Yöntem makalesi

Pulmoner Hipertansiyon Kemirgen Modeller Hemodinamik Karakterizasyonu

DOI:

10.3791/53335

⸱

11 Nisan 2016

 ,  , 
1Department of Medicine, Duke University Medical Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH), pulmoner arteriyollerin obliterasyonuna ve sağ ventrikül yetmezliği gelişmesine yol açan bir hastalıktır. PAH'ın kemirgen modelleri, PAH'ın patofizyolojisini anlamada kritik öneme sahiptir. Burada fare ve sıçanlarda sağ kalp kateterizasyonu ve ekokardiyografi ile hemodinamik karakterizasyonu gösterildi.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH), endotel hücre apoptozu, düz kas proliferasyonu ve pulmoner arteriyollerin obliterasyonu ile karakterize pulmoner vaskülatürün nadir görülen bir hastalığıdır. Bu da önemli morbidite ve mortalite ile birlikte sağ ventrikül (RV) yetmezliği ile sonuçlanır. Fare ve sıçanlarda bulunan PAH'ın kemirgen modelleri, bu nadir hastalığın altında yatan patofizyolojiyi anlamak için önemlidir. Özellikle, farklı PAH modelleri, farklı derecelerde pulmoner hipertansiyon, RV hipertrofisi ve RV yetmezliği ile ilişkili olabilir. Bu nedenle, PAH'lı fare ve sıçanların tam bir hemodinamik karakterizasyonu, ilaçların veya genetik modifikasyonların hastalık üzerindeki etkilerini belirlemede kritik öneme sahiptir.

Burada hem sıçan hem de fare PAH modellerinde sağ ventrikül fonksiyonunun ve hemodinamiğinin değerlendirilmesi için standart prosedürleri gösteriyoruz. Ekokardiyografi, sıçanlarda RV fonksiyonunu belirlemede yararlıdır, ancak uyanık farede sağ ventrikülün standart görünümlerini elde etmek zordur. Sağ kalp kateterizasyonu için erişim, kapalı göğüs farelerinde ve sıçanlarda iç juguler ven ile sağlanır. Basınçlar, bir sıvı basınç dönüştürücüsü veya minyatür bir mikromanometre basınç kateteri ile polietilen boru kullanılarak ölçülebilir. Açık göğüste basınç-hacim döngü analizi yapılabilir. Hemodinamik elde edildikten sonra, kemirgen ötenazi edilir. Kalp, RV serbest duvarını sol ventrikül (LV) ve septumdan ayırmak için diseke edilebilir, bu da Fulton indeksi (RV/(LV+S)) kullanılarak RV hipertrofisinin değerlendirilmesine olanak tanır. Daha sonra gerektiğinde kalp, akciğerler ve diğer dokulardan örnekler alınabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH) inflamatuar hücre infiltrasyonu, düz kas proliferasyonu ve endotel hücre apoptosis ile ilişkili pulmoner vasküler bir hastalıktır. Bu değişiklikler daha sonra sağ ventrikül (RV) disfonksiyonu ve kalp yetmezliğine yol açan, pulmoner arteriyollerde oblitere sonuçlanır. PAH PAH ve RV yetersizliğinin altında yatan patofizyoloji anlamak için, bu hastalığı incelemek için genetik ve farmakolojik modelleri dahil olmak üzere farklı modelleri, bir dizi (1,2 başka yerde gözden) geliştirilmiştir.

Bu modellerin, en popüler sıçan hipoksi kaynaklı fare (Hx) PAH ve monokrotalin (MCT) ve SU5416-hipoksi (SuHx) modellerdir. Fare Hx modelinde fareler medial çoğalması bileşke gelişimi ile, (0.10 FiO2 ile 18.000 feet irtifada karşılık, Normobarik veya hipobarik ya) hipoksi 4 hafta maruz RV syst arttıolic baskılar ve RV hipertrofisi 3 geliştirilmesi. Daha sonra PAH 4 geliştirilmesi ile sonuçlanan bir açık mekanizma yoluyla pulmoner endotel hücrelerine hasarı 60 mg / kg sonuçlar tek bir dozda, MCT. SU5416 benzer patolojik değişimler ile sürekli pulmoner hipertansiyon 3 hafta sonuçlar için kronik hipoksi ile, ardından, 60 mg / kg'lık bir defalık deri altına enjeksiyon ile vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptörleri (VEGFR) 1 ve 2 engelleyici inhibitörü ve tedavi olduğu bu obliteratif vasküler lezyonların 5 oluşumu ile, insan hastalıklarında görüldüğü üzere. Geçmiş yıllarda, pulmoner hipertansiyon için çeşitli transgenik fare modelleri geliştirilmiştir. Bunlar BMPR2 gen mutasyonları PAH hem ailesel ve idiyopatik formlarda bulunurlar olarak, heme oksijenaz-1 nakavt ve IL-6 aşın (başka yerde 1,2 gözden) nakavt ve kemik morfogenetik protein reseptörü 2 (BMPR2) ait mutasyonlar dahildir.

PH Bu farklı kemirgen modelleri pulmoner hipertansiyon, RV hipertrofisi ve RV yetersizliği farklı seviyeleri var. Hipoksi ve çeşitli transgenik fare modelleri sıçan modelinde 1 ya daha hafif PAH neden olsa da, farklı genetik mutasyonlar ve bunlarla ilişkili moleküler sinyal yollarının test izin vermiyor. MCT birçok dokuda 4 endotel hücrelerine karşı toksik olduğu görünmektedir, ancak MCT modeli, ciddi PAH neden yoktur. hem farmakolojik manipülasyon ve hipoksi pozlama gerektirmesine rağmen vasküler ile karakterizedir SuHx modeli, insanlarda idiyopatik PAH görülen çok benzer değiştirir. Dahası, bu modellerin tümünde, PAH gelişimi ile ilişkili histopatolojik değişiklikler, pulmoner basınçlar ve rv fonksiyonu arasında bir kopukluk olabilir. Bu histopatolojik değişiklikler arasında orantılı bir ilişki, pulmon şiddeti Genellikle insan hastalığı, aksine birary hipertansiyon ve RV yetersizliği derecesi. Böylece, PH bu kemirgen modellerinde kapsamlı bir karakterizasyonu gereklidir ve (kardiyak kateterizasyon ile) (genellikle ekokardiyografi ile) RV işlevi değerlendirmeler, hemodinami ve kalbin histopatolojik ve (doku hasat) akciğerleri tutar edilir.

Bu protokol, biz sıçan ve fare PAH modelleri hemodinamik karakterizasyonu için kullanılan temel teknikleri açıklar. Bu genel teknikler, sağ ventrikül pulmoner damar herhangi bir çalışma uygulanabilir ve PAH modelleri ile sınırlı değildir. ekokardiyografi ile RV görselleştirme sıçanlarda nispeten basittir, fakat nedeniyle büyüklük ve RV karmaşık geometri farelerde daha zordur. Ayrıca, bu gibi TAPSE olarak ölçülmesi RV işlev için kullanılan bazı suretler, pulmoner arter (PA) hızlanma süresi ve PA Doppler dalga çentik, iyi insanlarda geçerliliği ve pu değerlendirmesi ile sadece zayıf korelasyonlmonary hipertansiyon ve invaziv hemodinami ile RV işlev. bir empedans kateter ile açık göğüs kateterizasyonu basınç-hacim (PV) belirlenmesini sağlar döngüler ve daha detaylı bir hemodinamik karakterizasyon rağmen RV hemodinaminin belirlenmesi en ilham ile negatif intratorasik basınç etkisini korumak için, bir kapalı göğüs ile yapılır . herhangi bir işlem olduğu gibi, prosedürlere deneyimi gelişen deneysel başarısı için kritik öneme sahiptir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

açıklanan tüm prosedürler Tıp Duke Üniversitesi Fakültesi hayvan bakım yönergeleri izleyin.

1. öncesinde Prosedürü Başlama

Not: herhangi bir hayvan prosedürleri öncesinde, uygun kurumsal izin alınmış olduğundan emin olun. Tüm işlemler olduğu gibi, hiçbir hayvan acı olduğunu sağlamak için uygun ağrı kesiciler kullanın.

  1. heparinize steril tuzlu su (100 U / ml) ile yıkayın kateterler açıklığını sağlamak. Mark boyun orta kalpten uzunluğuna kateter eşdeğer ucundan bir nokta (yaklaşık sıçanlar için 4 cm ve fareler için 2 cm).
  2. fare veya sıçan anestezisi. Anestezik Seçimleri izofluran (indüksiyon% 3-4, bakım% 100 oksijen ile karıştırılmış% 1.5), ketamin / ksilazin (80-120 / 10 mg / kg) ve pentobarbital (40-80 mg / kg) bulunmaktadır 6..
    1. Örneğin, ketamin: ksilazin (80-120 mg / kg: 10-16 fareler için mg / kg IP ve 80-100 mg / kg: 5-10 mg sıçanlar / kg IP) tek doz anestezi 20-50 dakika sürer. ekokardiyografi, izofluran (indüksiyon% 3-4 ve bakım için% 1.5) ile fare veya sıçan uyutmak. Bu çekilme refleksleri bulunmadığına onaylamak için cerrahi alanında kemirgen kısma anestezi derinliği değerlendirin. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem kullanın.
      Not: Farklı anestezik maddeler doğru kullanımı ve optimizasyon ile güvenilir sonuçlar elde etmek için kullanılabilir (6 başka incelenmiştir). ksilizin: kateterizasyon bizim tercih ketamin kullanmaktır. ketamin / ksilazin ile doz aşımı derinden kalp hızı ve kalp fonksiyonlarını azaltabilir, bu nedenle uygun sıcaklık ve solunum kontrolü sağlamak için önemlidir. farelerde kalp hızı (> 400 / dk) korumak için, rutin bilateral vagotomi gerçekleştirin. yeterli burada ketamin / xylazine miktarı olacak tipik son 20-30 dakika, açık-kapalı veya göğüs kalp kateterizasyonu ya takip gerçekleştirmek içinhayvan ötenazi.
  3. Cerrahi işlem (Şekil 1) için sıçan / fare hazırlayın.
    1. göğüs kürk tıraş (ekokardiyografi sağlamak için) ve cerrahi bölgeden, sağ boyun.
    2. dışa betadin kullanarak merkezden dairesel süpürme ile traş cerrahi bölgeleri fırçalayın,% 70 alkollü bez ile temizlik izledi.
    3. altında bir ısınma pad ile ameliyat işlemine hayvan yerleştirin. 37-37,5 ° C vücut ısısını korumak için ısıtma düzeyini ayarlayın. rektal prob ile vücut sıcaklığını izleyin. Hipotermi önemli taşikardi önemli bradikardi ve hipertermi sonuçlara neden olabilir.

2. Ekokardiyografi

Not: kemirgen ekokardiyografi tam bir açıklaması başka bir yerde 7 açıklanmıştır. fare için, anestezi öncesinde, görüntüler uyanık, el ölçülü hayvan elde edilebilir. sıçan için,ekokardiyografi öncesinde sıçan olarak tercih edilir anestezi elle) uyanık iken ölçülü için çok büyük.

  1. Parasternal uzun eksen (PLAX) Resmi.
    1. platform üzerinde yatar pozisyonda hayvan yerleştirin veya elle dizginlemek.
    2. 2B canlı görüntüyü yansıtmak için B Modu seçin.
    3. sol parasternal hattına Rats için fare için 40 MHz veya 25 MHz frekans ile ultrason transdüser hizalayın ve ardından dönüştürücü sonda göstergesi kaudal yöne bakacak şekilde saat yönünün tersine 30 ° döndürmek (5 ila 11 saat hat pozisyonu) . Açı hafifçe (aynı tomografik düzlemde dönüştürücünün kısa ekseni boyunca sallanan) dönüştürücü ekranın ortasında tam bir LV odacık görünümü elde etmek.
    4. Bulun ve bu anatomik yapıların (Şekil 2A) bakın: sol ventrikül (LV) lümen; Septum (IVS); sağ ventrikül (RV) lümen; Çıkan aort (AO); Sol kulakçık (LA).
    5. M Modu Switch, bir zamanlar bu yukarıdaki yapıların açıkça görüntülenmiştir. Referans noktası olarak AO kullanarak LV lümen geniş kısmından gösterge hattını yerleştirin ve aynı zamanda LV Odası (Şekil 2B) merkezinde odak derinliği yalan olun. Transdüserin açılanma değişen ve M modu ölçümleri alarak RV benzer ölçümler yapmak.
    6. çevrimdışı ölçümü (LV odası boyutunda, FS ve sol ventrikül duvar kalınlığı) için veri kaydetmek için bir video döngü oluşturmak için cine mağaza kullanın.
    7. Aorta PW imleci yerleştirerek ve (Şekil 2C) kaydederek PW Doppler modunda aort çıkış bir doppler izleme edinin.
  2. Aort Düzeyde parasternal kısa eksen View (PSAX).
    1. B Moduna.
    2. Parasternal kısa eksen görünümü (Şekil 3) elde etmek için parasternal uzun eksen görünümü dönüştürücü 90 ° saat yönünde çevirin. id kafatası doğru dönüştürücüyü hareket ettirin ve açıaort kapağı kesit görünümü entify.
    3. pulmoner kapak broşür ve pulmoner arter ile devam aorta sağ üst lokalize bir hilal biçimli yapı olarak sağ ventrikül çıkış yolunu (RVOT) tanımlayın.
    4. elle aynı pozisyonda sabit tutun. PW Doppler Modu geçin.
      Not: kemirgen tutan ve prob dönüştürücü pozisyonunda hareket ve değişim en aza indirmek için kullanılabilir için bir istasyon platformu.
    5. Sağ ventrikül çıkış yolu merkezinde pulmoner kapak seviyesine örnek hacmi proksimal yerleştirin ve sonra teknenin (Şekil 3B) aracılığıyla kan akımının yönüne imleç paralel yerleştirin.
      Not: kan akışı yönünde örnekleme açısını ayarlamak veya açı bir değişikliğin düzeltilmesi için ultrason yazılımı kullanmak için önemlidir. düzeltme olmadan, geminin maksimum açı hızı ~% 15 olarak dikkate alınmaması karşılık 30 ° vardır.
    6. adjbeyaz sınırları ve karanlık bir çukur içinde gösteren laminer kan akımı (Şekil 3C) olan bir "iyi" Doppler zarfı elde etmek gerektiği gibi ust ölçeği (kan akımının hızı). Doppler izleme kaydediniz.
      Not: Bir "kötü" Doppler zarf yeterli beyaz sınırları ve karanlık bir oyuk uymuyor.
    7. kateterizasyon bu noktada yapılan değilse, anestezi kullanılması durumunda kemirgen kurtarmak için izin verir. sternal yatma korumak için yeterli kendine geldi ve tamamen iyileşti kadar diğer hayvanların şirkete iade yoktur kadar kemirgen gözetimsiz bırakmayın. kateterizasyon yapılırsa, Bölüm 3'e geçin.

3. Sağ Kalp kateterizasyonu

  1. RV basıncı ölçümü için kapalı göğüs yaklaşımı
    1. Kurmak:
      1. basınç ve chann için yazılımında giriş kanalına 1. basınç dönüştürücü, set kanalı 1 bağlayınKalp hızı için el 2.
      2. mmHg birimleri dönüştürmek için, bazal izleme kaydetmek (kan basınç sensörü ve PE boru kullanıyorsanız) elle basınç göstergesi ile basınç kalibrasyonu yapın. Sonra kanal 1 altında birimler dönüşüm gerçekleştirmek.
      3. Kanal 2 altında döngüsel ölçümleri seçip ölçümü için kaynak ve oranı kanal 1 seçmek 2. kanalın girişini kapatmak, kalp atış hızını ayarlamak için.
    2. derinlemesine odaklama ve 5x büyütme ile bir diseksiyon mikroskobu altında fare / sıçan yerleştirin.
    3. Sternum (Şekil 1) mandibulanın cilt İnsizyon. Tamamen servikal bölgeyi ortaya çıkarmak için kesi her tarafına retraktörlerin bir çift koyun.
    4. Açık açık ince künt ucu forseps (Şekil 4A, B) kullanılarak damar sağ eksternal juguler maruz tükürük bezleri ayırmak için teşrih.
    5. Dikkatle çevreleyen bağ dokusu sağ eksternal juguler ven izole.
      6. <(Sağ eksternal juguler ven altına (mümkün olduğunca alt çeneye yakın) distale ven ligate ve sonra proksimal gevşek bir düğüm; li> ipek sütür iki adet (fareler için 6-0 sıçanlar için 4-0) yerleştirin Şekil 4C).
    6. Distal bağlı düğüm küçük bir "nick" (cut) proksimal yapmak için iris makas kullanın.
    7. Bir forseps ile kateter tutun ve ven kesim içine kateter yerleştirin ve sonra proksimal düğüm sıkın.
      Not: Genellikle polietilen (PE) -10 boru (~ 2 fr) fareler ve kullanmak PE-50 (~ 3 fr), bir 31 g veya 21 G iğne ile normal basınç transdüktörüne bağlı sıçanlarda ve kalibre. uzunluğu kabaca sağ ventrikül ucu yerleştirme tekabül bir kalem ile kateter işaretleyin. PE boru bir alternatif olarak, bir mikromanometre kateteri kullanılır. Yavaşça uzak düğüm çekerek kateter tanıtmak yardımcı olabilir.
    8. Yavaşça sağ kalp ve monitör içine kateter itmekişaretine göre ilerleme derinliği. RV basıncı kateter yerini doğrulamak ve tanımlamak için yazılımda basınç iz (Şekil 5) izleyin.
    9. hareketsiz kateter tutun ve veri 2 dakika süreyle (Başlat düğmesinin yanında kayıt geçiş verileri) toplamak.
    10. toplama (Bölüm 4) örnek geçin.
  2. RV PV Döngü Analizi için açık göğüs Yaklaşım.
    Not: Sağ ventrikül PV döngü analizi nedeniyle RA SVC geçmemesi iletkenlik kateter, sertliği bir kapalı göğüs yaklaşımla yapılamaz. Ticari olarak mevcut iletkenlik kateterler LV PV döngü analizi için tasarlanmıştır.
    1. iletkenlik için Kanal 1 set yazılımda; basınç Kanal 2; kalp hızı ve Kanal 3.
    2. 16 G teflon tüp ile sıçan entübe ve mekanik ventilatöre tüp bağlayın. Hesaplayın ve takip kullanarak fareler ya da sıçanlar için havalandırma parametrelerini ayarlamaking formüller 6: tidal hacmi (V t, ml) = 6.2 x M 1.01 (M = hayvan kütlesi, kg); solunum sayısı (RR, min -1) = 53.5 x M -0.26 (Şekil 6A).
    3. Cerrahi alan üzerine kürk yayılmasını azaltmak için kürk üzerine% 70 alkol yayıldı.
    4. xiphoid süreç altında bir kesi yapın ve bilateral kanadını doğru makas ile cilt incelemek.
    5. karın duvarı kesti ve diyafram boyunca iki taraflı diseksiyon ile karın boşluğuna açın.
    6. Kalbin tepe teşhir ve bilateral göğüs kafesi (Şekil 6A) kesmek için diyaframı açın. bir şırınga kullanılarak göğüs ve periton boşlukları içerisine tuzlu püskürtülerek buharlaşma ve doku kurumasını önlemek.
      Not: Biz genellikle karın boşluğu ve göğüs kafesini açmak için bir diseksiyon makas kullanın. Kanama genellikle önemli değildir, ancak kanama varsa, elektrokoter kullanılabilir.
    7. Özenle izole edilmesi inciçevreleyen bağ dokusu e inferior vena kava (IVC).
    8. IVC etrafında; (fareler için 6-0 sıçanlar için 4-0), ve sonra gevşek bir düğüm (veya 16 G teflon tüp aracılığıyla dikiş ipliği) (Şekil 6B) ipek sütür bir parça yerleştirin.
    9. RV serbest duvara bir 27-30 iğne paralel apikal RV serbest duvarı delmek ve iğneyi çıkartın. 4'ten fazla mm iğne itmek için dikkatli olun.
      Not: Alternatif olarak, PE-60 tüpü küçük bir parça rv apeksine iletkenlik kateterin ponksiyon yol kullanılabilir.
    10. Tüm elektrotlar ventrikül (Şekil 6C) içinde olana kadar apikal RV serbest duvar yara bıçak ile iletkenlik kateter ucu takın.
    11. Yazılımda basınç hacim döngü izlemek ve sonra anlamlı solunum varyasyon (Şekil 7B, C) ​​göstermek değil sürekli şekilli döngüler elde etmek için kateterin konumunu ayarlamak.
    12. KayıtBazal PV PV bir dizi döngüler elde etmek için en az 10 saniye boyunca (Başlat düğmesinin yanında kayıt geçiş verileri) döngüler.
    13. ön yük değiştirebilir ve PV döngüler kaydetmek için IVC etrafında yerleştirilmiş dikiş çekin. Off-line verileri analiz ve RV sistolik fonksiyonu (Şekil 7D) çeşitli parametrelerini elde. Bu analiz, daha önce 8 tarif edilmiştir.
      Not: İVC alternatif forseps ile tıkalı olabilir. ön yük azaltılması onaylamak için RV basıncı iz izleyin.
    14. Daha önce hacim birimleri 6 iletkenlik birimlerinden bir dönüşümü sağlamak için tarif edildiği gibi tuzlu ve küvet kalibrasyonları gerçekleştirin.
    15. veri kayıt sonra, yavaşça dışarı kateteri çekin ve hemen tuzlu bir su banyosu içine kateterin ucu yerleştirin. bittikten sonra, üreticinin talimatlarına göre kateter temizleyin.

Kalp ve Akciğer Örneklerinin 4. Koleksiyonu

Not: Burada prosedürler gibiterminal olarak açıklanan yeniden, hayvan kapalı-ya da açık-göğüs sağ kalp kateterizasyonu ya sonra ötenazi gerekir.

  1. toraks (bilateral torakotomi) açarak fareler Euthanize kapalı göğüs yaklaşımı kullanılması durumunda, exanguination veya anestezik doz aşımı sonrasında vantilatör kapatarak.
    Not: servikal dislokasyon tavsiye edilmez.
  2. Akciğerin enflasyon perfüzyonunu gerçekleştirmek için, 20 bir basınç cmH2O ile akciğer şişirmek için ayarlanmış bir ringstand üzerine enflasyon boru bağlamak (ama akciğerleri şişirmek için henüz vanayı açmayın).
  3. Açıkça kas ve bağ dokusu çevreleyen trakea teşrih.
  4. (; Fareler için 6-0 sıçanlar için 4-0) trakea etrafında ve sonra gevşek bir düğüm ipek sütür bir parça yerleştirin.
  5. Yavaşça başını basarak trakea germek ve alt çeneye yakın bir kesim (çevresinin% 70) yapmak.
  6. nazik streç tutmak ve trakea (fareler için 20 G ya da sıçanlar için 16 G) kanül yerleştirin.sütür kullanarak kanül sabitleyin. Enflasyon boru üzerine kanül bağlayın ve fiksatif akışı önlemek için kanül etrafında dikiş kravat.
  7. RV serbest duvar bıçak ve pulmoner arter doğru enjekte etmek için 10 ml şırınga kullanarak PBS ile akciğerler yıkayın. Akciğerler ağartma başladıktan sonra Nick atrium bıraktı.
  8. aort kökünde keserek kalbi hasat.
  9. Bir sivrisinek hemostat kullanarak sağ akciğer alt lob Kelepçe ve sağ alt lob kesti. mikrosantrifüj tüpleri içine parçaları yerleştirin ve sıvı azot içinde dondurularak ek.
  10. trakea bağlanması ve ardından trakea kanülü 5 dakika için% 10 tamponlu nötr formalin ile akciğer şişirme ve çıkarın.
  11. toraks dışında akciğer teşrih ve% 10 tamponlu nötr formalin ile sabitleyin.
    Not: Dondurulmuş kesitlerin daha sonra hazırlanması için sulandırılmamış OCT dondurmak: Alternatif olarak, optimum kesim medya ile akciğer şişirmek (PBS ile 1 OCT, 1 seyreltilmiş).
  12. dikkatliceventriküllerden gelen atrial ayırmak ve interventriküler septum yanında diseksiyon ile sağ ventrikül serbest duvarı izole.
  13. RV hipertrofisi derecesini rakamlarla bir Fulton indeksi (RV / LV + S) 9, hesaplamak için RV ve LV + septum (LV + S) tartılır.
    Not: TheFulton Endeksi PH farklı modellerde değişir. Sıçan 10: Kontrol, 0.28 ± 0.01; hipoksi kaynaklı, 0.57 ± 0.02; MCT ile tedavi, 0.51 ± 0.03. C57BL6 / J fare 11: Kontrol, 0.26 ± 0.01; SuHx (14 gün), 0.40 ± 0.02; SuHx (21 gün), 0.43 ± 0.01; SuHx (28 gün), 0.44 ± 0.03.
  14. Yapış sıvı azot içinde RV ve LV + S dondurmak veya tamponlu nötr formalin% 10 düzeltin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kemirgenlerde sağ kalp kateterizasyonu uzunlamasına izlem için geçerli değildir terminal prosedür genellikle olduğu gibi, ekokardiyografi tarama ve takip 12 için mükemmel bir noninvazif bir alternatiftir. ekokardiyografide insan PAH pulmoner arter sistolik basıncı genellikle apikal görünümde elde edilecek genellikle basittir triküspit yetersizliği türetilmiştir edilirken, böyle bir görünüm güvenilir Doppler ile pulmoner arter sistolik basıncı tahmin önlenmesi, kemirgenlerde elde edilmez. Ancak, aort düzeyde P...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada özetlenen protokoller, pulmoner hipertansiyonun kemirgen modellerinde hemodinamiğin ve sağ ventrikül fonksiyonunun kapsamlı bir karakterizasyonunu açıklamaktadır. Burada tarif edildiği gibi sağ kalp kateterizasyonu terminal bir prosedür olsa da, ekokardiyografi ile ilişkili mortalite minimumdur, bu da hastalığın ilerlemesinin taranmasına ve izlenmesine olanak tanır. Bununla birlikte, anestezi17 ile mortaliteyi belirgin şekilde artıran PH'lı hastalara benzer şekilde, deneyimlerimize göre, şiddetli PH'lı ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

SR, NIH K08HL114643, Gilead Pulmoner Arteriyel Hipertansiyon Araştırma Akademisyenleri ve Tıp Bilimcileri için Burroughs Wellcome Fund Kariyer Ödülü tarafından desteklenmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Vevo 2100 Görüntüleme Sistemi (120V) VisualSonics, inc. VS-11945
Vevo 2100 Görüntüleme İstasyonu VisualSonics, inc. 
Yüksek Frekanslı Mekanik DönüştürücülerVisualSonics, inc. MS250, MS550D, MS400
Ultrason Jeli Parker Laboratuvarlar A.Ş.  01-08
PowerLab 4/35CihazlarML765
Labchart 8ADInstruments
Musluklu ve kablolu BP dönüştürücüADInstrumentsMLT1199
BP dönüştürücü kalibrasyon kitiMillar
Mikro Uçlu Basınç KateteriScisense FT111B (fare) ve FT211B'den (sıçan) alternatif kateter
MillarSPR-513için Mikro Uçlu Basınç KateteriScisense FT111B (fare) ve FT211B'den (sıçan) temin edilebilen alternatif kateter
Millar Mikro-Tip  fareler için ultra minyatür PV döngü kateteriMillarPVR-1035Scisense FT112'den (fare) temin edilebilen alternatif kateter
Millar Mikro-Tip sıçanlar için ultra minyatür PV döngü kateteriMillarSPR-869Scisense FT112'den (fare) temin edilebilen alternatif
kateter Millar PV sistemi MPVS-300 MillarMPVS-300
4-0 İpek Siyah Örgü 100 Yard MakaraRoboz CerrahiSUT-15-2
6-0 İpek Siyah Örgü 100 Yard MakaraRoboz CerrahiSUT-14-1
İris Makas, Hassas, Integra MiltexVWR21909-248
VWR Diseksiyon Makası, Keskin/Kör UçluVWR82027-588
VWR Hassas Makas, 4 1/2 "VWR82027-582
İki yıldızlı Hemostatlar, ExceltaVWR63042-090
Nötr tamponlu formalinVWR89370-094
CrotalineSigmaC2401
SU5416Tocris Biosciences3037
3.5X-45X Bom Standı Trinoküler Zoom Stereo Mikroskop AmScopeSM-3BX
PE (Polietilen Boru)-10Braintree Scientific IncPE10 36 FT
PE (Polietilen Boru)-50Braintree Scientific IncPE50 36 FT
PE (Polietilen Boru)-60Braintree Scientific IncPE60 36 FT
Masa Üstü İzofluran Anestezi ÜnitesiKent ScientificACV-1205S
Surgisuite çok fonksiyonlu cerrahi platformKent ScientificSurgisuite
Ekartör setiKent ScientificSURGI-5002
Anestezi indüksiyon odasıVetEquip941443
Anestezi Gaz filtresi kabıKent ScientificACV-2001
Kemirgen burun konisiVetEquip921431
Fare SPR-1000 için ADInstruments MLA1052 temin edilebilirSıçan

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gomez-Arroyo, J., et al. A brief overview of mouse models of pulmonary arterial hypertension: problems and prospects. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, 977-991 (2012).
  2. Ryan, J. J., Marsboom, G., Archer, S. L. Rodent models of group 1 pulmonary hypertension. Handbook of experimental pharmacology. 218, 105-149 (2013).
  3. Voelkel, N. F., Tuder, R. M. Hypoxia-induced pulmonary vascular remodeling: a model for what human disease. J Clin Invest. 106, 733-738 (2000).
  4. Gomez-Arroyo, J. G., et al. The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, 363-369 (2012).
  5. Abe, K., et al. Formation of plexiform lesions in experimental severe pulmonary arterial hypertension. Circulation. 121, 2747-2754 (2010).
  6. Pacher, P., Nagayama, T., Mukhopadhyay, P., Batkai, S., Kass, D. A. Measurement of cardiac function using pressure-volume conductance catheter technique in mice and rats. Nat Protoc. 3, 1422-1434 (2008).
  7. Brittain, E., Penner, N. L., West, J., Hemnes, A. Echocardiographic Assessment of the Right Heart in Mice. J. Vis. Exp. (81), e50912(2013).
  8. Abraham, D. M., Mao, L. Cardiac Pressure-Volume Loop Analyses Using Conductance Catheters in Mice. J Vis Exp. , In revision (2015).
  9. Vergadi, E., et al. Early macrophage recruitment and alternative activation are critical for the later development of hypoxia-induced pulmonary hypertension. Circulation. 123, 1986-1995 (2011).
  10. Mam, V., et al. Impaired vasoconstriction and nitric oxide-mediated relaxation in pulmonary arteries of hypoxia- and monocrotaline-induced pulmonary hypertensive rats. J Pharmacol Exp Ther. 332, 455-462 (2010).
  11. Wang, Z., Schreier, D. A., Hacker, T. A., Chesler, N. C. Progressive right ventricular functional and structural changes in a mouse model of pulmonary arterial hypertension. Physiol Rep. 1, 00184(2013).
  12. Thibault, H. B., et al. Noninvasive assessment of murine pulmonary arterial pressure: validation and application to models of pulmonary hypertension. Circ Cardiovasc Imaging. 3, 157-163 (2010).
  13. Abe, K., et al. Long-term treatment with a Rho-kinase inhibitor improves monocrotaline-induced fatal pulmonary hypertension in rats. Circ Res. 94, 385-393 (2004).
  14. Ma, W., et al. hypoxia chamer info--Calpain mediates pulmonary vascular remodeling in rodent models of pulmonary hypertension, and its inhibition attenuates pathologic features of disease. J Clin Invest. 121, 4548-4566 (2011).
  15. de Man, F. S., et al. Bisoprolol delays progression towards right heart failure in experimental pulmonary hypertension. Circ Heart Fail. 5, 97-105 (2012).
  16. de Man, F. S., et al. Dysregulated renin-angiotensin-aldosterone system contributes to pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Crit Care Med. 186, 780-789 (2012).
  17. Pritts, C. D., Pearl, R. G. Anesthesia for patients with pulmonary hypertension. Curr Opin Anaesthesiol. 23, 411-416 (2010).
  18. Paulin, R., et al. A miR-208-Mef2 Axis Drives the Decompensation of Right Ventricular Function in Pulmonary Hypertension. Circ Res. 116, 56-69 (2015).
  19. Brittain, E., Penner, N. L., West, J., Hemnes, A. Echocardiographic assessment of the right heart in mice. J Vis Exp. , (2013).
  20. Cheng, H. W., et al. Assessment of right ventricular structure and function in mouse model of pulmonary artery constriction by transthoracic echocardiography. J Vis Exp. , e51041(2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Sa Kalp KateterizasyonuEkokardiyografiBas n Hacim D ng s AnaliziSa Ventrik l FonksiyonuFulton ndeksiKapal G s KateterizasyonuA k G s Kateterizasyonu

İlgili makaleler