Yöntem makalesi

Hücre Etiketleme ve Süperparamanyetik Demir Oksit Nanopartiküller ile Hedefleme

DOI:

10.3791/53099

⸱

19 Ekim 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Cardiovascular Diseases, Mayo Clinic, 2Division of Engineering, Mayo Clinic, 3School of Medicine, Pharmacy and Health, Durham University, 4Regional Center for Applied Molecular Oncology, Masaryk Memorial Cancer Institute, 5Mayo Clinic College of Medicine, Mayo Clinic

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hedeflenen hücre iletimi, çeşitli biyomedikal uygulamalarda yararlıdır. Bu protokolün amacı, hücreleri etiketlemek için süperparamanyetik demir oksit nanopartikülleri (SPION) kullanmak ve böylece hücre iletimi ve lokalizasyonu üzerinde yüksek derecede kontrol için manyetik hücre hedefleme yaklaşımlarını mümkün kılmaktır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre ve terapötik maddelerin hedefli verilmesi hedef dışı sitelerine zararlı etkilerini en aza indirirken hedef yerde tedavi edici etkiyi konsantre biyomedikal uygulamalarda geniş bir fayda sağlayacaktır. Manyetik hücre hedefleme, verimli, güvenli ve basit dağıtım tekniğidir. Süperparamanyetik demir oksit nanopartiküller (spion) biyolojik olarak uyumlu, biyolojik olarak parçalanabilir ve manyetik alanlara duyarlı hale getirmek için hücrelere endocytosed edilebilir. Sentez işlemi manyetit (Fe 3 O 4) oluşturulmasını içerir bir poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA) bir kaplama oluşturmak üzere yüksek hızlı bir emülsiyon ardından nanopartiküller. PLGA-manyetit SPIONs yaklaşık 10 nm çapında manyetit çekirdek içerir, çapı yaklaşık 120 nm olan. Kültür ortamı içinde yerleştirildiğinde, SPIONs doğal hücreler tarafından endositoze ve sitoplazmik endozomlara içindeki küçük kümeler olarak depolanır. Bu parçacıklar, hücreler yeterli manyetik kütle vermekManyetik alanlar içinde hedefleme için izin vermek. Sayısız hücre sıralama ve hedefleme uygulamaları manyetik alanlara duyarlı çeşitli hücre tiplerini render tarafından etkindir. SPIONs da tümör tedavisi veya doku lehimleme yerel hipertermi bir tıbbi görüntüleme kontrast maddesi olarak kullanılmak hedeflenen ilaç ya da gen iletimi, teşhis deneyleri, kuşağın dahil olmak üzere diğer biyomedikal uygulama çeşitliliği bulunmaktadır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücrelerin vücuttaki belirli bölgelere hedefli olarak verilmesi ve yakalanması, çeşitli biyomedikal uygulamalar için arzu edilir. Nöral kök hücrelerin MRG kılavuzluğunda odaklanmış ultrason ile beyne verilmesi, nörodejeneratif hastalık, travmatik beyin hasarı ve inme için olası bir tedavi seçeneği olarak önerilmiştir1. Mezenkimal kök hücreler, doğal tümör-tropik özellikleri nedeniyle tümörlere anti-kanser ilaçları verme yetenekleri açısından incelenmektedir2,3. Kardiyak kök hücreler, miyokard enfarktüsü için olası bir tedavi olarak kalbe verilmiştir4,5. Vasküler stentler, dolaşımdaki progenitör hücreleri yakalamak için CD34 antikorları ile geliştirilmiştir6. Umut verici olsa da, bu hücre hedefleme yaklaşımları, hücre özgüllüğü eksikliği, tutarsız hücre tutulması ve hedef dışı hücre iletimi gibi dezavantajlar sunar.

Mevcut yöntemin genel amacı, çeşitli hücre iletimi ve sıralama uygulamaları için hücrelerin manyetik olarak yönlendirilmiş hedeflemesini sağlamaktır. Manyetik hedefleme, belirli hücrelerin minimum hedef dışı etki ile belirli bir hedef bölgeye kontrollü bir şekilde verilmesine izin verir7. Manyetik alanlar, manyetik olarak etiketlenmiş hücrelerin vücut içindeki hareketini güvenli bir şekilde yönlendirmek için implante edilmiş veya harici cihazlar tarafından üretilebilir8. Çok sayıda araştırma çabası, rejenerasyon sonuçlarını iyileştirmek için kök hücrelerin kalp9-14, retina15, akciğer16, cilt17, omurilik18,19, kemik20, karaciğer21 ve kas22,23 gibi yaralı dokulara manyetik olarak yönlendirilmiş hedeflemesine odaklanmıştır.

Hücrelerin manyetik hedeflemesi, implante edilebilir kardiyovasküler cihazları endotelize etmenin bir yolu olarak da kapsamlı bir şekilde incelenmiştir. Düzgün ve eksiksiz bir endotel, tromboz ve iltihabı azaltmak için cihaz ile dolaşımdaki kan elemanları arasında bir bariyer sağlar. Endotel hücreleri, implantasyondan önce veya implantasyondan sonra vasküler sistem yoluyla cihaza iletilebilir. Her iki durumda da, manyetik alanlar, hücreleri cihazın yüzeyine yakalamak ve dolaşımdaki kan tarafından üretilen kesme gerilimine maruz kaldıklarında hücreleri tutmak için kullanılır. Manyetik vasküler stentler24-27 ve vasküler greftler28 bu amaç için üretilmiş ve test edilmiştir.

Manyetik hücre hedefleme, hücreleri manyetik taşıyıcı parçacıklarla etiketlemek için bir strateji gerektirir. Bu parçacıklar, antikorlar veya ligand/reseptör çiftleri aracılığıyla hücrelerin yüzeyine bağlanabilir veya hücrelere endositoz edilebilir. Süperparamanyetik demir oksit nanopartikülleri (SPION) biyolojik olarak parçalanabilir, biyouyumludur ve çeşitli hücre tipleri tarafından kolayca endositoz edilir29. Bu parçacıklar, bir hücreyi manyetik alanlara etkili bir şekilde duyarlı hale getirir ve zamanla doğal olarak bozulur. SPION'lar, çeşitli manyetik hedefleme ve sıralama uygulamaları için kültürdeki hücreleri manyetik olarak etiketlemek için basit ve güvenli bir yol sağlar. SPION'ların bir manyetit (Fe3O4) çekirdeği ve poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA) kabuğu ile sentezlenmesi için bir yöntem sağlanmıştır. Ek olarak, SPION'larla kültürdeki hücreleri etiketlemek için bir yöntem sağlanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Manyetit Gel 1. Sentezi

  1. Etil alkol ve ardından deiyonize su, ardından konsantre edilmiş hidroklorik asit kullanarak, tüm cam yıkayın. Tercihen bir kurutma fırınında, O / N kurumaya bırakın.
    DİKKAT! hidroklorik asit zararlı - Davlumbaz kişisel koruyucu donanım ve iş giyim; Etil alkol zararlıdır - kişisel koruyucu ekipman giyin.
  2. De gaz kadar deiyonize H2O 500 ml yavaşça 30 dakika boyunca N2 gazı geçirilmesi yolu ile, bir Dreschel şişe kullanın.
  3. Set-up Kimyasal bir davlumbaz içinde manyetit sentez cihazı.
    1. Bir isomantle ısıtıcı içinde 500 ml'lik bir üç boyunlu yuvarlak tabanlı bir şişeye yerleştirilir ve bir kelepçe ile merkezi boyun güvence altına almak ve dur.
    2. Yuvarlak dipli bir reaksiyon yan boyunlarının birinin içine bir kauçuk septum ve diğer yan boyun bir lastik septum ile bir geri akış kondansatörü takın. Sürekli reflü Kondansatörden soğuk su çalıştırın.
    3. Delinme incie yuvarlak tabanlı bir şişe lastik bir N2 gaz hattına bağlı olan bir iğne ile septum ve kabarcık çalışan bir gaz hattına bağlı bir iğne ile geri akış kondenseri lastik septum, delinme (yani, su ile bir şişeye), gaz çıkışı görselleştirmek için.
    4. Bir yandan çarklı adaptör aracılığıyla yuvarlak dipli merkezi boynuna bıçak raket yükleyin. Bir stand üzerine monte edilen bir havai karıştırıcı bıçak pedini mili takın.
  4. N 2 gazı ile yuvarlak dipli temizleyin ve düşük ama algılanabilir hızda akan N2 gazı bırakın.
  5. Yuvarlak dipli bir şişede ila geri akış kondansatörü çıkarın ve demir (III) klorür, demir 0,6125 g (II) klorid tetrahidrat 1.000 g ekleyin ve gazı alınmış H2O 50 mi
    DİKKAT! demir (III) klorür ve demir (II) klorür tetrahydrate zararlı - kişisel koruyucu ekipman giyin.
  6. 50 ısıtılırken, geri akış kondansatörü yerine yerleştirin ve 1000 rpm'de karıştırma° C. Bu koşullar altında karıştırılarak 10 nm çapında manyetit nanopartıküllerin üretir.
  7. Bir kez 50 ° C 'de, yine karıştırılırken yuvarlak dipli bir şişede lastik septum ile enjekte edilerek% 28 amonyum hidroksit çözeltisi 10 ml.
    DİKKAT! amonyum hidroksit zararlıdır - kişisel koruyucu ekipman giyin.
    Not: amonyum hidroksit çözeltisi manyetit çökeltilmesi için kullanılır ve çözelti, siyah dönmelidir.
  8. Hala karıştırılarak amonyak gazı kaynatmak 90 ° C'ye yuvarlak dipli bir şişeye ve ısı kauçuk septum ve N2 gazı hattı çıkarın.
    Not: Bu, geri akış kondenseri lastik septum batırılarak yuvarlak tabanlı bir şişeye N2 akışı sağlamak için isteğe bağlı olarak, ancak, maghemit için manyetit oksidasyonu Bu adım sırasında ihmal edilebilir düzeydedir.
  9. Karıştırmaya devam ederken bir kez 90 ° C 'de, yuvarlak dipli bir şişeye oleik asit 1 ml. Oleik asit Na kaplamak için manyetit kullanılannoparticles manyetit jel oluşturmak için.
    DİKKAT! oleik asit zararlıdır - kişisel koruyucu ekipman giyin.
  10. Yuvarlak dipli bir reaksiyon üzerine kauçuk septum ve N2 gazı hattı değiştirin ve geri akış kondansatörü çıkarın.
  11. 2 saat boyunca 500 rpm'de ısı ve karıştırın kapatın.
  12. Isomantle ısıtıcı yuvarlak dipli çıkarın ve manyetit jel korumak için şişenin dibine düzenlenen güçlü bir mıknatıs kullanırken kalan herhangi bir sıvı süzün.
    DİKKAT! hasar veya yaralanmayı önlemek için son derece dikkatli güçlü bir mıknatıs anlaştım.
  13. (Isteğe bağlı) / N hava kuru O kadar manyetit jel izin verin.

Manyetit Gel 2. saflaştırılması

  1. Manyetit jel erimesi için yuvarlak dipli bir şişeye heksan 40 ml ilave edilir
    DİKKAT! hekzan zararlı - Davlumbaz kişisel koruyucu donanım ve çalışmalarını giyerler.
  2. Kalıntı H2O ileri geri çıkarmak için gazı alınmış, H2O, 40 ml ile bir ayırma hunisi kullanarakmanyetit çözümü m.
    1. Yavaşça bir ayırma hunisine olan H üzerine manyetit çözeltisi 2 O dökün ve yavaşça 5 dakika için iki fazlı sıvı girdap.
    2. Dışarı boşaltın ve alt sulu kısmını atın.
    3. Yavaş yavaş magnetit çözeltisi altına, yerleşir, böylece, ayrı bir huniye gazı alınmış H2O 40 ml ekleyin ve yavaşça girdap ve daha önce olduğu gibi süzün.
    4. Üçüncü kez yıkamak için tekrarlayın.
  3. Bir Erlenmeyer şişesine manyetit çözeltisini susuz sodyum sülfat değer birkaç spatula ekleyin ve girdaplı magnetit çözeltisinden kalan herhangi bir kalıntı H2O çıkarmak için kullanılır.
  4. Sodyum sülfat ve kalan H2O çıkarmak için bir filtre hunisi içinde 1 um'lik filtre kağıdı içinden manyetit çözüm Filtre
    NOT: Vakum yardımı tavsiye edilir.
  5. 50 ml'lik bir buharlaştırıcı balon manyetit çözeltisini ve için heksan buharlaştırılması için bir buharlaştırıcı kullanımı, dönerAşağıdaki koşullar ile 2 h: orta derecede dönüş hızı, vakum, 50 ° C su banyosu içinde balon buharlaştırılması, uygulamalı ve 24 ° C su yoğunlaştırıcı içinde dolaşan.
    Not: İsteğe bağlı olarak, PLGA ile kaplandıktan önce manyetit jel saklayın.

PLGA Shell ile Manyetit Nanopartiküller 3. Kaplama

  1. % 1.5 (kütle / hacim) çözelti oluşturmak için etil asetat 240 ml PLGA, 3.60 g (75/25 karışım) içinde çözülür. DİKKAT: etil asetat zararlı - Davlumbaz kişisel koruyucu donanım ve çalışmalarını giyerler.
  2. Bir% 5.0 (kütle / hacim) çözelti oluşturmak için, bir manyetik karıştırıcı kullanılarak gazı alınmış, H 2 O 500 ml, Pluronic F-127 25,00 g çözündürülür.
    Not: Pluronic F-127, bir biyo-uyumlu yüzey aktif madde olarak hareket eden bir non-iyonik amfifilik blok kopolimerdir. Bu aşama 3.3.2 yağ içinde su emülsiyonu stabilize etmek yardımcı olur.
  3. Bir microspatula kullanarak, ağırlık, cam şişeler içinde altı 0.040 g alikotları manyetit jel toplandı. PerfHer bir kısım için, aşağıdaki kaplama ve yıkama işlemi kapatýnýz.
    NOT: tümbölenler 4. adımda bozulma önce dondurarak kurutma en aza indirirken saflık ve verim maksimize edecek etkin kullanım ve manyetik dekantasyon sağlamak için gereklidir.
    1. 10 dakika boyunca ultrasonik temizleyici bir 0.040 g magnetit jel kısım ve bir plastik kapta sonikasyon PLGA solüsyonu 40 ml ekleyin.
    2. Plastik behere Pluronic çözeltisi 80 ml ilave edilir ve 7 dakika bir yağ-içinde-su emülsiyonu olarak manyetit nano partiküller PLGA kaplama oluşturmak için hemen en yüksek ayarda laboratuar mikseri ile emülsifiye.
    3. Hemen etil asetat buharlaştırılması için kimyasal bir çeker ocak içinde 1 saat süre ile deiyonize H2O ve sonikasyon 1 L spion seyreltilir.
    4. Spion çözüm yanındaki güçlü bir mıknatıs yerleştirin ve yavaşça mıknatıs kahverengi SPIONs toplamak için karıştırın.
      Not: Bu, aralıklı birçok saat için karışmaya gerekebilirçözelti önce s SPIONs çoğu tahsil edildiğini belirten beyazımsı döner.
    5. Mıknatıslı beherde SPIONs koruyarak sulu bir çözelti boşaltacaktır.
    6. Şöyle SPIONs üç kez yıkayın.
      1. Deiyonize H2O 1 L SPIONs Askıya
      2. 20 dakika spion çözeltisi sonikasyon.
      3. Spion çözüm yanındaki güçlü bir mıknatıs yerleştirin ve yavaşça mıknatıs kahverengi SPIONs toplamak için karıştırın. Bu çözelti, SPIONs en toplanmıştır belirten açık döner önce aralıklı birkaç saat karışmaya gerekli olabilir.
      4. Mıknatıslı beherde SPIONs koruyarak sulu bir çözelti boşaltacaktır.
  4. Bir sulu süspansiyon halinde tek bir ağırlıklı bir cam şişe içinde, altı magnetit jel tümbölenini sentezlenebilir SPIONs toplayın. Gerektiği gibi, isteğe bağlı olarak manyetik aşırı su süzün.

4. FreezeSPIONs arasında KURUTMA FIRINI

  1. Spion çözeltisi dondurun.
  2. -Freeze kurutmak bir liyofilizerde spion çözüm O / N.
  3. Dondurularak kurutulmuş SPIONs tartılır. Hücre etiketlenmesi için kullanılana kadar dondurularak kurutulmuş SPIONs -20 ° C'de saklanabilir.
    NOT: -20 ° C'yi dramatik Depolama bozulması kinetik azaltır ve raf ömrünü uzatır.

SPIONs sahip Hücreleri 5. Etiketleme

  1. 40 mg / ml arasında bir konsantrasyonda, fosfat tamponlu salin (PBS) içinde SPIONs bir kısım askıya alma ve 30 dakika boyunca ultrasonik titremeye maruz bırakılır.
  2. Hücre kültürü ortamı, 5 ul / ml arasında bir konsantrasyonda bir hücre, yaklaşık konfluent şişeye spion solüsyonu ekleyin. Yavaşça şişeyi sallanan hatta dağılımını sağlamak.
  3. 37 ° C'de 16 saat boyunca inkübe hücreleri.
  4. Yavaşça kültür ortamı aspire ve PBS ile iki kez hücreleri yıkayın.
  5. Manyetik etiketli hücreleri toplayın ve deneyler için kullanın.
  6. Kullanılmayan spion Çözelti 4 ° C'de saklanabilir ve bize olmalıdırBir kaç ay içinde ed. Her kullanımdan önce 30 dakika sonikasyon.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Manyetit nanopartiküller 50 ° C ve 1000 rpm'de (Şekil 1) demir (III) klorür ve demir (II) klorid tetrahidrat bir sulu çözelti karıştırıldıktan bir sonucu olarak çap olarak yaklaşık 10 nm. Bu sonuçlar, magnetit nanopartiküllerinin başarılı bir sentez göstermektedir. İlk kez sentezi çalışırken toplu küçük bir örnek alınır manyetit nanopartiküllerin büyüklüğü ve şekli kontrol etmek önemlidir. Transmisyon elektron mikroskopi (TEM) bu parçacıkların görselleştirmek için tercih edilen bir yöntemdir. Toplu atıl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Herhangi bir nanoparçacık sentezi protokolü gibi, reaktif kimyasal saflığı en az bir sitotoksik etkiye sahip olacaktır, yüksek kaliteli SPIONs elde edilmesi için çok önemlidir. Oleik asit (% ≥99), demir (II) klorid tetrahidrat (≥99.99%), demir (III) klorür (≥99.99%), etil asetat da dahil olmak üzere oldukça saf reaktifler satın almak için önemlidir (HPLC derece,% ≥99.9 ), heksan (HPLC derece, ≥97.0%), amonyum hidroksit (% ≥99.99) ve sodyum sülfat (≥99.0%). Nispeten pahalı olabilir çok saf ve yüksek kaliteli PLGA satın a...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu – FNUSA-ICRC'den (no. CZ.1.05/ 1.1.00/ 02.0123), Amerikan Kalp Derneği Bilim İnsanı Geliştirme Hibesi (AHA # 06-35185N) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH #T32HL007111).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Amonyum Hidroksit çözeltisi, H2O, &ge içinde% 28 NH3< / sub>; % 99,99 eser metal bazlıSigma-Aldrich338818-100ML & nbsp;Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman giyin
Dreschel şişesi, 500 mlAce Glass5516-16
Etil Asetat, CHROMASOLVR Plus, HPLC için, %99,9 Sigma-Aldrich650528-1LZararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman giyin ve çeker ocakta çalışın
Etil alkolSigma-AldrichE7023Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman kullanın
Buharlaşma şişesi, 50 ml, 24/40 eklemliSigma-AldrichZ515558Rotoevaporatör ile kullanım için
Filtre kağıdı, 3 cm çap, grade 1Fisher09-805PCam filtre hunisi ile kullanım için
Cam beherler, 1 LFisherFB-101-1000SPION'ları yıkamak için
Cam filtre hunisi, vakum hortumu adaptörü, 24/40, 30 mLFisherK954100-0344 
Cam şişe kapaklarıFisher03-391-46Cam şişelerle kullanım için
Cam şişeler, 2 mlFisher03-391-44Manyetit jel toplamak için & SPION'lar
Hexane, CHROMASOLVR, HPLC, & ge için; 97.0% (GC)Sigma-Aldrich34859-1L Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman giyin ve çeker ocakta çalışın
Hidroklorik asitSigma-AldrichH1758Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman giyin ve çeker ocakta çalışın
Demir (II) klorür tetrahidrat, vb; %99,99 eser metal bazında Sigma-Aldrich380024-5GZararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman kullanın
Demir(III) klorür susuz, toz vb.; % 99,99 eser metal bazlıSigma-Aldrich451649-1GZararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman kullanın
Isomantle ısıtıcı, 500 mLVoight GlobalEM0500/CEX1
Laboratuvar karıştırıcıSilversonL5M-A
LiyofilizatörLabconco7670520
MicrospatulasFisher21-401-25AManyetit transferi için jel
NdFeB mıknatıs, 1 inç x 1 inç x 1 inç İnanılmazMıknatıslarC1000H-MÇok güçlü mıknatıs, dikkatli tutun
Oleik asit, & ge; %99 (GC)Sigma-AldrichO1008-5G Dondurucuda saklayın; Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman kullanın
Üstten karıştırıcıIKA2572201
Üstten karıştırıcı kelepçesiIKA2664000Üstten karıştırıcı ile kullanım için
Üstten karıştırıcı H-standıIKA1412000Üstten karıştırıcı ile kullanım için
Fosfat tamponlu tuzlu su LifeTechnologies10010-023
Plastik beherler, 250 mlFisher02-591-28
PLGA PURASORB PDLG (75/25 karışımı)PuracPDLG 7502PDLG 7502A da kullanılabilir; Dondurucuda saklayın
Pluronic F-127 tozu, BioReagent, hücre kültürü için uygunSigma-AldrichP2443-250G 
PTFE genişletilebilir bıçak küreği, 8 mm çapSciQuipSP4018
PTFE kap adaptörü, 24/40, 8 mm çap kürek uyarMonmouth ScientificPTFE Gemi Adaptörü A480PTFE genişletilebilir bıçak küreği ile kullanım için
Devridaim soğutucusuClarkson696613Rotoevaporatör ile kullanım için
Reflü kondansatörü, 24/40, 250 mmAce Glass5997-133'euyar
RotoevaporatörClarkson216949
Kauçuk septa, 24/40Ace Glass9096-56
Tıpalı ayırıcı huni, 250 mlFisher10-438E
Sodyum sülfat ACS reaktifi, > %99,0, susuz, granülSigma-Aldrich239313-500G 
Üç boyunlu yuvarlak tabanlı şişe, açılı, 24/40 eklemli, 500 mlAce Glass6948-16
Ultrasonik temizleyici delikli tavaFisher15-335-20AUltrasonik temizleyici ile kullanım için
Ultrasonik temizleyici, 2,8 LFisher15-335-20
Vakum kontrolörüClarkson216639Rotoevaporatör ile kullanım için (isteğe bağlı)
Vakum pompaClarkson219959Rotoevaporatör ile kullanım için

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Burgess, A., et al. Targeted delivery of neural stem cells to the brain using MRI-guided focused ultrasound to disrupt the blood-brain barrier. PLoS One. 6 (11), e27877(2011).
  2. Nguyen, K. T. Mesenchymal Stem Cells as Targeted Cell Vehicles to Deliver Drug-loaded Nanoparticles for Cancer Therapy. J Nanomed Nanotechol. 4 (1), e128(2013).
  3. Kean, T. J., Lin, P., Caplan, A. I., Dennis, J. E. MSCs: Delivery Routes and Engraftment, Cell-Targeting Strategies, and Immune Modulation. Stem Cells Int. , 732742(2013).
  4. Suzuki, K., et al. Targeted cell delivery into infarcted rat hearts by retrograde intracoronary infusion: distribution, dynamics, and influence on cardiac function. Circulation. 110 (11 Suppl 1), II225-II230 (2004).
  5. Garbern, J. C., Lee, R. T. Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration. Cell Stem Cell. 12 (6), 689-698 (2013).
  6. Duckers, H. J., et al. Accelerated vascular repair following percutaneous coronary intervention by capture of endothelial progenitor cells promotes regression of neointimal growth at long term follow-up: final results of the Healing II trial using an endothelial progenitor cell capturing stent (Genous R stent). EuroIntervention. 3 (3), 350-358 (2007).
  7. Pan, Y., Du, X., Zhao, F., Xu, B. Magnetic nanoparticles for the manipulation of proteins and cells. Chem Soc Rev. 41 (7), 2912-2942 (2012).
  8. Huang, Z. Y., et al. Deep magnetic capture of magnetically loaded cells for spatially targeted therapeutics. Biomaterials. 31 (8), 2130-2140 (2010).
  9. Shen, Y., et al. Comparison of Magnetic Intensities for Mesenchymal Stem Cell Targeting Therapy on Ischemic Myocardial Repair: High Magnetic Intensity Improves Cell Retention but Has No Additional Functional Benefit. Cell Transplant. , (2014).
  10. Cheng, K., et al. Magnetic antibody-linked nanomatchmakers for therapeutic cell targeting. Nat Commun. 5, 4880(2014).
  11. Vandergriff, A. C., et al. Magnetic targeting of cardiosphere-derived stem cells with ferumoxytol nanoparticles for treating rats with myocardial infarction. Biomaterials. 35 (30), 8528-8539 (2014).
  12. Huang, Z., et al. Magnetic targeting enhances retrograde cell retention in a rat model of myocardial infarction. Stem Cell Res Ther. 4 (6), 149(2013).
  13. Chaudeurge, A., et al. Can magnetic targeting of magnetically labeled circulating cells optimize intramyocardial cell retention. Cell Transplant. 21 (4), 679-691 (2012).
  14. Cheng, K., et al. Magnetic targeting enhances engraftment and functional benefit of iron-labeled cardiosphere-derived cells in myocardial infarction. Circ Res. 106 (10), 1570-1581 (2010).
  15. Yanai, A., et al. Focused magnetic stem cell targeting to the retina using superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Cell Transplant. 21 (6), 1137-1148 (2012).
  16. Ordidge, K. L., et al. Coupled cellular therapy and magnetic targeting for airway regeneration. Biochem Soc Trans. 42 (3), 657-661 (2014).
  17. El Haj, A. J., et al. An in vitro model of mesenchymal stem cell targeting using magnetic particle labelling. J Tissue Eng Regen Med. , (2012).
  18. Vanecek, V., et al. Highly efficient magnetic targeting of mesenchymal stem cells in spinal cord injury. Int J Nanomedicine. 7, 3719-3730 (2012).
  19. Sasaki, H., et al. Therapeutic effects with magnetic targeting of bone marrow stromal cells in a rat spinal cord injury model. Spine (Phila Pa 1976). 36 (12), 933-938 (2011).
  20. Oshima, S., et al. Enhancement of bone formation in an experimental bony defect using ferumoxide-labelled mesenchymal stromal cells and a magnetic targeting system. J Bone Joint Surg Br. 92 (11), 1606-1613 (2010).
  21. Luciani, A., et al. Magnetic targeting of iron-oxide-labeled fluorescent hepatoma cells to the liver. Eur Radiol. 19 (5), 1087-1096 (2009).
  22. Oshima, S., Kamei, N., Nakasa, T., Yasunaga, Y., Ochi, M. Enhancement of muscle repair using human mesenchymal stem cells with a magnetic targeting system in a subchronic muscle injury model. J Orthop Sci. 19 (3), 478-488 (2014).
  23. Ohkawa, S., et al. Magnetic targeting of human peripheral blood CD133+ cells for skeletal muscle regeneration. Tissue Eng Part C Methods. 19 (8), 631-641 (2013).
  24. Tefft, B. J., et al. Magnetizable Duplex Steel Stents Enable Endothelial Cell Capture. Ieee T Magn. 49 (1), 463-466 (2013).
  25. Uthamaraj, S., et al. Design and validation of a novel ferromagnetic bare metal stent capable of capturing and retaining endothelial cells. ABME. 42 (12), 2416-2424 (2014).
  26. Polyak, B., et al. High field gradient targeting of magnetic nanoparticle-loaded endothelial cells to the surfaces of steel stents. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 105 (2), 698-703 (2008).
  27. Pislaru, S. V., et al. Magnetically targeted endothelial cell localization in stented vessels. J Am Coll Cardiol. 48 (9), 1839-1845 (2006).
  28. Pislaru, S. V., et al. Magnetic forces enable rapid endothelialization of synthetic vascular grafts. Circulation. 114 (1 Suppl), 314-318 (2006).
  29. Wang, Y. X., Xuan, S., Port, M., Idee, J. M. Recent advances in superparamagnetic iron oxide nanoparticles for cellular imaging and targeted therapy research. Curr Pharm Des. 19 (37), 6575-6593 (2013).
  30. Yellen, B. B., et al. Targeted drug delivery to magnetic implants for therapeutic applications. J Magn Magn Mater. 293 (1), 647-654 (2005).
  31. Granot, D., et al. Clinically viable magnetic poly(lactide-co-glycolide) particles for MRI-based cell tracking. Magn Reson Med. , (2013).
  32. Levy, M., et al. Long term in vivo biotransformation of iron oxide nanoparticles. Biomaterials. 32 (16), 3988-3999 (2011).
  33. Mirshafiee, V., Mahmoudi, M., Lou, K., Cheng, J., Kraft, M. L. Protein corona significantly reduces active targeting yield. Chem Commun (Camb). 49 (25), 2557-2559 (2013).
  34. Salvati, A., et al. Transferrin-functionalized nanoparticles lose their targeting capabilities when a biomolecule corona adsorbs on the surface. Nat Nanotechnol. 8 (2), 137-143 (2013).
  35. Landazuri, N., et al. Magnetic targeting of human mesenchymal stem cells with internalized superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Small. 9 (23), 4017-4026 (2013).
  36. Sun, J. H., et al. In vitro labeling of endothelial progenitor cells isolated from peripheral blood with superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Mol Med Rep. 6 (2), 282-286 (2012).
  37. Zhang, B., et al. Detection of viability of transplanted beta cells labeled with a novel contrast agent - polyvinylpyrrolidone-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles by magnetic resonance imaging. Contrast Media Mol Imaging. 7 (1), 35-44 (2012).
  38. Song, M., et al. Labeling efficacy of superparamagnetic iron oxide nanoparticles to human neural stem cells: comparison of ferumoxides, monocrystalline iron oxide, cross-linked iron oxide (CLIO)-NH2 and tat-CLIO. Korean J Radiol. 8 (5), 365-371 (2007).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Manyetit Nanopartik l SenteziPLGA KaplamaY ksek H zl Em lsifikasyonManyetik HedeflemeFloresan MikroskopiGe irimli Elektron MikroskobuTaramal Elektron MikroskobuDondurarak Kurutma

İlgili makaleler