Yöntem makalesi

Yalıtım endotelyal Progenitor Hücre insan göbek kordon kanı

DOI:

10.3791/56021

⸱

14 Eylül 2017

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of Arkansas

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu iletişim kuralının amacı göbek kordon kanı endotelyal progenitor hücrelerini izole etmektir. Bazı uygulamalar bu hücreler bir biyomarker hastaların kardiyovasküler riski ile iskemik hastalıklar, tedavi tanımlamak için kullanmayı içerir ve oluşturma doku Mühendisliği vasküler ve kalp kapak oluşturur.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Endotelyal progenitor hücreler (EPCs) periferik kan varlığı ve onun katılımı vasculogenesis ilk Ashara ve arkadaşları1tarafından rapor. Daha sonra diğerleri benzer türdeki diğer kemik iliği2,3' ten kaynaklanan EPCs varlığını belgelemiştir. Daha yakın zamanlarda, Yoder ve EPCs göbek kordon kanı türetilmiş gösterdi Ingram4,5,6kan olanlar yetişkin periferik izole göre bir daha yüksek proliferatif potansiyeli vardı. Doğum sonrası vasculogenesis dahil olmak dışında EPCs da söz doku Mühendisliği vasküler kalp kapak yapıları7,ve8oluşturmak için hücre kaynağı olarak göstermiştir. Çeşitli yalıtım protokoller bulunmaktadır, bazıları ücretli mononükleer hücreler (ÇUŞ 'un) endotel ve hematopoetik işaretleri yardımıyla yukarıda belirtildiği kaynaklardan elde edilen hücre sıralanması veya özel endotelyal büyüme ile bu ÇUŞ 'un kültür Orta veya bu teknikleri9bileşimi. Burada, biz yalıtım için bir iletişim kuralı mevcut ve kullanarak EPCs kültürünün İhtisas endotel orta immunosorting, Western Blot kullanarak izole hücrelerin karakterizasyonu tarafından takip kullanımı olmadan büyüme faktörleri ile desteklenmiş ve immunostaining.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Birkaç müfettişler özellikleri ve insan EPCs5,10,11,12,13potansiyelini inceledik. EPCs endotel dokusunda siteleri hipoksi, iskemi, yaralanma veya tümör oluşumu için uygun ve yeni vasküler yapılar4,14oluşumuna katkıda yeteneği olan hücreleri dolaşan olarak tanımlanabilir. Neovaskülarizasyon, doğum sonrası vasculogenesis, şeklinde gözlenen onların katılımı bir anlayış bu hücreler ve tedavi uygulamaları4,15, kullanımları Patofizyoloji yol açmış 16. bireyin EPCs sayısında kardiyovasküler patoloji9,15,16,17,18ile,19 ilişkili olduğu gösterilmiştir ,20. Diğer çalışmalar da EPCs bir vana fibroblast benzeri fenotip ayrıştırılan ve bu hücrelerin doku Mühendisliği kalp vanalar7,21için kullanılan olabilir önerdi.

EPCs yalıtmak için gerekli belirli hücre yüzey molekülleri açıkça nedeniyle İncelemeler4arasındaki tutarsızlıkları tespit edilmiştir değil. Çok uluslu şirketler yapışma maruz kalma kültür koşulları, çeşitli ile belirli bir matris için sözde EPCs olabileceğini düşündüren çeşitli gruplar1,17,22,23, sahne aldı farklı fenotipik özellikleri görüntülenemiyor. Bu özellikler phagocytotic yeteneği, Matrigel tüp oluşumu ve Dil acetylated düşük yoğunluklu lipoproteinler alımını eksikliği içerir. Yüksek klonojenik progenitör mobilizasyonu yapar ve proliferatif potansiyeli ile hangi EPCs hierarchized5olabilir iki özelliklerdir. EPCs da insan fetal akciğer fibroblastlar4ile cocultured zaman vitro tübüllerin oluşabilir. Bu hücreler endotel hücre yüzey işaretleyicileri ifade etmek ve hematopoetik işaretleri13,24,25bazılarını paylaşmak için bilinir. Fenotipleme EPCs için yaygın olarak kabul edilen olumlu ifade işaretleri vardır CD31, CD34, vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptör 2 (VEGFR2), von Willebrand faktör (vWF), CD133, c-Kit ve vasküler endotel cadherin (VE-cadherin)4 , 18. CD90, CD45, CD14, CD115 veya alfa-düz kas aktin (α-SMA) Co hızlı hücreleri bakteri ve yetersizlik de novo insan formu için phagocytose sınırlı proliferatif potansiyel, yeteneklerini nedeniyle EPCs olmak dikkate alınmaz damarları vivo içinde4,7. Bu makalede insan göbek kordon kanı ezelî belgili tanımlık lüzum için herhangi bir hücreyi iletişim kuralları sıralama endotelyal progenitor hücre izolasyon için değiştirilmiş bir protokol özetlenmektedir. Bu yazı için biz CD31, CD34 ve VEGFR2 olumlu işaretleyicilerle α-SMA negatif göstergesi olarak olarak kullanılır.

Bu makalede, yalıtma ve göbek kordon kanı hücrelerden endotelyal progenitor hücre kullanarak sıralama kültür yöntemi büyüme faktörleri (EGM) ile desteklenmiş endotelyal büyüme orta İhtisas öneriyorum. Bu EGM vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) ve fibroblast büyüme faktörü (FGF), hayatta kalma, yayılması ve endotel hücreleri26geçiş güvenliğini artırmak içerir. Ayrıca askorbik asit, hücre Arnavut kaldırımlı Morfoloji bakımından sorumlu olan içerir; İnsülin benzeri büyüme faktörü-anjiogenik ve göçmen işlevi sağlayan 1 (IGF-1); ve heparin, büyüme faktörleri geliştirilmiş uzun vadeli istikrar içinde orta26neden olur. Endotel hücre kültür ortamına eklenen diğer büyüme faktörleri içerir takviyesi ile epidermal büyüme uyarıcı hücre çoğalması ve farklılaşma ve EGF26 hücrelere sensitizes hidrokortizon yardımcı olan faktörü (EGF), . Bu belirli büyüme orta kullanımı EPCs endotel Bazal orta (EBM) ya da Dulbecco'nın modifiye kartal orta (DMEM) göre daha yüksek sayıda verimleri göster.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma Üniversitesi Arkansas kurumsal inceleme Kurulu (onay numarası 16-04-722) onayı ile gerçekleştirilmiştir. Göbek Kordon kanı birimleri sitrat fosfat dekstroz (GBM) çözümünde, Arkansas Kordon Kanı Bankası toplanmıştır ve depolama gereksinimini karşılamayan birimleri için araştırma kuruluşuna verildi. Kordon kan birimleri ortam sıcaklıklarda koleksiyonunun 24 saat içinde laboratuvara couriered.

1. yalıtım endotelyal Progenitor Hücre kordon kanı üzerinden

  1. reaktifler hazırlanması.
    1. Hazırlamak endotel Bazal orta (EBM) % 10 fetal sığır serum için (FBS) ekleyerek EGM takıma 20 ng/mL İnsülin benzeri büyüme faktörü (IGF), 1 µg/mL askorbik asit, 5 ng/mL rekombinant insan epidermal büyüme faktörü (rhEGF), 22.5 µg/mL heparin ve 0,5 ng/mL vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), 10 ng/mL rekombinant insan Fibroblast büyüme faktörü B (rhFGF-B), 0.2 µg/mL hidrokortizon ve % 2 penisilin-streptomisin-glutamin ile birlikte. Kültür 0.2 µm polyethersulfone (PES) membran vakum filtre kullanarak ortamın sterilize.
    2. Hazırlama fare ben kollajen çözüm 50 µg/mL 0,02 N Asetik asit kullanarak bir konsantrasyon, kuyruk. Bu çözüm 0.2 µm şırınga filtre sterilize.
    3. Öncesi kat 6-şey tabak 2 mL hazırlanmış iri fare ile ben her şey için kollajen çözüm kuyruk. Tohum önce % 5 CO 2 ve 37 ° C en az 1 h için tutulan bir kuluçka yerleştirebilirsiniz.
    4. 1:1 konsantrasyon, kordon kanı ile Hanks dengeli tuz çözüm (HBSS) yaklaşık olarak 25 mL seyreltik.
    5. Hazırlama radyo-IMMUNO yağış tahlil 150 mM Sodyum Klorür, %1 Triton X-100, % 0.5 sodyum deoxycholate, 1 mM β-gliserofosfat, % 0,1 SDS ve 50 mM Tris (pH 8.0) kullanarak (RIPA) arabellek.
  2. Yalıtım endotelyal progenitor hücre.
    1. Sıcak tüm hazır reaktifler yalıtım önce 37 ° C'de tutulan bir su banyosunda.
    2. Yoğunluğu degrade orta reaktif 20 mL 50 mL santrifüj tüpü ekleyin.
    3. Dikkatle katman seyreltilmiş kordon kanı pipet tüp yan duvarlarının doğru amaçlayan tarafından bu katman bozmadan yoğunluk gradient orta içeren santrifüj tüpü içinde 20 mL.
    4. Onların yoğunlukları ( şekil 1) göre kan bileşenlerinin santrifüj rotor frenler ile 800 x g oda sıcaklığında 30 dk için de centrifuging tarafından ayırın. Farklı Katmanlar rahatsız etmeyin.
    5. Plazma katmanın dikkatle bu tüp dışında diğer hücre katman pipet ucu MNC ulaşmak mümkün olana katmanları (bkz. şekil 1) rahatsız etmeden pipetting tarafından kaldırın. Kaldırılan plazma atın.
      Not: pipet ipuçları plazma kaldırmak için kullanırken, plazma MNC katmanının (bozuklukları azaltmak için, şekil 1) küçük bir tabaka bırakın.
    6. Bir 18'lik iğne donatılmış kullanarak çok uluslu şirketler içerir buffy kat toplamak ve bir taze santrifüj tüpü transfer.
    7. Ekleyin EBM eşit bir hacmi toplanan çok uluslu şirketler. santrifüj için bu tüpler 500 x g 10 min için de 4'te ° C. atma süpernatant.
      Not: Kırmızı hücre Pelet kırmızı kan hücreleri/eritrositler varlığı nedeniyle görünür.
    8. 5 mL kırmızı kan hücreleri parçalayıcı amonyum klorür çözeltisi ekleyin. Bu tüp için 5-10 dk ara sıra sallayarak ile buz üzerinde kuluçkaya.
      Not: çok uluslu şirketler için zararlı olabileceği kadar dikkatli olun bu adımı sırasında zaman süresini aşmayacak şekilde alınmalıdır.
    9. 500 x g 4 ° C'de 10 dakika için de tüpler santrifüj kapasitesi ve süpernatant atın. Eritrositler devam ederse, kırmızı renk Pelet içinde gözlenen 1.2.8 ve 1.2.9 yükleme tamamlayana dek.
    10. Pelet hazırlanan EGM içinde resuspend ve hemasitometre çok uluslu şirketler kullanın.
    11. Aspiratı sıçan kuyruk ben (adımından 1.1.3) kolajen kaplı 6-şey plaka ve wells 1 fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) x ile üç kez yıkayın.
    12. 1 x 10 7 çok uluslu şirketler her iyi bir konsantrasyon, kollajen plakasına EGM içinde resuspended MNC Pelet tohum. 37 ° C'de % 5 CO 2 kuluçka yerleştirin.
    13. Sonra 24 h, orta Aspire edin ve wells bir kez EGM ile yıkayın. Her şey için EGM orta 3 mL ekleyin ve geri 37 ° C, % 5 CO 2 kuluçka yerleştirin.
    14. 7 gün boyunca her gün taze EGM orta ile plaka doldurmak. 7 gün sonra EGM orta her gün değiştirin.
    15. Bir alan parlak mikroskop kullanarak almak 6-şey plaka görüntülerini her gün endotel hücre kolonileri ilerlemesini izlemek için. Nerede koloniler ortaya onların büyüme izlemek için plaka işareti.
      Not: Genellikle kültür görünmesini colonies için 5 ile 9 gün arasında sürer.
  3. Genişleme endotelyal progenitor hücre.
    1. Kat T-25 kültür şişeye fare ile kuyruk kollajen (50 µg/mL) ve yer o 37 ° C'de % 5 CO 2 kuluçka için en az 60 dk. aspiratı ve hücreleri tohum önce üç kez 1 x PBS ile T-25 hücre kültür şişeye yıka.
      2. 3 mm boyutunda 150 µL % 0.05 tripsin-EDTA çözüm her kuyuya kullanarak ulaştığınızda
    2. endotel hücre koloniler trypsinize. 6-şey plaka 37 ° C, % 5 CO 2 kuluçka 2-3 dakika süreyle geri yerleştirin
    3. Ekli hücreleri çıkarmak için 6-şey plaka hafifçe dokunun. 2 mL EGM eklenir ve yaklaşık 15 mL santrifüj tüpü hücrelerde kurtarmak.
    4. Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak ve ilk tohumlama yoğunluğu hesaplamak.
    5. Spin 15 mL santrifüj tüpleri 400 x g 5 dakika süreyle, hücre Pelet EGM içinde Resuspend ve T-25 şişeye ~ 500.000 hücreleri ile tohum. Bu şişeyi geçiş 1 olarak işaretlemek ve T-25 şişeye geri 37 ° C, % 5 CO 2 kuluçka yerleştirin.
      Not: Hücreleri EBM ve DMEM büyüme EGM ile karşılaştırmak için kaplama.
    6. İçin daha fazla geçişleri, şişeye % 90 izdiham ulaştığında, adımları 1.3.1 - 1.3.5 ve hücre 10 4 hücreleri/cm 2 T-75 veya T-175 hücre kültür şişeler reseed. İzole hücreler (Adım 2 ve 3) karakterizasyonu için devam.

2. İzole hücreler kullanarak Western Blot karakterizasyonu

  1. Ekle 50-100 µL lizis, arabellek izole hücreleri ayırdetmek için genişleme adımları her geçiş. Proteinler yaklaşık 500.000 veya daha çok satır toplamak.
  2. Yukarı ve aşağı şiddetle hücreleri rüptürü ve proteinleri serbest bırakmak için pipet. Toplamak ve arabellek microcentrifuge tüp transfer.
  3. Microcentrifuge tüp 500 x g de spin ve dikkatle süpernatant yeni bir microcentrifuge tüp aktarın. Etiket ve tüpler uzun süreli depolama için-80 ° C'de depolayın.
  4. Ya Bradford kullanarak her tüpün içinde protein miktarını ölçmek ' s veya BCA tahlil 27 , 28 , 29.
  5. Standart prosedürler 27 , 28 , 29 kullanarak kurutma Western taşımak. İfadeye CD31, CD34, VEGFR2 ve α-SMA ait toplam protein 5 µg analiz. Veri normalleştirme için α-tübülin kullanın.

3. Dolaylı ayirt

  1. 18-mm cam coverslips % 50 etanol içinde solüsyon içeren temizleyicide ve onları kurutun. Temiz coverslips bir 12-şey plaka gecede Biyogüvenlik mahalledeki bir UV ile onları sterilize etmek ışık bırakın.
  2. Kat coverslips ile 50 ve #181; g/kuyruk kollajen ve plaka bir 37 ° C, % 5 CO 2 kuluçka en az 60 dakika süreyle transfer mL sıçan
  3. Kollajen Aspire edin ve 1 mL 1 x PBS coverslips yıkamak için 12-şey plaka ekleyin. 1 x PBS Aspire edin ve iki kez tekrarlayın.
  4. Tohum 250.000 kültürlü EPCs her şey ve onları geri 37 ° C'de % 5 CO 2 kuluçka immunostaining taşıma önce en az 3 gün boyunca yerde.
  5. 3 kez 1 x PBS ile plaka yıkayın. Her şey buz gibi metanol 1 mL ekleyin ve hücreleri düzeltmek 15 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya.
  6. Kullanarak bir standart iletişim kuralı 27 , 28 , 29 immunostaining taşımak. Antikorlar onların uygun dilutions kullanın (Örneğin, CD31 (1:20), CD34 (1:50), α-SMA (1: 100) ve VEGFR2 (1:50)).
  7. Al epifluorescence mikroskop kullanarak immunostained coverslips görüntülerini.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yalıtım ve genişleme endotelyal Progenitor Hücre:
Bir şematik (şekil 1) genel Protokolü tasvir sağlanır. Farklı kan bileşeni katmanları insan göbek kordon kanı ile yoğunluk gradient Orta yoğunluk gradient Santrifüjü takip tespit edildi. Çok uluslu şirketler kollajen tedavi plakalar üzerine tohum, gün 5 ve 7 (Şekil 2A) arasında ilk koloniler akıbet gözlendi. Bu koloniler büyümeye devam etti ve ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Daha önce belirtildiği gibi bir kaldırım taşı döşeli Morfoloji sahip yapışık EPCs. Bizim izole çok uluslu şirketler bir seklinde hücre koloni (Şekil 2A-2D) bir süre kültür on gün içinde bir Arnavut kaldırımlı koloni (Şekil 2E-2F) erken aşamalarında ilerledi. EPCs farklı farklı araştırma gruplarınca, endotel koloni oluşturan hücreleri5veya endotelyal progenitor hücreler12Yani geç en...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu malzeme Grant No altında Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenen çalışma üzerine kuruludur CMMI-1452943 ve Arkansas Üniversitesi onur üniversite tarafından. Biz de Arkansas Kordon Kanı Bankası kordon kanı birimleri ile bize sağlamak için kabul etmek istiyorum.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
A) İzolasyon ve kültürleme için< / güçlü >
EGM-2 BulletKitLonzaCC-3162
.
Ficoll-PaqueGE Heatlhcare17-1440-02
Hank'in Dengeli Tuz ÇözeltisiThermofisher Scientific14170-112
Amonyum KlorürKök Hücre Teknolojileri7850
1x Fosfat Tampon TuzluSu Thermofisher Bilimsel14190250
Sıçan Kuyruğu I KollajenCorning354236
Buzul Asetik AsitAmresco0714-500ML
%0.05 Tripsin-EDTAThermofisher Scientific25300054
HEPES tamponuThermofisher Scientific15630080
Dulbecco'nun Modifiye Eagle's MediumThermofisher Scientific10566-016
B) Antikorlar ve hücre lizatları
CD31 Abcamab283641:250 seyreltme  Western blotting
CD34için Santa Cruz Biotechnologysc-70451:100 Western blotting
α-SMAabcamab5694Western blotting için 1:100 seyreltme
&-tubulinabcamab7291Western blotting için 1:2.500 seyreltme
VEGFR2abcamsc504Western blotting için 1:100 seyreltme
İnsan umbilikal ven endotel hücre lizatıSanta Cruz Biotechnologysc24709 
Valf interstisyel hücre lizatıKendi laboratuvarından kültürlenmiş ve RIPA tamponu ile parçalanmış birincil hücre hattı
C) Western blotting ve immün boyama< / güçlü >
10x Tris / Glisin / SDS tamponuBiorad161-0772Çalışma tamponu olarak kullanılır
10x Tris / Glisin tamponuBiorad161-0771Transfer tamponu olarak kullanılır
Immobilon-FL transfer membranıMerck MilliporeIPFL0010Bu, 45 & m gözenek boyutu ve protokolde western blot membran
4x Laemmli numune tamponuolarak belirtilmiştir Biorad161-0747
2-merkaptoetanolBiorad161-0710
%10 Kriter TGX prekast jelBiorad5671033
Prolong Gold antifadeThermofisherScientific P36930Uzun süreli depolama için immün boyalı lamellerin montajında kullanılır
MetanolVWR AnalitikBDH1135-4LP
Bu ürün, Endotel Büyüme Ortamı Fetal Sığır Serumu Thermofisher Scientific 26140079 Pencillin-Streptomisin-Glutamin (100x) Thermofisher Scientific 10378016 yapmak için gereken tüm büyüme faktörleriyle birlikte gelir için seyreltme

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Asahara, T., et al. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275 (5302), 964-967 (1997).
  2. Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. J Clin Invest. 105 (1), 71-77 (2000).
  3. Shi, Q., et al. Evidence for circulating bone marrow-derived endothelial cells. Blood. 92 (2), 362-367 (1998).
  4. Hirschi, K. K., Ingram, D. A., Yoder, M. C. Assessing identity, phenotype, and fate of endothelial progenitor cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (9), 1584-1595 (2008).
  5. Ingram, D. A., et al. Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood. Blood. 104 (9), 2752-2760 (2004).
  6. Yoder, M. C., et al. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals. Blood. 109 (5), 1801-1809 (2007).
  7. Sales, V. L., et al. Transforming growth factor-beta1 modulates extracellular matrix production, proliferation, and apoptosis of endothelial progenitor cells in tissue-engineering scaffolds. Circulation. 114, 1 Suppl 193-199 (2006).
  8. Sales, V. L., et al. Endothelial Progenitor Cells as a Sole Source for Ex Vivo Seeding of Tissue-Engineered Heart Valves. Tissue Eng Pt A. 16 (1), 257-267 (2010).
  9. Liew, A., Barry, F., O'Brien, T. Endothelial progenitor cells: diagnostic and therapeutic considerations. Bioessays. 28 (3), 261-270 (2006).
  10. Hur, J., et al. Characterization of two types of endothelial progenitor cells and their different contributions to neovasculogenesis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (2), 288-293 (2004).
  11. Ingram, D. A., Caplice, N. M., Yoder, M. C. Unresolved questions, changing definitions, and novel paradigms for defining endothelial progenitor cells. Blood. 106 (5), 1525-1531 (2005).
  12. Melero-Martin, J. M., et al. In vivo vasculogenic potential of human blood-derived endothelial progenitor cells. Blood. 109 (11), 4761-4768 (2007).
  13. Melero-Martin, J. M., Bischoff, J. Chapter 13. An in vivo experimental model for postnatal vasculogenesis. Methods Enzymol. 445, 303-329 (2008).
  14. Yoder, M. C. Human endothelial progenitor cells. Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (7), 006692(2012).
  15. Siddique, A., Shantsila, E., Lip, G. Y. H., Varma, C. Endothelial progenitor cells: what use for the cardiologist. J Angiogenes Res. 2 (6), (2010).
  16. Camci-Unal, G., et al. Surface-modified hyaluronic acid hydrogels to capture endothelial progenitor cells. Soft Matter. 6 (20), 5120-5126 (2010).
  17. Hill, J. M., et al. Circulating endothelial progenitor cells, vascular function, and cardiovascular risk. N Engl J Med. 348 (7), 593-600 (2003).
  18. Young, P. P., Vaughan, D. E., Hatzopoulos, A. K. Biologic properties of endothelial progenitor cells and their potential for cell therapy. Prog Cardiovasc Dis. 49 (6), 421-429 (2007).
  19. Mehta, J. L., Szwedo, J. Circulating endothelial progenitor cells, microparticles and vascular disease. J Hypertens. 28 (8), 1611-1613 (2010).
  20. Nevskaya, T., et al. Circulating endothelial progenitor cells in systemic sclerosis are related to impaired angiogenesis and vascular disease manifestations. Ann Rheum Dis. 66, 67-67 (2007).
  21. Cebotari, S., et al. Clinical application of tissue engineered human heart valves using autologous progenitor cells. Circulation. 114, 1 Suppl 132-137 (2006).
  22. Ito, H., et al. Endothelial progenitor cells as putative targets for angiostatin. Cancer Res. 59 (23), 5875-5877 (1999).
  23. Vasa, M., et al. Increase in circulating endothelial progenitor cells by statin therapy in patients with stable coronary artery disease. Circulation. 103 (24), 2885-2890 (2001).
  24. Wu, X., et al. Tissue-engineered microvessels on three-dimensional biodegradable scaffolds using human endothelial progenitor cells. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 287 (2), 480-487 (2004).
  25. Boyer, M., et al. Isolation of endothelial cells and their progenitor cells from human peripheral blood. J Vasc Surg. 31 (1), Pt 1 181-189 (2000).
  26. Huber, B., Czaja, A. M., Kluger, P. J. Influence of epidermal growth factor (EGF) and hydrocortisone on the co-culture of mature adipocytes and endothelial cells for vascularized adipose tissue engineering. Cell Biol Int. 40 (5), 569-578 (2016).
  27. Sturdivant, N. M., Smith, S. G., Ali, S. F., Wolchok, J. C., Balachandran, K. Acetazolamide Mitigates Astrocyte Cellular Edema Following Mild Traumatic Brain Injury. Sci Rep. 6, 33330(2016).
  28. Lam, N. T., Muldoon, T. J., Quinn, K. P., Rajaram, N., Balachandran, K. Valve interstitial cell contractile strength and metabolic state are dependent on its shape. Integr Biol (Camb). 8 (10), 1079-1089 (2016).
  29. Tandon, I., et al. Valve interstitial cell shape modulates cell contractility independent of cell phenotype. J Biomech. 49 (14), 3289-3297 (2016).
  30. Cockshell, M. P., Bonder, C. S. Isolation and Culture of Human CD133+ Non-adherent Endothelial Forming Cells. Bio-Protocol. 6 (7), (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

H cre zolasyonuYo unluk Gradyan Santrif jasyonuEndotelyal B y me OrtamWestern Blot Analizimmunboyama KarakterizasyonuKollajen KaplamaH cre K lt r nk basyonuKoloni Olu umu

İlgili makaleler