Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon

18.7K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/52805

⸱

17 Haziran 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Cell Biology, Columbia University Medical Center, 2The Taub Institute for Research on Alzheimer's Disease and the Aging Brain, Columbia University Medical Center, 3Department of Neurology, Columbia University Medical Center

Bu makalede

Özet

Burada, amiloid-beta'nın doğrudan stereotaksik beyin infüzyonu için bir protokol sunuyoruz. Bu metodoloji, amiloid-beta'nın beyin nöronları üzerindeki kısa vadeli etkilerini ele almak için alternatif bir in vivo fare modeli sağlar.

Özet

Alzheimer hastalığı, yaşlanma nüfusu etkileyen nörodejeneratif bir hastalıktır. Hastalığın önemli bir nöropatolojik özellik amiloid-beta aşırı üretim ve etkilenen bireylerin beyin bölgelerinde amiloid beta plakların birikmesidir. Yıllar boyunca bilim adamları, amiloid beta patolojiyi çoğaltmak girişiminde sayısız Alzheimer hastalığı fare modelleri yarattı. Ne yazık ki, fare modelleri, sadece seçici bir şekilde hastalık özelliklerini taklit eder. Nöronal ölüm, Alzheimer hastalığı olan hastaların beyinlerinde belirgin bir etki fark bu farelerde yoksundur. Nöronlar en zehirli olduğu kanıtlanmıştır amiloid-beta biçimleri - - Bu nedenle, biz ve diğerleri doğrudan amiloid-beta çözünür oligomerik türler beslerken bir yöntem istihdam var stereotaxically beyin içine. Bu yazıda seçkin bir beyin bölgesi amiloid beta seviyelerinin arttırılması, bu cerrahi teknik belgelemek için erkek C57BL / 6J fareler kullanmaktadır.Kolinerjik devre ile bağlıdır bazal ön ile birlikte bu beyin yapısı, hastalığın dejenerasyon alanlarından biri temsil ettiği infüzyon hedef hipokampusun dentat girus olduğunu. Broca diyagonal bant dikey bacak hücre ölümü ve kolinerjik nöron kaybı eşlik eden bir artış iken, stereotaksik infüzyon yoluyla dentat girus amiloid-beta yükseltilmesi sonucu, 1 hafta içinde, dentat girus nöron kaybına yükselerek Bazal önbeyin. Bu etkiler 2 haftaya kadar gözlenir. Elde ettiğimiz veriler mevcut amiloid beta infüzyon modeli, kısa vadede bölgeye özgü nöron ölümünü ele alternatif fare modeli sağladığını göstermektedir. Bu modelin avantajı amiloid-beta mekansal ve zamansal biçimde yüksek olmasıdır.

Giriş

Amiloid-beta (Aβ 1-42) oluşan amiloid lekesi yatakları, Alzheimer hastalığı (AD) patolojisinde önemli bir özelliğidir. Birçok çalışma nöron ölümünü, sinaptik distrofi, kayıp ve disfonksiyonu ortaya rekombinant oligomerik Aβ 1-42 o yüksek veya toksik seviyelere göstermiştir; yanı sıra, öğrenme ve hafıza açıkları 1-4 olarak. Etkilenen beyin bölgeleri hipokampus, korteks ve bazal ön beyin ve amigdala 5,6 gibi subkortikal yapılar yer alıyor. Bugüne kadar, AD Aβ 1-42 patoloji simüle girişiminde birden transgenik fare modelleri vardır. Zorlanma bağlı bu hayvanlar AD seçkin patolojik özelliklerini inceleyerek yararlı olduğunu kanıtlayabilir. Ne yazık ki, 2 transgenik kuşaklar, APP23 ve 5XFAD hariç olmak üzere, bu fareler, tam nöronal kayıp, MS önemli bir yönünü çoğaltma olmadı. Hatta APP23 ve 5XFAD gözlenen nöronal kayıp, nöronal ölüm glikozu ileved birkaç seçme bölgelere 7,8 kadar, ince yaşa bağımlı ve izole oldu.

vahşi tip fare beyin oligomerik Aβ 1-42 doğrudan infüzyon amyloidopathy 1,9,10 nöronal ölüm yönü çoğaltır in vivo modelinde mükemmel içerir. Yaygın olarak kullanılan transgenik fare modellerinin aksine oligomerik Aβ 1-42 infüzyon modeli akut bir mekansal ve zamansal bir şekilde Aβ 1-42 seviyesini yükseltmektir için idealdir. Bu model için, vahşi tip fareler kullanılarak avantajı transgenik fare hatları tanıtılan mutasyon potansiyel dengeleme ya da yan etkileri ortadan kaldırır. Son çalışmalar, hipokampusa Aβ 1-42 toksik düzeylerini beslerken 1 hafta 1 içinde enjeksiyon bölgesinde çok yakın nöron ölümünü ortaya çıkarır göstermiştir. Dahası, Aβ 1-42 kolinerjik nöronların 11 bazal ön beyin için toksik gözlem ile tutarlı olduğunuhipokampus için projeler kolinerjik nöron (BFCN) nüfus etkin bir beyinde izole nöronal devrenin sınavları için izin farelerde, beta-amiloid infüzyon 1,10 izleyen 7-14 gün içinde% 20-50 azalır. Çoğunlukla, kontrol / araç ve oligomerik Aβ 1-42 çözümler hipokampus 12 dentat girus için ipsilateral BFCN projesi yana karşılaştırmalar, sol ve sağ hemisfer 1 arasında yapılacak izin beynin her iki tarafında enjekte edilebilir.

Bu yazıda erişkin vahşi tip C57BL / 6J fareler için detaylı bir ameliyat ve enjeksiyon metodoloji sağlayacaktır. Bu fare suşu nedeniyle araştırma geniş kullanım seçilir. Teknik olarak, herhangi bir beyin bölgesi, ancak burada tekniği açıklamak için bir hedef olarak hipokampusun dentat girus kullanır, infüzyon için hedeflenebilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Not: Tüm hayvan deneyleri için, kurumsal ve bakım ve laboratuvar hayvanlarının kullanımı için ulusal kurallar takip edildi.

1. Cerrahi Cerrahi Aletler ve Çözümler hazırlayın

  1. Tüm paslanmaz çelik cerrahi aletleri otoklavlayın.
  2. Steril moleküler sınıf iyonu giderilmiş damıtma suyu ile 200 derece mutlak etanol seyrelterek% 70 etanol hazırlayın.
  3. Hamilton şırınga 29 G iğne takın. 1 dakika boyunca tekrar tekrar hazırlanması ve çıkarma nanopure su ile Hamilton şırınga ve iğne içini temizleyin. % 70 etanol ile bu işlemi tekrarlayın.
    1. Hamilton şırınga pistonu ve iğneyi çıkartın. Hava Laminer akış kaput O / N parçaları kurulayın.
    2. Kullanımdan önce, 30 dakika boyunca ultraviyole ışığıyla iğne ve şırınga ışın tedavisi.
  4. % 0.9 hacim konsantrasyonuna nihai ağırlığa moleküler sınıf suda NaCl çözülmesiyle tuzlu su çözeltisi hazırlayın. Sterilizasyonu0.2 um gözenekli filtre içinden filtre edilerek çözelti ze.

2. oligomerik Aβ 1-42 hazırlayın

  1. Fa 've diğerleri 13 yayınında tarif edildiği gibi Monomerize tam olarak 5 mM DMSO içinde rekombinan insan Aβ 1-42 yeniden süspanse edin.
  2. Ameliyat öncesi gününde 100 mcM steril (1x) PBS ile 5 mM Aβ 1-42 sulandırmak.
  3. Ezilerek de çözüm karıştırın.
  4. 4 ˚ C de 12 saat Aβ 1-42 çözelti inkübe edin.
    Not: Bu tür PBS DMSO seyreltilerek veya karıştırılmış olarak kontrol çözümleri / Aβ ​​1-42 peptid Aβ 1-42 ile aynı şekilde hazırlanmalıdır tersine çevirir.

Enjeksiyon Koordinatları belirlemek 3.

  1. Tam anterior-posterior (AP), medial-lateral (ML) belirlemek için yetişkin fare beyin atlası kullanın ve dorsal-ventral (DV) ilgi 14 beyin bölgesi için koordine eder.
    Hayırte: Biz bregmadan aşağıdaki koordinatlarla hedef olarak hipokampusun dentat girus aldı tekniği göstermek için: AP, -2,00 mm; ML, 1.3 mm ±; DV, -2.2 mm. AP değeri önceki eksi işareti o bregma 2.00 mm arka olduğunu gösterir. ML değeri önceki ± işaret merkezinden sol ve sağ yönünü gösterir. Son olarak, DV önceki eksi işareti beynin ventral yüzeyinden hareket gösterir.

4. Stereotaksik Çerçevesi Ayarı

  1. Cerrahi yüz maskesi, temiz laboratuvar önlüğü ve steril cerrahi eldiven giyin.
  2. Stereotaksik alet ve% 70 etanol ile fare adaptörü silin.
  3. Tezgahın üzerine steril cerrahi örtü aşağı yatırın.
  4. Steril cerrahi asmak üstünde fare adaptörü ile stereotaksik aleti koyun.
  5. % 70 etanol ile fare ısıtma yastığı silin. Stereotaksik çerçeve yatağın üzerinde ısıtma yastığı yerleştirin. Genel amaçlı Labora kullanınFare adaptör yatağın üzerinde ısıtma pedi aşağı teybe edici etiketleme bant.
    1. Üreticinin talimatlarına göre ılık su sirkülasyon pompası ısıtma yastığı takın.
    2. Sıcak su sirkülasyon pompası açın ve 37 ° C sıcaklığı ayarlamak ve sıcaklığına ulaşana kadar bekleyin.
  6. Üreticinin talimatlarına göre motorlu dikey enjeksiyon miline vidalanarak stereotaksik çerçeve üzerine 29 G iğne ile 50 ul Hamilton şırınga yapıştırın.
  7. Boncuk sterilizatör açın ve üreticinin önceden ayarlanmış sıcaklığa ulaşana kadar bekleyin.
    Not: Bu hayvanlar arasında paslanmaz çelik aletleri sterilize etmek için kullanılır. Bu enstrümanlar sterilizasyon boncuklar ile temas 20 saniye sürer.
  8. Sıcak plaka açın ve 42 ° C olarak ayarlayın ve üstüne temiz bir boş kafes yerleştirin.
  9. Hamilton şırınga stereotaksik çerçeve üzerinde sabit iken motorlu stereotaksik i kullanınnjector Aβ 1-42 çözüm hazırlamak için.
    Not: şırıngaya çözümün fazla 4 ul hazırlayın ve daha sonra enjekte seviyesini ayarlamak için stereotaksik enjektör kullanın. Üreticinin talimatlarına uygun olarak bir enjektör.

5. Hayvan hazırlanması

  1. Ölçek tartmak kullanarak fare ağırlığını belirler.
  2. Periton boşluğu içine (ip) enjekte edilerek 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg ksilazin ketamin / ksilazin kokteyli ile fare anestezisi. Ayak tutam refleks kaybı anestezi derinliği izleyin.
  3. Fare sedasyon sonra saç kesme almak ve kafatası üzerindeki deriyi açığa başını tıraş.
  4. Stereotaksik yatağın üstüne ısıtma yastığı üstüne fare yerleştirin.
  5. Diş görevlisi içeride kesici diş ağzı açık ve yerleştirmek için spatula kullanın. Fare yüzünde burun sabitleyin. Nazikçe ve çok sıkı değil aşağı kelepçe.
  6. Posikafa sabitlemek için kulak yolunun içine ikili kulak çubuklardan yon. Bu kafatası vurur kadar her enine hareket ettirin ve sonra kilitlemek için vidayı çevirin.
    1. Baş hafifçe kafasına aşağı itmek için parmağınızı kullanın güvenli olduğundan emin olmak için. Baş düzgün güvenli ise dışarı vermeyecektir veya basıldığında hareket ettirin.
  7. Nemli tutmak için gözlere göz kremi ya da göz damlası bir damla uygulayın. Gözleri cerrahi işlem boyunca nemli olduğundan emin olun.
  8. Cerrahi alan% 70 etanol ve ardından kafatası üzerinde cilt için betadin çözüm uygulamak için steril pamuklu çubuklarla kullanmak dezenfekte etmek için. Alternatif betadin ve 2 kez daha temizliği% 70 etanol gerçekleştirin.

6. Cerrahi ve İnfüzyon

  1. Kafa derisinin orta hatta bir 2-3 mm'lik kesi yapmak için bir neşter kullanın ve sonra kafatası, dönüm noktası sagital sütür, bregma ve lambda maruz 1.0-1.5 cm kesi hattı genişletmek için düz ince makas kullanınstereotaksik koordinatlar dayanmaktadır s. Ayrı cildi korumak için mikro kelepçeleri kullanın.
    Not: Bregma ve lambda pozisyonları fare beyin atlası "Stereotaksik Koordinatlarda Fare Beyin" 14 açıklanmıştır.
  2. Bir pamuklu çubukla atın steril tuzlu su içinde ıslatın ve kafatasını temizlemek için kullanabilirsiniz. Sonra, kafatası kurulamak için temiz, kuru bir pamuklu bir bez kullanın.
  3. Bregma üzerinde bir nokta işaretlemek için steril ince kalem kullanın. Iğne ucu sadece bregma üzerinde nokta değecek şekilde Hamilton şırınga konumlandırmak için stereotaksik mikromanipülatör kullanın.
    1. DV koordinat kaydedin.
    2. Kafatasının AP ekseni seviyesi iğne ucu lambda noktasını değecek şekilde posterior Hamilton şırınga taşımak olup olmadığını kontrol etmek için.
    3. DV konumunu kaydedin. 0.5 mm içindedir DV bregma ve lambda koordinatları emin olun.
      Not: amaç bregma ve lambda arasındaki DV farkı en aza indirmektir.
  4. M kullanicromanipulator Bregma noktaya geri Hamilton şırınga iğne ucu dönün.
  5. Başlangıç ​​AP pozisyonu kaydedin.
  6. Koordinat başlayan AP'den 2.00 mm çıkarılarak biten AP konumunu hesaplayın.
  7. Koordinat son AP'ye Hamilton şırınga iğnesi yeniden konumlandırmak için mikromanipülatör kullanın.
  8. Geçerli ML koordinat kaydedin.
  9. Sol hesaplayın ve sağ ML biten ekleme veya koordinat ML başlatılmasını 1,3 mm çıkartarak koordine eder.
  10. Biten ML koordinat ya Hamilton şırınga iğne taşımak için mikromanipülatör kullanın.
    1. Her iki biten ML koordinatlara kafatası yüzeyine iğne ucu dokunun ve DV koordinatlarını kaydetmek ve değerler 0,5 mm içinde olduğundan emin olun.
      Not: Gol ML koordinatları biten ikisi arasındaki farkı DV en aza indirmektir.
    2. Bir bitiş kafatası üzerinde yukarı 0.5-1 cm iğne çekin koordinat iken. Th bir nokta işaretlemek için steril ince kalem alınKafatasının e yüzeyi. Kafatasının karşı tarafta için bu adımı yineleyin.
  11. Yolumdan net Hamilton şırınga Salıncak.
  12. Matkap 0,8 mm matkap kafasını takın. , Iki eliyle matkap atın istikrar için masanın yüzeyinde dirsek ayarlamak ve sol veya sağ ML ya koordinat şarpi nokta üzerinde biraz matkap kafasını yerleştirin. Kafatasında bir delik tanıtmak için kafatası yüzeye matkap ucu düşürmek, matkap etkinleştirin. Karşı tarafta için bu adımı yineleyin.
    Not: Bazı kanama yeni tanıtılan deliklerden oluşabilir. Daha sonra kanama varsa kan kurulamak için temiz ve kuru pamuklu bir bez kullanın.
  13. Yeni tanıtılan ML delik ya üzerinde geri pozisyona Hamilton şırınga taşıyın. Sadece kafatası geçmiş Hamilton iğne indirin. Bu noktada beyin delmek için dikkatli olun. Emin olmak için iğne sur kafatası işaret parmağınızı almak ve yavaşça yapmak için kafatası karşı iğne itin geçtie İğne deliği çıkmak değildir.
  14. Başlangıç ​​DV koordinat kaydedin.
  15. Biten DV başlangıç ​​DV koordinat 2.2 mm çıkartarak koordinat hesaplayın.
  16. Koordinat aşağı biten DV iğneyi indirin.
  17. 0.5 ul / dk'lık bir oranda dentat girus içinde Aβ 1-42 4 ul pompalamak için stereotaksik enjektör pompası devreye sokun.
  18. Infüzyon tamamlandıktan sonra, iğne enjeksiyon üzerinden çözeltinin geri akışını en aza indirmek için ilave 1 dakika boyunca yerinde kalması sağlar.
  19. Beynin diğer tarafına iğne taşımak ve 6,13-6,18 adımları tekrarlayın.

7. Hayvan Kaldırma ve Ameliyat Sonrası Bakım

  1. Kulak çubukları ve yüz / burun nöbet sökün. Cihazdan fareyi çıkarın.
  2. Kafa derisi kapatın çekin ve daha sonra sütür ile yara mühür bir öğrenci, standart model forseps kullanın.
  3. Hidrasyon için IP üzerinden fare içine steril serum fizyolojik 1 ml enjekte edilir.
  4. IçindeJECT buprenorfin (0.1 mg / kg) deri altından ağrıyı gidermek için.
  5. O uyanana kadar 42 ° C sıcak plaka üstüne set temiz boş bir kafes içinde fare koruyun, sonra bol gıda ve su ile konut kafesine geri.
  6. Deri altı enjeksiyon yoluyla ağrı kesici 3 gün boyunca her 12 saat buprenorfin yönetme.

8. Dikiş Kaldırma

  1. IP tarafından 100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg xlyazine ketamin / xylazine kokteyl ile fare anestezisi. Not: Bu, 7-10 gün ameliyat sonra yapılır.
  2. Dikiş kaldırmak için bir öğrenci, standart model forseps ve düz ince makas kullanın.
  3. Hidrasyon için IP üzerinden fare içine steril serum fizyolojik 1 ml enjekte edilir.
  4. O uyanana kadar 42 ° C sıcak plaka üstüne ayarlanmış bir temiz boş bir kafes içinde fare koruyun ve ardından bol gıda ve su ile konut kafesine geri.

9. Hayvan Kurban ve Doku İşleme

  1. Fare ve p uyutmak% 4 paraformaldehid 15 ile erfuse beyin kaldırmak ve 16 cryosectioning için işlemek.
    Not: hayvan kurban zamanlaması deneyci bağlıdır. Ancak, bizim çalışmalar için biz 7 ve 14 gün ameliyat sonrası seçti.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

İnsan yeniden birleştirici oligomerik Aβ 1-42 hazırlanması için, bu yöntem, monomerlerin, dimerler, trimerler ve tetramerler (Şekil 1A) 'den oluşan çözünebilir oligomerik türler elde edilir. Bu düşük molekül ağırlıklı Aβ 1-42 türlerin değil, fibriller ve plaklar, nöronlar 1,4,9,17-19 en toksik olduğu çeşitli ortamlarda gösterilmiştir. Oligomerik Aβ 1-42 fare beyninde Aβ 1-42 nöron ölümünü indükleyen olup olmadığını belirlemek için (100 uM stok s...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

1) aseptik teknik kullanır;: deneyci veya cerrah olmalıdır başarılı Aβ 1-42 enjeksiyon elde etmek için 2) doğru doğru koordinatlar ile çıkar beyin bölgesini belirlemek; 3) düzgün AP ve ML ekseninde tesviye beyni stereotaksik çerçeve fare sabitlemek mümkün; 4) hassas mikromanipülatör çalıştırmak için yeteneği var; 5) Uygun post-operatif bakım sağlamak. Bu önemli adımlar takip edilirse, fare gözlemlenebilir enfeksiyonu ile ameliyat hayatta gerekir.

In vitro uyum içinde çalı...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

Teşekkürler

Bu çalışma Ulusal Nörolojik Bozukluklar Enstitüsü tarafından desteklenen ve İnme Alzheimer Hastalığı Araştırma finanse Yaşlanma üzerine (CMT kadar) NS081333, Alzheimer Derneği hibe NIRG-10-171721 ve (UH kadar) Ruh Sağlığı Hibe MH096702 Ulusal Enstitüsü ve Ulusal Enstitüsü hibe edildi (YYJ ve JB) Columbia Üniversitesi, pilot hibe AG008702 de merkezi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Ketamin HCl (100 mg / ml)Henry Schein Medical10490071 kg hayvan başına 100 mg ketamin
Ksilazin (20 mg / ml)Henry Schein Medicalmevcut değil1 kg hayvan başına 10 mg ksilazin
Buprenex (0.3 mg / ml)Henry Schein Medical12177931 kg hayvan başına 0.1 mg buprenex
A ve beta; 1-42David Teplow/UCLAmevcut değil100 μ M; Bu amiloid A & beta makalesinde kullanıldı
; 1-42BachemH-1368Teplow lab A & beta'dan amiloid yerine kullanılabilir
; 1-42American Peptide62-0-80B& beta'dan amiloid yerine kullanılabilir
; 1-42< / sub>Amerikan Peptit62-0-46BA ve beta'yı karşılaştırmak için kontrol peptidi olarak kullanılabilir; 1-42
NU4 Antikoru (Oligomerik Amiloid Antikoru)William Klein/Northwestern U.'dan Hediyemevcut değil1: 2.000 seyreltme
Anti-Amiloid Oligomerik Antikor  (Poliklonal Tavşan)EMD MilliporeAB9234Nu4 yerine kullanılabilir; son kullanıcı tarafından test edilmesi gerekiyor
6E10 Antikoru (Monoklonal Fare) (Amiloid Antikoru)Biolegendsig-393201:1.000 seyreltme
ChAT Antikoru (Poliklonal Keçi)MilliporeAB144P1:100 seyreltme
DeadEnd Florometrik TUNEL sistemiPromegaG3250için üreticinin talimatlarına uyun
InvitrogenP36935ile Prolong Gold Antifade ReaktifiSlaytları kaydırırken kullanın
Fluorogold Fluorochrome, LLCmevcut değil% 2 çözelti
Mutlak Etanol (200 kanıt)Fisher ScientificBP2818-4Novex'i sterilize etmek ve dezenfekte etmek için% 70 etanol yapmak için
10-20 Trisin jelLife TechnologiesEC6625BOXA ve beta'yı ayırmak için; 1-42
Novex Tricine SDS Koşu Tamponu (10X)Life TechnologiesLC1675%10-20 Trisin jelleri çalıştırmak için
Novex Tris-Glisin Transfer Tamponu (25X)Life TechnologiesLC3675%10-20 Trisin jelleri aktarmak için
SuperSignal Western Blot EnhancerThermo Scientific46640A ve beta'yı geliştirmek için; 1-42 sinyali; üreticinin protokolünü takip edin
Protran BA79 Nitroselüloz Lekeleme Membranı, 0.1 & mu; mGE Sağlık Yaşam Bilimleri10402088%10-20 Trisin jelleri aktarmak için
Xcell SureLock Mini-CellLife TechnologiesEI000110-20 Trisin jelleri çalıştırmak için elektroforez aparatı
GenTeal Kayganlaştırıcı Göz JeliNovartismevcut değilAmeliyat sırasında fare gözlerini nemli tutmak için; yerel eczanelerde bulunabilir
 
[header]
Refresh Optive Lubricant Eye DropsAlerganmevcut değil Ameliyatsırasında fare gözlerini nemli tutmak için; yerel eczanelerde bulunabilir; GenTeal
BetadineStoelting50998Spatula'yı sterilize etmek ve dezenfekte etmek için
;VWR82027-490Hayvan ağzını açmak için
Bulldog Serrefines Kelepçeleri (Çene Dims. 9X1.6 mm; Uzunluk 28 mm)Güzel Bilim Araçları18050-28İsteğe bağlı; Enjeksiyon sırasında kafa derisini ayrı tutmak için
Düz İnce Makas (Kesme kenarı 25 mm; Uzunluk 11,5 cm)İnce Bilim Aletleri14060-11Kafa derisini kesmek için
#3 Neşter Sapıİnce Bilim Aletleri10003-12
#11 Cerrahi Bıçakİnce Bilim Aletleri10011-00Kafa derisi kesisi yapmak için
Öğrenci Standart Desen Forcep (Uç Dims. 2,5x1,5 mm; Uzunluk 11,5 cm)İnce Bilim Araçları91100-12Dikiş sırasında kafa derisini kapalı tutmak için
Düzeltici Combo KitKent ScientificCL9990-1201Saç tıraşı için
T / Pompa Ilık Su Sirkülatörü ve nbsp;Kent Bilimsel TP-700Ameliyat sırasında hayvanı ısıtmak için
Yeniden Taşınabilir Savaş Madenciliği Pedi (5" x 10")Kent Scientific TPZ-0510FEAAmeliyat sırasında hayvanı ısıtmak için T/Pump ılık su sirkülatörüne takmak için
Akülü Mikro MatkapÇalma58610Kafatasında delik açmak için 0,8 mm çelik çapak kullanın
Fare ve Laboratuvar Standart Stereotaksik Alet Yenidoğan Sıçan AdaptörüÇalma51615
Sadece Fare için Stereotaksik AletÇalma51730Bunu Stoelting Cat yerine kullanabilirsiniz. # 51615
Özetin Özeti Stereotaksik EnjektörÇalma53311
Kuru Cam Boncuk SterilizatörüÇalma50287Paslanmaz çelik aletleri sterilize etmek için
Steril Cerrahi Örtü (18" x 26")Çalma50981
Hamilton Şırınga 50 ml, Model 705 RN SYR, NDLHamilton Company7637-01Beyin enjeksiyonu için; Farklı çözeltiler için farklı şırıngalar kullanın
29 G İğne, Küçük Hub RN NDLHamilton Şirketi7803-06Beyin enjeksiyonu için Hamilton şırıngasına takmak için
1 ml BD Tüberkülin ŞırıngalarıVWRBD309659Anestezi ve salin uygulamak için
30 G İğne (0.5")VWRBD305106Anestezi ve salin uygulamak için
Taşınabilir Elektronik CS Serisi Tartı (Ohaus)VWR65500-202Anestezi dozunu belirlemek üzere hayvanları tartmak için
Sıcak plaka (Üst Plaka Dims. 7,25x7,25 inç)VWR47751-148Ameliyat sonrası hayvanları ısıtmak için
Sofsilk İpek İpek Sütür C-1 Kesme 3/8, 12 mmCovidienS1173Yarayı kapatmak için
Vetbond Doku Yapıştırıcısı (3M)Santa Cruz Biotechnologysc-361931İsteğe bağlı: yaranın kapanmasına yardımcı olmak için; Sütür ile kullanın.
Pamuk Uçlu Ahşap Şaft Steril AplikatörlerFisher scientific22-029-488Cerrahi yaranın temizlenmesi ve kurutulması için
Fisherbrand Superfrost Plus Mikroskop SlaytlarıFisher Scientific 12-550-15Beyin bölümlerini toplamak için
VWR Mikro Kapak Camı 24 X 50 mmVWR48393241Mikroskop slaytlarını monte etmek için
Thermo Scientific Nalgene Şırınga Filtresi 0.2 & mu; mFisher Scientific194-2520Tuzlu su solüsyonunu sterilize etmek için
Viscot Medical Medline'dan steril çift uçlu cilt markörleriVIS1422SRL91Kafatası üzerindeki koordinatları işaretlemek için
Teplow lab Scrambled A DAPI kullanın % % yerine kullanılabilir Yuvarlak / Konik :

Kaynaklar

  1. Baleriola, J., et al. Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions. Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).
  2. Haass, C., Selkoe, D. J. Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews. Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).
  3. Knowles, J. K., et al. The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).
  4. Troy, C. M., et al. beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation. Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).
  5. Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis. Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).
  6. Gotz, J., Ittner, L. M. Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia. Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).
  7. Calhoun, M. E., et al. Neuron loss in APP transgenic mice. Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).
  8. Oakley, H., et al. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).
  9. Jean, Y. Y., et al. Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death. The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).
  10. Sotthibundhu, A., et al. Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).
  11. Kar, S., Quirion, R. Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology. Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).
  12. Leranth, C., Frotscher, M. Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers. The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).
  13. Fa, M., et al. Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices. Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).
  14. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Second edn, Academic Press. (2001).
  15. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).
  16. Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain. Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).
  17. Jin, M., et al. Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).
  18. Lambert, M. P., et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).
  19. Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2 (6), a006262(2012).
  20. Chakrabarti, M., et al. Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration. Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).
  21. Cirrito, J. R., et al. In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).
  22. Puzzo, D., et al. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).
  23. Puzzo, D., et al. Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory. Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).
  24. Akpan, N., et al. Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).
  25. Fulmer, C. G., et al. Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).
  26. Thakker-Varia, S., et al. The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).
  27. Greferath, U., et al. Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice. The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).
  28. Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band. Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).
  29. Clarke, D. J. Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study. Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).
  30. Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. Amyloid beta mediates memory formation. Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Amiloid beta EnjeksiyonuDentat GirusKoordinat BelirlemeKafatas n n A lmasne Yerle tirmenf zyon Prosed rBazal n Beyin
Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.