Dopaminerjik Homeostasis farelerde yüksek performanslı sıvı Kromatografi analizi ve Synaptosomal dopamin alımı kullanımı tarafından değerlendirilmesi

Kathrine L. Jensen; Annika H. Runegaard; Pia Weikop; Ulrik Gether; Mattias Rickhag

doi:10.3791/56093

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Dopaminerjik Homeostasis farelerde yüksek performanslı sıvı Kromatografi analizi ve Synaptosomal dopamin alımı kullanımı tarafından değerlendirilmesi

11.9K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/56093

⸱

21 Eylül 2017

Kathrine L. Jensen¹ , Annika H. Runegaard¹ , Pia Weikop² , Ulrik Gether¹ , Mattias Rickhag¹

¹Molecular Neuropharmacology and Genetics Laboratory, Lundbeck Foundation Center for Biomembranes in Nanomedicine, Department of Neuroscience and Pharmacology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ²Laboratory of Neuropsychiatry, Psychiatric Center Copenhagen and Department of Neuroscience and Pharmacology, University of Copenhagen

Bu makalede

Özet

Synaptosomal dopamin alımı ve yüksek performanslı sıvı Kromatografi analiz temsil deneysel araçları tarafından değerlendirilmesi dopamin taşıyıcı işlevi ve striatal dokusunda dopamin düzeyleri dopamin homeostazı farelerde araştırmak için anılan sıraya göre. Burada protokolleri dopamin doku içeriği ölçmek ve dopamin taşıyıcı işlevselliğini değerlendirmek için mevcut.

Özet

Dopamin (DA) bir düzenleyici nörotransmitter kontrol motor aktivite, ödül süreçleri ve bilişsel işlev var. Dopaminerjik (DAergic) neurotransmission bozulma şiddetle Parkinson hastalığı, dikkat eksikliği hiperaktivite bozukluğu ve uyuşturucu bağımlılığı¹^,^{2 gibi merkezi sinir sistemi ile ilişkili çeşitli hastalıklarla ilişkilidir} ^,³^,⁴. Hastalık mekanizmaları DA dengesizlik içeren operasyona eleştirel yönleri hastalıkları taklit etmek için hayvan modellerinde bağımlı, ve böylece DA homeostazı belirli bölümlerini değerlendirmek protokolleri roman yorumlara ve tedavi mümkün sağlamak önemlidir Bu hastalıklar için hedefler.

Burada, o zaman birlikte iki yararlı deneysel protokol mevcut farelerde DAergic sisteminin fonksiyonel bir okuma sağlar. Biyokimyasal ve fonksiyonel parametrelere DA homeostazı DA düzeyleri ve dopamin taşıyıcı (DAT) işlevselliği⁵değerlendirilmesi ile elde edilir. Ne zaman DA sistemi araştıran, güvenilir bir şekilde endojen DA--dan yetişkin beyin düzeylerini ölçmek için temel yeteneğidir. Bu nedenle, biz mevcut yüksek performanslı sıvı Kromatografi (HPLC) gerçekleştirmek nasıl beyin dokusunda da düzeylerini belirlemek için fare Dorsal striatum (dStr) ve nucleus accumbens (NAc) doku üzerinde deney gerçekleştirmek, ama yöntemi Ayrıca diğer DA innervated beyin bölgesi için uygun mu.

DAT DA geri presynaptic terminal içine Alım için gerekli böylece serbest bırakmak da zamansal ve mekansal etkinliği denetleme Düzeyleri ve DAT işlevselliğini striatum içinde bilerek büyük DA homeostazı değerlendirirken önemlidir. Burada, aynı anda yüzey düzeyleri ve işlev bir synaptosomal⁶ DA alımı tahlil kullanarak bilgi anlamak için izin veren bir protokol sağlar.

Geçerli yöntemleri standart immunoblotting iletişim kuralları ile kombine DAergic sistemi karakterize etmek için araştırmacı ile ilgili araçlar sağlar.

Giriş

Dopamin (DA) düzenleyici nörotransmitter motor davranış, ödül ve bilişsel işlev¹^,⁷^,⁸^,⁹için kritik olduğunu. Dengesizlikler DA Homeostazı, dikkat eksikliği hiperaktivite bozukluğu, uyuşturucu bağımlılığı, depresyon ve Parkinson hastalığı¹gibi birkaç nöropsikiyatrik hastalıkların karıştığı. DA presynaptic nöron böylece daha fazla sinyal taşıma nerede bağlar ve tarih öncesi ve postsinaptik membran reseptörleri aktive, sinaptik yarık serbest bırakılır. Synapse yayımlanmasından sonra DA kademede dağınık şekilde ve geçici D....