Yöntem makalesi

Deafferentated Fare Retina bir düz montaj Hazırlık patlaması amacrine hücreleri Yama Kelepçe Kaydı

DOI:

10.3791/54608

⸱

13 Ekim 2016

 ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology, Baylor College of Medicine, 2Department of Neuroscience, Baylor College of Medicine, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology, Baylor College of Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, düz monte hazırlık retina nöronlar üzerinde tüm hücre yama kelepçe kayıt yapmak gösterilmiştir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Memeli retina birden nöronal tip oluşan tabakalı bir dokudur. onun karmaşık sinaptik ağ içinde nasıl işlendiğini görsel sinyaller anlamak için, elektrofizyolojik kayıtlar sık ​​sık bireysel nöronlar arasındaki bağlantıları incelemek için kullanılır. Biz fare retina GCL (ganglion hücre tabakası) ve INL hem de genetik olarak işaretlenmiş nöronların yama kelepçe kayıt (iç nükleer tabaka) için düz montaj hazırlık optimize ettik. dikey ve yanal hem de bağlantıları eski yapılandırmasında korunur, çünkü düz bağlar kayıt INL nöronlar incelenecek büyük yanal bileşenleri ile retina devreleri izin dilimleri üzerinde tercih edilmektedir. Biz kolinerjik dolup taşan amacrine hücreleri (keseler) olarak retina ayna ortaklı nöronların cevapları karşılaştırmak için bu yordamı kullandık.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Merkezi sinir sisteminin kolay erişilebilir bir parçası olan retina, onlarca yıldır sinirbilim çalışmalarında yararlı bir model olmuştur. Nöronların genetik olarak işaretlenmesi, retinadaki sinaptik bağlantıların ayrıntılı karakterizasyonuna izin vermiştir. Retinal nöronların işlevini ve morfolojisini incelemek için birçok metodoloji mevcut olduğundan, yama klemp kayıt tekniği, retinada dikey olarak iletilen sinyalleri mevcut anlayışımızda etkili olmuştur. Bu sinyaller, fotoreseptörlerdeki foton absorpsiyonundan kaynaklanır ve retinal ganglion hücrelerinin (RGC'ler) sivrilmesi yoluyla beyin görme merkezlerine gönderilir. Şimdiye kadar biriken büyük bir bilgi birikimine rağmen, vaskülarize memeli retinasındaki nöral çeşitlilik çözülmemiş durumda ve normal görüşe hizmet eden retina devrelerinin tam olarak değerlendirilmesini engelliyor. Bunun nedeni kısmen, çoğu kaydın daha proksimal retinal nöronlara1-3 erişim için yanal devre bütünlüğünü takas etmek için retina dilimleri üzerinde gerçekleştirilmiş olmasıdır. Retinanın görsel sinyalleri nasıl hesapladığına dair kapsamlı bir resim elde etmek için, nöronların, büyük ve küçük yanal bağlantıların daha iyi korunabileceği düz yuvalarda kaydedilmesi arzu edilir.

Fotoreseptörlerden bipolar hücrelere sinaptik iletim, depolarize bipolar hücreler4-6'daki kusurlu bir metabotropik glutamat reseptörü 6 (mGluR6) sinyal yolu nedeniyle veya sadece dejenere retinalardaki fotoreseptör kaybının bir sonucu olarakkesildiğinde 7-10, birçok RGC salınım aktiviteleri sergiler. Bu salınımlar birden fazla kaynaktan kaynaklanır, ancak AII amakrin hücreleri (AII-AC'ler) ve depolarize edici koni bipolar hücreler (DCBC'ler) arasındaki boşluk bağlantı eşleşmesini içeren en fazla ilgiyi görmüştür ve bu nedenle en iyi anlaşılmıştır1,7,11. Yukarıda bahsedilen AII-AC/DCBC ağının farmakolojik ablukası altında devam eden ve deafferentasyonlu retinaları olan RhoΔCTA ve Nob farelerinde OFF tipi SAC'lerin salınımını sağlayan başka bir kaynak bulduk7,8,12. Burada, INL nöron kaydı için retinal düz montajlar hazırlama protokolümüzü detaylandırıyoruz. Bu yaklaşım, kontrast arttırıcı optiklerle donatılmış bir floresan mikroskop altında tanımlanabilen floresan protein (tdTomato) ekspresyonu ile kolinerjik retinal nöronları işaretlemek için ticari fare hatlarını (Jax stok no. 006410 ve 007905) kullanır. Bu yaklaşımla elde edilen bazı deneysel sonuçlar daha önce bildirilmiştir4,5,7,13.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Etik onayı - kurumsal hayvan bakımı tarafından onaylanmış ve Baylor College of Medicine komitesini kullanmak gibi hayvan denekleri prosedürleri, kuralları ve araştırma hayvanlar için Sağlık kılavuzların National Institutes düzenlemelerine uygun olarak yapılmıştır.

1. Harici ve Dahili Çözümler

  1. retina diseksiyonu sırasında ve sonraki elektrofizyolojik kayıt harici bir çözüm olarak memeli Ringer çözeltisi kullanın. Kayıt günü (kalsiyum olmadan) 10x stok çözeltisinden, memeli Ringer çözeltisi hazırlayın ve carbogenation 15 dakika (% 95 O2 ve% 5 CO2) sonrasında CaCl2 damla damla ilave edin. Nihai 1x solüsyonu (mM cinsinden) şunları içerir: NaHCO 3, 0.8 Na 2 HPO 4, 0.1 NaH 2 PO 4, 2 CaCl2, 1 MgSO 4 ile 10 D-glikoz 120 NaCl, 5 KCl, 25.
  2. SAC salınımların karakterize etmek için iki dahili çözümleri kullanın. TestYetişkin fare RGCs üzerinde daha uzun süreli tüm hücre yama kelepçe kayıtları hazırlanan çözeltiler yararlılığı ve kullanılana kadar -20 ° C'de 500 ul alikolar içinde belirlenmiş gruplar saklayın.
    1. Membran potansiyeli salınım kaydetmek için, (mM olarak) ihtiva eden bir potasyum bazlı içi çözelti kullanımı: 125 K-glukonat, 8 NaCI, 4 ATP mg, 0.5 Li-GTP, 5 EGTA, 10 HEPES ve% 0.2 biocytin (ağırlık / h). KOH ile 7.3 pH ayarlayın.
    2. (100 CS-metansülfonat, 8 NaCI, 4 ATP mg, 0.5 Li-GTP, 5 EGTA, 10 HEPES ve% 0.2 biocytin: eksitatör inhibe edici postsinaptik akımlar kaydetmek için, (mM olarak) ihtiva eden bir sezyum bir dahili solüsyon kullanmak ağırlık / hacim). CsOH ile 7.3 pH ayarlayın.

Kayıt Günü için 2. Hazırlık

  1. açık delikli bir nitroselüloz membran hazırlamak için, el ile körleşmiş 16 G şırınga iğnesi yapılmış özel bir zımba ile membran yumruk ve iki temiz bir cam levha arasına membran dümdüz. Bir toptan için, Retina montaj çapı merkezi delik 0.2 mm yapmak ve çapı 1-1,2 mm 4 büyük delikler tarafından onu çevreleyen.
  2. elektrotlar içine iç çözümü yüklenmesi için özelleştirilmiş bir dolgu iplik yapmak için, ortada bir 10 ul pipet eritmek ve soğur ve sertleşir kadar yavaşça erimiş kısmı uzatmak. Hemen önce, kullanmak biraz daha uzun yama pipetler daha oluncaya kadar filamanın kesmek için temiz bir jilet kullanmak için.
  3. bir iç filament ile borosilikat cam tüp programlanabilir çektirmenin yama pipetler çekin. Deney günü mikropipetler imalatı ve bunları hemen kullanın.
    NOT: Isı: kayıt BİLSEM'ler için, şu çektirmenin ayarını kullanın 484; çekin: 0; hız: 25; gecikme süresi: 1; Basınç: 400 ve 462. borosilikat tüplerin OD ve kimliği bir rampa değeri sırasıyla 1.65 mm ve 1.0 mm vardır. pipetler direnç 10-14 MQ olduğunu.
  4. Bir saat doku hasattan önce, Şeki iç çözümün bir tüp çözülme> 30 dakika boyunca bir girdap üzerinde ng.

3. Retina Diseksiyon

  1. Hayvan bir ayak tutam yanıt kaybedene kadar oksijen izofluran% 4 ile hayvan anestezisi. servikal dislokasyon ile hayvan kurban.
  2. uzakta düz sivri iris makası ile optik sinir başları 1-2 mm optik sinirlerin kapalı hem gözbebekleri kesin.
  3. kan kaldırmak ve daha sonra carbogenated memeli Ringer solüsyonu sokmaktan temiz bir kağıt havlu üzerine gözbebekleri yuvarlayın. 23 G iğne ile limbus üzerinde bir delik ve mikro-makas ile limbusta boyunca keserek gözbebekleri ikiye bölmek. Ince forseps kullanılarak kornea ve lensi çıkarın.
    1. retina tam montaj için hafifçe ince forseps ile pigmente epitel kapalı tüm retina soyma ve optik sinir başı doğru kenarından dört 1.5-2 mm dik kesim yapmak.
  4. çanak içine bir delikli nitroselüloz membran daldırın ve hafifçe ile bitti retina sürükleyinGCL taraf yukarı. bir bütün montaj retina hazırlarken orta deliğe optik sinir başını yerleştirin. başka bir temiz kabına retina ile membran aktarın. Yavaşça bir Malta haçı gibi bakmak ve deliklerin üzerine dört kenarı koymak için iyi bir fırça ile retina dümdüz.
    1. retina kısmı bir seferde incelenecek olursa, pigment epitel bağlı kaldığı bir jilet ile 3-4 parçaya Aşama 3.3 ile üretilen her Göz yuvası kesti. carbogenated dış çözelti içinde ışıktan kullanılmayan parçalarını koruyun ve 12 saat içinde bunları kullanmak.
  5. Kuru filtre kağıt parçası ile nitroselüloz membran kurulayın ve forseps ile vitreus ve iç sınırlayıcı membran ve bir boya fırçası kaldırın.
  6. tüm retina kenarları tamamen altta kapalı bir cam kapak kayma ile kayıt odasına aksamını aktarmadan önce zara bağlı olduğundan emin olun. Kapak kayma ve rehydrat vakum gres ile membran sabitleyinDış çözümü ile retina e. montaj altında herhangi bir hava kabarcıkları tuzak dikkatli olun.
  7. dik bir mikroskop sahneye odasına ayarlayın. dakika başına ~ 3 ml bir oranda sıcak (34-35 ° C) carbogenated dış çözelti ile bölme serpmek.
  8. diferansiyel girişim kontrast (DIC) ve / veya Epifloresans altında GCL ve INL nöronlar görmek için 60x su daldırma lens kullanabilirsiniz sonra ilk 10x objektif mercek altında retina incelemek ve. tdTomato salgılayan BİLSEM'lere görselleştirmek için, beyaz bir 554 nm'lik bir uyarılma filtreli ve 581 nm'lik bir emisyon filtresi ile birlikte LED ışık kaynağı kullanır.

Düz montaj Retina 4. Tüm hücre yama Kelepçe Kayıt

  1. Özel bir dolgu filaman bir şırınga filtre ile iç çözelti filtre.
  2. taze çekilmiş mikropipet içine filamanın yerleştirin ve çözüm> için gümüş elektrot teli kapsayan kadar ucuna yakın iç çözüm dağıtmak5 mm. iterek veya tüp bağlı 10 mi plastik şırınga pistonu çekerek ayarlanabilir elektrodun içinde bu basınç ile bir emme kutuplu bir elektrot tutucu üzerine mikropipet sabitleyin.
  3. objektif altında pipet bulun ve retina üzerinde ~ 100 um aşağı getirmek. akım-takipçi modu (I = 0) kapsamında, DC ayakta DC gerilim sinyali sıfıra ofset kullanın. O banyoda iken pipet aracılığıyla sabit genlik kare dalga akımları enjekte edilerek mevcut kelepçe (I Kelepçe) modu altında pipet direncini ölçün ve Raccess düğmeyi çevirerek farkı nötralize. Ohm kanunu ile pipet direnci hesaplamak için Raccess topuzu üzerinde okuma kullanın.
  4. Yavaş yavaş 10 um Retina üzerinde elektroduna ~ getir. elektrot pozitif basınç uygulayın. o retina yaklaştıkça pipet yakın yansıma değişimini izleyin. Çabuk fakat nazikçe GCL içine pipet zorlamak ve pozitif pressu azaltmakhemen yeniden.
  5. etiketli nöron doğru pipet hareket ettirin. diğer nöronlar, kan damarları ve Muller hücreleri endfeet temastan kaçının. elektrot tıkanmasını önlemek için gerekirse daha pozitif basınç uygulayın.
  6. Bir çukur görünür olana kadar bir etiketli nöron orta hat yakınında pipet yerleştirin. pozitif basınç serbest bırakın ve plazma zarı pipet üzerine geri sıçrama sağlar.
  7. Bir Giga-ohm mühür oluşumunu yardım etmek pipet 20 120 pA negatif akımları uygulayın. pipet içine plazma zarı çekmek için gerekirse yumuşak bir emme uygulayın. hücre zarı yırtılmasına mühür oluşumundan sonra 5 dakika bekleyin. Bu dökülen iç çözüm süperfüzyomu tarafından temizlenmesini sağlar. hafif bir emme ile membran rüptürü.
  8. membran rüptürü sonra ve mevcut kelepçe modunda iken, köprü dengesi üzerinde geçiş ve Raccess düğmesini kullanarak ayarlayın.
    NOT: Varsa SAC gibi küçük bir hücre için, sadece hafif ayarlama gereklidir. Alternonları bir arada, kayıt uyarıcı ve sırasıyla (0 mV civarında) (-75 mV civarında) klorür ters potansiyelleri hücreyi ve glutamat tutarak gerilim kelepçe modunda (V Kelepçe) inhibitör postsinaptik akımlar. Kontrol ve ara sıra retina ve / veya mikromanipülatör sürüklenme karşılamak için gerekirse pipet konumunu ayarlayın.
  9. Taze (örn, CNKX, AP5, pikrotoksin, tubokurarin, vs.) ve kanal modülatörleri (ör flupirtin, dopamin, meklofenamik asit, vs.), sinaptik blokerler hazırlanması sırasında veya ilaç tedavisi öncesi, membran potansiyel ya da mevcut bir değişiklik kaydetmek için dondurulmuş stoktan deney günü. carbogenated Ringer solüsyonu ile uyuşturucu seyreltiniz. perfüzyon yoluyla bir toplu şekilde onları uygulayın.
  10. Kayıttan sonra, yavaşça soma gelen pipet kaldırmak. Temiz bir çanak odasından derleme aktarın. Ayır ve delikli hol olmadan başka basık nitroselüloz zar üzerine retinaya yeniden takmakes fiksasyon sırasında retina düzgünlüğü sağlamak.
  11. Oda sıcaklığında 30 dakika süreyle% 4 paraformaldehid içinde daldırarak retina sabitleyin. nitroselüloz membran retina çıkarın ve 1x PBS ile yoğun durulayın. 4 ° C, 14% 0.4, Triton X-100 ile 1 x PBS içinde seyreltilmiş boya-konjüge streptavidin ile O / N boyama ile kaydedilen hücre morfolojisini ortaya koyuyor. antifade ortamda retina monte edin ve bir tarama konfokal mikroskop kullanılarak kaydedilen hücreleri gözlemleyin.
    Not: uçucu ve toksik olan paraformaldehid içeren prosedürler, güvenlik için bir taslak odası içinde yapılmalıdır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Içi ve bir deafferentated fare retina kapalı tip BİLSEM'lerin Örnek kayıtları, Şekil 1 'de gösterilmiştir. GCL ve INL hem de kolinerjik hücre güvenilir tdTomato floresan ile tanımlanmış ve DIC altında bütün hücre yama kelepçe kayıt için hedef olabilir (Şekil 1 A) onların membran potansiyelleri (üst izleri) ve (alt izleri, Şekil 1B) o sürücü sinaptik akımların salınımını ortaya çıkarmak için. Inhibitör ve eksitatör sinaptik akımlar gerili...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Birçok laboratuvar hazırlık 15-18 montaj düz GCL nöronlardan kaydettik, ama bizim prosedürler INL nöronlardan kayıt izin verir. Biz burada başarılı rutin kayıtlar için kritik olan birkaç adım vurgulamak.

retina tazelik ve düzlük bir kayıt pipet ile nüfuz için önemlidir. Bu bağlamda, delme nitroselüloz zara retinanın sağlam bağlanma çok önemlidir ve zamanında tekrar nemlendirme (Aşama 3.4-3.6) ve ardından çözelti geçici emme ile elde edilir. Bu kısa dönemde, genellikle az 30 sn, vi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Teknik yardım için Joung Jang ve Xin Guan'a teşekkür ederiz. Virginia Commonwealth Üniversitesi'nden Dr. Rory McQuiston'a ilk yama kelepçesi makinemizi kurduğu ve deneysel prosedürlerle ilgili tavsiyeleri için teşekkür ederiz. Voltaj kelepçesi kaydı ile ilgili önerileri için Dr. Samuel Wu'ya teşekkür ederiz. Çalışma, NIH hibeleri EY013811, EY022228 ve bir vizyon temel hibe EY002520 tarafından desteklenmektedir. C-KC, Baylor Tıp Fakültesi'nde Alice R. McPherson Retina Araştırma Vakfı Kürsüsü Başkanıdır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
OlympusBX51-WIsahip sabit kademeli floresan mikroskop
SutterMP-225
Yama kelepçesi amplifikatörüA-M SistemiAM2400
AD dönüştürücüUlusal EnstrümanNI-USB-6221
Isıtıcı kontrol cihazıWarner InstrumentTC-324B
Satır İçi ısıtıcıWarner InstrumentSC-20
Peristaltik pompaRaininDynamax
pipet çektirmeSutter InstrumentP-1000
Filamentli cam tüpKing Hassas CamÖzelleştirilmiş
StimülatörA.M.P.I.Master-8
BiyositSigmaB4261
NaClSigmaS6191
KClSigmaP5405
NaHCO3< / sub>FisherBP328-1
Na2< / sub>HPO4< / sub>SigmaS0876
Na2HPO4SigmaS5011
CaCl2SigmaC5670
MgSO4SigmaM1880
D-glukonatSigmaG6152
K-glukonatSigmaG4500
ATP-MgSigmaA9187
Li-GTPSigmaG5884
EGTASigmaE0396
HEPESSigmaH4034
KOHSigmaP5958
Cs-metansülfonatSigmaC1426
CsOHSigma232041
Şırınga filtresiNalgene171
1 ml şırıngaRainin
10 & mu; l pipet ucuGenesee Scientific24-130RL
Streptavidin-488ThermoFisherS-11223
10x PBSLonza17-517Q
DIC Mikromanipülatörlere 17013002

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Choi, H., et al. Intrinsic bursting of AII amacrine cells underlies oscillations in the rd1 mouse retina. J Neurophysiol. 112 (6), 1491-1504 (2014).
  2. Gregg, R. G., et al. Nyctalopin expression in retinal bipolar cells restores visual function in a mouse model of complete X-linked congenital stationary night blindness. J Neurophysiol. 98 (5), 3023-3033 (2007).
  3. Hellmer, C. B., Ichinose, T. Recording light-evoked postsynaptic responses in neurons in dark-adapted, mouse retinal slice preparations using patch clamp techniques. J Vis Exp. (96), (2015).
  4. Tu, H. Y., Bang, A., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. Increased dendritic branching in direction selective retinal ganglion cells in nob1 mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (13), (2014).
  5. Tu, H. Y., Chen, Y. J., Chiao, C. C., McQuiston, A. R., Chen, C. K. J. Rhythmic membrane potential fluctuations of cholinergic amacrine cells in mice lacking ERG b-waves. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
  6. Demas, J., et al. Failure to maintain eye-specific segregation in nob, a mutant with abnormally patterned retinal activity. Neuron. 50 (2), 247-259 (2006).
  7. Tu, H. Y., Chen, Y. J., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. A Novel Retinal Oscillation Mechanism in an Autosomal Dominant Photoreceptor Degeneration Mouse Model. Front Cell Neurosci. 9, 513(2015).
  8. Borowska, J., Trenholm, S., Awatramani, G. B. An intrinsic neural oscillator in the degenerating mouse retina. J Neurosci. 31 (13), 5000-5012 (2011).
  9. Margolis, D. J., Detwiler, P. B. Cellular origin of spontaneous ganglion cell spike activity in animal models of retinitis pigmentosa. J Ophthalmol. , (2011).
  10. Stasheff, S. F. Emergence of sustained spontaneous hyperactivity and temporary preservation of OFF responses in ganglion cells of the retinal degeneration (rd1) mouse. J Neurophysiol. 99 (3), 1408-1421 (2008).
  11. Trenholm, S., Awatramani, G. B. Origins of spontaneous activity in the degenerating retina. Front Cell Neurosci. 9, 277(2015).
  12. Trenholm, S., et al. Intrinsic oscillatory activity arising within the electrically coupled AII amacrine-ON cone bipolar cell network is driven by voltage-gated Na+ channels. J Physiol. 590 (Pt 10), 2501-2517 (2012).
  13. Chen, C. K. J., et al. Cell-autonomous changes in displaced cholinergic amacrine cells lacking Gbeta5. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
  14. O'Brien, B. J., Isayama, T., Richardson, R., Berson, D. M. Intrinsic physiological properties of cat retinal ganglion cells. J Physiol. 538 (Pt 3), 787-802 (2002).
  15. Lee, S., et al. An Unconventional Glutamatergic Circuit in the Retina Formed by vGluT3 Amacrine Cells. Neuron. 84 (4), 708-715 (2014).
  16. Hoggarth, A., et al. Specific wiring of distinct amacrine cells in the directionally selective retinal circuit permits independent coding of direction and size. Neuron. 86 (1), 276-291 (2015).
  17. Margolis, D. J., Gartland, A. J., Singer, J. H., Detwiler, P. B. Network oscillations drive correlated spiking of ON and OFF ganglion cells in the rd1 mouse model of retinal degeneration. PLoS One. 9 (1), e86253(2014).
  18. Schmidt, T. M., Kofuji, P. An isolated retinal preparation to record light response from genetically labeled retinal ganglion cells. J Vis Exp. (47), (2011).
  19. Ivanova, E., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. Increased phosphorylation of Cx36 gap junctions in the AII amacrine cells of RD retina. Front Cell Neurosci. 9, 390(2015).
  20. Enoki, R., Koizumi, A. A method of horizontally sliced preparation of the retina. Methods Mol Biol. 935, 201-205 (2013).
  21. Akrouh, A., Kerschensteiner, D. Morphology and function of three VIP-expressing amacrine cell types in the mouse retina. J Neurophysiol. 114 (4), 2431-2438 (2015).
  22. Wei, W., Elstrott, J., Feller, M. B. Two-photon targeted recording of GFP-expressing neurons for light responses and live-cell imaging in the mouse retina. Nat Protoc. 5 (7), 1347-1352 (2010).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

T m H cre Yama KenetlemeRetinal N robiyolojitdTomato FloresansGanglion H cre TabakasN kleer TabakaRetinal Devre Sistemi

İlgili makaleler