Yöntem makalesi

Kimlik ve metastatik faktörler gen transferi ile karakterizasyonu roman RIP-etiketinin içine; RIP-tva fare modeli

DOI:

10.3791/55890

⸱

16 Ekim 2017

 ,  , 
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, Weill Cornell Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz bir roman somatik gen aktarım sistem RIP-etiket kullanmak göstermek için bir iletişim kuralı mevcut; RIP-tva metastaz genlerinde fonksiyonu çalışmaya fare modeli. Kuş Retrovirüsler gen transferi önceden Malign, invaziv olmayan lezyonlar yetişkin farelerde pankreas β hücrelerinin içine sağlamak için intracardiacally teslim edilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metastatik kanser ölümleri solid tümör olan hastalarda yüzde 90'ını hesapları. Kanser metastaz sürücüleri daha iyi anlamak için ve yeni tedavi hedefleri belirlemek için acil bir ihtiyaç vardır. İlerleme birincil kanser metastaz için sürücü moleküler olayları araştırmak için bir bitransgenic fare modeli, RIP-Tag geliştirdik; RIP-tva. Bu fare modelinde, sıçan insülin organizatörü (RIP) pankreas beta hücrelerinde SV40 T antijen (etiket) ve reseptör alt grubu bir kuş lökozu virüs (tva) için ifade kullanıyor. Fareler pankreas nöroendokrin tümörlerin % 100 alellerle Hiperplazi, anjiogenez, adenoma ve invaziv karsinom gibi aşamaları ile insan tumorigenesis için benzer iyi tanımlanmış aşamalarla ile geliştirmek. Çünkü RIP-etiket; RIP-tva fareler metastatik hastalık geliştirmek değil, metastaz teşvik genetik değişikliklere kolayca belirlenebilir. Somatik gen aktarım tva ifade, pankreas β Proliferasyona premalign lezyonlar elde edilir kuş Retrovirüsler istenen genetik değişikliği barındıran İntrakardiyak sızdırma yoluyla. Bir titresi > ml başına 1 x 108 bulaşıcı birim vivo içinde enfeksiyon için uygun kabul edilir. Buna ek olarak, kuş Retrovirüsler tümörler RIP-etiket içinde türetilmiş hücre hatları bulaşabilir; RIP-tva fareler yüksek verimlilik ile. Hücre hatları metastatik faktörler karakterize etmek için de kullanılabilir. Burada nasıl bu fare modeli kullanmak ve tümör metastazı aday genler işlevleri değerlendirmek için satırları hücre göstermektedir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En kanserleri somatik mutasyon 1ile ortaya çıkmaktadır. Geleneksel genetiği fare modelleri (et) tumorigenesis 2için belirli genetik değişiklik katkısını önemli anlayışlar hazırladık. Ancak, bazı sınırlamaları vardır. Bu modellerin en büyük dezavantajı sadece bir doku bazı hücrelerde genetik değişiklikler elde insanlarda tümör oluşumu sporadik doğası çoğaltılmaz var. Transgenik ve nakavt fareler mutasyonların da germline geliştirme etkiler için potansiyeli vardır. Ayrıca, bu fare modelleri üreten pahalı ve zaman alıcı olduğunu.

Metastaz kanser alanında önemli bir konudur. Metastaz modelleme et ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

etik beyanı: deneylerin hayvanlar üzerinde yönergeleri ve ileri hayvan bakım ve kullanım Komitesi Weill Cornell Tıp Enstitüsü tarafından belirlenen düzenlemelere uygun olarak gerçekleştirilen.

1. seçim kuş Retroviral vektörler (RCASBP A-esaslı ya da RCANBP(A)-based)

  • vektörler Rous sarkomu virüs 11 ' den elde edilen. Kuş retroviral vektörler cDNAs sunabilirsiniz (≤ 2,5 kb), kısa saç tokası RNA'ların (shRNAs), mikroRNA (miRNAs) ve diğer kodlamayan RNA'ların. Piyasada bulunan vektörel çizimler malzemeleri listelenir ve diğerleri doğrudan yazarlardan istenmes....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vivo ve in vitro enfeksiyon oranı RIP-etiket; RIP-tva tümör hücreleri RCASBP tabanlı virüs tarafından 20~ % 20 ve % 80 ~ sırasıyla vardır. RIP-etiket; RIP-tva fare modeli, her fare 400 pankreas adacıkları yaklaşık % 4'ü doğal olarak geliştirmek tümörler 20; Bu nedenle tümör hücreleri her fare virüsler tarafından teslim genlerin potansiyel etkisinin histolojik ve fenotipik analiz için yeterli miktarda yoktu.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, bir güçlü fare modeli, RIP-Tag açıkladığımız; RIP-tva, yoluyla kimlik ve metastatik faktörler karakterizasyonu için kuş Retrovirüsler somatik gen teslim elde etmek için. Her ne kadar RIP-etiket; RIP-tva fareler geliştirmek pankreas nöroendokrin tümör, bu fare modelde tanımlanan metastatik faktörler de metastaz diğer kanser türleri teşvik.

Bizim yaklaşım somatik genetik değişiklikler özellikle premalign lezyonlar pankreas β hücrelerinin böylece daha sadakatle tek.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz Harold Varmus, Brian C. Lewis, Douglas Hanahan, Danny Huang, Sharon Pang, Megan Wong ve Manasi M. Godbole teşekkür ederim. Y.C.N.D. DOD grant W81XWH-16-1-0619 ve NIH grant 1R01CA204916 tarafından desteklenir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
RCASBP-Y DV plazmidAddgene11478
RCAS-RNAi plazmidAddgene15182
DMEMCorning10-013-CV
fetal sığır serumuAtlanta Biologicals25-005-CI
L-glutamin, 100xCorning25-005-CI
Penisilin-Streptomisin çözeltisi, 100xCorning30-002-CI
PBS/-, 1xCorning21-040-CV
SuperfectQiagen301305
Poliallomer santrifüj tüpüBeckman Coulter326823
0,45 mm Nalgene
PES Membranlı Şırınga Filtreleri		Thermo Scientific194-2545
İnsülin ŞırıngalarıBD
SinaptofizinVektör LaboratuvarlarıVP-S284
VECTASTAIN Elite ABC HRP Kiti (Peroksidaz, Tavşan IgG)Vektör LaboratuvarlarıPK-6101
Tamponlu AmpliTaq DNA Polimeraz IIYaşam TeknolojileriN8080153
MyTaq DNA PolimerazBiolineBIO-21106
329461

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Vogelstein, B., Kinzler, K. W. The multistep nature of cancer. Trends Genet. 9 (4), 138-141 (1993).
  2. Walrath, J. C., Hawes, J. J., Van Dyke, T., Reilly, K. M. Genetically engineered mouse models in cancer research. Adv Cancer Res. 106, 113-164 (2010).
  3. Khanna, C., Hunter, K.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

RIP Tag RIP tva Fare ModeliSomatik Gen TransferiAvian Retrovir s Enfeksiyonuntrakardiyak EnjeksiyonViral Titre BelirlemePankreatik Beta H creleriMetastatik Fakt r Tan mlamaKanser Metastaz AnaliziSinaptofizin BoyamaLenf Noduna Metastaz

İlgili makaleler