Ameliyat sonrası oluşan abdominal yapışıklıklar ağrı, infertilite ve ince barsak obstrüksiyonu nedeniyle hastaneye yatış ve yeniden ameliyatın önemli bir nedenidir. Farelerde abdominal yapışıklıklar oluşturmak için cerrahi prosedürümüz, yapışıklıkların oluşumunun altında yatan mekanizmaları incelemek için güvenilir bir araçtır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Karın Adezyonların Oluşturulması
Bu makalede
Özet
Özet
Abdominal yapışıklıklar, tipik olarak cerrahi veya intraabdominal enfeksiyon gibi inflamatuar bir hakarete yanıt olarak peritoneal boşlukta oluşan fibrotik dokudan oluşur. Yapışma oluşumunun altında yatan kesin mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır. Birçok bileşik ve fiziksel bariyer, değişen başarı seviyeleri ile ameliyat sonrası yapışıklıkları önleme yetenekleri açısından test edilmiştir. Fare ve sıçan, abdominal yapışıklıkların incelenmesi için önemli modellerdir. Literatürde fare ve sıçanlarda adezyonların oluşturulması için birkaç farklı teknik bulunmaktadır. Burada, sağ karın yan duvarına yerleştirilen dikişler ve zımpara kağıdı ile çekumun aşındırılmasının kullanıldığı bir protokol tarif edilmiştir. Fare uyuşturulur ve karın hazırlanır. Orta hat laparotomisi oluşturulur ve çekum tanımlanır. Çekum yüzeyini nazikçe aşındırmak için zımpara kağıdı kullanılır. Daha sonra, sağ abdominal yan duvarın peritonuna sekiz figürlü birkaç dikiş yerleştirilir. Karın boşluğu sulanır, az miktarda nişasta uygulanır ve kesi kapatılır. Bu tekniğin en düşük mortalite oranı ile en tutarlı adezyonları ürettiğini bulduk.
Giriş
Karın yapışıklıklar genellikle cerrahi veya karın içi enfeksiyonu takiben, inflamasyon yanıt olarak karın içinde formu skar dokusu bir form vardır. Yapışıklıklar kronik karın ağrısı ve kısırlık başlıca nedenidir ve ince bağırsak tıkanması 1 en sık nedenidir. Yapışıklıklar varlığı, ikinci bir karın operasyonu daha zor performans ve komplikasyonların 2 olasılığını artırır yapar.
Yıllar süren araştırmalara rağmen, yapışıklık oluşumunu altında yatan mekanizmaları yeterince anlaşılamamıştır. Peritoneal bir başlangıç yaralanma ardından barsak ve karın duvarı birlikte, 3 yüzeylerini bağlayan bir pıhtı oluşturan fibrin bakımından zengin sıvının, bir eksudasyon neden olduğu bilinmektedir. Daha sonra, fibroblastlar ve diğer hücreler yapışkan uzaya göç ve bağ dokusunu 4 salgılar. yıllara aylarda yapışma kan damarlarını ve sinirleri geliştirerek olgunlaşır 5.
Çeşitli ticari ürünler abdominal cerrahi (örneğin, Seprafilm) sonrasında doku kaynaşması oluşumunu azaltmak için tasarlanmış ürünler mevcuttur. Tüm bu ürünlerin mekanik bariyerler olarak hareket ve bağırsak döngüler ve karın duvarı 6,7 arasındaki fiziksel teması engelleyerek yapışma oluşumunu durdurmak. Cerrahi adhezyon bariyeri yapışıklık 8 oluşumunu azaltır kontrollü çalışmadan kanıtlara rağmen, pek çok cerrah anekdotal mekanik bariyer ürünlerin etkinliği ile hayal kırıklığı olmuştur.
Şu anda yapışıklık oluşumunda rol kesin süreçler tam olarak anlaşılamamıştır olduğu gerçeğini yansıtır herhangi bir ilaç tabanlı anti-yapışma tedaviler vardır. Özellikle yapışma oluşumunda yer olayların gelişmiş bir anlayış gerektirir yapışıklıkların oluşumuna katılan hücresel veya moleküler ajanlar hedefleyen bir terapi geliştirilmesi. çeşitli grups yapışıklık oluşumu 9-11 için önemli olabilir moleküler yollar belirledik. Hayvan modelleri yapışıklıklar oluşumunu incelemek için mükemmel bir ortam sağlar. Birçok çalışma, çok sayıda hayvan, özellikle de sıçan ve fare 6,12-14 yapışkanlıktaki cerrahi oluşturulmasını tarif yayınlanmıştır. Fare ve transgenik fareler ve fare tabanlı antikorların geniş yer fibrozis okuyan bizim deneyim göz önüne alındığında, yapışıklıklar çalışma için model olarak fare seçti. Bu yazıda, biz tekrarlanabilir ve güvenilir fare karın yapışıklıklar oluşturmak için geliştirilen tekniği rapor.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Aşağıdaki protokol Stanford Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve araştırma hayvanların kullanımı ile ilgili tüm kurumsal etik kurallara uygun olmuştur.
Karın Adezyonların 1. Yaratılış
- bir hafta önce prosedüre antibiyotik chow diyet fare başlatın.
- cerrahi aletler ve öncesi ılık tuzlu su sulama çözümü Otoklav.
- % 2 solunan izofluran kullanarak fare anestezisi.
- Hızlı bir uygulama tarafından izlenen bir saç kesme makinesi kullanılarak - tüy dökücü ajan (5 10 sn), karın yüzeyinin çoğunluğu saç kaldırmak. İyice yavaşça dikkatle ılık suya fare alt yarısını dunking, opsiyonel olarak ıslak gazlı bez ve silerek tüy dökücü ajan kaldırın. İyice hayvan kurulayın.
- anestezik burun konisi içine hayvanın burun yerleştirin. Tüm Ameliyat sırasında dikkatlice r izlemekGerektiğinde hayvanın espiratory hızı ve anestezik akış hızı titre edilir.
- hipotermiyi önlemek için, bu tür bir ısıtma yastığı veya ısıtıcı bir lamba gibi ısıtıcı bir cihazın kullanımı.
- Önce karın prepping için, ameliyat sırasında kaymasını önlemek için fareyi karın üstünde ve altında yer bant şeritler ile fare sabitleyin. betadin ile karın dezenfekte edin, sonra% 70 etanol ile takip edin. traş edilmiş bölgeye kenarlarında saç dahil hazırlık mümkün olduğu kadar alanı içerir. fare üzerinde bir steril örtüyü yerleştirin. (Şekil 1)
- Subkutan 0.1 mg / kg buprenorfin veya 30 g fare için 3 mikrogram enjekte.
- cilt kesi olun.
- alt karın orta hatta başlayarak, forseps ile cilt kavramak ve keskin bir makas kullanarak deride sığ dikey kesim yapmak.
- makasla xiphoid superiorda kesim taşıyın. sadece cildi girmek için özen gösterin.
- karın kaslarının n olarakiç organları kaplayan ow görünür, forseps ile kas orta hat kavramak ve çok dikkatli bir şekilde keskin bir makas kullanarak içine küçük bir kesim yapmak. yanlışlıkla bir abdominal organ içine kesmek için değil emin olun.
- Küçük bir kesim ile periton alana giren ve kas tabakası abdominal organlar uzak çekin gördükten sonra ağzına makas ekleme ve dikkatle her iki yönde keserek superior ve altta kesim uzatmak. xiphoid gelen superior için inferiora mesane üzerinde kesi uzatın. (Şekil 2)
- Şimdi bağırsak maruz kaldığı, çekum bulun ve hafifçe exteriorize. Dişli veya keskin forseps ile çekum tutmaktan kaçının. Bunun yerine, böyle bir Adson dişli forseps gibi atravmatik forseps kullanabilir.
- zımpara kağıdı ile çekum aşındırmak.
- yüzey daha az parlak ve peteşiler appea oluncaya kadar 60 saniye - Yavaşça 30 100 zımpara kağıdı ile çekum iki tarafın tüm yüzeyini aşındırmakyüzeyde r. Cerrah sağ elini ise, sağa dönük ucu ile çekum yönlendirmek ve cerrahın sol işaret parmağı üzerinde çekum asmak için yardımcı olur. (Şekil 3)
- yanlışlıkla ince sekum duvarının bir perforasyona neden kolay olduğu gibi, yavaşça zımpara yapın. zımpara çekal yüzeyi boyunca hareket ettirildiğinde grittiness az miktarda hissedilebilir olmalıdır. zımpara çekum üzerinde alıcı art arda hissedilir, bu büyük olasılıkla çekal duvardaki bir gözyaşı neden olacaktır. zımpara tanecikleri çıkarmak ve bu aşırı yabancı cisim reaksiyonuna neden olabilir, karın kalmaz emin olmak için dikkatle izleyin.
- çekal duvardaki bir gözyaşı oluşursa, işlemi sonlandırmak ve hayvan euthanize.
- Bir çekal kan damarı zımpara tarafından kesilmesi ve kanama neden olur ise, gazlı bez ile en fazla iki dakika basıncı tutun. kanama, bu saatten sonra devam ederse Ancak, etrafında bir figür-of-sekiz 7-0 monofilament sütür koyunKanama nokta. Bu güvenilir hemen hemen her durumda kanamayı durduracak. Bu duvarın dahil kısmının nekroz sebep olma riski olarak, sütür içine çekal duvarın büyük miktarda dahil özen gösterin.
- sağ karın yan duvar zarar.
- sağ karın yan duvarın kas periton yüzeyine aşındırmak için zımpara şeridi kullanın. zımparalama ile burada daha çekum daha agresif olun ve sağ karın yan duvarın tüm yüzeyi tartakladığı görünene kadar devam eder. Cilt kas tabakasında deliklerden görünür şekilde sert zımpara kaçının. (Şekil 4)
- Bir Castro-Viejo iğne sürücüsünü kullanma, sağ karın yan duvarın kas tabakası içine 4-0 figure-of-sekiz iki ila dört ipek dikiş yerleştirin. yaklaşık 5 mm uzunluğunda kuyrukları bırakın. yanlışlıkla sütür içine bağırsak duvarı yakalamak için özen gösterin. (Şekil 5)
- W doldurulmuş bir 10 ml şırınga kullanılaraki, tuz ısındı bağırsakları birkaç kez sulanması. yanı sıra içini sulamak için karın boşluğuna tuzlu akışı yönlendirin. Fare altında yüzey batırılmış hale gelirse, fareyi üzerinde taşımak veya hipotermi önlemek için, yüzey değiştirin.
- Aşırı sulama emmek için kesi üzerine yerleştirilen bir steril gazlı bez kullanın.
- nişasta bir tutam alın ve sağ karın yan duvarın yüzeyine ve çekum her iki tarafında üzerine serpin. (Şekil 6)
- aktif kanama olmadığından emin olun. varsa, durana kadar kanama noktasına doğrudan baskı uygulamak için bir gazlı bez sünger kullanın. Kanama kolaylıkla durmaz, yukarıda tarif edildiği gibi bir hemostatik dikiş yerleştirin.
- forseps ve parmak künt ucunu kullanarak, yavaşça karın boşluğuna geri bağırsak itin. adezyon oluşumunu maksimize etmek için hemen yanında karın yanağında dikişlerle için çekum yerleştirin.
- CKarın kesi kaybedersiniz.
- 6-0 emilebilir örgülü sütür kullanılarak, kesi üstündeki kas tabakası içine çalışan bir dikiş yerleştirin.
- kas tabakasını bir araya getirerek, aşağı insizyon altına doğru dikiş çalıştırın. yaklaşık 3 mm seyahat ve her yeni dikiş ile 3 mm sokması alır. sütürler yerleştirirken özen yanlışlıkla bağırsağın bir ısırık almak değil.
- kesi alt kısmında, önceki ısırık sütür bir döngü bırakmak ve dikiş kravat enstrüman için bunu kullanabilirsiniz. 5 mm kuyrukları bırakarak dikiş kesin.
- Cildi kapatmak için 6-0 naylon monofilament sütür ile yukarıdaki üç adımları tekrarlayın.
- 20 ml / kg deri altı serum fizyolojik bolus (30 g fare için yaklaşık 0.5 ml) uygulayınız.
- dorsal kürk sulama sırasında ıslak olsun eğilimi gibi kuru gazlı bez kullanarak, iyice tüm hayvan kurutun.
- Gevşek kesi karşılamak için karın etrafında soyunma bir yapıştırıcı sarın. a sınırlamak vermemeye özenNimal bacakları ya da sargı ile nefes mekaniği.
- anestezi kurtarır dikkatle hayvan izlemek. Ağrı kontrolü için işlem sonrası buprenorfin 2-3 gün boyunca her 12 saat uygulayın.
2. Hasat Yapışma Doku
- İlk ameliyattan sonra yedi gün en az bekleyin. Yine, cerrahi aletler otoklav ve izofluran ile fare uyutmak.
- % 70 etanol, ardından betadin ile karın sterilize edin. Tıraş ve histoloji zorlaştıran cildi içeren yapışma örnek saç kaplı olmayacak şekilde karın, sağ tarafında başka saç atmaktadır.
- bağırsak genellikle orijinal kesi yapışmış olduğundan, bir sol paramedian kesi kullanın. karın alt ucunda başlayarak, orijinal kesi alt solunda yaklaşık 5 mm, küçük dişli forseps ile cilt kavramak ve keskin bir makas ile deri içine kesti. Bu üstün kesim uzatıngöğüs kafesi için ly. (Şekil 7)
- makas kullanarak, kas tabakası içine ve periton boşluğu girdikten sonra kesilmiş, kesi üst ve alt kesim uzatmak. Orijinal kesi muhtemelen de karnın sağ yan duvarına yapışır ve çekum ve ince bağırsak neden yapışkan doku olacaktır. (Şekil 8)
- Çekum seviyesinden, makas kullanılarak ve insizyon kenarında başlayan, bağırsak yapışık olduğu alanın çevresinde bir daire karın duvarı içine kesme başlar.
- Yukarıda Alternatif ve çekum seviyesinin altında, yavaş yavaş barsak deri ve karın duvarı yapışık bir "ada", sonuçta tüm yol yapışma etrafını kesin ve daire tamamlayın. (Şekil 9)
- Yine deri ve karın duvarı oluşan bir doku sandviç vererek, barsak oyulmuş ve barsak geri kalanından yapışık kısmını ayırmak, makas kullanarakbir tarafta, diğer tarafta bağırsak ve yapışkan dokuya arasındaki iki bağlantı. (Şekil 10)
- İsteğe bağlı olarak, keskin karın duvarı kas cilt ayırmak için sivri makas kullanın. histoloji için ekli cildi düşünün, ama sindirim ve hücre izolasyonu için cilt kaldırılabilir. doku histolojisi için kullanılacaksa, aşırı yapışkan arayüzü bozmadan mümkün olduğunca sütür materyali kaldırmak için emin olun. sindirim ve hücre izolasyonu için o kadar uzun sindirmek süzülür doku olarak yerine sütür bırakmak kabul edilebilir.
- yapışma dokusu eksize sonra, kurumsal hayvan kullanımı komitesi tarafından onaylanmış bir insani yöntemi kullanarak fare euthanize.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
cerrahi, çekum ve muhtemelen artan kolon, karaciğer ve ince bağırsağın döngüler sonra yedi gün sağ taraflı karın duvarına yapışık olmalıdır. (Şekil 8) Kesilen doku gömüldü, kesit ve mükemmel histolojik slaytlar verecektir edilebilir. (Şekil 11, 12)
Prosedür doğru gerçekleştirildiğinde, farelerin% 100 yedi gün sonra dikkate değer adezyonlar olmalıdır. Ölüm% 5 daha az olmalıdır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu prosedürde kritik adımlar şunlardır: iyice, perforasyon neden karın yanağında sütür yerleştirerek, ve nişasta doğru miktarda uygulamadan çekum aşındırma. Sadece çekum, ya da barsak küçük bir özel bölümüne zımpara kağıdı uygulayın. ince bağırsağın büyük miktarlarda zımpara yaygın kullanımı önemli ileus neden olmaktadır. yüzeyi pürüzlü hale yeterli kuvvetle çekum aşındırmak için özen, ancak duvar gözyaşları o kadar çok değil. Bu dengeyi bulmak biraz zaman alabilir. Her zaman dikkatli bir şekilde bağırsak işlemek ve bağ...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.
Teşekkürler
CDM Amerikan Cerrahlar Koleji (AKS) Resident Araştırma Bursu ile desteklenmiştir. MSH California Rejeneratif Tıp Enstitüsü (CIRM) Klinik Fellow eğitim bursu TG2-01159 tarafından desteklenmiştir. MSH, HPL ve MTL Maksillofasiyal Cerrahi American Society (ASMS) / Maksillofasiyal Cerrahlar Vakfı (MSF) Araştırma Bursu Ödülü tarafından desteklendi. HPL NIH hibe R01 GM087609 ve Anthony Shu onuruna Ingrid Lai ve Bill Shu bir hediye ile desteklenmiştir. HPL ve MTL Pediatrik Rejeneratif Tıp Hagey Laboratuvarı ve Meşe Vakfı tarafından desteklenmiştir. MTL Gunn / Olivier Fonu tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Fisherbrand Emici Alt Pedler, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Çok Çizgili Steril Alan, 18" x 24" | Busse Hastane Tek Kullanımlık Malzemeler | 696 | Uygun boyutta dikdörtgen bir delik kesin |
| Isothesia isofluran | Henry Schein | ||
| Fisherbrand Steril pamuklu gazlı bez ped, 4 "x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum oftalmik merhem, 1/8 oz. tüp | Dechra Veterinerlik Ürünleri | NDC 17033-211-38 | |
| Nair tüy dökücü krem | Kilise & Dwight Co | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorfin ve nbsp; 0.3 mg / ml | Reckitt Benckiser İlaç A.Ş. | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insülin şırıngası, 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Povidon İyot Hazırlama Solüsyonu | Medline | MDS093944H | |
| Webcol alkol hazırlama çubukları | Covidien | 6818 | |
| Genel Amaçlı Labarotory Etiketleme bandı | VWR | 89097-912 | |
| BioGel PI cerrahi eldivenler | Mö lnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Dişli Mikro Forseps | Roboz | RS-5150 | |
| İnce makas keskin | Güzel Bilim Araçları | 14060-09 | |
| Düz tırtıklı forseps | Güzel Bilim Araçları | 11050-10 | |
| Castro-Viejo iğne sürücüsü | Güzel Bilim Araçları | 12565-14 | |
| 100 kumlu 1/4 yaprak zımpara kağıdı | ACE Donanım | 1010446 | Şeritler halinde kesin |
| 4-0 ipek sütür, 30", SH iğne | Ethicon | K831 | |
| 7-0 PDS II emilebilir monofilament sütür, 30", BV-1 iğne | Ethicon | Z135 | Genellikle çift kollu olarak gelir. Kullanılabilir iki sütür oluşturmak için dikişi orta noktadan kesin. |
| Pirinç nişastası | MP Biyomedikal | 102955 | |
| %0.9 Sodyum Klorür Sulama | Baxter | BHL2F7121 | 37 °C'ye kadar sıcak; C kullanmadan önce |
| 10 ml şırınga | Becton Dickinson | 309604 | |
| 6-0 Vicryl emilebilir örgülü sütür, 18", RB-1 konik iğne | Ethicon | J212H | |
| 6-0 Ethilon naylon monofilament ve nbsp; sütür, 18 ", P-3 iğne, | Ethicon | 1698G | |
| Tegaderm Şeffaf Film Giydirme Çerçevesi Stili, 6 cm x 7 cm | 3M | 1624W | Uzunlamasına ikiye kesin |
Kaynaklar
- Ellis, H., et al. Adhesion-related hospital readmissions after abdominal and pelvic surgery: a retrospective cohort study. Lancet. 353 (9163), 1476-1480 (1999).
- Brochhausen, C., et al. Current strategies and future perspectives for intraperitoneal adhesion prevention. J Gastrointest Surg. 16 (6), 1256-1274 (2012).
- diZerega, G. S., Campeau, J. D. Peritoneal repair and post-surgical adhesion formation. Hum Reprod Update. 7 (6), 547-555 (2001).
- Hellebrekers, B. W., Kooistra, T. Pathogenesis of postoperative adhesion formation. Br J Surg. 98 (11), 1503-1516 (2011).
- Herrick, S. E., et al. Human peritoneal adhesions are highly cellular, innervated, and vascularized. J Pathol. 192 (1), 67-72 (2000).
- Beyene, R. T., Kavalukas, S. L., Barbul, A. Intra-abdominal adhesions: Anatomy, physiology, pathophysiology, and treatment. Curr Probl Surg. 52 (7), 271-319 (2015).
- ten Broek, R. P., et al. Benefits and harms of adhesion barriers for abdominal surgery: a systematic review and meta-analysis. Lancet. 383 (9911), 48-59 (2014).
- Becker, J. M., et al. Prevention of postoperative abdominal adhesions by a sodium hyaluronate-based bioresorbable membrane: a prospective, randomized, double-blind multicenter study. J Am Coll Surg. 183 (4), 297-306 (1996).
- Cassidy, M. R., Sherburne, A. C., Heydrick, S. J., Stucchi, A. F. Combined intraoperative administration of a histone deacetylase inhibitor and a neurokinin-1 receptor antagonist synergistically reduces intra-abdominal adhesion formation in a rat model. Surgery. 157 (3), 581-589 (2015).
- Thaler, K., et al. Coincidence of connective tissue growth factor expression with fibrosis and angiogenesis in postoperative peritoneal adhesion formation. Eur Surg Res. 37 (4), 235-241 (2005).
- Hong, G. S., et al. Effects of macrophage-dependent peroxisome proliferator-activated receptor gamma signalling on adhesion formation after abdominal surgery in an experimental model. Br J Surg. 102 (12), 1506-1516 (2015).
- Whang, S. H., et al. In search of the best peritoneal adhesion model: comparison of different techniques in a rat model. J Surg Res. 167 (2), 245-250 (2011).
- Buckenmaier, C. C. 3rd, Pusateri, A. E., Harris, R. A., Hetz, S. P. Comparison of antiadhesive treatments using an objective rat model. Am Surg. 65 (3), 274-282 (1999).
- Rajab, T. K., et al. An improved model for the induction of experimental adhesions. J Invest Surg. 23 (1), 35-39 (2010).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
