Perfüze Mikro-biyoreaktörler Chip tabanlı üç boyutlu Hücre Kültürü

Summary

Biz, mikro-biyoreaktörler hücrelerin üç boyutlu ekimi için çip tabanlı platform açıklar. Bir çip 10 milyon kadar ev. steril, kapalı bir dolaşım döngü içinde sıvı akışı, oksijen basıncı vb ilişkin kesin olarak tanımlanmış koşullar altında yetiştirilen hücreler.

Abstract

Biz üç boyutlu hücre ekimi için bir çip tabanlı hücre kültürü sistemi geliştirdik. Olmayan biyolojik olarak parçalanabilen polimerler, örneğin, polikarbonat veya mikro enjeksiyon polimetil metakrilat, mikro sıcak kabartma veya termoform mikro çip tipik olarak imal edilmektedir. Ama, aynı zamanda biyo-bozunur polimerler imal edilebilir. Genel boyutları 0.7 1 x 20 x 20 x 0.7 mm 1 (hxwxl). Kullanılan yongaları temel özellikleri ya kadar 1156 metreküp mikro-konteynerler (cf-chip) bir ızgara her 120-300 boyutunu x 300 x 300 μ (hxwxl) veya 300 μ çaplı yuvarlak girinti ve derinlik 300 μ (r çip). Iskele 10 milyon ev. üç boyutlu bir yapılandırma hücreler. Optimal bir besin ve gaz kaynağı için çip biyoreaktör konut eklenir. Biyoreaktör basit yapılandırma, ayrica bir silindir pompa ve gaz kaynağı ile orta rezervuar oluşan, kapalı steril dolaşım döngü parçasıdır. Biyoreaktör perfüzyon, superfusion, hatta karışık bir çalışma modu çalıştırmak olabilir. Biz birkaç hafta süre başarıyla birincil hücre hücre hatlarının yanı sıra ekili var. Sıçan primer karaciğer hücreleri için en fazla 2 hafta süreyle Organotipik fonksiyonlarının korunması gösterilebilir. Hepatosellüler karsinom hücre hatları için, ya da sadece biraz standart tek tabaka kültürü ifade karaciğer belirli genlerin indüksiyon gösterebilirim. Beri bir kök hücre, kök hücre hatları ile ilk farklılaşma deneyler yetiştirme sistemi vaat sistemi de kullanışlı olabilir.

Protocol

Bu kağıt, birincil hücre hücre hatlarının yanı sıra üç boyutlu ekimi için bir çip tabanlı platform (Şekil 1) kullanımını açıklar. Birçok hücre, sadece 3 boyutlu bir ortamda ifade Organotipik fonksiyonları bu yana, biz hücreler tüm uzaysal yönde uymak için bir iskele sağlayan bir polimer çip geliştirdik ve sıvı akışının kontrolü için bir biyoreaktör konut monte edilebilir , deney tasarımı bağlı olarak oksijen basıncı vb, polimer yüzey çeşitli teknikler, örneğin, UV ışınlama, PECVD, γ-aşılama veya konvansiyonel ıslak kimya değiştirilmiş olabilir.

Discussion

Biz aktif perfüze mikro biyoreaktörler hücrelerin üç boyutlu ekimi için bir çip-tabanlı bir platform geliştirmiştir. Cips, biyolojik olarak parçalanabilen polimerler olmayan biyolojik olarak parçalanabilen yanı sıra mikro enjeksiyon kalıplama, sıcak kabartma yanı sıra mikro termoform ^teknikleri 3 tarafından imal edilebilir . Deneysel tasarım bağlı olarak, polimer yüzey ⁴ UV ışınlama tarafından değiştirilebilir. Hepatosit hücre hatları gibi birincil rat hepatositlerinde ifade, bazı karaciğer spesifik genlerin analizi gi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Hücreler	Diğer	ATCC	HB-8065
Kollajen I sıçan kuyruğundan	Reaktif	Roche Grubu	11 179 179 001
PARIS kiti	Reaktif	Ambion	AM1921
Syto16	Reaktif	Invitrogen	S7578
anti sitokeratin 18	Antikor	Abcam	ab668	Birincil Ab, Fare monoklonal, PBS'de 1/100 kullanılır,
Anti E-kaderin	Antikoru	Abcam	ab1416	Birincil Ab, Fare monoklonal, PBS'de 1/50 kullanılır.
Keçi anti-albümin	Reaktifi	Bethyl Laboratories	E80-129	Birincil Ab, keçi anti-insan Albümini, PBS'de 1/200 kullanılır
Tavşan anti-fare IgG1	Antikoru	Invitrogen	A11059	İkincil Ab, Alexa Unu 488 konjuge, PBS'de 1/100 kullanılır +% 0.5 BSA
Cy3 keçi önleyici IgG	Reaktifi	Jackson ImmunoResearch	705-165-003	Cy3 AffiniPure eşek a-keçi IgG Ab, PBS + 'da 1/700 kullanılır %0,5 BSA