1:50), CD25-PeCy7 (BC96, 1:50), CD11c-PeCy7 (BU15, 1:10) ve CD1c-APC (AD5-8E7, 1:10), test edilen her mAb seyreltme faktörüne göre FACS tamponu kullanılarak mAb-karışım hazırlayın. olmayan leke numunesi ile birlikte antikor izotip kontrolü kullanarak kapı ayarlarını tanımlayın.
  6. Her kuyuya hazırlanan mAb-karışımının 25 ul ekle. ışıktan korumak, 20 ° C ± 2 20 dakika kuluçkalayın.
  7. 20 ° C ± 2, 450 2 dakika boyunca x g ve aspire yüzer FACS tamponu santrifüj 100 ul ekle.
  8. Sadece hücre yüzey boyama gerektiren numuneler için, adım 3.16 ile devam edin.
  9. hücre içi Foxp3 boyama durumunda:
    1. seyrelticiler 3 parça ile, konsantratın bir kısım karıştırılarak tespit ve permeabilizasyon tamponu hazırlayın.
    2. 1x permeabilization tampon hazırlayın: sterilize H 2 O 1 kısım 10x permeabilization tamponu + 9 parça
  10. fiksasyon ve permeabili 100 ul pelet tekraryon tamponu, iyice karıştırın ve 4 ° C'de inkübe 30 dakika ° C.
  11. 450 2 dakika boyunca oda sıcaklığında xg, ve aspirat yüzer her şey, santrifüj 100 ul permeabilizasyon tamponu ekleyin.
  12. permeabilizasyon tamponu bir kez daha hücreleri yıkayın.
  13. Örnek için gerekli hücre içi mAb seçin, Foxp3-eFluo450 (PCH101, 1:50), IL-17A-AlexFluo488 (eBio64DEC1, 1:50) ve IFNy-PeCy7 (4S.B3, 1: 400). Test edilen her bir mAb seyreltme faktörüne göre% 2 normal sıçan serumu içeren permeabilizasyon tamponu kullanılarak mAb'ler karışım hazırlayın. olmayan leke numunesi ile birlikte antikor izotip kontrolü kullanarak kapı ayarlarını tanımlayın.
  14. Her kuyuya hazırlanan mAb karışımı 20 ul ekle. 4 inkübe ışıktan korumak, 30 dakika boyunca ° C.
  15. 30 dakika inkübasyondan sonra, her kuyuya permeabilizasyon tampon 100 ul ilave edin. 20 ° C ± 2, 2 dakika boyunca 450 x g'de santrifüj ve aspire yüzer.
  16. Permeabilization Buffe hücreleri yıkayınr bir kez daha. microFACS tüpe 110 FACS tampon ul, ve transfer hücre süspansiyonları içinde süspanse pelet.
    NOT: Örnek 10 renkli akım sitometri kullanarak ölçüm için hazırdır.
  17. Gerekli olan tam hücre sayısı halinde hemen akış sitometrisi kullanılarak ölçümler önce her numune içine florosferlerin iyi karıştırılmış düzgün süspansiyonu 10 ul ekle.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Burada sunulan protokol, tek bir 4 mm deri biyopsisi kullanırken 760 ± 178.000 kadar 615 (± SEM, sağlıklı gönüllülerin cilt demek) ± 2.200 arasında insan derisinden canlı lenfositler (± SEM, sedef hastalarının lezyonlu deriye ortalama) verecektir.

CD45 + hücrelerinin farklı CD4 + T hücreleri (~% 45), CD8 + T hücreleri (% 30) da dahil olmak üzere, sağlıklı bireylerin derisinden türetilen tek hücre süspansiyonları olarak tanımlanır ve CD11c + DH'...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada, verimli insan derisi biyopsi cilt yerleşik T hücrelerini izole etmek için bir protokol mevcut. Bu protokolün avantajı canlı lenfositlerinin nispeten yüksek sayılar izolasyon ve ilgili yüzey belirteçlerinin ifade. Belirlenen hücre alt edildi: CD11c + DH'ler, CD4 + ve CD8 + T hücreleri ve Foxp3 + CD25 + hücreleri. Önemli olarak, izole edilmiş bir cilt yerleşik T hücrelerinin ex vivo kültür çok iyi uygulanabilir ve daha sonra fonksiyonel analiz içi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Sedef hastalarının deri biyopsileri nazik Dr. Andreas Koerber bilimsel kullanım için yazılı veya sözlü aydınlatılmış onam sonra (Essen, Almanya Üniversitesi Dermatoloji bölümü) tarafından verilmiştir.

XH da NSFC 61263039 ve NSFC 11101321 tarafından desteklenmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Tek Kullanımlık Biyopsi PunchKai EuropeBP-40F4 mm
Tek kullanımlık steril neşterlerDalhausen1100000510
nazikMACS C tüpüMiltenyi Biotech130-093-237Mavi kapaklı, ayrışma tüpü olarak kullanılır.
gentleMACS AyrıştırıcıMiltenyi Biotech130-093-235Otomatik doku ayrıştırıcı. Deri biyopsisinin ayrıştırılması için "program spleen_01" kullanılması.
Hücre süzgeci BD35235070 ve mikro; m naylon
96 kuyulu U-alt plakaGreiner Bio-One650180
RPMI 1640Yaşam Teknolojileri22409-015
Sodyum piruvatYaşam Teknolojileri11360-039
GlutaMAXYaşam Teknolojileri35050-061
Penisilin / StreptomisinYaşam Teknolojileri15140-122
İnsan Havuzlanmış Serum (HPS)evde hazırlanan
Kollajenaz ISigma-AldrichC2674Tip 1-A, hücre kültürü için uygun
DNaz ICalbiochem260913
PBSB Braun3623140
BSASigma-AldrichA4503-500G
Sabitlenebilir Canlılık Boyası (FVD) APC-eFluo780eBioscience65-0865-18Hücre fiksasyonundan önce ölü hücreleri boyayın; 1: 1.000'de PBS ile seyreltin
Fiksasyon / Geçirgenleştirme KonsantresieBioscience00-5123-43
Fiksasyon / Geçirgenleştirme SeyrelticieBioscience00-5223-56
Geçirgenlik Tamponu (10x)eBioscience00-8333-56
BV421 Fare anti-insan CD45BD563879Klonu: HI30; seyreltme faktörü 1:50
FITC Fare anti-insan CD14DakoT0844Klon: TUK4; seyreltme faktörü 1:50
PE Fare anti-insan CD56DakoR7127Klon: MOC-1; seyreltme faktörü 1:50
ECD Fare anti-insan CD3Beckman - CoulterA07748Klon: UCHT1; yüzey boyama için seyreltme faktörü 1:50; hücre içi boyama için seyreltme faktörü 1:25.
PC5.5 Fare anti-insan CD4Beckman - CoulterB16491Klon: 13B8.2; seyreltme faktörü 1:200
PeCy7 Fare anti-insan CD11cBeckman - CoulterA80249Klon: BU15; seyreltme faktörü 1:50
APC Fare anti-insan CD1cMiltenyi Biotech130-090-903Klon: AD5-8E7; seyreltme faktörü 1:10
APC-AlexFluo700 Fare anti-insan CD8Beckman - CoulterA66332Klon: B9.11; seyreltme faktörü 1:400
APC-AlexFluo750 Fare anti-insan CD19Beckman - CoulterA94681Klon: J3-119; seyreltme faktörü 1:50
PeCy7 Fare anti-insan CD25eBioscienceAD5-8E7Klon: BC96; seyreltme faktörü 1:50
  PE Sıçan anti-insan CLAMiltenyi Biotech130-091-635klon: HECA-452; seyreltme faktörü 1:
eFluo450 Sıçan anti-insan Foxp3eBIoscience48-4776-42Klon: PCH101; hücre içi boyama; seyreltme faktörü 1:50
AlexFluo488 Fare anti-insan IL-17AeBioscience53-7179-42Klon: eBio64DEC17; hücre içi boyama; seyreltme faktörü 1:50
PeCy7 Fare anti-insan IFNgeBioscience25-7319-41Klon: 4S. B3; hücre içi boyama; seyreltme faktörü 1:400
Akış Sayımlı FlorosferlerBeckman - Coulter7547053Akış sitometrisi için boncuk sayma

Kaynaklar

  1. Clark, R. A., et al. The vast majority of CLA+ T cells are resident in normal skin. J Immunol. 176, 4431-4439 (2006).
  2. Zaba, L. C., Fuentes-Duculan, J., Steinman, R. M., Krueger, J. G., Lowes, M. A. Normal human dermis contains distinct populations of CD11c+BDCA-1+ dendritic cells and CD163+FXIIIA+ macrophages. J Clin Invest. 117, 2517-2525 (2007).
  3. Gebhardt, T., et al. Memory T cells in nonlymphoid tissue that provide enhanced local immunity during infection with herpes simplex virus. Nature Immunol. 10, 524-530 (2009).
  4. Boyman, O., et al. Spontaneous development of psoriasis in a new animal model shows an essential role for resident T cells and tumor necrosis factor-alpha. J Exp Med. 199, 731-736 (2004).
  5. Christophers, E., Mrowietz, U. The inflammatory infiltrate in psoriasis. Clin Dermatol. 13, 131-135 (1995).
  6. Jiang, X., et al. Skin infection generates non-migratory memory CD8+ T(RM) cells providing global skin immunity. Nature. 483, 227-231 (2012).
  7. Havran, W. L., et al. Limited diversity of T-cell receptor gamma-chain expression of murine Thy-1+ dendritic epidermal cells revealed by V gamma 3-specific monoclonal antibody. Proc Natl Acad Sci U S A. 86, 4185-4189 (1989).
  8. Campbell, J. J., et al. CCR7 expression and memory T cell diversity in humans. J Immunol. 166, 877-884 (2001).
  9. He, X., et al. Targeting PKC in human T cells using sotrastaurin (AEB071) preserves regulatory T cells and prevents IL-17 production. J Invest Dermatol. 134, 975-983 (2014).
  10. Clark, R. A., et al. A novel method for the isolation of skin resident T cells from normal and diseased human skin. J Invest Dermatol. 126, 1059-1070 (2006).
  11. Clark, R. A., Kupper, T. S. IL-15 and dermal fibroblasts induce proliferation of natural regulatory T cells isolated from human skin. Blood. 109, 194-202 (2007).
  12. Keijsers, R. R., et al. In vivo induction of cutaneous inflammation results in the accumulation of extracellular trap-forming neutrophils expressing RORgammat and IL-17. J Invest Dermatol. 134, 1276-1284 (2014).
  13. Hybbinette, S., Bostrom, M., Lindberg, K. Enzymatic dissociation of keratinocytes from human skin biopsies for in vitro cell propagation. Experimental dermatology. 8, 30-38 (1999).
  14. Hennino, A., et al. Skin-infiltrating CD8+ T cells initiate atopic dermatitis lesions. J Immunol. 178, 5571-5577 (2007).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Cilt BiyopsisiDoku Ayr t rmaKollagenaz lemiAk SitometrisiH cre S zgeciSantrif jlemeFACS AnaliziEx Vivo K lt rmm n H cre Belirte leri
Fenotipik Analizi ve İnsan Cilt lenfosit izolasyonu
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.