Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için

8.8K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/57448

⸱

26 Nisan 2018

 ,  ,  ,  , 
1Ludwig Institute for Cancer Research, 2Moores Cancer Center, School of Medicine, University of California, San Diego, 3Department of Pathology, School of Medicine, University of California, San Diego, 4Department of Medicine, School of Medicine, University of California, San Diego

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Orthotopic kafa içi enjeksiyon tümör hücrelerinin Beyin tümör biyolojisi, ilerleme, evrim ve terapötik yanıt çalışmaya kanser araştırmalarında kullanılmıştır. Burada gerçek zamanlı intravital görüntüleme ve miktar tümör preklinik glioblastoma modellerinde kitle sağlayan Floresans moleküler tomografi, tümör xenografts, mevcut.

Özet

Tumorigenicity olan bir tümör oluşturmak için yetenek kanser hücrelerinin kitle. İmmünyetmezligi fareler, subkutan kanseri hücreleri enjekte ve görünür ve elle tutulur olduktan sonra tümör kitle ölçüm hücreleri tumorigenic olup olmadığını belirlemek için yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım olacaktır. Orthotopic enjeksiyonu kanser hücrelerinin en çok benzeyen menşe okudu tümör doku microenvironment xenograft tanıtmak amaçlanmaktadır. Beyin kanser araştırma kanser hücrelerinin tümör oluşumu ve analiz içinde beyin microenvironment benzersiz izin vermek için kafa içi enjeksiyon gerektirir. Kafa içi xenografts vivo içinde görüntüleme anında engrafted orthotopically farelerde tümör kitle izler. Burada Beyin tümör xenografts, Floresans moleküler tomografi (FMT) kullanımı raporu Kanser hücreleri ilk kızılötesi floresan proteinler ile transduced ve immün farelerin beyninde enjekte. Hayvanlar o zaman zaman uzun süre tümör kitle hakkında kantitatif bilgi edinmek için taranır. Hücre önceden etiketleme, tekrarlanabilir, uygun maliyetli ve güvenilir miktar her fare içinde tümör yükü için izin verir. Biz görüntüleme yüzeylerde enjekte için ihtiyaç ortadan kaldırılmıştır ve böylece hayvanlar üzerinde stres azalır. Bu yaklaşımın bir sınırlama çok küçük kitlelerin algılamak için yetersizlik tarafından temsil edilir; Ancak, diğer teknikleri daha büyük kitleler için daha iyi çözünürlüğe sahip. Bir uyuşturucu tedavisinin etkinliği veya genetik değişiklikler gliyom hücre satırları ve hasta elde edilen örnekler değerlendirmek için uygulanabilir.

Giriş

Kanser sanayileşmiş dünya insanlarda hastalık ile ilgili ölümlerin önde gelen nedenlerinden biridir. Son derece yüksek bir ölü sayısı ile yeni tedaviler şiddetle ihtiyaç vardır. Glioblastoma multiforme (GBM) beyin kanseri, beyin tümörü, stromal ve bağışıklık hücrelerinin türdeş olmayan nüfus oluşan son derece öldürücü bir türüdür. Merkezi beyin tümörü ABD göre birincil kötü huylu ve kötü huylu olmayan beyin tümörü insidansı yaklaşık 100.000 başına 22 vaka olması. Yaklaşık 11.000 yeni vaka 20171ABD'de tanısı için bekleniyor.

Preklinik çalışmaları, uyuşturucu, yordam veya insanlarda test önce etkili olduğu için tedavi olasılığını araştırmak. Preklinik çalışmalarda erken laboratuvar adımlardan biri ilaç tedavisi için potansiyel moleküler hedef insan xenograft model olarak tanımlanan ana bilgisayar canlı, implante kanser hücrelerini kullanarak tanımlayan iş. Bu bağlamda, kafa içi Beyin tümör xenograft modelleri hasta elde edilen xenografts (PDXs) kullanarak beyin tümör biyolojisi, ilerleme, evrim ve terapötik yanıt çalışma ve son zamanlarda biyolojik gelişimi için ilaç yaygın olarak kullanılmıştır Eleme ve kişiselleştirilmiş tıp2,3,4.

Görüntüleme yöntemleri intrakranial xenografts izlemek için en uygun fiyatlı ve non-invaziv vivo içinde biridir bioluminescence görüntüleme (BLI)5,6,7,8. Ancak, bazı BLI sınırlamalar substrat yönetim ve kullanılabilirlik, enzim istikrar ve ışık Şoklama ve edinme9görüntüleme sırasında saçılma sayılabilir. Burada preklinik glioblastoma modelleri izlenecek yöntem Imaging alternatif olarak kızılötesi FMT raporu. Bu yöntem, sinyal Alım ve intracranially implant PDXs miktar, (bundan sonra FP720 adlandırılan) bir yakın kızılötesi floresan protein iRFP72010,11 ifade ya da (bundan böyle FP635 adlandırılan), turboFP635 bir FMT görüntüleme sistemi ile gerçekleştirilir. FMT teknolojisini kullanarak, tümör olabilir orthotopic vivo içinde önce sırasında veya tedaviden sonra preklinik gözlemler için non-invaziv, substrat-Alerjik ve nicel bir şekilde izlenir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Deneysel araştırma hayvanlar ve lentivirus kanser hücrelerinin transduce gibi bulaşıcı hayvan Kurulusları program tarafından ve kurumsal Biyogüvenlik Kurulu tarafından önceden onay gerektirir. Bu iletişim kuralı (UCSD) University of California San Diego hayvan bakımı kuralları izler.

1. FP635 veya FP720 yapı Glioblastoma hücrelerle etiketlerine göre

  1. Üretmek ve lentivirus Tiscornia vd tarafından açıklanan protokolüne göre arındırmak 12
  2. Kültür yaklaşık 2.0 x 106 DMEM artı % 10 fetal sığır serum (FBS) 15 cm tabak içinde insan gliyom hücre satırıyla hücrelerden; ya da kültür 2.0 x 106 insan glioblastoma hasta kaynaklı (GBM-PDX) yuvar DMEM ile/B27 ile F12 1:1 orta takviyesi plus insan rekombinant epidermal büyüme faktörü (EGF; 20 ng/mL) ve FGF (10 ng/mL) bir T75 şişesi içinde.
  3. 37 ° C, % 5 CO2ve %100 bağıl nem tüm hücreleri korumak.
  4. Hücreleri ayırmak.
    1. Tümörü hücreler için: süpernatant plakalar kaldır ve tripsin 1 X 3-5 mL gliyom hücrelere ekleme.
    2. GBM için yuvar: 15 mL tüp içine hücreleri pipetting tarafından hücreleri toplamak.
      1. Spin aşağı GBM küreler 200 x g masa üstü bir santrifüj oda sıcaklığında kullanarak 5 min için de.
      2. Süpernatant kaldırın ve 3-5 mL hücre dekolmanı çözeltisi ekleyin.
    3. 10-15 dk 37 ° C'de tüm hücreleri kuluçkaya.
  5. Hücreleri yukarı ve aşağı birkaç kez pipetting tarafından özenle ayırmak (küreler ve tümörü hücreleri tamamlandığından emin olun Disosiye) ve 5 min için 200 x g aşağı spin.
  6. Süpernatant kaldırın ve yukarı ve aşağı birkaç kez pipetting tarafından orta 5 mL hücrelerle resuspend. Hücre canlılığı trypan mavi dışlama tarafından belirler.
  7. Plaka 1.0 x 106 hedef hücre 10 cm tabak ile 5 mL pipetting tarafından orta de.
  8. Hücreleri enfeksiyon (MOI) Tiscornia vd tarafından açıklandığı gibi 5 çokluğu, floresan proteinler ifade lentivirus ile transduce 12 ve 37 ° C'de kuluçkaya
  9. 24 saat sonra orta transduced hücrelerden kaldırma, taze orta 5 mL ekleyin ve ek 48 h 37 ° C'de için kuluçkaya
  10. Enfekte hücreleri tek hücre süspansiyon adımlarda 1.4-1.6 açıklandığı içine ayırmak. Hücreleri 200 x g 5 min için de aşağı spin ve 500 µL çözüm sıralama resuspend (fosfat tamponlu tuz (PBS) % 1 FBS).
  11. Hücre süspansiyon FACS tüpler içine pipette. 1 µL/mL 4', ölü hücreleri dışlamak için 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) dihydrochloride hücrelerle birlikte leke. Negatif denetimleri Akış Sitometresi kapıları ayarlamak için gerekli (sigara transduced hücreleri ve sigara transduced hücreleri / DAPI lekeli).
  12. Floresan-pozitif/DAPI-negatif hücreleri çözüm, sıralama içine Basu vd tarafından açıklandığı gibi sıralama 13ve 15 mL konik tüp içine sıralanmış hücreleri toplamak.
  13. Spin aşağı 200 x g 5 min için de sıralanmış hücreleri, süpernatant kaldırmak ve kültür orta 5 mL resuspend. Tohum pipetting tarafından bir 10 cm çanak sıralanmış hücrelerde. En az 48-72 saat için 37 ° C'de kuluçkaya.
  14. Hücreleri dissociating tarafından sıralanmış hücreleri genişletin aşağıdaki adımları 1.4-1.6 ve içine birden çok yemekler vivo deneyler için kaplama.
    Not: hücre hazırlık ve arıtma sıralama hakkında daha fazla bilgi için bkz: Basu vd. 13

2. immünyetmezligi fareler içine iRFP öğesini Glioblastoma hücre kafa içi enjeksiyon

Not: ameliyat başlamadan önce Araçlar ve cerrahi Oda yordamı için temiz olduğundan emin olun. İmmünyetmezligi korele çıplak (Foxn1nu) erkek ya da dişi fareler, 4-5 hafta yaşlı ve kafa içi enjeksiyonlar için 17-19 g arasında kullanın. Hayvanlar en az 3 gün boyunca geldikten sonra ve ameliyattan önce yer.

  1. Hücre hazırlık
    1. Hasat ve floresan pozitif tümörü hücreleri tek hücre süspansiyon (Adım 1.4-1.6) ayırmak ve 2-5 µL PBS enjeksiyon hayvan başına ücret, 0,5 veya 1.0 x 106 hücrelerde resuspend. 1.5 mL microcentrifuge tüp ve buz üzerinde yer içine hücre süspansiyon pipette.
  2. Anestezi hazırlama ve yönetim
    1. 200 µL serum fizyolojik çözüm ketamin (100 mg/kg) ve xylazine fare vücut ağırlığının 20 gram (10 mg/kg) içeren hazır olun. Hayvanlar tartmak ve anestezi uygun doz hesaplayın.
    2. Mayi iğne anestezi sağlamak ve oftalmik merhem su kaybı önlemek için gözler için geçerlidir. Bu adım hakkında daha fazla bilgi için bkz: Kathleen vd. 14 Place bir Önceden ısıtılmış su termal yastık 37 ° C'de üzerinde hayvan
    3. Hayvanların ayak çimdik yanıt (pedal refleks), izleme tarafından genellikle 5-10 dk içinde anestezi ki kontrol edin.
  3. Kafa içi enjeksiyon
    1. 5 µL yük Hamilton şırınga (künt ucu iğne) hücre süspansiyon ve sonda tutucu bağlama ile.
    2. Fareyi bir küçük hayvan stereotaksik çerçevesine yerleştirin ve kulak Bar ve çetin vd tarafından açıklanan detayları takip kesici bağdaştırıcısı kullanarak kafa tamir 15
    3. Başından % 70 etanol ve betadine solüsyonu ile dezenfekte. Cerrahi sitesi olduğunu tamamlamak steril emin. Küçük bir neşter ile orta bir kesi gerçekleştirmek ve cilt ve bağ dokusu ayrı.
    4. Hamilton şırınga micromanipulator kullanarak bregma noktasına yerleştirin.
    5. Sonda tutucu 1.0 mm hastanın ve 2.0 mm yanal bregma noktasından hareket. Bu konumunu bir kalemle işaretlemek.
    6. Bu konumda dikkatle kan damarları görünür olana kadar aşağı doğru hafif basınç uygulayarak bir micromotor el matkapla kafatası içinde bir delik açın. Araknoid mater ve beyin parankimi bozmak değil.
    7. İğne burr deliğe tanıtmak ve pial yüzeyinin altında 3,0 mm ilerlemek.
    8. Birim (2-5 µL) ve akış hızı (1 µL/dak) motorlu stereotaksik enjektör kullanarak enjeksiyon ayarlamak veya el ile enjeksiyon gerçekleştirir.
    9. Enjeksiyon sonra iğne yavaş yavaş 1.0 mm her 1dk artan tarafından çıkarın ve % 70 etanol ile enjeksiyon yeri temizleyin.
    10. Yakın cilt cerrahi zımba ile veya cerrahi dikiş (genellikle dikiş anılacaktır) yaparak yara ve Kathleen ve ark. görmek 14 daha fazla ayrıntı için.
  4. Hayvan Kurtarma
    1. Hayvan su termal pad (37 ° C) için aktarım ve vücut ısısı, solunum hızı ve kalp hızı, tam kurtarma kadar izlemek. Analjezi başına standart iletişim kuralları yönetmek.
      Not: diğer raporları5,14,15cerrahi ve koordinatları, stereotaktik yordam hakkında daha fazla bilgi için bkz:.

3. FMT görüntüleme

Not: deneysel amacı göre iRFP öğesini glioblastoma hücreler olabilir önce sırasında veya tedaviden sonra vivo içinde izlenen. İçin amaç düşsel, hayvanlar isoflurane indüksiyon odası kullanarak anestezi, tarama ve görüntü FMT Imager yerleştirme istasyonundaki sırasında görüntüleme bir kasete koru.

  1. Kafes ve isoflurane indüksiyon odası yerde hayvan kaldırın. Odası kapatın ve oksijen akışı ve % 3-5 için Buharlaştırıcı açın.
  2. Hayvan izlemek kadar tamamen anestezi, genellikle 1-2 dk. baygın içinde hayvanlar dış uyaranlara yanıt.
  3. İmzalat hayvan odasından kaldırın ve hayvan görüntüleme kasete ilk olarak, baş adaptör yerleştirerek koymak aşağı bakacak şekilde hayvan yerleştirerek takip ettim. Baş kaset ortasına bulunduğundan emin olun.
  4. Kaset üst plaka üstüne yerleştirin ve ayar düğmeleri 17 mm kadar sıkın.
  5. Bir kez bu hayvan görüntüleme kasete güvenlidir, görüntüleme için kaset nerede isoflurane pompalanır anestezi hayvan tutmak için iç Dok FMT Imager ekleyerek devam edin.
  6. Imager ve analyzer yazılımı yazılım simgesini çift tıklatarak çalıştırın.
  7. "Deneysel sekmesi" penceresinde, "Veritabanı" ve "çalışma grubu" seçin.
  8. "Tarama sekmesini" pencereye git ve görüntü konuya "konu seçin" tıklatarak seçin. Ayrıca, "Lazer kanal" panelinde lazer kanalını seçin. FP635 etiketli hücreleri için "lazer kanal 635 nm" seçin ve "Kanal 680 nm lazer" FP720 etiketli hücreleri için seçin.
  9. Bir görüntü elde etmek "Tarama sekme" penceresinde "Yakalama" seçeneğini tıklatarak. Sonra tarama alanını tıklatıp kaynak konumları, genellikle içinde 20-25 kaynakları Ipsilateral tarafı için kararlı bir dizi için yakaladığınız görüntüyü tarama alanına sürükleyerek ayarlayın.
  10. "Yeniden yapılanma Kuyruğa Ekle" seçeneğini işaretleyin ve "Tarama" "Tarama sekmesini" penceresinde vurmak.
  11. Tarama tamamlanana kadar bekleyin ve ardından görüntüleme kaset takma biriminden çıkarma.
  12. Kaset üst plaka çıkarın ve hayvan arka kafesin içine yerleştirin.
  13. Tekrarlamak belgili tanımlık merdiven 3.1-3.12 hayvanları geri kalanı için.

4. görüntü analizi

  1. Imager ve analyzer yazılımı, "Analiz sekmesi" pencereyi seçin.
  2. Veri kümesi ve konu "Analiz sekmesi" penceresinin "Veri kümesi seçimi" panelinde "+" düğmesini tıklatarak analiz etmek için yükleyin.
  3. "Analiz sekmesi" penceresinde görüntü yüklendikten sonra "Analiz sekmesi" penceresinin sol üst köşesinde bulunan elips simgesini seçerek bölgesi faiz (ROI) analizi gerçekleştirin.
  4. Eşik "istatistik veri" panelinde yanında doğru tıkırtı "Analiz sekmesi" penceresinde "eşik" sütun sıfır olarak ayarlayın.
  5. Toplam değer "İstatistik veri" Masası'ndaki fare beyninde implante floresan öğesini glioblastoma hücrelerden sinyali temsil eder.
  6. 4.2-4.4 hayvanları geri kalanı için yineleyin. Yüklemek veya yeni bir konu kaldırmak "+" veya "−" düğmesini, sırasıyla, "Analiz sekmesi" pencere "Veri kümesi seçimi" panelinde.
    Not: FMT görüntüleme ve yazılım işlemi hakkında daha fazla bilgi için bkz:20.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Glioblastoma U87EGFRvIII hücreleri (EGF reseptör değişken III aşırı ifade U87 hücreleri) adım 1.2 göre kültürlü. Lentivirus üretilen ve adım 1.1 göre saf. Viral konsantrasyon p24 tarafından belirlendi ELISA analiz. Hücreleri adım 1.8 göre kızılötesi floresan protein taşıyan lentivirus ile transduced. FP72010,11 kodlama plazmid lütfen Dr V.V. Verkhusha tarafından sağlanan ve FP635 vektör ticari bir satıcıdan satın alınmıştır. Hedef...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Tümör xenografts kapsamlı kanser araştırmalarında hem de bir dizi köklü görüntüleme teknikleri geliştirilmiştir: BLI; Manyetik rezonans görüntüleme (MRG); Pozitron emisyon tomografisi (PET), bilgisayarlı tomografi (CT); FMT. Her bu yaklaşımların artıları ve eksileri ile gelir, ama sonuçta birbirini tamamlayıcı bilgiler türü ile. Görüntü teknolojisi en sık kullanılan vivo içinde biridir BLI5,6,7,

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar çakışma çıkarlarının bildirin.

Teşekkürler

Dr. Frederick Lang, MD Anderson Kanser Merkezi GBM-PDX neurospheres için teşekkür ederim. Bu eser yenilgi GBM araştırma işbirliği tarafından Ulusal beyin tümörü toplum (Frank Furnari), R01-NS080939 (Frank Furnari), James S. McDonnell Vakfı (Frank Furnari); bir iştiraki desteklenmiştir Jorge Benitez bir ödülü Amerikan beyin tümörü Derneği (ABTA) üzerinden tarafından desteklenen; Ciro Zanca kısmen bir Amerikan-İtalyan kanser Vakfı doktora sonrası araştırma bursu tarafından desteklenmiştir. Frank Furnari maaş ve ek destek Ludwig Enstitüsü'nden kanser araştırmaları için alır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
DMEM / Yüksek Glikoz HyClone / GESH30022.1
DMEM / F12 1: 1  Gibco11320-082
FBSHyClone / GESH30071.03
AccutaseYenilikçi hücre teknolojileriAT-104
TripsinHyClone / GESH30236.01
B27 takviyesiGibco17504044
insan rekombinant EGF Kök Hücre Teknolojileri2633
insan rekombinant FGFKök Hücre Teknolojileri2634
DPBSCorning21-031-00
FACS tüpleriFalcon352235
DAPIThermoFisher Scientific62248
BlasticidinThermoFisher ScientificA1113903
p24 ELISA Clontech632200
XylazineAkornNDC 59399-110-20
KetaminZoetisNADA 043-403Kontrollü madde
MerhemDechronNDC 17033-211-38
Emilebilir sütürCpMedicalVQ392
5 ul şırıngaHamilton26200-UTarafından satılan katalog numarası Sigma-Aldrich
Hücre SıralayıcısıSonySH8007
Fare stereotaksik çerçeve Çalma51730
Motorlu stereotaksik enjektörÇalma53311
Mikromotor el tipi matkapForedomK1070
Fare ısıtma pedi Ken Scientific CorporationTP-22G
Floresan Tomografi Sistemi PerkinElmerFMT 2500 XL
TrueQuant Görüntüleme Yazılımı Perkin Elmer 
Ultra-santrifüj Optima L-80 XPBeckman Coulter392049
Doku Kültürü 100mmTabaklar Olympus Plastics25-202
Doku Kültürü 150mm TabaklarOlympus Plastics25-203
Doku Kültürü Şişeleri T75Corning430720U
50 mL konik tüplerCorning430290
15 mL konik tüplerOlympus Plastics28-101
Santrifüj Avanti J-20Beckman CoulterJ320XP-IM-5
Tüp, Polipropilen, İnce Duvar, 5.0 mLBeckman Coulter326819
Tüp, İnce Duvar, Polipropilen, 38,5 mL, 25 x 89 mmBeckman Coulter326823
Atimik çıplak farelerCharles Nehri LaboratuvarlarıSuş Kodu  490 (Homozigot)Kurumsal Hayvan Bakım Programı ve Kurumsal Biyogüvenlik Komitesi tarafından önceden onay alınması gerekmektedir.    
7005319

Kaynaklar

  1. Ostrom, Q. T., et al. CBTRUS Statistical Report: Primary Brain and Other Central Nervous System Tumors Diagnosed in the United States in 2009-2013. Neuro-Oncology. 18 (suppl_5), v1-v75 (2016).
  2. Pauli, C., et al. Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine. Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).
  3. Stewart, E. L., et al. Clinical Utility of Patient-Derived Xenografts to Determine Biomarkers of Prognosis and Map Resistance Pathways in EGFR-Mutant Lung Adenocarcinoma. Journal of Clinical Oncology. 33 (22), 2472-2480 (2015).
  4. Gao, H., et al. High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response. Nat Med. 21 (11), 1318-1325 (2015).
  5. Ozawa, T., James, C. D. Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging. J. Vis. Exp. (41), e1986(2010).
  6. Kondo, A., et al. An experimental brainstem tumor model using in vivo bioluminescence imaging in rat. Child's Nervous System. 25 (5), 527-533 (2009).
  7. Nyati, S., Young, G., Ross, B. D., Rehemtulla, A. ATM Kinase: Methods and Protocols. Kozlov, S. V. , Springer. New York. 97-111 (2017).
  8. Kondo, A., et al. Longitudinal assessment of regional directed delivery in a rodent malignant glioma model. J Neurosurg Pediatr. 4 (6), 592-598 (2009).
  9. Badr, C. E. Bioluminescent Imaging: Methods and Protocols. Badr, C. E. , Humana Press. 1-18 (2014).
  10. Shcherbakova, D. M., Verkhusha, V. V. Near-infrared fluorescent proteins for multicolor in vivo imaging. Nat Meth. 10 (8), 751-754 (2013).
  11. Filonov, G. S., et al. Bright and stable near-infrared fluorescent protein for in vivo imaging. Nat Biotech. 29 (8), 757-761 (2011).
  12. Tiscornia, G., Singer, O., Verma, I. M. Production and purification of lentiviral vectors. Nat. Protocols. 1 (1), 241-245 (2006).
  13. Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS). J. Vis. Exp. (41), e1546(2010).
  14. Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J Vis Exp. (47), (2011).
  15. Cetin, A., Komai, S., Eliava, M., Seeburg, P. H., Osten, P. Stereotaxic gene delivery in the rodent brain. Nat. Protocols. 1 (6), 3166-3173 (2007).
  16. Benitez, J. A., et al. PTEN regulates glioblastoma oncogenesis through chromatin-associated complexes of DAXX and histone H3.3. Nature Communications. 8, 15223(2017).
  17. Kirschner, S., et al. Imaging of Orthotopic Glioblastoma Xenografts in Mice Using a Clinical CT Scanner: Comparison with Micro-CT and Histology. PLOS ONE. 11 (11), e0165994(2016).
  18. Mannheim, J. G., et al. Standardization of Small Animal Imaging-Current Status and Future Prospects. Molecular Imaging and Biology. , (2017).
  19. Engblom, C., et al. Osteoblasts remotely supply lung tumors with cancer-promoting SiglecFhigh neutrophils. Science. 358 (6367), (2017).
  20. Lauber, D. T., et al. State of the art in vivo imaging techniques for laboratory animals. Laboratory Animals. 51 (5), 465-478 (2017).
  21. Zanca, C., et al. Glioblastoma cellular cross-talk converges on NF-κB to attenuate EGFR inhibitor sensitivity. Genes & Development. 31 (12), 1212-1227 (2017).
  22. Villa, G. R., et al. An LXR-Cholesterol Axis Creates a Metabolic Co-Dependency for Brain Cancers. Cancer Cell. 30 (5), 683-693 (2016).
  23. Liu, F., et al. EGFR Mutation Promotes Glioblastoma through Epigenome and Transcription Factor Network Remodeling. Molecular Cell. 60 (2), 307-318 (2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Hücre TransdüksiyonuAkış Sitometrisi ile Sıralamaİntrakraniyal EnjeksiyonTümör İzlemeYakın Kızılötesi Proteinlerİmmünodefisyent Farelerİlaç Etkinlik Testi
Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.