Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Boncuk Multiplex tahlil için gözyaşı sitokin profilleri analizi dayalı

11.3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/55993

⸱

13 Ekim 2017

Bu makalede

Özet

Sitokinler çeşitli oküler hastalıklar eğitim yardımcı olur gözyaşı film analizi. Boncuk dayalı multiplex deneyleri basit ve hassas ve küçük hacimli örneklerde birden çok hedef test etkinleştirin. Burada biz bir protokolü kullanarak bir profil oluşturma gözyaşı film sitokin için tarif boncuk dayalı multiplex tahlil.

Özet

Gözyaşı film böylece yağlama, beslenme ve koruma altındaki hücreler için sağlayarak göz, Dış yüzeyini kaplayan bir karmaşık yağlar, proteinler ve mineraller karışımıdır. Gözyaşları analizini biyolojik tahmin, tanı ve Prognozunda çeşitli oküler hastalıklar için tanımlanması için gelişmekte olan bir alandır. Gözyaşı kolayca ulaşılabilir ve onların non-invaziv oluşur. Bu nedenle, gelişen teknolojileri protein veya metaboliti kompozisyon ve patolojik koşulları ile dernek değişiklikleri incelemek için gözyaşları içinde birden çok analitler tanımlanması için önem kazanmaktadır. Gözyaşı sitokinler oküler yüzey sağlık eğitim için ideal biyolojik ve kuru göz hastalığı ve vernal konjonktivit gibi farklı oküler yüzey bozuklukları mekanizmaları anlama konusunda da yardımcı olur. Boncuk dayalı multiplex deneyleri birden çok analitler örnek küçük bir miktar ile daha yüksek bir hassasiyet algılama yeteneğine sahip. Burada tarif biz standart bir protokol gözyaşı örnek toplama, çıkarma ve sitokin bir boncuk kullanarak profil oluşturma analizi multiplex tahlil göre.

Giriş

Gözyaşı gözyaşı bezi ve Aksesuar bezleri tarafından üretilen ve gözün dış yüzeyi ceket. Gözyaşı film bir dış lipit katmanı ve çözünür proteinler içerir bir iç sulu tabaka oluşur, mucins ve membran mucins bağlı. Gözyaşları mikrobiyal işgali önlemek, besin kaynağı ve oküler yüzey için yağlama sağlar. Hava ve oksijen taşıma için kornea dokusu arasında arayüz olarak gözyaşı hareket. 1 gözyaşı film proteinler, karbonhidratlar, lipitler ve elektrolitler oluşur. Gözyaşı proteinler ile oküler ve sistemik hastalıklar arasındaki ilişkiyi gibi Glokom, Kuru göz hastalığı, vernal konjonktivit, diabet, tiroid ilişkili orbitopathy ve kanser birkaç çalışmalar ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmada kullanılan protokolleri Tan Tock Seng hastane, Singapur Kurumsal değerlendirme Komitesi tarafından kabul edildi.

1. gözyaşı sitokin analizi

  1. gözyaşları topluluğu:
    1. rahat bir muayene sandalyeye oturun ve yanlarında karşı seçtiğin bu kullanıcı kafasını yerleştirmek için konu sormak.
    2. Konu aramak, dikkatle (Whatman filtre kağıttan 41.liğe yapılmış) Schirmer şeritler açın ve şerit yuvarlak sonu üzerinde göz fornix aşağı yerleştirin ve 5 min için gözlerini kapatmak için konu talimat isteyin. Gözyaşı toplarken oküler yüzey teması en aza indirmek için çok dikkat edin. 30<....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

4 sağlıklı deneklerin gözyaşı akışı şeritler kullanarak 8 gözlerinden gözyaşı örneği toplanmıştır ve sitokin düzeyleri yukarıda belirtilen iletişim kuralı kullanılarak analiz edildi. Tüm konular erkek ve dört konu yaş 36, 42, 44 ve 52 idi sırasıyla. Oküler yüzey sağlık ve kuru göz hastalığı göre klinik testler (gözyaşı film kıracak zaman, Schirmer'ın testi, kornea boyama, Konjonktival boyama, kapak/meibomian bezinin muayene, kornea gözyaşı işaretler ve görsel işaretler ve belirtiler) tara.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Sitokinler küçük hücresel salgılanan proteinler ve bağışıklık yanıtı düzenleyen güçlü bağışıklık modülatörler vardır. 32 ifade profilleri çeşitli sitokinlerin gözyaşı örnekleri çeşitli patolojik şartları göz ve sitokin hastalık patogenezinde mekanizmaları anlamak, oküler sağlık durumunu belirlemek için yardımcı profilleri üzerinde çalışmalar ile ilgili olarak, hastalık şiddeti, tanı ve ilerleme. 2 , 5 daha düşük protein konsantrasyonları v.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok. Finansal faiz ya da çıkar çatışması yok.

Teşekkürler

Araştırma çalışmaları Merkezi hibe Tan Tock Seng hastane kişiselleştirilmiş tohum finansman programı 2015 tarafından desteklenen; Singapur göz Araştırma Enstitüsü Pilot hibe fonu için Tan Tock Seng hastane adım grant.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Milliplex MAP insan sitokin / kemokin manyetik boncuk paneli -1 kitMerck, ABDHCYTOMAG-60K-41
Flexmap 3D luminex cihazı Luminex Corp, Austin, TX, ABD
xPonent yazılımı Luminex Corp, Austin, Teksas, ABD
RBXGenerator yazılımıBIO-RAD, Fransa
Bio-Plex Manager 6.1BIO-RAD, Fransa
Plaka çalkalayıcıCorning, ABD
TECAN Mikroplaka YıkayıcıTecan, İsviçreHydroSpeed
Vortex Genie 2Scientific Industries inc, ABDG560E
PipetlerMettler Toledo, CA, ABD
1.5ml mikrosantrifüj tüpüAxygen, ABDMCT-150-C
Schirmer gözyaşı akışı test şeridiGöz Bakımı ve Tedavisi, ABD101657
Flexmap 3D Kalibrasyon KitiLuminex Corp, Austin, Teksas, ABD40-028
Flexmap 3D Doğrulama KitiLuminex Corp, Austin, Teksas, ABD40-029
Oküler muayene koltuğu

Kaynaklar

  1. Conrady, C. D., Joos, Z. P., Patel, B. C. Review: The Lacrimal Gland and Its Role in Dry Eye. J Ophthalmol. 7542929, (2016).
  2. von Thun Und Hohenstein-Blaul, N., Funke, S., Grus, F. H. Tears as a source of biomarkers for ocular and systemic diseases. Exp Eye Res. , 126-137 (2013).
  3. ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Gözyaşı Sitokin ProfillemesiGözyaşı Örneği ToplamaSitokin TespitiManyetik Plaka Yıkama MakinesiAssay Tamponu İnkübasyonuStreptavidin FizkoeritrinStandart Eğri OptimizasyonuSitokin Konsantrasyon AnaliziOküler Hastalık Biyobelirteçleri