Yöntem makalesi

Peptid ve Protein miktar kullanarak otomatik IMMUNO-maldı (iMALDI)

DOI:

10.3791/55933

⸱

18 Ağustos 2017

 ,  ,  ,  , 
1University of Victoria-Genome BC Proteomics Centre, 2Jewish General Hospital, McGill University, 3Dept of Biochemistry and Microbiology, University of Victoria, 4Proteomics Centre, Segal Cancer Centre, Lady Davis Institute, Jewish General Hospital, McGill University, 5Gerald Bronfman Department of Oncology, Jewish General Hospital

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Otomatik IMMUNO-maldı (iMALDI) teknolojisini kullanarak karmaşık biyolojik sıvı protein miktar için bir protokol sunulmuştur.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kütle spektrometresi (MS) her hedef molekül kütlesi ücret oranı doğrudan tespiti sonucunda mükemmel tahlil özgüllük ile karmaşık örnekleri, protein miktarının için en sık kullanılan teknolojileri biridir. Ancak, çoğu diğer analitik teknikler gibi MS tabanlı proteomik yüksek-bereket analitler ölçme doğru bir önyargı var, elde etmek zor bu yüzden düşük ng/mL algılama sınırlar veya pg/mL karmaşık örnekleri ve bu konsantrasyon aralığın çoğu için biofluids insan plazma gibi hastalık ilgili proteinleri verdik. Düşük-bereket analitler algılama içinde yardımcı olmak için IMMUNO-zenginleştirme konsantre ve MS ölçüm, önemli ölçüde tahlil duyarlılık geliştirmek önce analit arındırmak için tahlil içine entegre edilmiştir. Bu çalışmada, IMMUNO - Matrix-Assisted lazer desorpsiyon/iyonlaşma (iMALDI) teknoloji proteinlerin ve peptidler biofluids içinde miktar için sunulan, IMMUNO-zenginleştirme boncuk üzerinde temel alan, maldı-MS ölçüm öncesinde elüsyon olmadan izledi. Anti-peptid antikorlar manyetik boncuklar functionalized ve örnekleri ile inkübe. Sonra yıkama, boncuk doğrudan bir maldı hedef tabağa aktarılır ve matris çözüm için boncuk uygulandıktan sonra sinyalleri tarafından uçuş (MALDI-TOF) enstrümanın bir maldı-zaman ölçülür. Diğer IMMUNO-MS deneyleri için karşılaştırıldığında örnek hazırlama prosedürü Basitleştirilmiş ve maldı ölçüm hızlıdır. Bütün numune hazırlama sistemi, geliştirilmiş tahlil tekrarlanabilirlik ve yüksek işlem hacmi ile işleme bir sıvı ile otomatik olarak gerçekleşir. Bu makalede, iMALDI tahlil peptid anjiyotensin belirlemek için kullanılır ben (Ang ben) konsantrasyon plazma, plazma renin aktivitesi okuma birincil aldosteronism (PA) tarama için klinik olarak kullanılır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kütle spektrometresi nicel proteomik içinde vazgeçilmez bir araç haline gelmiştir. Kütle spektrometresi hedef proteinler veya peptidler kitlelerin belirlemek için bu nedenle elde edilen analit sinyalleri uzun için karşılaştırıldığında çok özel olabilir. İki iyonlaşma yöntemleri, electrospray ve maldı, en çok1,2,3,4proteinler ve peptidler algılamak için kullanılır. Düşük-bereket proteinler yüksek-bereket proteinler huzurunda ng/mL veya pg/mL konsantrasyonlarda karmaşık örneklerinde tespiti MS tabanlı protein miktar içinde büyük bir sorun yatıyor ve insan plazmada bulunan birçok aday protein biyolojik vardır Bu aralığı5içinde. Bu sorun büyük ölçüde doğal olarak geniş dinamik alan ve insan Proteom6karmaşıklığı tarafından nedeniyle oluşur.

Bu algılama zorlukları aşmak için IMMUNO-MS yöntemleri hedef proteinler veya katı bir yüzeye örnek çözümlerinden peptidler zenginleştirmek için geliştirilmiştir analitler ve MS ölçüm7,8 elüsyon tarafından takip , 9 , 10. IMMUNO-zenginleştirme karmaşık örnekleri analitler saflaştırılmış ve bu nedenle diğer molekülleri iyon-bastırma etkilerinden en aza indirilir. Sahip oldukları yüksek antikor Bağlama kapasitesi avantajları ve kullanım kolaylığı gibi çeşitli katı destekler arasında manyetik boncuklar şu anda en yaygın olarak kullanılmaktadır. Farklı functionalizations ve boyutları ile manyetik boncuklar geliştirilen ve immunoprecipitation deneyler için ticari. Bugüne kadar IMMUNO-zenginleştirme boncuk üzerinde electrospray iyonlaşma (ESI) ve maldı-MS ile protein ve peptid ölçüm için sızdı. Kararlı izotop standartları ve yakalama tarafından Anti-peptid antikorlar (SISCAPA) teknolojisi, kuluçka antikor kaplı boncuk IMMUNO-zenginleştirme ile takip örnekleri proteinleri sindirmek. "Klasik" SISCAPA içinde ele geçirilen proteotypic peptidler boncuk eluted ve tarafından sıvı Kromatografi-ESI-MS (LC-MS) veya doğrudan infüzyon ESI-çoklu tepki izleme-MS (ESI-MRM-MS)11,12tarafından ölçülür. IMMUNO-zenginleştirme MRM tahlil duyarlılığı düşük ng/mL Aralık13ulaşan 3-4 büyüklük, geliştirilmiş.

Electrospray-MS için karşılaştırıldığında, maldı-MS daha hızlı ve böylece hiçbir ertelenmiş ve kirlenme sorunları, temizlik ve LC sütunların yeniden denge yüksek üretilen iş çalışmaları14için daha uygun hale anlamına gelmez. IMMUNO-maldı teknoloji bizim laboratuvar IMMUNO-zenginleştirme maldı-MS ile hassas ve belirli miktar peptidler ve proteinler (proteotypic peptidler Nefelometri üzerinde dayalı) için birleştirmek için geliştirilen15,16 ,17. IMMUNO-zenginleştirme sonra boncuk maldı hedef tabağa yatırılır, matris çözüm için boncuk eklenir ve plaka kuruduktan sonra bir MALDI-TOF-Bayan göre analiz için hazırdır. Boncuk üzerinden peptidler elüsyon ayrı bir adım olarak gerçekleştirilir, ancak böylece numune hazırlama basitleştirilmesi ve örnek kaybını en aza boncuk noktalarına eklendiğinde benzeşme bağlı analitler maldı matris çözüm tarafından eluted. İMALDI teknoloji uygulamaları18,19, çeşitli uygulanan ve son zamanlarda edilmiş otomatik ve anjiyotensin ölçmek için kullanılan ben (Ang ben) plazma renin aktivitesi (PRA)20belirlemek için. Bu iletişim kuralı bir otomatik iMALDI tahlil gerçekleştirmek için kullanılan yordam gösterecektir. Örnek olarak, daha az % 10 arası gün CVs PRA tahlil alarak sağlanmıştır edildi 744 örnek gün20/ ölçme yeteneği ile otomasyon yoluyla.

Bu el yazması gösterdi iMALDI PRA tahlil hedef molekül olarak protein sindirimi gerektirmez (Ang ben) bir peptid 1295.7 Da Moleküler ağırlığı olduğunu. Diğer deneyleri içinde nerede protein sindirimi gereklidir ve bir peptid için olduğu gibi protein vekil olarak kullanılır, eşsiz ve bunun c kolayca ayırt edilebilir böylece 800 Da üzerinde bir kitle ile hedef protein iMALDI için seçili peptid olmalıdır Hemical gürültü maldı matris çözümden. Anti-peptid antikorlar peptidler IMMUNO-zenginleştirme için gereklidir. İletişim kuralı PRA ölçme bir iMALDI tahlil için dört adımlardan oluşur: 1) Ang nesil ben insan plazma; 2) IMMUNO-zenginleştirme Ang I istimal boncuk antikor kaplı; 3) boncuk bir maldı hedef plaka ve transfer ekleyerek matris çözüm; ve 4) sinyal Alım bir MALDI-TOF-MS ve veri analizi20tarafından.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

aşağıda açıklanan reaktifler miktarda 20 hasta plazma numuneleri ölçüm üzerinde temel alır. İletişim kuralı aşağıdaki Victoria Üniversitesi kuralları sunulan ' s insan araştırma Etik Komitesi.

1. Ang üretimi ben insan plazma

  1. çözülme plazma numuneleri (≥ 200 µL) bir odada sıcaklık su banyo için 5 min ve örnekleri tamamen çözdürülen kadar buza koy.
  2. Transfer 200 µL el ile kuyu 1.1 mL derin-şey plaka (örnek plaka), ayrı ve 2 ° C ve 1278 x g. 10 dk santrifüj plaka santrifüj kapasitesi her plazma örneği
  3. Seri olarak tavuk yumurta akı albümin ile altı Kalibratör çözümleri hazırlamak için bir 500 fmol/µL Ang I NAT standart çözüm sulandırmak için sistem işleme bir otomatik sıvı kullanın (0,1 0,2 0,6, 1.9, 5,7, 17.2 fmol/µL).
    4. Örnek plaka
  4. pipet 200 µL her Kalibratör iyi ve 125 µL nesil için arabelleğe.
    Not: Fosfat tamponlu tuz (PBS) arabelleği gerektiriyor denemenin gün taze hazırlanacak CEWA.
  5. Bir otomatik sıvı sistemi işleme kullanarak, yeni bir tabak içinde 125 µL plazma süpernatant karıştırmak ya da PBS CEWA 125 µL Ang 25 µL ile ben 1 M Tris, 0.2 mM ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) ve 1 mM içerir üretimi arabellek phenylmethylsulfonyl florür (PMSF).
    Not: Ang hazırlamak ben bir 1 M Tris/0.2 mM EDTA sulu tampon karıştırma tarafından üretimi arabellek (pH 5.5 ayarlamak Asetik asit kullanarak) ve PMSF çözüm (metanol içinde 100 mM). 4 ° C. Mix iki çözümleri de 1 ay deneme günü için her iki çözüm de depolanması.
  6. Otomatik olarak çözümler bir 96-şey plaka, çözüm başına 3 çoğaltır, iyi başına 34 µL içine aktarın. Plaka için 3 h. 37 ° C'de kuluçkaya

2. IMMUNO-Ang zenginlik ben kullanarak antikor kaplı boncuk

  1. antikor manyetik Protein G boncuklar üzerine konjugasyon
    Not: Boncuk ile antikor konjugasyon el ile 3 h sırasında Ang gerçekleştirilen ben üretimi dönemi denemenin gün. Diğer analitler için konjuge boncuk %0,015 arkadaşlar (PBSC) 4 ° C'de 3 ay veya daha uzun, özellikleri ve sağlamlık-in antikor bağlı olarak içeren PBS arabellek depolanması mümkün olabilir.
    1. Transfer 110 µL boncuk Bulamaç (20 örnekleri ölçme ve 6 puntoluk standart eğri yapmak için yeterli), 1,5 mL tüp içine. Boncuk yedi kez % 25 Asetonitril/PBSC 1 mL ile üç kez PBSC 1 mL ile yıkayın. Her yıkama adım arasında boncuk cips için manyetik bir stand kullanın. Sonra son yıkama yıkama arabellek kaldırma
      Not: 7 kez % 25 ile yıkama Asetonitril/PBSC ara-20 gibi boncuk Bulamaç MS-uyumsuz katkı maddeleri kaldırmak için önemlidir. Seçili boncuk böyle katkısız iseniz, bu geniş çamaşır adım gerekli olmayabilir.
    2. Boncuk PBSC 110 µL içinde resuspend ve anti-Ang 110 µL ekleyin ben antikor (son antikor konsantrasyon: 100 µg/mL). Boncuk ve çözüm pipetting tarafından mix ve onları 1s 8 rpm'de dönen için oda sıcaklığında kuluçkaya.
    3. 3 kez ile 1 mL PBSC boncuk yıkama ve PBSC 1100 µL içinde resuspend.
      Not: herhangi bir boncuk çözüm tüp kap kuluçka sırasında aktı, benchtop santrifüj 2680 x g. kullanarak çözüm aşağı spin
    4. Boncuk çözüm el 96-şey plaka (Boncuk standart plaka) aktarın. Aliquot sisteme aynı 96-şey plaka başına iyi. 120 µL boncuk işleme otomatik sıvı kullanın
  2. IMMUNO-zenginleştirme boncukları üzerinde
    1. 3 h Ang ben üretimi dönemi, yerleştirdikten sonra kuluçka plaka buz Ang ı. nesil sonlandırmak 10 dk
    2. Otomatik olarak 100-fold SIS peptid hisse senedi çözüm (10 pmol/μL) seyreltik PBS ile tampon ve otomatik olarak daha fazla aliquot bir 96-şey PCR plakasına istikrarlı isoptope standart peptid seyreltme. (100 fmol içeren) bir çözümün kararlı izotop standartları (SIS) peptid 1,5 µL kuluçka plaka her kuyunun içine aktarmak ve plazma numuneleri veya PBS arabelleklerindeki CEWA ile karıştırarak.
    3. Otomatik olarak boncuk çözüm, 10 mL başına iyi kuluçka plaka içeriğini aktarmak, mix.
    4. 4 ° c için 1 h plaka 8 rpm'de dönen kuluçkaya.
    5. Boncuk üç kez otomatik olarak 5 mM amonyum bikarbonat (AmBic) çözümü, iyi yıkama başına başına 100 µL ile yıkayın. Son yıkama sonra 5 mm AmBic çözüm her şey içinde 7 µL boncuk resuspend. Boncuk son yıkama sonra altına çekmek için bir mıknatıs kullanın

3. Transfer bir maldı hedef plaka ve matris çözüm ekleme üzerine boncuk

  1. otomatik olarak bir maldı hedef plaka üzerine boncuk Bulamaç Aktarım 7 µL 2.600 spot büyüklüğü µm. Boncuk kurumasına izin.
    Not: Küçük USB-yeti hayranı boncuk kurutma işlemi hızlandırmak için kullanılabilir.
  2. Otomatik olarak α-cyano-4-hydroxycinnamic asit (HCCA) 2 µL Ekle-matris çözümden (3 mg/mL HCCA, 1.8 mg/mL amonyum sitrat, % 70 Asetonitril ve % 0.1 trifluoroacetic asit içeren) her örnek hedef plaka üzerinde spot üzerine de matris .

4. Sinyal alma bir MALDI-TOF-MS ve veri analizi

  1. analiz örnek noktalar olumlu reflektör modunu kullanarak bir MALDI-TOF aleti ile. İç kalibrasyon, veri düzeltme ve temel çıkarma satıcıya özel yazılım ile otomatik olarak gerçekleştirmek.
    Not: MALDI-TOF ölçüm hedef peptidler veya protein bağlıdır için seçilen modu (pozitif/negatif, doğrusal/reflektör).
  2. (Nat/SIS yoğunluğu oranı) göreli yanıt oranını hesaplamak ve her örnek konsantrasyonu belirlemek Ang için standart eğri karşılaştırın. Denklem (1), nerede kullanarak PRA hesaplamak Δt Ang ben üretimi Ang ı. oluşturulmasında kullanılan süreyi temsil eder
    PRA = [Ang ben] / Δt Ang ben üretimi (1)

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ang ölçmek için bir otomatik iMALDI yordam ben şekil 1' de gösterilen. Hedef peptidler (endojen peptidler veya peptidler sindirilir proteinler üzerinden) Anti-peptid manyetik boncuklar zenginleştirilmiş ve sonra boncuk maldı ölçüm için bir hedef tabak aktarılır. Tüm prosedürü ek peptid elüsyon adım gerektiren diğer IMMUNO-MS teknolojileri ile karşılaştırıldığında basitleştirilmiştir. Otomasyon iMALDI tahlil örnekleri, çok sayıda varyasyon (CV) altında % 10

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geleneksel MS tabanlı protein miktar için karşılaştırıldığında, iMALDI analitler zenginleştirmek ve onları karmaşık örnekleri, bu nedenle proteinler veya düşük konsantrasyonlarda peptidler ölçmek mümkün hale gelen arındırmak için antikorlar kullanır. İMALDI Protokolü kritik bir adımda hedef peptidler immün zenginlik olduğunu. Bu amaçla, antikorlar yüksek özgüllük ve ilgi ile seçilmesi gerekir. SISCAPA, 10-9 M veya daha iyi, antikor benzeşim düşük ng/mL21yüksek hassasiyet elde etmek için...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C.H.B patent iMALDI teknoloji üzerinde tutar.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Genom yenilikler ağ (cin) aracılığıyla mali destek genom Kanada ve genom British Columbia işlemleri (204PRO) ve teknoloji geliştirme (214PRO) için teşekkür ederiz. İlaç keşif platformu Araştırma Enstitüsü McGill Üniversitesi Sağlık Merkezi için filme MALDI-TOF enstrüman kullanımı için teşekkür ediyoruz. H.L. desteği Ulusal Bilim ve mühendislik Araştırma Konseyi, Kanada (NSERC) bir doktora sonrası bursu dan minnettardır. C.H.B öncü bağış Fonu (LEEF) üzerinden destek için minnettar olduğunu. C.H.B. desteği (Montreal, Quebec, Kanada) McGill Üniversitesi'nde moleküler Onkoloji Segal McGill sandalyeden minnettardır. M.X.C. ve C.H.B. Yahudi Genel Hastanesi (Montreal, Quebec, Kanada) için Warren Y. Soper hayırsever güven ve Alvin Segal Aile Vakfı çekmek için minnettarız.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Sağlıklı kontrol insanplazması BiyoıslahHMPLEDTA2
Amonyum bikarbonatSigma Aldrich09830
Amonyum sitrat dibazikSigma Aldrich09833
CHAPS (> =% 98)Sigma AldrichC9426
Tavuk yumurtası beyazından albümin (% >98)Sigma AldrichA5503
Etilendiamintetraasetik asitSigma AldrichEDS
Alfa-siyano-4-hidroksisinnamik asitSigma Aldrich70990
Fosfat tamponlu salinSigma AldrichP4417
Fenilmetansülfonil florürSigma Aldrich78830
Trifloroasetik asitThermo Fisher Scientific85172LC-MS sınıfı
asetonitrilFluka34967LC-MS sınıfı
suFluka39253LC-MS sınıfı
asetik asitFluka320099LC-MS sınıfı
Tris(hidroksimetil)aminometanRoche Teşhis3118169001
Dynabeads Protein G manyetik boncuklarThermo Fisher Scientific10003D2.8 μ m, 30 mg / mL< / span>
anti-Ang I keçi poliklonal antikoruSanta Cruz Biyoteknolojisc-7419
Nat ve SIS Ang I,Victoria Üniversitesi-Genome BC Proteomik Merkezi'nde
Otomatik sıvı işleme sistemiAgilent16050-102Agilent Bravo robotik iş istasyonu
MıknatısThermo Fisher Scientific12321DInvitrogen DynaMag-2 mıknatıs
Tüp döndürücüTheromo Scientific400110QLabquake Tüp Döndürücü
MıknatısThermo Fisher Scientific12027DynaMag-96 yan etekli mıknatıs
MıknatısVP Scientific771RM-1boncukları kuyunun dibine çekmek için kullanılır
MALDI-TOFBruker BrukerMicroflex LRF cihazı
sentezlendi,

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Aebersold, R., Mann, M. Mass spectrometry-based proteomics. Nature. 422 (6928), 198-207 (2003).
  2. Nicol, G. R., et al. Use of an Immunoaffinity-Mass Spectrometry-based Approach for the Quantification of Protein Biomarkers from Serum Samples of Lung Cancer Patients. Mol. & Cell. Proteomics. 7 (10), 1974-1982 (2008).
  3. Webster, J., Oxley, D. Chemical Genomics and Proteomics: Reviews and Protocols. Zanders, E. D. , Humana Press. 227-240 (2012).
  4. Yergey, A. L., et al. De novo sequencing of peptides using MALDI/TOF-TOF. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 13 (7), 784-791 (2002).
  5. Anderson, L. Six decades searching for meaning in the proteome. J. Proteomics. 107, 24-30 (2014).
  6. Landegren, U., et al. Opportunities for Sensitive Plasma Proteome Analysis. Anal. Chem. 84 (4), 1824-1830 (2012).
  7. Guo, A., et al. Immunoaffinity Enrichment and Mass Spectrometry Analysis of Protein Methylation. Mol. & Cell. Proteomics. 13 (1), 372-387 (2014).
  8. Florentinus-Mefailoski, A., Soosaipillai, A., Dufresne, J., Diamandis, E. P., Marshall, J. G. An enzyme-linked immuno-mass spectrometric assay with the substrate adenosine monophosphate. Anal. Bioanal. Chem. 407 (4), 1119-1130 (2015).
  9. Fredolini, C., et al. Immunocapture strategies in translational proteomics. Expert Rev Proteomics. 13 (1), 83-98 (2016).
  10. Tran, J. C., et al. Automated Affinity Capture and On-Tip Digestion to Accurately Quantitate in Vivo Deamidation of Therapeutic Antibodies. Anal. Chem. , (2016).
  11. Razavi, M., Leigh Anderson, N., Pope, M. E., Yip, R., Pearson, T. W. High precision quantification of human plasma proteins using the automated SISCAPA Immuno-MS workflow. N. Biotechnol. 33 (5 Part A), 494-502 (2016).
  12. Razavi, M., et al. High-Throughput SISCAPA Quantitation of Peptides from Human Plasma Digests by Ultrafast, Liquid Chromatography-Free Mass Spectrometry. J. Proteome Res. 11 (12), 5642-5649 (2012).
  13. Anderson, N. L., et al. SISCAPA Peptide Enrichment on Magnetic Beads Using an In-line Bead Trap Device. Mol. & Cell. Proteomics. 8 (5), 995-1005 (2009).
  14. Parker, C. E., Pearson, T. W., Anderson, N. L., Borchers, C. H. Mass-spectrometry-based clinical proteomics - a review and prospective. The Analyst. 135 (8), 1830-1838 (2010).
  15. Reid, J. D., Holmes, D. T., Mason, D. R., Shah, B., Borchers, C. H. Towards the Development of an Immuno MALDI (iMALDI) Mass Spectrometry Assay for the Diagnosis of Hypertension. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 21 (10), 1680-1686 (2010).
  16. Mason, D. R., Reid, J. D., Camenzind, A. G., Holmes, D. T., Borchers, C. H. Duplexed iMALDI for the detection of angiotensin I and angiotensin II. Methods. 56 (2), 213-222 (2012).
  17. Camenzind, A. G., vander Gugten, J. G., Popp, R., Holmes, D. T., Borchers, C. H. Development and evaluation of an immuno-MALDI (iMALDI) assay for angiotensin I and the diagnosis of secondary hypertension. Clin. Proteomics. 10 (1), 20(2013).
  18. Jiang, J., et al. Development of an immuno tandem mass spectrometry (iMALDI) assay for EGFR diagnosis. Proteomics Clin Appl. 1, (2007).
  19. Jiang, J., Parker, C. E., Fuller, J. R., Kawula, T. H., Borchers, C. H. An Immunoaffinity Tandem Mass Spectrometry (iMALDI) assay for Detection of Francisella tularensis. Analytica chimica acta. 605 (1), 70-79 (2007).
  20. Popp, R. An automated assay for the clinical measurement of plasma renin activity by immuno-MALDI (iMALDI). Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1854 (6), 547-558 (2015).
  21. Schoenherr, R. M., et al. Automated screening of monoclonal antibodies for SISCAPA assays using a magnetic bead processor and liquid chromatography-selected reaction monitoring-mass spectrometry. J Immunol Methods. 353 (1-2), 49-61 (2010).
  22. Borchers, C. H. Methods of quantitation and identification of peptides and proteins. US patent. , US 7846748 B2 (2010).
  23. Borchers, C. H. Methods of quantitation and identification of peptides and proteins. Canadian patent CA. , CA 2507864 C (2011).
  24. Weiß, F., et al. Catch and measure-mass spectrometry-based immunoassays in biomarker research. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1844 (5), 927-932 (2014).
  25. Nelson, A. L. Antibody fragments: Hope and hype. mAbs. 2 (1), 77-83 (2010).
  26. Gupta, V., et al. An evaluation of an aptamer for use as an affinity reagent with MS: PCSK9 as an example protein. Bioanalysis. 8 (15), 1557-1564 (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Peptide QuantificationMALDI TOFImmuno enrichmentMagnetic BeadsAutomated Liquid HandlingAngiotensin IPlasma Renin ActivityPrimary Aldosteronism

İlgili makaleler