Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bakteri ve mantar virüsle enfekte olmuş hücreler üzerinde Biyofilm Başlatma Belirlenmesi

9.3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/54162

⸱

6 Temmuz 2016

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, Midwestern University

Bu makalede

Özet

Burada, virüs bulaşmış HeLa hücre tek katmanlarına yapışma için Krallıklar arası ilişki ve rekabetin (bakteri ve mantar) belirlenmesi için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, prokaryotlar, ökaryotlar ve virüslerin çoklu kombinasyonlarına genişletilebilir.

Özet

mantarlar, bakteriler ve virüs içeren taksonomik krallıklar arasında polimikrobiyal etkileşimlerin incelenmesi önceden mikrobiyomları viral üyeleri bu virüs bulaşmış konak hücreleri ile sonraki mikrop etkileşimleri nasıl etkilediği ile ilgili incelenmiş değildir. bakteri ve mantarlar ile virüs birlikte yaşama ağız boşluğu ve genital mukoza yüzeyleri üzerinde esas olarak mevcuttur. Mukozal hücrelerin, kalıcı kronik veya kalıcı geç viral enfeksiyonları, özellikle de ifade edilen reseptör, önemli sayıda virüs değiştirilerek mikrobiyomu üyeleri üzerindeki etkisini ve türü olabilir. Ev sahibi hücre membranı mimarisinde Modifikasyon biyofilm, yani yapışma ilk adımı başlatmak için normal flora ve fırsatçı patojenlerin daha sonraki üye değiştirilmiş yeteneğine neden olur. Bu çalışma, biofil başlatılmasından HSV etkisinin ölçülmesi ve görsel inceleme için bir yöntem tarif ederS. m formasyonu (yapışma) aureus ve C. albicans.

Giriş

İnsan mikrobiyomları vücudunda coğrafi bölgeleri paylaşan birden taksonomik krallıklardan farklı organizmaların içerir. hücre yüzeylerine yapışma mikrobiyomları kolonizasyon sürecinin bir parçasıdır biyofilm, önemli bir ilk adımdır. mikrobiyomları dahil kronik ve inatçı enfeksiyonlara neden virüsler olabilir. Bu virüslerin kronik hücre enfeksiyon, farazi reseptörü durumunu bir değişikliğe neden olabilir. Ek olarak 1,2, hücre içi patojenler ile hücre girişi da sırayla bakteri ve mantarlar da dahil olmak üzere, diğer mikrobiyomları üyelerinin eki değiştirebilir ana membran akışkanlığını / hidrofobiklik etkileyebilecek . İnsan konağın aynı coğrafi bölgelerde lokalize co bu çoklu patojen arasında oluşabilir etkileşimleri anlamak için, biz mukozal yüzeyinde mevcut taksonomik krallıkların spektrumunu temsil patojenlerin etkileşimini incelemek gerekir.

t "> Herpesviridae mikrobiyomu daimi üyeleri olarak insanlarda% 100 mevcut mikropların ailesidir 3,4. Buna ek olarak aynı zamanda sürekli semptomlarının varlığı ve yokluğunda hem döken edilebilir. Spesifik olarak, herpes simplex virüs-1 ve herpes simplex virüs-2 (HSV-1 ve HSV-2 sırasıyla) oronasopharynx ve genital bölgesindeki mikrobiyomu daimi üyeleridir. bağışıklık yetkin kişiler, her iki HSV-1 ve HSV-2 neden gingivostomatit yanısıra genital herpes 5-8. bu bölgelerde, HSV kronik kalıcı nectins, heparan sülfat, lipid sallar ve herpes virüs giriş arabulucu yüzey ifadesinde değişiklikler hücreler sonuçlara HSV 9. entry dökülme viral asemptomatik / tümör nekrozu ile karakterize bir gizli enfeksiyona neden faktör reseptörü (HVEM / TNFR) 10-25. bazı bakteriler ve mantarlar, örneğin, S. aureus ve C. albicans Bu potansiyel olarak ortak temsil alıcıları, fırsatçı patojenler ise,Ayrıca oronasopharynx 26,27 mukozal mikrobiyomları üyeleri olarak bulunabilir. Oronasopharynx S. içinde aureus ve C. albicans kolonizasyon iki ayrı siteler işgal. Doğal diş ana olarak, oral mukoza, HSV-1 ve C tarafından paylaşılır albicans, anterior nazal nares S. tarafından işgal edilirken aureus 28. Ancak, rağmen, in vitro bulgular S. aureus ağız epitel hücrelerine yapışır, 29,30 S. Normal doku 29,30 mevcut olduğunda aureus seyrek Oral örneklerden izole edilir. Küçük klinik bulguların ötesinde genital yol ko-kolonizasyon niş ile ilgili bilinen S. aureus C iken, genital iltihap, akıntı ve disparoni ile karakterize, aerobik vajinit ile ilişkilidir albicans ağız boşluğu 31-35 gözlenene benzer bir mukozal lezyonlar. Böylece, ağız ve genital microbi bu üyelerin her ne kadaronların etkileşimine ilişkin bilinen küçük ome çapraz taksonomik krallıklar konak hücre yüzeyinde 5 bağlılık yoluyla biyofilm oluşumunu başlatmak için bu etkileri kendi yeteneği gibi. Bu protokol etkin bir ko-kolonizasyon / enfeksiyon fonksiyonel sonuçlarını belirlemek amacıyla uygulanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. HSV Suşlar ve Taşıma

Not: Rekombinan olmayan yayılan HSV-1 (KOS) gL86 ve HSV-2 (KOS) 333gJ - V. Twiari 36,37 tarafından sağlanan kullanılan beta-galaktosidaz raportör etkinliği ile.

  1. 1 -80 ° C de, tek bir parça ve deposundan virüs kullanabilir: Dulbecco'nun değiştirilmiş Eagle ortamı,% 20 fetal sığır serumu (FBS) ile (DMEM) 1 oranında ve kullanılana kadar yağsız süt. Viral çok depolama önce, O-nitrofenil-β-D-galactopyranoside (ONPG) ve 5-bromo-4-kloro-3-indolil-β-D-galactopyranoside (X-Gal) deneyi virüs konsantrasyonunu belirlemek.
  2. Daha önce (Şekil 1) 14 tarif edildiği gibi, raportör virüs giriş deneyi kullanılarak her bir deney tahlili çalıştırmak için X-Gal boyaması ile virüs canlılığı ve enfeksiyon (MOI) bir çokluğunu belirlemek.
  3. İstenen İçişleri Bakanlığı virüs (Opt-MEM) seyreltin. tek tabakalar (paraformaldehit; 0.5 ml / oyuk) saptamak lekelenme. Ayrı bir microti virüs canlılığı kontrolleri yerleştirinpolimikrobiyal tahlil plakaları paralel olarak ter plakası.

2. HeLa 299 Hücre İşleme

  1. 4.5 g / L glikoz,% 10 ısı ile inaktive edilmiş fetal büyükbaş hayvan serumu (FBS), gentamisin (50 ug / ml) ve L-glutamin ile DMEM içinde 37 ° C,% 5 CO2 de büyür. Tripsin çözeltisi ile% 80 izdiham Geçiş hücreleri (% 0.05 tripsin, etilendiamintetraasetik asit, 0.53 M EDTA, 5 ml / şişe).

3. C. albicans Taşıma

Not: C Klinik laboratuar bir kaynaktan elde edilen albicans orta 2x yağsız süt REMMEL -80 ° C'de saklanır.

  1. Kültür Sabouraud Dekstroz Orta (37 ° C) üzerine stok donmuş. 24 saat altkültür C sonra Fungisel ortamı üzerine albicans (37 ° C, 48 saat) kullanım için.
  2. Mikrop tüpünü (GT) formları oluşturun (3 ml FBS, temsili koloniler almak 3 saat, 37 ° C, Abs 600, 0.3). inkübasyondan sonra, GT yıkama (HBSS; 2x, 4000 xg). (37 ısıtıldı HBSS ile yıkandı, GT ekleme# 176; C; 0.32 Abs 600). GT formları hemositometre sayımı ile tespit edildiği üzere gözlenen hücre% 99 olmalıdır.
  3. Temsili Fungisel koloniler seçerek maya formu (YF) stok süspansiyonları olun (HBSS, 3 ml 0.32 Abs 600). YF formlarının sayısını / mikroskopik hemasitometre kullanarak ml. YF formları hemositometre sayımı ile tespit edildiği üzere gözlenen hücre% 99 olmalıdır.
  4. Mantar stok çalışma yapmak (25 ml HBSS GT veya YF stokunun 250 ul; 37 ° C; 10 5 CFU / ml)

4. S. aureus Taşıma

  1. Mağaza S. aureus ATCC 25923 (-80 ° C; Remmel süt 2x yağsız). koyun kanlı agara Kültürü (% 5; 37 ° C; 24 saat). temsili koloniler seçin ve hisse senedi için 2 gün içinde orta tuzları mannitol transfer (37 ° C, 18 saat).
  2. S. olun aureus stok süspansiyonu (3 mi HBSS; 1.32 Abs 600, 10 8 CFU / mL)
    1. S. çalışma yapmak aureus stok (100 ul25 ml HBSS stoklar; 10 5 CFU / ml).

5. Candida ve S. aureus Süspansiyonlar

  1. Karışık C olun albicans ve S. aureus süspansiyon (250 ul YF veya GT stok ve 25 ml HBSS 100 ul S. aureus stok).

6. polimikrobik Biyofilm Deneyi

  1. 2 x 10 5 HeLa hücre / ml 200 ul (% 85 birleşen seviyesi) Tohum 96 oyuklu plakalar. Kaya plakaları (30-45 dakika; 37 ° C), inkübasyondan önce (37 ° C,% 5 CO2 kuluçka, 18 saat). Yıkama mono tabakaları (1x; Opt-MEM) daha sonra HSV ile tohum (HSV-1 (KOS) gL86 veya HSV-2 (KOS) 33 GJ - 100 ul Opt-MEM; MOI 50 ve 10). Inkübe edin (37 ° C, 3 saat,% 5 CO2). günde sadece bir virüs suşu kullanın.
  2. Enfekte tek tabakaları yıkayın (1 x fosfat tamponlu tuzlu su, Mg + 2 ve Ca + 2 ile (PBS); 100 ul). 25 & # bırakarak sıcak HBSS ile PBS değiştirin181; her bir L.
    1. YF, GT ve / veya S. ekle (hücre oranı = 5 hedef 100 ul: 1, n = 16), S. aureus çalışma süspansiyonlar. Tablo 1 'de gösterildiği gibi inkübe edin (statik; 30 dakika; 37 ° C,% 5 CO2).
  3. İnkübasyondan sonra, her seferinde aspire bir sütun hemen Mg + 2 ve Ca + 2 ile 300 ul PBS ile yeniden doldurmak. (1:50 seyreltme 200 ul;, filtre sterilize RIPA) radyo-immünopresipitasyon tahlil lizis tamponu eklemek sonra da iki kez bu adımı yineleyin.
  4. Hızla HeLa hücre lisatı daha sonra manitol tuzları (MS) ve / veya Fungisel (F) ortam (Şekil 2) üzerine 50 ul koyun Karışım. 90 ° açıyla cam çubuk bükülmüş kullanarak lizat yayıldı. (37 ° C'de 18 saat) inkübe edin. El ile plaka başına koloni sayısını saymak. Kontroller S. oluşur aureus ve / veya C HSV-bulaşmamış HeLa hücrelerinde albicans bağlılık.

7. Görüntüleme Çalışmaları

  1. Her yuvarlak cam lamel yıkayın (12 mm; 50 ml aseton ml beher 100). Kuru ve sterilize lamelleri (Kimwipes, cam petri). Alkol alev sterilize forseps ile steril bir 24 yuvalı plakalara ait kuyucuklar içerisine, kuru steril lamelleri yerleştirin.
  2. yıkandı, steril yuvarlak cam lamelleri içeren 24 gözlü plakalara, HeLa hücreleri (96 gözlü levhalar için kullanılan 5x hacmi 1 mi) eklenir. Adımda yukarıda belirtilen 6.4 6.2.1'de tarif edildiği gibi inkübe ve işlem, 5X 96 gözlü levhalar için kullanılan ses şablonun (Tablo 2) 'e uygun bir virüs, bakteri ya da mantarları ekleyin.
  3. Son yıkamadan sonra, metanol ile slayt sel ve buharlaşmasına izin vererek mikroskopi için hücreleri düzeltin. boyanma kadar oda sıcaklığında plakaları saklayın.
  4. Aydınlık alan mikroskobu (1,000x nihai orijinal büyütme) için deiyonize su ile metanol-sabit lamelleri içeren kuyu doldurun. Hemen su aspire. Grams kristal viyole ile her lamel örtün. Yıkama olmayan bağlı leke (deiyonize su) ücretsiz lamelleri. In situ Kuru lamelleri sonra etiketli slayt montaj orta sert seti (Şekil 3) ile yapışır.
  5. floresan mikroskobu (100x objektif; 1,000x son orijinal büyütme), adım 7.4 açıklandığı gibi yıkama esas metanol ücretsiz lamelleri. kuyularda lamelleri kurulayın.
    1. Kuruduktan sonra, kapak fişleri kaldırmak ve etiketli slaytlar üzerine koyun. (- 5 ul 1) Daha sonra floresan izotiyosiyanat (FITC) ile birleştirilmiş bayır Herpes Simplex virüs tip 1:20 seyreltme lamel kapsayacak şekilde 1 + 2 gD antikoru yeterli miktarda ilave edin.
    2. 30 dakika boyunca 37 ° C'de bir nem odasında slaytlar inkübe edin. İnkübasyondan sonra, PBS 4 değişiklikler lamelleri yıkayın.
    3. Son yıkamadan sonra, etiketli slayt lamel dönün. 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (, nem odası; 30 dakika için 37 ° C DAPI) ile leke. İnkübasyondan sonra 4 Chan lamelleri yıkamaPBS ges, daha sonra sabit set montaj orta ile etiketlenmiş slayt yapıştırın.
    4. montaj orta karanlıkta oda sıcaklığında 24 saat boyunca tedavi etmek için izin verin. parlak bir alan mikroskobu veya FITC ve DAPI kesme filtreleri ile floresan mikroskop ya petrol hedefi altında lamelleri inceleyin. Eş-lokalizasyonu (Şekil 4) için en az 50 alanlar (organizma başına en az 100 hücre) fotoğraflarını inceleyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu raporda tarif edilen sistem elde edilebilen veri sağlamlık düzeyi Şekil 2, af 38 'de gösterilmiştir. Bu sistemin kullanılmasıyla viral yönden enfekte hücreleri ve birbirlerinin yapışma üzerindeki etkisi ile stafilokok ve mantar etkileşimin modülasyonuna tarif edilebilir. Polimikrobiyal etkileşimi, aynı hücreler üzerinde oluşup oluşmadığını tespit etmek için, Şekil 3 ve 4 38 'de gösterildiği gibi bu tür ça...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Şu anda hiçbir bilgi, prokaryot ökaryot ve viral yani çoklu taksonomik etki, çapraz konak mikrobiyomları yarı daimi üyelerinin kalıcı arasındaki karmaşık etkileşimlerin mevcuttur. Bu nedenle S. biyofilm başlamasını incelemek için in vitro model sisteminde bir roman geliştirdi aureus ve C. HSV-1 veya HSV-2 albicans HeLa 229 (HeLa) hücreler 38 etkilemiştir. HeLa hücre model sistem benzersiz bir avantaj sunuyor. Bu, her iki S için bir reseptör görevi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Bu proje Midwestern Üniversitesi, IL Araştırma ve Sponsorlu Programlar Ofisi (ORSP) ve Midwestern Üniversitesi Diş Hekimliği Fakültesi-Illinois (CDMI) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
C.albicans
BBL Sabouraud DekstrozBD211584
Fungisel AgarDot Scientific7205A
S.aureus
Mannitol Tuz AgarTruva Biyolojileri7143B
Koyun kanı agarTroy Biologicals221239
Hela hücreleri< / güçlü>
1x DMEM (Dubelcco'nun Modifiye Eagle Medium, 4.5 g / L glikoz ve L-glutamin ile, sodyum piruvat içermezCorning10-017-CM
Gentamisin 50 mg / mlSigma139750 ve mikro; tam DMEM Tripsin EDTA'da g / ml nihai konsantrasyon
(% 0.05 Tripsin, 0.53 M EDTA) Çözelti 1xCorning25-052-CI
Fetal Sığır SerumuAtlanta BiologicalsS11150Tam DMEM'de% 10 nihai konsantrasyon
güçlü > Diğer ortam ve reaktifler< / güçlü >
ONPGThermo Scientific34055
Ultra Saf X galInvitrogen15520-018
1x HBSS (Hanks'in Dengeli Tuz Çözeltisi)Corning20-021-CV
1x PBSDot Scientific30042-500
RIPA LysisYaşam Teknolojileri89901
< güçlü > Boyama< / güçlü >
MetanolFisher ScientificA433P-4
HSV 1 ve 2, gDViroStat196
DAPISIGMAD8417-5MG
Gram Kristal MenekşeTroy Biyolojikleri212527
Malzemeler< / güçlü >
Petri kabı 100 x 15Nokta Bilimsel229693 & nbsp;
Petri kabı 150 x 15Kord Valmark2902
96 Kuyulu plakalarEvergreen Scientific222-8030-01F
24 oyuklu plakalarEvergreen Scientific222-8044-01F
Kültür tüpleri 100 x 13Thomas Scientific9187L61
Kapak kayma daireleri, 12 mmDeckglaserCB00120RA1
<

Kaynaklar

  1. Palu, G., et al. Effects of herpes-simplex virus type-1 infection on the plasma-membrane and related functions of HeLa S3 cells. J Gen Virol. 75, 3337-3344 (1994).
  2. Vitiello, G., et al. Lipid composition modulates the interaction of peptides deriving from herpes simplex virus type I glycoproteins B and H with biomembranes. Biochim. Biophys. Acta-Biomembr. 1808, 2517-2526 (2011).
  3. Bradley, H., Markowitz, L. E., Gibson, T., McQuillan, G. M. Seroprevalence of Herpes Simplex Virus Types 1 and 2-United States, 1999-2010. J. Infect. Dis. 209, 325-333 (2014).
  4. Szpara, M. L., et al. Evolution and diversity in Human Herpes Simplex Virus genomes. J Virol. 88, 1209-1227 (2014).
  5. Arduino, P. G., Porter, S. R. Herpes Simplex Virus Type I infection: overview on relevant clinico-pathological features. J Oral Pathol Med. 37, 107-121 (2008).
  6. Looker, K. J., Garnett, G. P. A systematic review of the epidemiology and interaction of herpes simplex virus types 1 and 2. Sex. Transm. Infect. 81, 103-107 (2005).
  7. Taylor, T. J., Brockman, M. A., McNamee, E. E., Knipe, D. M. Herpes simplex virus. Front Biosci. 7, 752-764 (2002).
  8. Bernstein, D. I., et al. Epidemiology, clinical presentation, and antibody response to primary infection with Herpes Simplex Virus Type 1 and Type 2 in young women. Clinical infectious diseases : an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 56, 344-351 (2013).
  9. Sacks, S. L., et al. HSV shedding. Antiviral Res. 63, 19-26 (2004).
  10. Brandhorst, T. T., et al. Structure and Function of a Fungal Adhesin that Binds Heparin and Mimics Thrombospondin-1 by Blocking T Cell Activation and Effector Function. PLoS Pathog. 9, (2013).
  11. Green, J. V., et al. Heparin-Binding Motifs and Biofilm Formation by Candida albicans. Journal of Infectious Diseases. 208, 1695-1704 (2013).
  12. Khalil, M. A., Sonbol, F. I. Investigation of biofilm formation on contact eye lenses caused by methicillin resistant Staphylococcus aureus. Niger. J. Clin. Pract. 17, 776-784 (2014).
  13. Shanks, R. M. Q., et al. Heparin stimulates Staphylococcus aureus biofilm formation. Infection and Immunity. 73, 4596-4606 (2005).
  14. Tiwari, V., et al. Role for 3-O-sulfated heparan sulfate as the receptor for herpes simplex virus type 1 entry into primary human corneal fibroblasts. J Virol. 80, 8970-8980 (2006).
  15. Delboy, M. G., Patterson, J. L., Hollander, A. M., Nicola, A. V. Nectin-2-mediated entry of a syncytial strain of herpes simplex virus via pH-independent fusion with the plasma membrane of Chinese hamster ovary cells. Virol J. 3, (2006).
  16. Di Giovine, P., et al. Structure of Herpes Simplex Virus Glycoprotein D Bound to the Human Receptor Nectin-1. PLoS Pathog. 7, (2011).
  17. Hauck, C. R. Cell adhesion receptors - signaling capacity and exploitation by bacterial pathogens. Medical Microbiology and Immunology. 191, 55-62 (2002).
  18. Kramko, N., et al. Early Staphylococcus aureus-induced changes in endothelial barrier function are strain-specific and unrelated to bacterial translocation. Int. J. Med. Microbiol. 303, 635-644 (2013).
  19. Roy, S., Nasser, S., Yee, M., Graves, D. T., Roy, S. A long-term siRNA strategy regulates fibronectin overexpression and improves vascular lesions in retinas of diabetic rats. Molecular vision. 17, 3166-3174 (2011).
  20. Sato, R., et al. Impaired cell adhesion, apoptosis, and signaling in WASP gene-disrupted Nalm-6 pre-B cells and recovery of cell adhesion using a transducible form of WASp. Int. J. Hematol. 95, 299-310 (2012).
  21. Shukla, S. Y., Singh, Y. K., Shukla, D. Role of Nectin-1, HVEM, and PILR-alpha in HSV-2 entry into human retinal pigment epithelial cells. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 50, 2878-2887 (2009).
  22. Stump, J. D., Sticht, H. Mutations in herpes simplex virus gD protein affect receptor binding by different molecular mechanisms. J Molecu Model. 20, (2014).
  23. Zelano, J., Wallquist, W., Hailer, N. P., Cullheim, S. Expression of nectin-1, nectin-3, N-cadherin, and NCAM in spinal motoneurons after sciatic nerve transection. Experimental Neurology. 201, http://dx.doi.org/10.1016/j.expneurol.2006.04.026 461-469 (2006).
  24. Akhtar, J., et al. HVEM and nectin-1 are the major mediators of herpes simplex virus 1 (HSV-1) entry into human conjunctival epithelium. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49, 4026-4035 (2008).
  25. Heo, S. K., et al. LIGHT enhances the bactericidal activity of human monocytes and neutrophils via HVEM. J. Leukoc. Biol. 79, 330-338 (2006).
  26. National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report. Am J Infect Control. 32, 470-485 (2004).
  27. Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis of 24,179 cases from a prospective nationwide surveillance study. Clinical infectious diseases : an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 39, 1093-1093 (2004).
  28. Colacite, J., et al. Pathogenic potential of Staphylococcus aureus strains isolated from various origins. Ann. Microbiol. 61, 639-647 (2011).
  29. Colombo, A. V., et al. Quantitative detection of Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis and Pseudomonas aeruginosa in human oral epithelial cells from subjects with periodontitis and periodontal health. J. Med. Microbiol. 62, 1592-1600 (2013).
  30. Merghni, A., Ben Nejma, M., Hentati, H., Mahjoub, A., Mastouri, M. Adhesive properties and extracellular enzymatic activity of Staphylococcus aureus strains isolated from oral cavity. Microb Pathogen. 73, 7-12 (2014).
  31. Donders, G. G. G., et al. Definition of a type of abnormal vaginal flora that is distinct from bacterial vaginosis: aerobic vaginitis. Bjog. 109, 34-43 (2002).
  32. Li, J. R., McCormick, J., Bocking, A., Reid, G. Importance of vaginal microbes in reproductive health. Repro Sci. 19, 235-242 (2012).
  33. Jarvis, W. R. The epidemiology of colonization. Infect Cont Hosp Epidemiol. 17, 47-52 (1996).
  34. Okonofua, F. E., Akonai, K. A., Dighitoghi, M. D. Lower genital-tract infections in infertile nigerian women compared with controls. Genitourin Med. 71, 163-168 (1995).
  35. Nenoff, P., et al. Mycology - an update Part 2: Dermatomycoses: Clinical picture and diagnostics. J Der Deutschen Dermatol Gesellschaft. 12, 749-779 (2014).
  36. Hubbard, S., et al. Contortrostatin, a homodimeric disintegrin isolated from snake venom inhibits herpes simplex virus entry and cell fusion. Antivir. Ther. 17, 1319-1326 (2012).
  37. Shukla, S. Y., Singh, Y. K., Shukla, D. Role of Nectin-1, HVEM, and PILR-α in HSV-2 entry into human retinal pigment epithelial cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50, 2878-2887 (2009).
  38. Plotkin, B. J., Sigar, I. M., Tiwari, V., Halkyard, S. Herpes simplex virus (HSV) modulation of Staphylococcus aureus. and Candida albicans.initiation of HeLa 299 cell-associated biofilm. Curr Microbiol. , (2016).
  39. Alva-Murillo, N., Lopez-Meza, J. E., Ochoa-Zarzosa, A. Nonprofessional phagocytic cell receptors involved in Staphylococcus aureus internalization. Biomed Res Internat. , (2014).
  40. Calderone, R. A., Scheld, W. M. Role of fibronectin in the pathogenesis of candidal infections. Reviews of infectious diseases. 9, Suppl 4 400-403 (1987).
  41. Fowler, T., et al. Cellular invasion by Staphylococcus aureus involves a fibronectin bridge between the bacterial fibronectin-binding MSCRAMMs and host cell beta1 integrins. European journal of cell biology. 79, 672-679 (2000).
  42. Mao, L., Franke, J. Symbiosis, dysbiosis, and rebiosis-The value of metaproteomics in human microbiome monitoring. Proteomics. 15, 1142-1151 (2015).
  43. Christopher, R. A., Kowalczyk, A. P., McKeown-Longo, P. J. Localization of fibronectin matrix assembly sites on fibroblasts and endothelial cells. J Cell Sci. 110, (Pt 5) 569-581 (1997).
  44. Heino, J., Kapyla, J. Cellular receptors of extracellular matrix molecules. Current Pharm Des. 15, 1309-1317 (2009).
  45. Hynes, R. O., et al. A large glycoprotein lost from the surfaces of transformed cells. Annals of the New York Academy of Sciences. 312, 317-342 (1978).
  46. Mao, Y., Schwarzbauer, J. E. Fibronectin fibrillogenesis, a cell-mediated matrix assembly process. Matrix biology : journal of the International Society for Matrix Biology. 24, http://dx.doi.org/10.1016/j.matbio.2005.06.008 389-399 (2005).
  47. Schwarzbauer, J. E., DeSimone, D. W. Fibronectins, their fibrillogenesis, and in vivo functions. Cold Spring Harbor perspectives in biology. 3, (2011).
  48. Abdelmegeed, E., Shaaban, M. I. Cydooxygenase inhibitors reduce biofilm formation and yeast-hypha conversion of fluconazole resistant Candida albicans. J. Microbiol. 51, 598-604 (2013).
  49. Gow, N. A. Germ tube growth of Candida albicans. Current topics in medical mycology. 8, 43-55 (1997).
  50. Liu, Y. P., Filler, S. G. Candida albicans Als3, a multifunctional adhesin and invasin. Eukaryot. Cell. 10, 168-173 (2011).
  51. Lu, Y., Su, C., Liu, H. Candida albicans hyphal initiation and elongation. Trends Microbiol. 22, 707-714 (2014).
  52. Kabir, M. A., Hussain, M. A., Ahmad, Z. Candida albicans: A model organism for studying fungal pathogens. ISRN microbiology. 2012, 538694(2012).
  53. Ovchinnikova, E. S., Krom, B. P., Busscher, H. J., van der Mei, H. C. Evaluation of adhesion forces of Staphylococcus aureus along the length of Candida albicans hyphae. BMC Microbiol. 12, (2012).
  54. Peters, B. M., et al. Staphylococcus aureus adherence to Candida albicans hyphae is mediated by the hyphal adhesin Als3p. Microbiology-Sgm. 158, 2975-2986 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Bakteriyel TutunmaFungal AdhezyonHSV EnfeksiyonuStaphylococcus aureusCandida albicansHeLa HücreleriPolimikrobiyal AnalizKristal Viyole Boyama
Bakteri ve mantar virüsle enfekte olmuş hücreler üzerinde Biyofilm Başlatma Belirlenmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.