Lipozomların heterojen intra-tümöral birikimi, anormal bir tümör mikroçevresi ile ilişkilendirilmiştir. Burada, perfüzyon görüntüleme ile tümör mikrosirkülasyonunu ölçmek ve görüntü kılavuzluğunda robotik bir sistem kullanılarak yüksek interstisyel sıvı basıncını (IFP) ölçmek için yöntemler sunulmaktadır. Ölçümler, hacimsel mikro-BT görüntüleme kullanılarak belirlenen lipozomların intratümöral birikimi ile karşılaştırılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Perfüzyon Mekansal Ölçümler, Solid Tümörlerde interstisyel sıvı basınç ve lipozomlar Birikim
Bu makalede
Özet
Özet
lipozom heterojen intra-tümöral birikim onların etkinliğinin önemli bir belirleyicisidir. kaotik tümör mikro sirkülasyonu ve IFP yüksek Hem lipozomlar gibi nanoteknoloji dayalı ilaç verme sistemleri heterojen intra-tümöral dağılımı ile bağlantılıdır. Bu çalışmada, tümör mikrosirkülasyon, yüksek IFP ve nanopartiküllerin birikimi arasındaki ilişki in vivo deneylerle araştırılmıştır. Bu dinamik bilgisayarlı tomografi (DCE-BT) gelişmiş kontrast ve tümör IFP ölçümü mikro-CT tarayıcıya bağlı yeni bir görüntü kılavuzluğunda robotik iğne yerleştirme sistemi kullanılarak tümör mikrosirkülasyonun değerlendirilmesi ile gerçekleştirilmiştir. Lipozomların intra-tümöral birikimi stabil olarak kontrast maddesi iyoheksol (BT-lipozomlar) kapsülleyen bir nano lipozomal formülasyonun BT görüntü bazlı değerlendirilmesi ile belirlenmiştir. BT görüntüleme mekansal dağılımı co-lokalizasyonu için izinTümör hemodinami, meme kanseri bireysel subkütan ksenograft fare modelinde IFP ve BT-lipozom birikimi. Ölçümler perfüzyon ve plazma hacim oranı lipozom intra-tümöral dağılımının güçlü arabulucular olan keşfine yol açtı. Ayrıca, sonuçlar IFP kan akışını modüle yoluyla lipozom dağıtımı aracılık dolaylı bir rol oynadığını göstermektedir.
Giriş
nanoparçacık ilaç verme sistemleri intra-tümöral birikiminin ölçülmesi sitotoksik ilacın yeterli bir konsantrasyonu, tümör içinde elde edilmiş olup olmadığını belirlemek için önemli bir araç sağlayabilir. "Görüntü mümkün" lipozomal sistemlerinin geliştirilmesi non-invaziv ve nicel sağlar in vivo böyle pozitron emisyon tomografisi (PET) 1, optik floresan 2, ve bilgisayarlı tomografi (BT) 3 olarak görüntüleme yöntemleri ile ilaç uygulama aracı tespiti, 4 ve manyetik rezonans görüntüleme (MRG) 5. Görüntüleme farmakokinetik ve lipozom verme sistemleri biyolojik dağılımını belirlemek ve nanoparçacık birikimi ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm in vivo deneyler Üniversitesi Sağlık Ağı Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanan bir protokol çerçevesinde gerçekleştirildi.
1. Hayvan Modeli
- Birlikte% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve penisilin-streptomisin 100x seyreltme ile DMEM içerisinde 5 x 10 6, MDA-MB-231 7 göğüs adenokarsinoma tümör hücreleri arasında kültür.
- Hasat hücreler% 0.05 tripsin-EDTA çözeltisi kullanılarak% 80 konfluent olduğunda. 3-5 dakika sonra DMEM 3x hacim tripsin-EDTA etkisiz hale getirir. hücrelerin 15 ul tablet alın ve bir hemasitometre kullanarak saymak. 200 x g'de 5 dakika boyunca bir....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Söz konusu protokol, sırasıyla 91,8 ± 0,3 nm ve -45,5 ± 2,5 mV, iyoheksol kapsüllü bir konsantrasyon ile CT-lipozomlar elde lipozom çapı ve 55 mg ml -1 zeta potansiyelini demek gerekir. Şekil 1a temsilcisi DCE-BT görüntüleme içerir sonuçlar, iyoheksol intra-tümöral birikimi zamansal değişiklikleri gösterir hacimsel veri zaman serisi elde edilmiştir. Tümör içinde bir ROI seçilmesi perfüzyon, damar geçirgenliği, plazma hacim fraksiyonu ve interstisyel hacim frak.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada sunulan görüntü tabanlı ölçme yöntemleri tümör mikrosirkülasyon özellikleri, IFP ve BT-lipozom birikiminin mekansal dağılımı tespitine imkan. Bu özellikleri ilişkilendirmek önceki girişimler, birden fazla tümör taşıyan hayvanlar üzerinden dökme ölçümler dayanıyordu ve bu nedenle yaygın olarak nano-boyutlu ilaç verme sistemleri 15 gözlenmiştir intra-tümöral birikiminde heterojenite mekanizmasını açıklamak duyarlılık eksikliği olan. DCE-BT tümör mikrosirkülasyonun özelliklerinde intra-tümöral varyasyonla.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur
Teşekkürler
Yazarlar, MDA-MB-231 hücrelerinin kültürlenmesi ve MDA-MB-231 ksenogreftlerinin implante edilmesindeki yardımları için Dr. Javed Mahmood'a, CT-lipozomları hazırladığı için Linyu Fan'a teşekkür eder. Shawn Stapleton, CIHR'deki Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırmaları Lisansüstü Burs Programı ve Terry Fox Vakfı 21. Yüzyıl için Radyasyon Araştırmalarında Mükemmeliyet Stratejik Girişimi'nden (EIRR21) sağlanan fon için minnettardır. Bu çalışma, Terry Fox New Frontiers Programı (020005) ve Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri'nden (102569) alınan hibelerle desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| MDA-MB-231 metastatik meme adenokarsinomu tümör hücreleri | ATCC | HTB-26 | |
| Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı (DMEM) | Yaşam Teknolojileri | 11965-092 | |
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | Sigma-Aldrich | F1051 | |
| HyClone Penisilin-Streptomisin 100x Çözümü | GE Sağlık Yaşam Bilimleri | SV30010 | |
| Tripsin-EDTA (% 0.05), fenol kırmızısı | ThermoFisher Scientific | 25300-054 | |
| 1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfokolin (DPPC) | Avanti Lipids Inc., ABD | 850355P | |
| Kolesterol (CH) | Avanti Lipids Inc., ABD | 700000P | |
| 1,2-distearoil-sn-glisero-3-fosfoetanolamin-N-poli (etilen glikol) 2000 (DSPE-PEG2000) | Avanti Lipids Inc., ABD | 880128P | |
| Omnipaque (Iohexol) 300 mg iyot / ml & nbsp; | GE Healthcare, CA | ||
| 80 nm gözenek boyutu Track-Etch polikarbonat membranlar | Whatman Inc., ABD | ||
| 200 nm gözenek boyutu Track-Etch polikarbonat membranlar | Whatman Inc., ABD | ||
| 10 m Lipex Ekstruder | Nothern Lipids Inc, CA | ||
| Diyaliz Torbası Moleküler Ağırlık Kesme (MWCO) 8 kDa | Spectrum Labs, ABD | ||
| 750.000 Nomik Moleküler Ağırlık Kesme (NMWC) Teğetsel akış sütunu | MidGee ultrafiltrasyon kartuşu, GE Healthcare, CA | ||
| Peristaltic pompa | Watson Marlow Inc., ABD | ||
| UV spektrometresi | Helios γ, Spectronic Unicam, ABD | ||
| 90Plus partikül boyutu analizörü ve nbsp; | Brookhaven, Holtsville, ABD | ||
| eXplore Locus Ultra mikro-CT sistemi | GE Healthcare, CA | CT-Konsol Yazılımı | |
| AxRecon GPU Tabanlı Yeniden Yapılandırma | Acceleware Corp. CA | ||
| 27 G Kateter SURFLO Kanatlı İnfüzyon Seti | Terumo Tıbbi Ürünler, ABD | SV*27EL | |
| PE20 polietilen tüp | Becton Dickinson, ABD | 427406 | |
| Kalem ucu 25 G ve kez; 3.5 & prime; &asal; Whitacre spinal iğne | Becton Dickinson, ABD | 405140 | IFP iğnesi |
| P23XL ve nbsp; basınç dönüştürücü & nbsp; | Harvard Apparatus, CA | P23XL | |
| PowerLab 4/35, Bridge Amp, LabChart Pro 7.0 ile | ADInstruments Pty Ltd., ABD | PL3504, FE221 | IFP edinim sistemi ve edinim yazılımı |
| CT-Sabre Small Animall Intervention sistemi (CT-IFP Robot) | Paralaks Yenilikleri, CA | CT-IFP robotu kullanılarak manipüle edildi Kontrol Yazılımı | |
| CT-IFP robot hizalama yazılımı | Özel Matlab yazılımı | ||
| DCE-CT Analiz Yazılımı | Özel Matlab yazılımı | ||
| Matlab 2013b | Mathworks, ABD |
Kaynaklar
- Seo, J. W., Zhang, H., Kukis, D. L., Meares, C. F., Ferrara, K. W. A novel method to label preformed liposomes with 64Cu for positron emission tomography (PET) imaging. Bioconjugate chemistry. 19 (12), 2577-2584 (2008).
- Huang, H., Dunne, M., Lo, J., Jaffray, D., Allen, C.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
