Yöntem makalesi

Etkin Bir Yöntem Dediferansiye Yağ Hücreleri Elde

DOI:

10.3791/54177

⸱

15 Temmuz 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Cell Regeneration and Transplantation, School of Medicine, Nihon University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DFAT hücre üretimi için koşulları değiştirdik ve burada bu hücrelerin üretimi için geliştirilmiş bir büyüme ortamının kullanımına ilişkin bilgi veriyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doku mühendisliği ve hücre tedavisi klinik büyük umutlar tutun. Bu bağlamda, bu tür mezenkimal kök hücreler (MSC'ler), multipotent hücreler, hasar görmüş organ fonksiyonu geri yakın gelecekte tedavi edici kullanılabilir. Bununla birlikte, MKH'lerin ve amplifikasyon çevreleyen verimsizlik izole oldukça invaziv prosedürü dahil olmak üzere birçok teknik sorunlar, şu anda bu tedavi yöntemlerinin potansiyel klinik kullanımını engellemektedir. Burada, dediferansiye yağ hücreleri (DFAT), MSC-benzeri hücrelerin oluşumu için son derece etkili bir yöntem getirmektedir. İlginç bir şekilde, DFAT hücreleri adipojenik, osteojenik ve kondrojenik hücreleri dahil olmak üzere çeşitli hücre tiplerine ayırt edilebilir. diğer gruplar, daha önce olgun adipoz dokudan DFAT hücrelerini oluşturmak için çeşitli yöntemler sunulmuştur olmasına rağmen, bizim yöntem daha etkili DFAT hücreleri üretmek için izin verir. Bu bağlamda, ortaya DFAT kültür ortamı (DCM), FBS% 20 ile desteklenen,% 20 FBS ile takviye edilmiş DMEM den DFAT hücreleri üreten daha etkilidir. Ayrıca, hücre kültürü yöntemi ile üretilen DFAT hücreleri çeşitli doku tiplerine redifferentiated edilebilir. Bu nedenle, doku, farklılaşmadan çalışmaları için çok ilginç ve faydalı model sunulmuştur.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre tedavisi ve doku mühendisliği rejeneratif tıp 1-5 alanında sıcak konulardır. Bu tedavi yöntemleri çok ümit vericidir ederken, çeşitli teknik sorunlar şu anda bunların klinik kullanımını engelleyebilir. Bu bağlamda, iPS hücrelerinin üretiminde olduğu gibi, tüm doku mühendisliği tedavileri hasta güvenliğini korumak için dış gen iletiminin serbest hücreler üretmek gerekir. Buna göre, başarılı insan DFAT hücrelerini 6 üretmek için ilk grup oldu. Birçok diğer araştırma grupları beri daha da modelin yararlılığını vurgulayarak, memeli kökenli 7-9 DFAT hücrelerini oluşturmak için bir yöntem benimsemiştir.

Bi....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

insan deri altı yağ numuneleri Plastik Cerrahi, Üroloji, Çocuk Cerrahisi ve Nihon Üniversitesi Itabashi Hastanesi (Tokyo, Japonya) Ortopedik Cerrahi Anabilim ameliyat geçiren hastalarda elde edildi. Hastalar yazılı bilgilendirilmiş onam alındı ​​ve Tıp Nihon Üniversitesi Etik Komitesi çalışmayı onayladı.

1. Doku Hazırlanması

  1. laboratuvara ameliyathaneye gelen doku örneği getir.
  2. (-) 5 ml PBS ile adipoz doku Yıkama 1-2 g ve 50 ml bir tüp içinde bir kez oda sıcaklığında (RT) ve 10 cm plastik tabak numuneyi.

2. kollajenaz sindirimi

  1. (-) PBS numune kaldır, steril% 0.1 10 ml, ardı....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, DFAT hücre üretme yöntemi ve araç takımı (Şekil 1) geliştirilmiştir. Bizim yöntem bize DCM ve% 20 FBS (Şekil 2A) ihtiva eden DMEM ortamı her ikisini de kullanarak DFAT hücreleri oluşturmasına olanak sağlar. Bu nedenle, biz DFAT hücrelerini üreten DCM ve DMEM verimliliğini karşılaştırıldı. Bağımsız olarak, adipositlerin sayısına (Şekil 2A ve B), DMEM karşılaştırıldığında, bu bağlamda, DCM, üç kat DFAT hücre .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

, In vitro dediferansiyasyon tavan kültürü olarak bilinen bir süreç geçmesi Olgun adipositler, daha ilkel bir fenotip dönmek ve proliferatif yetenekleri kazanmak olabilir. Bu hücreler dediferansiye yağ (DFAT) hücreleri de ifade edilmektedir. DFAT hücrelerinin multilinaj farklılaşması potansiyeli değerlendirildi. Analiz ve gen ekspresyon analizi DFAT hücreleri TSK 6 ile karşılaştırıldığında oldukça homojen olduğu saptanmıştır akım sitometrisi. Aslında, DFAT hücrelerinin hücre yüzeyi antijeni .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma kısmen Japonya Bilimi Teşvik Derneği'nin (ST261006IP, TM) İleri Araştırma ve Teknolojiden Start-up Oluşturma Programı (START Programı) ve Milli Eğitim, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan Özel Üniversitelerde Stratejik Araştırma Vakfı Programı (2014-2019) (S1411018, TM) tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
CSTI303-MSC orta CSTI87-671Bu besiyeri metinde DCM olarak tanımlanır
PBS(-)Wako166-23555Mg2+ ve Ca2+
DMEM ortamıGibco11965-092
Fetal SığırSerumu Sigma172012
Kollajenaz tip IISigmaC-6885
MakasTakasago Medical Industry Co., LtdTKZ-F2194-1
ÇalkalayıcıTAITECBioshaker V.BR-36
Falcon Hücre Süzgeci 100 μ mSarı CORNING YAŞAM BİLİMLERİ & nbsp;DL 352360
Şahin 12,5 cm² Mavi Bacalı Vidalı Kapaklı Dikdörtgen Eğimli Boyun Hücre Kültürü ŞişesiCORNING YAŞAM BİLİMLERİ & nbsp;
18 G iğneNIPRO02-002
20 ml Şırınga NIPRO08-753
Z Serisi Sürgü SayacıBECKMAN COULTER383550
içermez 353107

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lanzoni, G., et al. Concise review: clinical programs of stem cell therapies for liver and pancreas. Stem Cells. 31 (10), 2047-2060 (2013).
  2. de Girolamo, L., et al. Mesenchymal stem/stromal cells: a ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

DFAT H creleriKollajenaz DigestyonuDoku zolasyonuH cre K lt r Y ntemiDCM BesiyeriAdipojenik DiferansiyasyonOsteojenik DiferansiyasyonKondrojenik DiferansiyasyonH cre Proliferasyonu

İlgili makaleler