Bir deri altı tümör modelinde tümör-süzücü lökosit subsetleri Değerlendirilmesi

Russell K. Pachynski; Alexander Scholz; Justin Monnier; Eugene C. Butcher; Brian A. Zabel

doi:10.3791/52657

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bir deri altı tümör modelinde tümör-süzücü lökosit subsetleri Değerlendirilmesi

20.1K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52657

⸱

13 Nisan 2015

Russell K. Pachynski¹ , Alexander Scholz³ , Justin Monnier²^,³ , Eugene C. Butcher³ , Brian A. Zabel²

¹Division of Oncology, Department of Medicine, Washington University School of Medicine, ²Palo Alto Institute for Research and Education, Veterans Affairs Palo Alto Health Care System, ³Laboratory of Immunology and Vascular Biology, Department of Pathology, Stanford University School of Medicine

Bu makalede

Özet

Bu protokol, bir fare tümör modelinde tümör mikroçevresi içindeki lökosit alt kümelerinin ayrıntılı değerlendirmesi için bir yöntemi açıklar. Chemerin eksprese eden B16 melanom hücreleri, sinjeneik farelere deri altından implante edildi. Tümör mikroçevresinden alınan hücreler daha sonra boyandı ve akış sitometrisi ile analiz edildi, bu da ayrıntılı lökosit alt küme analizlerine izin verdi.

Özet

Tümör mikro sızmak İhtisas bağışıklık hücreleri neoplazi büyümesini ve hayatta kalmasını düzenler. Malign hücreler sıyrılmak veya hayatta ve gelişmek için anti-tümör immün yanıtları yıkmak gerekir. Tümörler tolerojenik DC işe, immunsupresif düzenleyici T hücreleri (Tregs), ve sitotoksik anti-tümör yanıtları inhibe miyeloid türetilmiş baskılayıcı hücreler (MDSC) gibi bağışıklık farklı mekanizmaları bir dizi "kaçış" yararlanmak. Tümör baskılamasında katılabilir bütün immünostimülatör dendritik hücreler, doğal bir anti-tümör bağışıklık liman doğal katil hücreler ve sitotoksik T hücreleri: Bunun aksine, anti-tümör efektör bağışıklık hücreleri habis büyüme ve genişleme yavaşlatabilir. pro- ve anti-tümör lökositlerin arasındaki denge sonuçta davranış ve transforme edilmiş hücrelerin kaderini belirler; insan klinik çalışmalarda çok sayıda bu karşılanır var. Lökosit alt kümelerinin Böylece, detaylı analiz içindetümör mikro giderek daha önemli hale gelmiştir. Burada, bir fare tümör modelinde tümör mikro-ortamında mevcut infiltratif lökosit subsetleri analiz etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Fare B 16 melanoma tümör hücreleri, C57BL / 6 farelerine deri altından aşılandı. Belirli bir zamanda, tümörler ve çevredeki cilt blok halinde çıkarıldı ve daha sonra akış sitometrisi çok renkli boyandı tek hücre süspansiyonları içine işlenir. Lökosit alt kümesi belirteçleri çeşitli kullanarak, kontrol ve chemerin-ifade tümörler arasında lökosit alt kümelerini infiltre göreli yüzdelerini karşılaştırmak başardık. Araştırmacılar, bağışıklık tümörün mikro-ortamı varlığı ve tümör büyümesinin geleneksel kalınlığı boyutu ölçümleri ile bir araya getirildiğinde, potansiyel olarak bunları, tümör büyümesi üzerinde immün bileşim içinde değişikliklerin etkisini açıklamak sağlayacak çalışma için böyle bir araç kullanılabilir. Böyle bir teknik, herhangi bir tümör modeli tatbik edilebilir olduğu tümör ve mikro-ortam CBir rezeke ve işlenebilir.

Giriş

tümör büyümesi ve teşvik ve regresyon arasındaki denge, kısmen, ^mikro-1,2 bulunan pro- ve anti-tümör infiltre eden lökositlerin dengesine bağlıdır. (TME) tümör mikro çalışma ve özellikle infiltratif lökosit alt-popülasyonunu tespit etmek amacıyla, bir fare tümör modelinde deri altı tümörleri değerlendirilmesi için bir yöntem geliştirdi. tümör mikro okuyan önemi de bilinen ve literatürde desteklenmemektedir. Çok sayıda çalışma, pro- ve anti-tümör infiltre eden bağışıklık hücrelerinin dengesini farede değil, aynı zamanda ^(3,4 gözden) insan üzerinde çalışmalar sadece tümör büyüme sonuçlarını etkileyebilir göstermiştir. Örneğin, Curiel ve diğ.,