Yöntem makalesi

Tüm Blood adlı ultrasensitive Protein Algılama için Tam Otomatik Santrifüj mikroakışkan Cihazı

10K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/54143

⸱

16 Nisan 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, School of Life Sciences, Ulsan National Institute of Science and Technology (UNIST), UNIST-gil 50, Ulsan, Republic of Korea, 2Agency for Defense Development (ADD), Daejeon, Republic of Korea, 3KOGAS (Korea Gas Corporation) Research Institute, 4Center for Soft and Living Matter, Institute for Basic Science (IBS)

Bu makalede

Özet

Bu protokol, 30 dakika içinde 10 μL tam kandaki proteinlerin femto molar algılama duyarlılığının nasıl elde edileceğini göstermektedir. Bu, yüksek yüzey alanının yanı sıra gelişmiş sinyal-gürültü oranı için etkili karıştırma ve yıkama sunan bir disk üzerinde laboratuvara entegre edilmiş elektroeğrilmiş nanolifli matlar kullanılarak elde edilebilir.

Özet

Enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA), biyolojik örneklerde az miktarda proteini tespit etmek için umut verici bir yöntemdir. Azaltılmış numune hacmi ve test süresinin yanı sıra tam otomasyon için bir platform sağlayan cihazlar, hasta başı teşhisinde potansiyel kullanım için gereklidir. Son zamanlarda, TiO2 nanoliföz (NF) matlardan oluşan bir disk üzerinde laboratuvar kullanarak serum proteinleri, C-reaktif protein (CRP) ve kardiyak troponin I'in (cTnI) ultra hassas tespitini gösterdik. 30 dakika içinde küçük bir tam kan hacminden femto molar (fM) algılama hassasiyeti ile geniş bir dinamik aralık gösterdi. Cihaz, düşük numune hacimlerinden daha fazla hassasiyet için otomatikleştirilmiş kan ayırma, ölçme, karıştırma ve yıkama için çeşitli bileşenlerden oluşur. Burada, video gösteriminde, NF'lerin yanı sıra diskin imalatı, entegrasyonu ve çalışması için deneysel protokolleri ve teknik bilgileri aşağıdaki sırayla gösteriyoruz: TiO2 NF matı hazırlama süreçleri; TiO2 NF matının diske aktarılması; immün reaksiyonlar, disk montajı ve çalışması için yüzey modifikasyonu; İmmünoassay için disk üzerinde algılama ve temsili sonuçlar. Bu cihazın kullanımı, minimum numune ve reaktif tüketimi ile çoğullanmış analiz sağlar. Avantajları göz önüne alındığında, cihaz çok çeşitli uygulamalarda kullanım bulmalı ve düşük miktarda bulunan proteinlerin analizini kolaylaştırmada faydalı olmalıdır.

Giriş

Hastalık tanısı için çeşitli platformlar 1,2 gibi nanotellerin, 3 nanopartiküller, 4 nanotüpler, 5 ve nano (NF'ler) 6-8 olarak nano ölçekli malzemelere dayanan geliştirilmiştir. Bu nano kendi benzersiz fizikokimyasal özellikleri nedeniyle son derece hassas biyoanalizlere için yeni teknolojilerin tasarımı mükemmel umutları sunuyoruz. Örneğin, gözenekli bir çinko oksit nanolifler meme kanseri biyobelirteçlerinin femto-mol hassas bir şekilde tespit kullanılmaktadır. 9. Son zamanlarda, kimyasal stabilitesini göz önüne biyoanalitik edecektir 10 araştırılmıştır (TiO2) titanyum dioksit esaslı sol-jel, 11 ihmal edilebilir protein denatürasyonu 12 ve ek olarak biyouyumluluk. 13, TiO2 yüzeyi üzerindeki hidroksil grupları kimyasal modifikasyon biyomoleküllerin kovalent bağlanmasını kolaylaştırır. 14,15 Desenli TiO2 thin, filmler 16 veya TiO2 17 yüzey alanını arttırarak, bir hedef proteinin algılama hassasiyetini artırmak için kullanılmıştır nanotüpler, Ancak, üretim süreci oldukça karmaşık ve pahalı ekipman gerektirir. Öte yandan, electrospun NF'ler basit ve düşük maliyetli üretim süreci yanı sıra nedeniyle yüksek yüzey alanı dikkatini alıyorsanız, 18,19 henüz electrospun TiO2 NF mat kırılgan ya da gevşek özelliği işlemek için zorlaştırır ve mikroakışkan cihazlar ile entegre. 6,20 nedenle, TiO2 NF paspaslar nadiren biyoanalitik uygulamalarda sert yıkama koşulları gerektiren özellikle kullanılmıştır.

Bu çalışmada, bu sınırlılıkların üstesinden gelmek için, ince bir polidimetilsiloksan (PDMS) yapışkan tabaka kullanarak, herhangi bir hedef alt-tabakanın yüzeyi üzerine, NF halılar electrospun aktarmak için yeni bir teknoloji geliştirilmiştir. furthermore, başarılı polikarbonat (PC) yapılan bir santrifüj mikroakışkan cihaz üzerine electrospun TiO NF paspaslar 2 entegrasyonunu gösterdi. Bu cihazı kullanarak, C-reaktif protein, hassas bir yüksek tam otomatik ve entegre (CRP) ve kardiyak troponin I (cTnl) tam kan sadece 10 uL, 30 dakika içinde elde edilmiştir. 21 nedeniyle birleştirilebilir UF ve merkezkaç platformun özelliklerinin avantajları, deney alt saptama sınırı 100 ng / ml (~ 12:08) 1 ug / ml (~ 8 FM) den altı mertebe geniş bir dinamik aralık sergilemiştir CRP ve 37 pg / ml (~ 01:05) içindeki bir saptama sınırı 100 ng / ml (~ 4 nM), 10 pg / ml (~ 12:04) bir dinamik aralık için 0.8 ug / ml (~ 6 FM) ve cTnI için. Bu tespit limitleri ~ 300 ve 20 Hangi kat bunlara karşılık gelen geleneksel ELISA sonuçlarına göre daha düşük. Bu teknik, uygun antikorlar ile, herhangi bir hedef proteinlerin tespiti için uygulanabilir. Genel olarak, bu cihaz coörneğin, tam kan 10 ul; biyolojik numunelerin çok küçük miktarlarda bile büyük bir hassasiyetle hedef proteinlerin nadir miktarlarda algılayabilir beri uld in vitro diagnostik ve biyokimyasal tahliller büyük katkı. Biz sadece bu çalışmada ELISA kullanılarak serum protein algılama gösterdi rağmen, mikroakışkan cihazlar ile electrospun UF'lerin transferi ve entegrasyon teknolojisi daha geniş yüksek algılama hassasiyeti için büyük bir yüzey alanı gerektiren diğer biyokimyasal reaksiyonlarda uygulanabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Not: Kan sağlıklı bireylerden alınmış ve bir kan toplama tüpü içinde toplanmıştır. Yazılı bilgilendirilmiş olur Tüm gönüllülerden elde edilmiştir.

TiO2 NF Mat 1. Fabrikasyon

  1. Ön-madde 22 solüsyonuna hazırlanması
    1. Etanol (% 99.9, 3 mi) ve buzlu asetik asit (3 mi) içindeki bir karışımına titan tetraizopropoksit (TTIP), 1.5 g çözülür ve bir manyetik karıştırıcı ile 30 dakika boyunca oda sıcaklığında çözelti (25 ° C) karıştırılır.
    2. etanol (% 99.9) 3.64 g polivinil pirolidon (PVP) ağırlık bakımından% 11 çözülür ve bir sıcak levha manyetik karıştırıcı kullanılarak 1 saat boyunca 65 ° C'da, çözelti karıştırılır.
    3. Birleştirin ve bir sıcak levha manyetik bir karıştırıcı ile 4 saat 65 ° C sıcaklıkta iki çözüm karıştırın.
  2. elektrospinning
    1. 200 um iç Diame bir paslanmaz çelik iğne bağlı bir şırınga içine hazırlanan çözelti yükter. dalgıç çıkardıktan sonra şırıngaya doğrudan çözüm dökün.
    2. yüksek DC voltajı (15 kV) topraklanmış alt-tabaka üzerine yerleştirilmiş bir silisyum üzerinde 10 dakika süre ile 0.3 ml / st bir akış oranında (2 cm x 2 cm) sürekli solüsyonun verilmesini. Elektrospinning sırasında iğne ve 10 cm topraklı alt-tabaka arasındaki mesafeyi ayarlamak.
  3. NF mat kalsinasyon
    1. Bir fırın içinde NF koruyucu serin ve yüksek vakum koşullarında (5 x 10 -5 torr) altında 3 ° C / dk'lık bir rampa oranında 500 ° C'ye kadar sıcaklık kadar değişebilmektedir.
    2. 3 saat 500 ° C sıcaklık muhafaza edin. fırın içinde oda sıcaklığında (25 ° C) örneklerinin sıcaklık soğutun.

Bir Santrifüj mikroakışkan Disc içine TiO 2. Entegrasyon 2 NF Mat

  1. Bir diskin Fabrikasyon
    1. 3D tasarım yazılımı (örneğin, Sol kullanınidWorks veya) benzer diskin her katmanın odaları, kanal, ya da vanaları tasvir. Kod üreten yazılım (örn EdgeCAM veya benzeri) kullanarak bilgisayar nümerik kontrol (CNC) kod tasarım dosyalarını dönüştürün. Talimatlara göre yazılımları kullanın manuel 23,24 Not:. Bu cihazda kullanılan tipik kanal boyutları x 0.3 mm (genişlik x derinlik) 1,0 mm'dir.
    2. (CNC freze makinesinin çalışma yazılımını açın, örneğin., DeskCNC veya benzeri) ve işletim yazılımı, CNC kodu yüklemek ve sırasıyla aşağıdaki tıklatın: "AUTO" -> "G KODU AÇIK" -> oluşturulan CNC kodu seçin.
    3. CNC freze PC plakasını: Disk tabakası için üst tabaka ve 5 mm PC plakaları için 1 mm PC tabak kullanın. "BAŞLAT" butonuna tıklayarak diskin her katmanı kesmek için CNC freze makinesi çalıştırın.
  2. Diske TiO2 NF mat Transferi
    1. bir silikon alt-tabaka ve 40 uL (tridekaflor-1,1,2,2-tetrahydrooctyl), 30 dakika boyunca vakum altında bir vakum odasına -1-trichlorosilane ihtiva eden küçük bir Petri tabağına yerleştirin. fluorosilane buharlaşmakta ve alt tabaka üzerine kaplanmış olur.
    2. Bir vakum odası 1 oranında ve gazını: 10 bir sertleştirici madde ile birlikte polidimetilsiloksan (PDMS) ön-polimer karıştırın. Spin-kat 60 saniye boyunca 650 rpm'de bir silikon yüzeye PDMS.
    3. 10 dakika yapışkan bir duruma ulaşmak için 65 ° C sıcaklıkta bir fırın içinde, silikon alt-tabaka üzerine kaplanmış PDMS Cure.
      Not: Kür süresi çevre koşullarına bağlı olarak değişebilir, ve yapışma kuvveti reometresi kullanılarak yapışma testi ile test edilebilir.
    4. Bir cımbız kullanarak PDMS kaplı silikon üzerine elektrospinning ve kalsinasyon tarafından hazırlanan TiO2 NF mat aktarın. Daha sonra el (cam slayt, örneğin.) Düz bir nesneyle transfer TiO2 NF mat bir konformal baskı uygulamak ve nesneyi çıkartın. koymak4 saat 65 ° C ya da 1 saat boyunca 80 ° C'de bir fırında Bu örnek tamamen PDMS tabakasını sertleştirmek için.
    5. 20 ul PDMS / sertleştirici karışımı kullanılarak disk kaplayın bağlanma reaksiyonu odaları (10: 1), bir yapışkan tabaka olarak işlev yapar diske TiO2 NF mat takmak için.
    6. PDMS katmanda TiO2 NF mat, etanol (% 99.9), 50 ul koyun, 6 mm çapında bir zımba deliği olan NF mat kesilmiş ve 20 ul ile kaplanmış bağlanma reaksiyonu odalarına TiO2 NF mat kesim transfer önceki adımda PDMS.
      NOT: Bu adımda, etanol Si substrat kesilmiş TiO2 NF mat ayırmak için yararlı olacaktır.
    7. 1 saat tam PDMS tedavi etmek için 4 saat boyunca ya da 80 ° C 'de 65 ° C' de fırında TiO2 NF MAT entegre disk inkübe edin.
  3. Diskte TiO2 NF mat yüzey modifikasyonu
    1. PEtanol (3-glisidoksipropil) metildietoksi silan (GPDES) onarılması% 1 h / h çözeltisi (% 99.9).
    2. 140 W, 180 saniye boyunca 50 sccm oksijen akışı oksijen plazma ile TiO2 NF mat entegre disk davranın. Her bir nano mat GPDES çözeltisi 100 ul koyun ve 2 saat oda sıcaklığında (25 ° C) inkübe edilir.
    3. Bir yıkama şişesi kullanılarak etanol (% 99.9) dağıtım yoluyla yüzeyler kısaca yıkayın, ardından diski tersini ve temiz karşı mendil lekeleme tamamen etanol çıkarın. 1 saat boyunca 80 ° C'de tedavi. Yukarıda belirtildiği gibi, fiziksel olarak adsorbe edilmiş ve bağlanmamış GPDES molekülleri uzaklaştırmak için, aynı şekilde, etanol (% 99.9) ile iki kez yıkanır.
    4. Kuru vakum altında, bir azot akımı ile kurutma.
      NOT: Disk kullanılıncaya kadar RT (25 ° C) kapalı bir kapta saklanabilir.
  4. Yüzey üzerindeki antikorların immobilizasyonu
    1. antikorlarla 200 ug / ml 'lik bir solüsyonu (monoklonal fare anti yapmakİnsan hsCRP ya da bir fosfat tamponlu tuzlu su (PBS), tampon (pH 7.4) sahip antikorlar seyreltilmesiyle monoklonal fare anti-cTnI). bir mikropipet kullanarak bir diskin her NF hasır üzerine çözeltinin 5 ul koyun. antikorlar hakkında daha fazla bilgi için malzeme listesine bakın.
    2. nemli bir oda içinde diskleri tutmak ve 4 saat 37 ° C'de inkübe edin. % 0.1 BSA-PBS tamponuyla NF MAT kaplanmış antikorları yıkayın. bir mikropipet kullanarak yıkama tamponu 100 ul ile odasını doldurmak, aspire veya boşaltma yoluyla tampon kaldırmak. Son olarak, diski ters çevirin ve temiz bir mendil karşı kurulayın ve ardından diski monte edin.
  5. disk montaj
    1. Bir paket program (örn AutoCAD veya benzeri) kullanılarak, çift taraflı yapışkan bant ile disk tasarımı çizin. Kesme plotter CAD tasarım yükleyin.
    2. kesim plotter kullanarak çift taraflı yapışkan bant kesti. çift ​​yapışkan bant bir koruma tabakası soyulabilir ve i takmakDisk tabakanın üzerine t. diğer koruma katmanı soyulabilir ve disk katman üzerinde üst tabaka ekleyin.
    3. presleme makinesinde ön monte disk yerleştirin ve tam her valf, kanal ve odaları bağlamak için her katmanda hizalama işaretleri kullanarak üst / yapışkan / disk katmanı hizalamak. presleme makinesi kullanılarak konformal basınç uygulayın.

3. İmmunoassay

  1. Mikropipet kullanılarak% 1 BSA-PBS tamponuyla odaları doldurun ve 1 saat 37 ° C'de inkübe diski. bir mikropipet kullanarak aspirasyon ile tamponu çıkarın. reaksiyona girmemiş siteleri engellemek için bir diskin proteinin spesifik olmayan adsorpsiyon azaltmak için bu adım gerçekleştirin.
  2. doldurma ve bir mikropipet kullanılarak odaları aspire% 0.1 BSA-PBS ile iki kez yıkanır.
    NOT: Bu aşamada, disk, kullanılana kadar 4 ° C 'de muhafaza edilebilir.
  3. Bir micropipett kullanarak disk üzerinde CRP tespiti için antijen-çivili tam kan ya da CRP serbest serum yük 10 ule. Kalibrasyon grafikler yapmak için, 100 ng / ml, 1 ug / ml CRP konsantrasyonları kullanır; ve cTnl 10 ug / ml ila 100 ng / ml olmuştur.
    Not: uM aralığında genellikle tam kan içinde daha yüksek CRP seviyeleri nedeniyle, CRP içermeyen serumu cihazın düşük algılama sınırı göstermek için kullanılmıştır.
  4. kırmızı kan hücreleri ayırmak için 60 saniye boyunca 3600 rpm (391 xg) diski Spin.
  5. Açık valf lazer ışınlama ile 1. ve aktarım 3 sn 2,400 rpm'de diski iplik HRP ile konjuge antikorları tespit 8 ul içeren odasına süpernatant plazma 4 ul.
    Not:. Valf harekete ve disk işlemi görselleştirilmesi için genel işlemler önceki raporunda ayrıntılı olarak anlatılmıştır 21
  6. Protein ve tespit antikorlarının bağlanma için, 5 saniye süreyle bir karıştırma modu (15Hz s-1, 15 °) uygulanır.
  7. Valf # 2 ve bağlanma reaksiyonu odasına aşama 6'da elde edilen karışım transferi (2400 rpm3 sn). Daha sonra, karışım ve TiO2 UF bağlayıcı antikorlar arasında bir immunoreaksiyonunu elde etmek için 20 dakika boyunca bir karıştırma modu (60 Hz s-1, 2 °) uygulanır. ve reaksiyon açık valf 3. sonra atık haznesi (2400 rpm, 10 sn) rezidüel karışımı aktarın.
  8. Valf 4. açılması ve disk (2400 rpm, 4 sn) iplik bağlama reaksiyon odasına yıkama tamponu (600 ul) aktarın. Ardından odasında TiO2 UF'lerini yıkamak için 120 saniye boyunca bir karıştırma modu (30 Hz s -1, 30 °) uygulanır.
  9. Adım 3.8 aynı durumu takip ederek iki kez daha TiO2 UF'lerini yıkayın ve 20 saniye boyunca 2400 rpm'de diski iplik tamamen kalıntı yıkama tamponu çıkarın. Ardından, vana 5. kapatın.
  10. Kemilüminesan reaksiyon için, kapak 6 ve eğirme açarak bağlanma reaksiyonu odasına kemilüminesan substrat çözeltisi aktarıldıktan sonra 1 dakika boyunca bir karıştırma modu (30 Hz s-1, 2 °) uygulanırdaha sonra 10 saniye boyunca 2400 rpm'de disk.
  11. Valf 7. açılması ve 10 saniye boyunca 2400 rpm'de diski iplik algılama odalarına tepki substrat çözüm aktarın.
  12. Bir photomultiplier tüp (PMT) modülü donanımlı algılama sistemi kullanarak tepki gösterdi substrat çözeltisinden kemilüminesans sinyalleri ölçün.
    NOT: step motor, optik-bileşenler, çeviri aşamaları ve piyasada mevcut PMT: algılama sistemi aşağıdaki parçaları kullanarak özel inşa edilmiş bir makinedir. optomechanical parçalar ve step motor cihazı tutmak için monte edilir ve motor diski döndürebilirsiniz. algılama optik-parça sabit PMT tarafından gerçekleştirilir ve bu cihazın algılama odası üzerinde yer almaktadır. adım motor manipüle ederek, algılama odaları sağ PMT algılama bölgesi altında hizalanır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu protokol, yüksek hassasiyet hazırlanan ile tam kandan protein tespiti için tam otomatik santrifüj mikroakışkan cihaz kullanarak. TiO2 NF paspaslar Elektrospinning ve kalsinasyon işlemleri ile hazırlanmıştır. Bu akış hızı, voltaj ve eğirme süresi gibi koşullar, Elektrospinning, arzu edilen çapta, morfoloji ve kalınlığı UF'lerini imal etmek için optimize edilmiştir. koşulları optimize değildi zaman, oluşan UF'lerden kalitesi kötü. Özellikle, UF'ler düşük voltaj (5...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

TiO2 NF entegre disk üzerinde deney kan çok düşük hacimde, düşük fazla proteinler arasında derece hassas saptanması için hızlı, ucuz ve kullanışlı bir yöntemdir. Bu teknik, küçük örnek hacimlerini (10 ul) kullanılarak avantajı vardır ve aynı anda birden fazla numune analiz için elverişlidir. Bu bir çoklayıcı immunoassay cihazı olarak büyük bir potansiyel sunmaktadır. Cihaz, geleneksel ELISA gereklidir plazma ayrılması gibi örnek ön-işlem aşamaları gerekli değildir ilave bir avantajı vardır. Ayrıca, cihaz saye...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Bu eser Kore Ulusal Araştırma Vakfı (UÇK) hibeler (2013R1A2A2A05004314, 2012R1A1A2043747), Kore Hükümeti tarafından finanse edilen Kore Sağlık Teknoloji Ar-Ge Projesi, Sağlık ve Refah (A121994) ve IBS-R020-D1 Bakanlığı'ndan bir hibe ile desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Si gofretLG SILTRONCilalı Gofret, test sınıfıÇap (mm) = 150, oryantasyon = < 100>, katkı maddesi = bor, RES(Ohm-cm) = 1 - 30, kalınlık (μ m) = 650 - 700
Polikarbonat (PC) Daedong PlastikPCS # 6900Kalınlık (mm) = 1 ve 5 
Titanyum tetraizopropoksit, %98,Sigma-Aldrich205273
Polivinilpirolidon, Mw = 1.300.000Sigma-Aldrich437190
Asetik asitSigma-Aldrich320099
Susuz etanolSigma-Aldrich459836
Tridecafluoro-1,1,2,2-tetrahidrooktil)-1-triklorosilanSigma-Aldrich448931
PDMS ve kürleme maddesiDow CorningSYLGARD 184
GPDESGelest IncSIG5832.0 
EtanolJT Baker
FE-SEMFEINova NanoSEM
X-ışını fotoelektron spektroskopisiThermoFisherK-alpha
3D modelleme makinesiM& Ben CNC Laboratuvarı, KoreCNC freze makinesi
Balmumu dağıtma makinesiHanra Precision Eng. Co. Ltd., KoreÖzelleştirilmiş
Çift taraflı yapışkan bantFLEXcon, ABDDFM 200 şeffaf 150 POLY H-9 V-95
Kesme plotterGraphtec Corporation, JaponyaGraphtec CE3000-60 MK2
Spin kaplayıcıMIDASSPIN-3000D
Fırın (kalsinasyon)R. D. WEBB COMPANYWEBB 99
Reometre (Yapışma testi)Thermo ScientificHaake MARS  III - ORM Paketi
Oksijen plazma sistemiFEMTOSEVIMLI
Monoklonal fare anti-human hsCRPHytest Ltd., Finlandiya4C28(klon # C5)
Monoklonal fare anti-cTnIHytest Ltd., Finlandiya4T21(klon # 19C7)
HRP konjuge keçi poliklonal anti-hsCRPAbcam plc., MAab19175
HRP konjuge fare monoklonal anti-cTnIAbcam plc., MAab24460(klon # 16A11)
hsCRPAbcam plc., MAab111647
cTnIFitzgerald, MA30-AT43
Sığır AlbüminiSigma-AldrichA7906
PBSAmresco IncE404
Kan alma tüpleriBD vacutainer367844K2 EDTA 7.2 mg artı kan
toplama tüpleri
SuperSignal ELISA femtoInvitrogen37074
Modüler çok etiketli plaka okuyucuPerkin ElmerEnvision 2104
Disk işletim makinesiHanra Precision Eng. Co. Ltd., KoreÖzelleştirilmiş
Fotoçoğaltıcı tüp (PMT)Hamamatsu FotonikH1189-210
AutoCADAutoDeskSürüm 2012Tasarım yazılımı
SolidWorks 3D CAD yazılımı SOLIDWORKS A.Ş.Sürüm 20133D Tasarım yazılımı,
EdgecamVero yazılımsürümü 2009.01.06928Kod üreten yazılım
DeskCNCCarken Co.Sürüm 2.0.2.18CNC freze makinesi yazılımı

Kaynaklar

  1. Zhang, Y., et al. Nanomaterials for Ultrasensitive Protein Detection. Adv. Mater. 25 (28), 3802-3819 (2013).
  2. Hu, W., Li, C. M. Nanomaterial-based advanced immunoassays. Wiley Interdiscip. Rev. Nanomed. Nanobiotechnol. 3 (2), 119-133 (2011).
  3. Yang-Kyu, C., Chang-Hoon, K. Silicon Nanowire Biosensor for Cancer Markers. Biosensors and Cancer. , Science Publishers. 164-183 (2012).
  4. Baltazar, R., Vistas, C. R., Ferreira, G. M. Biosensing Applications Using Nanoparticles. Nanocomposite Particles for Bio-Applications. , Pan Stanford Publishing. 265-282 (2011).
  5. Roy, P., Berger, S., Schmuki, P. TiO2 Nanotubes: Synthesis and Applications. Angew. Chem. Int. Ed. 50 (13), 2904-2939 (2011).
  6. Yang, D., et al. Electrospun Nanofibrous Membranes: A Novel Solid Substrate for Microfluidic Immunoassays for HIV. Adv. Mater. 20 (24), 4770-4775 (2008).
  7. Chantasirichot, S., Ishihara, K. Electrospun phospholipid polymer substrate for enhanced performance in immunoassay system. Biosens. Bioelectron. 38 (1), 209-214 (2012).
  8. Zhang, N., et al. Electrospun TiO2 Nanofiber-Based Cell Capture Assay for Detecting Circulating Tumor Cells from Colorectal and Gastric Cancer Patients. Adv. Mater. 24 (20), 2756-2760 (2012).
  9. Ali, M. A., Mondal, K., Singh, C., Dhar Malhotra, B., Sharma, A. Anti-epidermal growth factor receptor conjugated mesoporous zinc oxide nanofibers for breast cancer diagnostics. Nanoscale. 7 (16), 7234-7245 (2015).
  10. Mondal, K., Ali, M. A., Agrawal, V. V., Malhotra, B. D., Sharma, A. Highly Sensitive Biofunctionalized Mesoporous Electrospun TiO2 Nanofiber Based Interface for Biosensing. ACS Appl. Mater. Interfaces. 6 (4), 2516-2527 (2014).
  11. Tu, W., Dong, Y., Lei, J., Ju, H. Low-Potential Photoelectrochemical Biosensing Using Porphyrin-Functionalized TiO2 Nanoparticles. Anal. Chem. 82 (20), 8711-8716 (2010).
  12. Liu, S., Chen, A. Coadsorption of Horseradish Peroxidase with Thionine on TiO2 Nanotubes for Biosensing. Langmuir. 21 (18), 8409-8413 (2005).
  13. Portan, D. V., Kroustalli, A. A., Deligianni, D. D., Papanicolaou, G. C. On the biocompatibility between TiO2 nanotubes layer and human osteoblasts. J.Biomed.Mater.Res. Part A. 100 (10), 2546-2553 (2012).
  14. Dettin, M., et al. Covalent surface modification of titanium oxide with different adhesive peptides: Surface characterization and osteoblast-like cell adhesion. J. Biomed. Mater. Res. Part A. 90 (1), 35-45 (2009).
  15. Kim, W. -J., et al. Enhanced Protein Immobilization Efficiency on a TiO2 Surface Modified with a Hydroxyl Functional Group. Langmuir. 25 (19), 11692-11697 (2009).
  16. Son, K. J., Ahn, S. H., Kim, J. H., Koh, W. -G. Graft Copolymer-Templated Mesoporous TiO2 Films Micropatterned with Poly(ethylene glycol) Hydrogel: Novel Platform for Highly Sensitive Protein Microarrays. ACS Appl. Mater. Interfaces. 3 (2), 573-581 (2011).
  17. Kar, P., Pandey, A., Greer, J. J., Shankar, K. Ultrahigh sensitivity assays for human cardiac troponin I using TiO2 nanotube arrays. Lab Chip. 12 (4), 821-828 (2012).
  18. Agarwal, S., Wendorff, J. H., Greiner, A. Use of electrospinning technique for biomedical applications. Polymer. 49 (26), 5603-5621 (2008).
  19. Ding, B., Wang, M., Wang, X., Yu, J., Sun, G. Electrospun nanomaterials for ultrasensitive sensors. Mater. Today. 13 (11), 16-27 (2010).
  20. Liu, Y., Yang, D., Yu, T., Jiang, X. Incorporation of electrospun nanofibrous PVDF membranes into a microfluidic chip assembled by PDMS and scotch tape for immunoassays. ELECTROPHORESIS. 30 (18), 3269-3275 (2009).
  21. Lee, W. S., Sunkara, V., Han, J. -R., Park, Y. -S., Cho, Y. -K. Electrospun TiO2 nanofiber integrated lab-on-a-disc for ultrasensitive protein detection from whole blood. Lab Chip. 15 (2), 478-485 (2015).
  22. Li, D., Xia, Y. Fabrication of Titania Nanofibers by Electrospinning. Nano Lett. 3 (4), 555-560 (2003).
  23. Lombard, M. SolidWorks 2013 BIBLE. , John Wiley & Sons Inc. Indianapolis, IN. (2013).
  24. Tickoo, S. EdgeCAM 11.0 for Manufacturers. , CADCIM Technologies. Schererville, IN. (2007).
  25. Zhu, R., et al. Improved adhesion of interconnected TiO2 nanofiber network on conductive substrate and its application in polymer photovoltaic devices. Appl. Phys. Lett. 93 (1), 013102(2008).
  26. Song, M. Y., Ahn, Y. R., Jo, S. M., Kim, D. Y., Ahn, J. -P. TiO2 single-crystalline nanorod electrode for quasi-solid-state dye-sensitized solar cells. Appl. Phys. Lett. 87 (11), 113113(2005).
  27. Katsuhiro, O., et al. Electrospinning processed nanofibrous TiO2 membranes for photovoltaic applications. Nanotechnology. 17 (4), 1026-1031 (2006).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

ELISANanolif EntegrasyonuElektrospunlamaPDMS KaplamaDisk MontajOtomatik mm nanalizFemtomolar Duyarl l k

İlgili makaleler