Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Ultrason destekli İntrakardiyak enjeksiyon bağırsak için giriş için deneysel iltihabi bağırsak hastalıkları fare modellerinde kullanım artırmak için insan Mezenkimal Kök hücre

12K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/55367

⸱

1 Eylül 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Gastroenterology and Liver Disease, University Hospitals, Digestive Health Research Institute, Case Western Reserve University, 2Case Cardiovascular Research Institute, School of Medicine, Case Western Reserve University, 3Department of Medicine, Harrington Discovery Institute, Harrington Heart and Vascular Institute, University Hospitals Case Medical Center, 4Department of Radiology, University Hospitals Case Medical Center, 5Department of Biology - Skeletal Research Center, Case Western Reserve University

Bu makalede

Özet

Fare modelleri kolon iltihabı çalışmalarda Mezenkimal Kök hücre (MSC) küçük bir yüzdesi (% 1-5) intravenöz enjekte veya intraperitoneally iltihaplı kolon1,2için ev gösterdi. Bu çalışmada ultrason destekli MSCs İntrakardiyak enjeksiyonlari bağırsak için artan yerelleştirme neden gösterir.

Özet

Crohn hastalığı (CD) ortak bir kronik inflamatuar hastalık küçük ve büyük bağırsak var. Fare ve insan Mezenkimal Kök hücre (MSCs) immünsupresif potansiyele sahip ve yönetim rotanın kendi posta ve etkinliği 1 sınırlayabilirsiniz olsa bile iltihap bağırsak iltihabı, fare modelleri bastırmak için gösterilmiş olan , 3 , 4 , 5. yerel MSCs uygulamaya kolon yaralanma modelleri kolon iltihabı ameliorating, daha fazla etkinlik göstermiştir. Ancak, veri üstünde insan kemik iliği türevi MSCs (hMSCs) ince bağırsak iltihabı deneysel Crohn hastalığı, SAMP-1/YitFc (SAMP) modeli sitesi için yerelleştirme geliştirmek için teknik yetersizliği vardır. Bu eser hMSCs kronik bağırsak iltihabı iyi karakterize spontan modeli SAMP farelerde ultrason destekli İntrakardiyak enjeksiyon için yeni bir teknik anlatılmaktadır. Cinsiyet ve yaş-eşlemeli, inflamasyon-Alerjik AKR/J (AKR) fare denetimleri kullanılmıştır. Biodistribution ve yerelleştirme çözümlemek için hMSCs üç kişilik bir muhabir içeren bir lentivirus ile transduced. Üçlü muhabir ateş böceği luciferase (fl), kollarındaki görüntüleme için oluşuyordu; hücre sıralama için monomeric kırmızı floresan protein (mrfp); ve kesilmiş herpes simpleks virüs timidin kinaz (ttk), Pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme. Bu çalışmanın sonuçları bu 24 h İntrakardiyak yönetim sonra ince bağırsak iltihabı-Alerjik AKR fareler aksine SAMP farelerin hMSCs yerelleştirmek göster. Bu roman, ultrason destekli enjeksiyon SAMP fare sol ventrikül hMSCs yüksek başarı oranı hücre teslimat, minimal morbidite ve mortalite ile fare hızlı kurtarma için izin sağlar. Bu teknik MSCs gelişmiş yerelleştirme TNFΔRE6gibi küçük bağırsak iltihabı diğer modelleri için yararlı bir yöntem olabilir. Gelecekteki çalışmalar hMSCs içi Arteryel teslim tarafından artan lokalizasyonu için artan tedavi edici etkinliği yol açabilir Eğer belirleyecektir.

Giriş

Crohn hastalığı (CD) ortak bir kronik inflamatuar hastalık küçük ve büyük bağırsak ve ana bilgisayar bağışıklık sisteminin uygunsuz bir yanıt bağırsak mikropları7,8' e neden olarak düşündüm. Son yıllarda yapılan çalışmalarda fare ve insan Mezenkimal Kök hücre (MSCs) iltihabı bağırsak iltihabı1,3,4,5fare modellerinde önleyebilirsiniz göstermiştir. İnsan MSCs kemik iliği veya yağ dokusu türetilmiş CD9içerir (IBD), iltihabi bağırsak hastalığı olan hastalarda tedavi kullanmak birden fazla devam eden klinik çalışmalar vardır. MSC tedavisi için iki güzergah bu klinik çalışmalarda kullanılan: bir sistemik infüzyon içerir (Yani, intravenöz) MSCs luminal IBD (CD dahil) ve diğer, yerelleştirilmiş uygulama/enjeksiyon fistül kök hücrelerin içerir perianal CD hastalarda yolu. Bir son meta-analiz IBD, sistemik için MSC tedavisinin (Yani, intravenöz) luminal IBD (CD dahil) için MSC terapi içinde % 40 kadar etkili (% 95 GA: 7-%79) hastaların, etkinliği % 61 daha yüksek ise (% 95 CI: 36-%85), ne zaman MSCs Yerel olarak hastalıklı CD fistül9içine enjekte edildi. Son aşama III multicenter allojeneik yağ kök hücrelerin doğrudan CD hastalar şifa perianal fistüllere istatistiksel olarak anlamlı klinik ve radyolojik kanıt gösterdi perianal fistül enjekte plasebo kontrollü randomize, meta-analiz10bulguları corroborating. MSC terapi intravenöz luminal CD için verilen düşük etkinliği nedenlerle yeterli ölçüde araştırdık ama MSCs yetersiz posta inflamasyon siteye nedenlerinden biri olabilir. Fare modelleri kolon iltihabı çalışmalarda intravenöz enjekte MSCs (% 1-5) küçük bir yüzdesi ulaşmak sadece iltihaplı kolon; kalan MSCs akciğer (ilk geçiş etkisi)1ile,2 süzülür göstermiştir ,5,11,12. Birden çok fare araştırma çalışmaları bu nedenle MSC İdaresi kulunç4hayvan modellerinde mayi rota (IP) kullanılmaktadır. Ancak, onlar da sadece hücreleri küçük bir kısmını ulaşmak ve iki nokta üst üste engraft ve etkinliği olduğunu tümör nekrozis faktör-indüklenebilir gen 6 protein gibi çözünebilir parakrin faktörler salgılanmasını (TSG-6)2ile ilgili olduğunu gösterdi. MSC mekanizması immünosupresyon ve iyileşme parakrin içerir bir multipronged yaklaşım içerir; TSG-6 gibi hücre yakınlık bağımsız faktörler; ve gibi yakın bağlı faktörler, hücre ölüm-ligand 1 (PD-L1); programlanmış ya da pürüzlü 1. Bu nedenle, siteye MSC yerelleştirilmesini iltihap artan etkinliği9,13' te neden olabilir. Aslında, yeni yapılan bir çalışmada kolon yaralanma sitesinde doğrudan implante MSCs angiogenez teşvik vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) salgılayan tarafından iyileşmesinde sonuçlandı gösterdi. Öte yandan, en az bir iyileştirici etkisi sonra intravenöz enjeksiyon5belirtilmişti. Siteye kendi yerelleştirme inflamasyon (Yani, bağırsakta SAMP fareler) artırmak için sol ventrikül yönetiminde yüksek lisans için bu İntrakardiyak enjeksiyon ultrason destekli teknik geliştirilmiştir. Görüntü güdümlü enjeksiyon daha yüksek oranda başarı için yol açar ve morbidite ve mortalite oranları azalmıştır doğru bir enjeksiyon sağlar. Ayrıca, sol ventrikül içine MSCs enjeksiyon onları arteriyel dolaşımı, onlar iltihaplı bağırsak küçük ciğerlerine olma önce ulaşabilecekleri teslim eder.

Bu çalışmada, insan kemik iliği türevi MSCs (hMSCs) enjeksiyon CD14, SAMP-1/YitFc (SAMP) fare modeli için kullanılmıştır. SAMP bir iyi karakterize spontan fare ile neredeyse % 100 alellerle14küçük bağırsak iltihabı geliştirir kronik inflamasyon modeldir. İltihap yanıt mikrofloranın yokluğunda, herhangi bir kimyasal, immünolojik ve genetik manipülasyon olarak geliştirir ve çok benzeyen insan CD11. AKR/J (AKR) fareler, inflamasyon-Alerjik, SAMP, ebeveyn kontrolü fareler cinsiyet ve yaş bahisler bu çalışmada kullanılmıştır.

HMSCs izole ve aydınlatılmış onam kullanılarak doğrulanır ve önceden protokolleri15,16yayınlanan normal, kimliği belirsiz bağış elde edilen kemik iliği (BM) örneklerinden laboratuvarda genişletilmiş. Yalıtım ve genişleme, MSC yetenek sonra içinde Osteojenik, Adipojenik ve chondrogenic farklılaşma birden çok deneyleri15tarafından laboratuvar olarak değerlendirilmesi. Osteojenik fonksiyonel tahlil hidroksiapatit/TRİKALSİYUM fosfat matris hMSCs subkutan olarak immün CB17-Prkdc SCID fareler17içeren seramik küpler Reproduction tarafından gerçekleştirildi. Küp tahlil osteogenesis ve chondrogenesis potansiyel gösterir ve bireysel MSC ürünleri17değerlendirmek için nihai test olarak kabul edilir. HMSCs in vivo enjeksiyon sonra görselleştirmek için lentivirus hMSCs ateş böceği luciferase (fl), monomeric kırmızı floresan protein (mRFP) ve herpes simpleks viral timidin kinaz (ttk oluşan üç kişilik muhabir gen yapısı ile transduce için kullanılan ), bir değiştirilmiş miyoproliferatif sarkomu virüs (Tümen) organizatörü18tarafından tahrik. Ateş böceği luciferase üçlü muhabir olarak o örtü enjekte biyoluminesans hMSCs oxyluciferin için bir enzimdir ve fotonlar/beyaz ışık üretir. Bu bir vivo içinde görüntüleme sistemi, canlı hMSCs farelerde görselleştirme etkinleştirme optik hassas şarj kuplajlı cihaz (CCD) kamera (bioluminescence) tarafından algılanır. (BLI) görüntüleme bioluminescence seri olarak hücreleri izleme ve ex vivo analiz için kullanılabilecek hassas bir tekniktir. Güçlü tümen organizatörü kullanımı üçlü füzyon muhabir gen yapısı sürekli ifade ediyor ve enjekte hMSCs görüntüleme için daha--dan 16 hafta19sağlar. HMSCs transduce ve düşük iletim verimliliği var zordur. En iyi duruma getirilmiş bir iletişim kuralını kullanarak, hMSCs iletim verimliliği geliştirildi ve gelişmiş18transgene ifade edildi. MRFP ifade (bir üçlü reporter genler) Akış Sitometresi üzerinde kullanarak, hMSCs % 83'e varan yüksek bir verimlilik ile transduce yeteneği gösterilmiştir. Farklılaşma deneyleri ve in vivo küp deneyleri kondrosit, adipositler ve osteocytes17ayırt etmek için transduced hMSCs yeteneğini gösterdi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

tüm fareler deneyler ve yordamlar çalışma Case Western Reserve Üniversitesi tarafından onaylanmıştır ' s kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi. Yordamlar Derneği değerlendirmesi için yapılmıştır ve laboratuvar hayvan bakımı (AAALAC) akreditasyonu tesis akredite. Aydınlatılmış onam sonra üniversite hastaneleri kurumsal inceleme Kurulu tarafından onaylanan Protokolü Case Western Reserve Üniversitesi, kök hücre çekirdeği tesisinde altında BM Aspire.

1. Kültür ve iletim insan kemik iliği elde edilen Mezenkimal Kök hücre (hMSCs)

Not: hMSCs yalıtım'da önceki yayınları 15 ayrıntılarıyla anlatılan , 20.

  1. Kültür izole hMSCs Dulbecco içinde ' s modifiye kartal orta-düşük glikoz (DMEM-LG) orta % 10 fetal sığır serum ile (FBS) desteklenmiştir. 37 ° C, % 95 nem oranı ve % 5 CO 2 ' T175 şişeler büyüme ortamının 25 mL ile hücre kültür. Orta yerine 3-4 günde. 14 günde hMSCs birincil geçişi gerçekleştirin.
    1. Ne zaman hücreleri % 80 izdiham ulaşmak, tamamen eski orta kaldırmak ve 5 mL steril fosfat tamponlu tuz içeren hücreleri nazikçe yıkayın (PBS; 75 cm doku kültürü Şişeler için).
    2. PBS balonun kaldırın ve 4 mL % 0.25 tripsin-ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) ekleyin. Şişeye geri 37 ° C'de kuluçka 5-10 dakika süreyle yer pozlama süresi olabildiğince kısa tutmak.
    3. Hücreleri çoğunluğu çok yönlü olmuştur ya da kültür çanak bağlantısız, reaksiyon sığır buzağı serum tripsin yarım hacmi eşit hacmi ekleyerek durdurur.
    4. Hücre süspansiyon bir uygun büyüklükteki santrifüj tüpü aktarın. Senaryo Özeti 400 x g 5 min için santrifüj kapasitesi ve dikkatle süpernatant kaldır.
    5. Resuspend 5 mL orta de hücrelerde (DMEM-LG + % 10 FBS) ve bir hemasitometre içeren hücreleri saymak.
      Not: Bu noktada, hücreleri olabilir subcultured veya üçlü gazeteci transduced.
  2. HMSCs iletim üçlü reporter ile gerçekleştirmek.
    1. Bir T175 tohum 1.5 x 10 6 hücrelerde şişesi. 37 ° C, %95, nem oranı ve % 5 CO 2 büyüme ortamının 25 mL hücrelerde kültür. Hücreler eklemek için 24 saat bekleyin.
    2. Başvuru 18 ' açıklandığı gibi bir virüs 15 mL tüpler, kokteyl yapmak.
      1. Tezcan lentivirus 37 ° c bir su banyosu. Dulbecco içinde bir 5 mg/mL proteamine sülfat çözümün 160 µL eklemek ' s modifiye kartal orta (DMEM) ve kültür ortamının 8 mL (DMEM-LG + % 10 FBS) 100 µg/mL nihai bir konsantrasyon için. Girdap için 3 s. Ekle bir virüs çeşitlilik enfeksiyon (MOI) 5 (1 kez çözdürülen) .
    3. Orta hücre kültür şişeye (Adım 1.2.1) kaldırın ve virüs kokteyl hücrelere ekleyin. 10 h 37 ° C, % 95 nem oranı ve % 5 CO 2 için kuluçkaya.
  3. 4 mL DMEM-LG + %10 100 µg/mL proteamine sülfat 4 mL ekleyin FBS ve ek 14 h için kuluçkaya
  4. 24 saat sonra iletim Orta 25 mL ile değiştirerek durdurmak (DMEM-LG + % 10 FBS).
  5. Akış Sitometresi 18 tarafından mRFP ifade değerlendirme tarafından Onayla iletim verimliliği.
    Not: Burada, transduced hMSCs ile % 65'den fazla verimlilik kullanıldı.
  6. Yanında eski yerine koymak ile 25 mL taze orta hücreleri genişletin (DMEM-LG + % 10 FBS) haftada iki kez. 37 ° C, %95, nem oranı ve % 5 CO 2 hücre kültür. Geçiş hücreleri % 80 izdiham ulaşmak sonra.
  7. Hücreler için istediğiniz sayıyı ulaşıldığında, trypsinization adımları 1.1.2 - 1.1.4 başına gerçekleştirmek.
  8. Hücreleri saymak ve onları steril PBS askıya (1 x) son konsantrasyonu 1 x 10 içinde 6 hücreler/75 µL. tutmak taşıma için buz hücrelerdeyse ultrason makineye. Deneyler için hMSCs geçit numaralardan 2-5 kullanın.

2. Ultrason güdümlü hMSCs biri İntrakardiyak enjeksiyon sol ventrikül

Not: kullanım SAMP1/YitFc kurulan küçük bağırsak iltihabı ve yaş ve cinsiyet uyumlu AKR/J fareler ile deneyler için. SAMP ve AKR fareler patojen-Alerjik belirli koşullar altında sürdürmek, standart laboratuvar chow besledin ve 12-h açık/koyu döngüleri kalsınlar. Burada, ultrason destekli kardiyak enjeksiyonları bir dezenfektan ile temizlenmiş ve % 70 alkol ile durulanır CWRU hayvan araştırma tesisi bulunan özel patojen-Alerjik kardiyak ultrason odasında yapıldı. Laboratuar araştırma personeli İntrakardiyak enjeksiyonlar sırasında önlük, göz kalkanları ve steril eldiven ile yüz maskesi dahil olmak üzere kişisel koruyucu ekipman takmalıdır. Vücut ısısı fare yordam süresince korunmalı.

  1. Ultrason görüntüleme sistemi fare anesthetizing önce ayarlayın. Bu iletişim kuralı için fare ekokardiyogram için tasarlanan ultrason makinesi kullanın.
    1. Güç ve başlatma dönüştürücü (30 MHz) yeni çalışma ayarlamak için açın.
  2. % 3-4 isoflurane 0,2 oranında % 100 oksijen kullanarak bir indüksiyon odasında fare anestezi - 0,5 L/dk. %2 isoflurane burun konisi üzerinden % 100 oksijen ile tüm prosedürü için hayvan korumak. Görüntüleme gerçekleştirmeden önce uygun anesthetization onaylamak parmak pinching tarafından fare haddeleme ve hareketin yokluğu gözlemleyerek.
    Not: Kornea kurutma önlemek için anestezi indüksiyon takip gözlere oftalmik merhem uygulanmalıdır. İmzalat fareler görüntüleme makineleri (Yani, bioluminescence görüntüleme sistemi ve ultrason), nereye onlar-ecek almak bir anestezik isoflurane bakım doz aktarın. Anestezi başlangıç ve anestezi derinliği Pinch kuyruk üzerinde tepki eksikliği gözlemleyerek ve ayak yastık her 10 min anestezi süresi boyunca belirlemek.
  3. Görüntüleme tablo ve ultrason jeli sıcaklık 37 için ayarlayın ° C.
  4. Kürk saç dökücü krem kullanarak imzalat fare Toraks alan üzerinde tamamen kaldırmak.
  5. Fare görüntüleme tablo sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve her iki üst ve alt ekstremitelerde vücut hareketleri işlem sırasında önlemek için yapıştırıcı bant ile güvenli. Bir Elektrokardiyogram işlem sırasında tüm fareler için sınırlanmadığını.
  6. Göğüs alanı % 70 etanol çubukla tarafından takip bir % 10 povidone/iyot bez kullanarak cildin temiz. Fare Toraks bölgesine jel kalın bir tabaka uygulayın.
  7. Dönüştürücü tutucuya mount ve sol ventrikül üzerinde görüş alanı açıkça görünene kadar konumunu ayarlamak.
  8. Yük 150 µL transduced hMSC hücre süspansiyon (2 x 10 6 hMSCs steril PBS 150 µL içinde) 28 G 1 mL şırınga içine iğne ve şırınga uygun sahibi için güvenli. Kalp gibi atan kan görselleştirmek için küçük hava sütun şırıngada tutun. Topaklanma önlemek için enjeksiyon önce hücreleri askıya alma.
  9. Şırınga fare Toraks doğru ilerlemek, ultrason rehberlik kullanarak iğne yörünge ayarlamak ve sol ventrikül girin.
  10. Ultrason görüntüleme rehberlik takip şırınga iğne interkostal uzayda ve fare sol ventrikül içine nüfuz.
    Not: Şırınga iğne ucu sol ventrikül Ultrasonografik görüntü üzerinde açıkça görülebilir olmalıdır. Uygun yerleştirme daha fazla taze arteryel kan çıkış tarafından şırınga onaylanması. Bunlar başarılı bir ekleme işaretler.
  11. HMSC hücre süspansiyon çok yavaş üzerinde 2 dk hafif pre uygulayarak, enjektessure.
  12. Enjeksiyon askıya alınan hücrelerin yavaşça ultrason jeli kapalı temiz iğne çekilme ve teyp bağlar üzerinden fare düğmesini serbest bırakın.
  13. Önceden ısıtılmış bir yastık ile yeni, temiz Kafesteki hayvan yer.
    Not: yordamı tamamlandıktan sonra sıcak bir ortam kurtarma kadar fareler için sağlanmalıdır. Periferik vazodilatasyon kurtarma ödün vermez beri çok ısınmaya kaçınılmalıdır. Fareler yakından izlenmeli ve diğer farelerin sternal recumbency korumak için yeteneklerini tarafından belirtilen onların tam kurtarma kadar izole tuttu.
  14. Tam kurtarma anestezi ve günlük deneme sonuna kadar elde edene kadar hayvan izlemek.

3. Bioluminescence (BLI) görüntüleme hMSCs

  1. görüntü fareler 24 saat sonra İntrakardiyak enjeksiyon görüntüleme sistemi bioluminescence. Düşsel bilgisayar yazılımı içinde vivo başlatın. Görüntüleme sistemi başlatmak ve yeni bir çalışma açın.
    1. Tıklatarak Denetim Masası'ndaki Görüntü parametreleri ayarlayın " sıra Kur. " görüntüleme modunda " ışıma " ve " fotoğraf. " pozlama süreleri 0,5 küme s 10 dk. için ayarlanmış binning " orta " ve F / durdurmak için " 1. " uyarma filtre ayarlamak " blok " ve emisyon filtre " açık. " görüş alanı ayarlamak " C " iki fareler için. Sıra kurulum için görüntü Sihirbazı'nı edinme kontrol panelinden eklenir.
  2. %2,5 indüksiyon odası ve makine içinde burun konisi oksijen pompası ile küme isoflurane geçiş.
  3. D-biyoluminesans (12.5 mg/mL) 300 µL ile fare ı.p. enjekte.
  4. Anestezi indüksiyon odasında fareyi getirin.
    1. 2-3 dk sonra fare odası, burun konisi anestezi manifold üzerinde başının ile görüntüleme vivo içinde içine transfer. Görüntüleme sırasında gözleri korumak için optik merhem uygulamak. Birden çok fare görüntü için siyah ışık baffle bitişik fareler üzerine ışığın yansıması engellemek için kullanın.
  5. 'I tıklatın " elde " D-biyoluminesans enjeksiyon sonra resim alma 10 dk başlatmak için düğmeyi.
  6. Daha fazla fare görüntüye 3.3-3.5 arasındaki adımları yineleyin.
  7. Ölüm onaylamak için servikal çıkığı tarafından takip CO 2 Solunduğunda fareler vivo içinde resim alma sonra ötenazi. Ex vivo çözümlemesi gerçekleştirin.
    1. Ex vivo çözümlemenin 20 dk sonra Eğer daha önce fareler; ödün biyoluminesans enjeksiyon (Adım 3.3) tekrar BLI sinyal 20 dk sonra biyoluminesans enjeksiyon düşebilir.
  8. Bütün gastrointestinal sistem (Yani, mide için rektum), Mezenterik lenf nodu (milyon), akciğer, dalak ve karaciğer kaldırmak için fareler incelemek. Onları petri yemeklerinde 2 , 4 forseps ve makas kullanarak yer.
  9. Görüntüleme odası explanted organlarda içeren petri kabına yerleştirin ve Saçınıza görüntüleri adımları 3.1-3.6 başına.
  10. Resim alma sonra explanted organları en uygun kesme sıcaklık (OCT) bileşik içeren numune kalıpları için transfer. Cryofreeze-80 ° c kuru buz kullanarak kalıplar. Anti-luciferase antikor hMSCs 16 varlığını doğrulamak için donmuş bölümlerinde kullanarak immünhistokimya gerçekleştirmek.
  11. Bölgesi faiz (ROI) Aracı'nın aracı paleti 16 , 19 ışık şiddeti miktar için kullanın. Yatırım Getirisi çerçeve seçin ve resmin üzerine faiz bölgesine taşıyın. ' I tıklatın " yatırım Getirisini ölçme " ve verileri SEQ dosya biçiminde kaydedin. Verileri bir .txt dosyası olarak verin ve miktar 16 için temel istatistik testleri gerçekleştirmek için istatistiksel yazılım kullanın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1 hMSCs kök hücre özelliklerini koruyarak üçlü muhabir ile yüksek verimlilikle transduced olduğunu gösterir. Transduced hMSCs (şekil 1 c, şekil 3) BLI tarafından gerçek zamanlı olarak görüntülenmeyecektir. Bu roman, SAMP fare sol ventrikül içine hMSCs ultrason destekli enjeksiyon enjeksiyon, minimal morbidite ve mortalite (Şekil 2) ile fare hızlı kurtarma için izin...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışmada ultrason destekli İntrakardiyak enjeksiyon hMSCs deneysel CD, küçük bağırsak fare modeli için yeni bir teknik anlatılmaktadır. İğne yörünge fare sol ventrikül ultrason tarafından sağlanan, gerçek zamanlı, yüksek çözünürlüklü görüntüleri dayalı ayarlanabilir gibi bu teknik başarı, ve hayatta kalma çok yüksek oranına sahiptir. Sol ventrikül teslim hMSCs sonra intra arterially dağıtılır ve böylece hücre akciğerlerde toplama kaçınarak Venöz dolaşım bypass avantajdır. Daha önce Karotid arter Kateterizasyonu intra...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Maneesh Dave savunma grant PR141774 ve Crohn ve kolit Vakfı Amerika kariyer geliştirme Ödülü tarafından desteklenir. Fabio Cominelli laboratuvar NIH tarafından desteklenen DK042191 (FC), DK055812 (FC), DK091222 (FC) ve DK07948 (FC) verir. Arnold Caplan laboratuvar kısmen L. David ve E. Virginia Baldwin Vakfı tarafından desteklenmektedir. Finansmanı kuruluşları çalışma çözümleme veya yazma makalenin herhangi bir rolü yoktu. İçeriği sadece yazarların sorumluluğunda.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
DMEM-LG   Gibco31600-091
%0.25 tripsin-EDTAGibco25-200-072
Proteamin SülfatSigma AldrichP4020-1G
D-LuciferinGoldbioluck-500
Fetal Bobin SerumuGibco26140-079
Antibiyotik-AntimikotikGibco15240-062
PBSHyCloneSH30256.01
175 cm doku cutlure şişeleriCorning431080
75 cm doku cutlure şişeleriCorning430720
Santrifüj tüpleriCrysalgen23-2265
Tissue-Plus OCT bileşiğiFisher HealthCare4585
Cryomold StandartDoku-Tek 4557
Lenti-Pac HIV Ekspresyon Paketleme SistemiGeneCopoeiaHPK-LvTR-20 
Povidone İyonidin swablarMedlineMDS093901
Epilasyon kremiNairN/A
Isoflurane Piramal Sağlık Bakımı NDC 66794 013 25
Forseps Güzel Bilim Araçları11200-33
Diseksiyon makası (Wagner)Güzel Bilim AraçlarıWagner 14068-12
Puralube veteriner merhemiPuralubeNDC 17033-211-38
Aquasonic 100 ultrason iletim jeliParker laboratuvarları01 08
Petri kabıFisher ScientificFB0875711A
SAMP fareleriCleveland Sindirim Hastalığı Araştırma Çekirdek Merkezi
AKR fareleriCleveland Sindirim Hastalığı Araştırma Çekirdek Merkezi
Vevo 770 görüntüleme sistemi  Visual Sonics, Toronto, Kanada
  IVIS spektrum serisi sistemi PerkinElmer, Waltham, MA
Living görüntü yazılımı CaliperLifeSciences, PerkinElmer, Waltham, MA
Üçlü muhabirLütfen Dr. Zheng-Hong Lee, CWRU, (alıntı 19)
tarafından sağlanmıştır

Kaynaklar

  1. Duijvestein, M., et al. Pretreatment with interferon-gamma enhances the therapeutic activity of mesenchymal stromal cells in animal models of colitis. Stem Cells. 29 (10), 1549-1558 (2011).
  2. Sala, E., et al. Mesenchymal Stem Cells Reduce Colitis in Mice via Release of TSG6, Independently of Their Localization to the Intestine. Gastroenterology. 149 (1), 163-176 (2015).
  3. Gonzalez, M. A., Gonzalez-Rey, E., Rico, L., Buscher, D., Delgado, M. Adipose-derived mesenchymal stem cells alleviate experimental colitis by inhibiting inflammatory and autoimmune responses. Gastroenterology. 136 (3), 978-989 (2009).
  4. Dave, M., et al. Stem cells for murine interstitial cells of cajal suppress cellular immunity and colitis via prostaglandin e2 secretion. Gastroenterology. 148 (5), 978-990 (2015).
  5. Manieri, N. A., et al. Mucosally transplanted mesenchymal stem cells stimulate intestinal healing by promoting angiogenesis. J. Clin. Invest. 125 (9), 3606-3618 (2015).
  6. Kontoyiannis, D., Pasparakis, M., Pizarro, T. T., Cominelli, F., Kollias, G. Impaired on/off regulation of TNF biosynthesis in mice lacking TNF AU-rich elements: implications for joint and gut-associated immunopathologies. Immunity. 10 (3), 387-398 (1999).
  7. Abraham, C., Cho, J. H. Inflammatory bowel disease. N. Engl. J. Med. 361 (21), 2066-2078 (2009).
  8. Dave, M., Papadakis, K. A., Faubion, W. A. Immunology of inflammatory bowel disease and molecular targets for biologics. Gastroenterol. Clin. North Am. 43 (3), 405-424 (2014).
  9. Dave, M., et al. Mesenchymal Stem Cell Therapy for Inflammatory Bowel Disease: A Systematic Review and Meta-analysis. Inflamm. Bowel Dis. 21 (11), 2696-2707 (2015).
  10. Panes, J., et al. Expanded allogeneic adipose-derived mesenchymal stem cells (Cx601) for complex perianal fistulas in Crohn's disease: a phase 3 randomised, double-blind controlled trial. Lancet. 388 (10051), (2016).
  11. Lee, R. H., et al. Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the anti-inflammatory protein TSG-6. Cell Stem Cell. 5 (1), 54-63 (2009).
  12. Gao, J., Dennis, J. E., Muzic, R. F., Lundberg, M., Caplan, A. I. The dynamic in vivo distribution of bone marrow-derived mesenchymal stem cells after infusion. Cells Tissues Organs. 169 (1), 12-20 (2001).
  13. English, K. Mechanisms of mesenchymal stromal cell immunomodulation. Immunol Cell Biol. 91 (1), 19-26 (2013).
  14. Pizarro, T. T., et al. SAMP1/YitFc mouse strain: a spontaneous model of Crohn's disease-like ileitis. Inflamm. Bowel Dis. 17 (12), 2566-2584 (2011).
  15. Lennon, D. P., Caplan, A. I. Isolation of human marrow-derived mesenchymal stem cells. Exp. Hematol. 34 (11), 1604-1605 (2006).
  16. Lin, P., et al. Serial transplantation and long-term engraftment of intra-arterially delivered clonally derived mesenchymal stem cells to injured bone marrow. Mol. Ther. 22 (1), 160-168 (2014).
  17. Dennis, J. E., Caplan, A. I. Porous ceramic vehicles for rat-marrow-derived (Rattus norvegicus) osteogenic cell delivery: effects of pre-treatment with fibronectin or laminin. J. Oral Implantol. 19 (2), 106-115 (1993).
  18. Lin, P., et al. Efficient lentiviral transduction of human mesenchymal stem cells that preserves proliferation and differentiation capabilities. Stem Cells Transl. Med. 1 (12), 886-897 (2012).
  19. Love, Z., et al. Imaging of mesenchymal stem cell transplant by bioluminescence and PET. PET. J. Nucl. Med. 48 (12), 2011-2020 (2007).
  20. Haynesworth, S. E., Goshima, J., Goldberg, V. M., Caplan, A. I. Characterization of cells with osteogenic potential from human marrow. Bone. 13 (1), 81-88 (1992).
  21. Ishizaka, S., et al. Intra-arterial cell transplantation provides timing-dependent cell distribution and functional recovery after stroke. Stroke. 44 (3), 720-726 (2013).
  22. Schenk, S., et al. Monocyte chemotactic protein-3 is a myocardial mesenchymal stem cell homing factor. Stem Cells. 25 (1), 245-251 (2007).
  23. Hayashi, Y., et al. Topical implantation of mesenchymal stem cells has beneficial effects on healing of experimental colitis in rats. J. Pharmacol. Exp. Ther. 326 (2), 523-531 (2008).
  24. Kodani, T., et al. Flexible colonoscopy in mice to evaluate the severity of colitis and colorectal tumors using a validated endoscopic scoring system. J. Vis. Exp. (80), e50843(2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Biyolüminesans GörüntülemeÜçlü Raporlayıcı Sistemİnce Bağırsak YönelimiSAMP Fare ModeliHücre Teslim Başarı OranıGastrointestinal Sistem Analizi
Ultrason destekli İntrakardiyak enjeksiyon bağırsak için giriş için deneysel iltihabi bağırsak hastalıkları fare modellerinde kullanım artırmak için insan Mezenkimal Kök hücre
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.