Biz'DNA plazmid dır fare mesane vivo içinde İdrar Kateterizasyon ve elektroporasyon ürotelyal hücre içine bir roman yöntemi açıklanmaktadır. Kesesi hastalıkları otokton fare modelleri oluşturmak için hızlı ve kolay bir yol sunar.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Biz'DNA plazmid dır fare mesane vivo içinde İdrar Kateterizasyon ve elektroporasyon ürotelyal hücre içine bir roman yöntemi açıklanmaktadır. Kesesi hastalıkları otokton fare modelleri oluşturmak için hızlı ve kolay bir yol sunar.
Genetiği fare modelleri (GEMMs) insan hastalıkları kanser gibi başlama ve ilerleme mekanizmalarının içine roman biyolojik anlayışlar ortaya son derece değerlidir. Transgenik ve koşullu nakavt fareler sık gen overexpression için kullanılmış olan veya ablasyon belirli doku veya hücre içinde vivotürleri. Ancak, germline fare modelleri oluşturma zaman alıcı ve pahalı olabilir. Gen teknolojileri ve DNA plazmid tarafından viral enfeksiyon teslim fizibilite düzenleme son gelişmeler hızlı oluşturulmasında çeşitli organları germline sigara otokton fare kanser modelleri etkinleştirdiniz. Mesane urothelium kapsayan bir glikozaminoglikan katman varlığı nedeniyle erişmeye viral vektörler için zor olan bir organdır. Burada, laboratuar DNA plazmid verimli bir şekilde teslim içine fare mesane urothelium içinde vivoiçin geliştirilen bir roman yöntemi açıklanmaktadır. PCAG-GFP DNA plazmid İntravezikal korumak ve cerrahi olarak maruz mesane çoğalmasıyla, DNA plazmid geçici ifade için mesane ürotelyal hücre içine özellikle teslim olduğunu göster. Bizim yöntem overexpression ve fare mesane genlerin nakavt için hızlı ve uygun bir yol sağlar ve GEMMs mesane kanseri ve diğer üroloji hastalıkları bina için uygulanabilir.
Genetiği fare modelleri (GEMMs) hayvan geliştirme, gen fonksiyonları vivo içindeve mekanizmaları hastalık ilerleme1,2hakkında bilgimizi genişletmek önemli bir rol oynuyor. Germline GEMMs geleneksel olarak iki şekilde geliştirilmiştir. İlk DNA plazmid pseudopregnant kadın zigotları nakli tarafından takip pronuclear enjeksiyonla transgenik fareler oluşturulmasıdır. Diğer knock-out/knock-gelen fareler tarafından homolog rekombinasyon embriyonik kök hücre üretimi ve chimeras gelişimi bu. Genlerin ilgi belirli doku veya hücre türü koşullu nakavt Cre ve flox siteleri ile genetik allelleri üreme birden çok n....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Burada açıklanan tüm yordamları kurallar ve düzenlemeler kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Kaliforniya Üniversitesi Santa Cruz uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Plazmid ve araçları hazırlama
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Gen teslim mesane urothelium içine başarı göstermek için biz pCAG-GFP15 plazmid elektroporasyon için kullanılır. Plazmid ve Trypan mavi çözüm 20 µL üretra enjekte ettiler ve 5 elektrik darbeleri idare. 48 h sonra fare mesane disseke ve negatif kontrol ise GFP sinyal (şekil 1A) gösterdi elektroporasyon geçmesi değil mesane GFP floresan bir diseksiyon floresan mikroskop altında yamalari gözlendi. Cytokeratin (CK) 5, CK18, ile kesitli mes.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Elektroporasyon hücre membran geçirgenliği artırır ve gen electrotransfer16için güçlü bir teknolojidir. Gen teslim yaşam kemirgenler tarafından elektroporasyon içine Nörobiyoloji alanları17,18,19,20,21' sık kullanılan. Onun potansiyel uygulamalar birçok diğer organlarda kapsamlı bir şekilde araştırılmalıdır değil. Bilgimizi, burada açık.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar rakip ilgi bildirin.
Biz Profesör Bin Chen, Dr Yue Zhang ve Kendy Hoang elektroporasyon sistemi kurma konusunda yardım için teşekkür ederim. Bu iş Z.A.W. için Santa Cruz kanser fayda grubu ve NIH gelen hibe tarafından desteklenmiştir
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| BD 1 mL TB Şırınga | Fisher | 148232E | |
| Buprenorfin | Sigma | B9275-50MG | |
| Dumont Cımbız | Roboz Surgical Instr | RS-5005 | Cerrahi kullanımdan önce %70 etanol ile tedavi edin |
| ECM830 SQ Dalga Elektroporatörü | Harvard Aparatı | 450052 | |
| Exel Uluslararası Tek Kullanımlık Safelet I.V. Kateterler | Fisher Scientific | 14-841-21 | 24G, 2.11 cm uzunluk, 0.045 cm dış çap |
| Ekstra İnce Mikro Diseksiyon Makası | Roboz Surgical Instr | RS-5135 | Cerrahi kullanımdan önce %70 etanol ile tedavi edin |
| Isofluran | Vet one | 501017 | |
| K& H Küçük Hayvanlar için Isıtmalı Dinlenme Minderi, 9'a 12 İnç | Amazon | n/a | Isı matını kağıt havluyla örtün |
| Oftalmik merhem | Fisher | NC0849514 | |
| PBS, pH7.4 | Yaşam Teknolojileri | 10010049 | |
| Pipet uçları 200 ve mikro; L | USA Scientific | 1111-0206 | |
| Pipet Uçları, Evrensel Uyum; 0,1 ila 10 ve mikro; L | Fisher | 02707438(CS) | |
| PIPETMAN NEO P2 | Gilson | F144561 | |
| PIPETMAN NEO P200N | Gilson | F144565 | |
| plazmid CAG-GFP | Addgene | 16664 | |
| Platin cımbız 5 mm | Harvard Aparatı | 450489 | 5 mm çap |
| Makas | Roboz Cerrahi Instr | RS-5880 | ile tedavi edin Cerrahi kullanımdan önce% 70 etanol |
| Dize kordonu | Amazon | yok | Mandala El Sanatları 150D 210D 0.8mm 1mm deri dikiş dikiş düz mumlu iplik dize kordon |
| Bant, Scotch | Fisher | 19047257 | |
| Therio-jel Veteriner Yağlayıcı | PBS hayvan sağlığı | 353-736 | |
| Tripan Mavi Leke | Yaşam Teknolojileri | 15250061 | |
| V-1 Masa üstü sistem anestezisi | VetEquip | 901806 | |
| Vicryl menekşe sütür 18" FS-2 kesme 5-0 | Fisher | NC0578475 | |
| Walgreens Povidone İyot %10 | Walgreens | 953982 | |
| Yara klipsi | Fisher | 018045 | |
| Yara klipsi uygulayıcısı | Fisher | 01804 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste