Apolipoprotein E-eksik farelerde Mineralocorticoid reseptörlerinin etkinleştirmesi üzerinden aterosklerotik plaklar indüksiyon

Özet

ApoE^{- / -} fareler aldosteron sürekli bir sürüm boyunca aterojenik bir diyet ile beslenen aort kökünde ateroskleroz ikna etmek için bir protokol açıklar. Plak kompozisyon karakterize yöntemleri de açıklanmaktadır.

Özet

Ateroskleroz nedeniyle kronik inflamatuar yanıt vasküler endotel etkileyen ve hipertansiyon, dislipidemi ve diyabet gibi çeşitli faktörler tarafından yükseltilir. Bugüne kadar kardiyovasküler hastalık gelişimi için bir risk faktörü olarak aldosteron dolaşan bir rol destekleyecek kanıt vardır. Transgenik fare modelleri ateroskleroz için önde gelen hücresel ve moleküler süreçleri çalışmaya üretilmedi. Bu el yazması ApoE^{- / -} farelerde aldosteron sürekli infüzyon yararlanır ve aterosklerotik plaklar aortik kökü tedavisi 4 hafta sonra oluşturur bir iletişim kuralını tanımlar. Biz, bu nedenle, miktar ve aortik kök düzeyinde aterosklerotik lezyonların karakterizasyonu için bir yöntem gösterilmektedir. Aldosteron infüzyon katma değeri aterosklerotik lezyonları lipid ve inflamatuar hücre zengin nesil tedavi 4 hafta sonra gösterilir. Plak lipid ve makrofaj içeriğinde ölçmek için boyama yordamlarda ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Özellikle, bu protokol için kalp kalp doku antigenicity korumak ve algılama antijenleri ilgi kolaylaştırmak amacıyla Ekim doku gömme gerçekleştiriyoruz. Plak fenotip analizini ateroskleroz gelişiminin patofizyolojisi çalışma ve anti-aterojenik uyuşturucu gelişimi için roman farmakolojik hedefleri belirlemek için geçerli bir yaklaşım temsil eder.

Giriş

Ateroskleroz mortalite ve morbidite dünya çapında¹ana nedenlerinden biridir. Lipidler ve aterosklerotik plak oluşumunu belirleyen lökositler tarafından kan damarları nerede sızmış bir kronik inflamatuar durumu ile karakterizedir. Akut kalp olaylar çoğunluğu plak yırtılması nedeniyle trombotik olaylar ile ilişkilidir. Plak rüptürü eğilimli "hassas" tanımlanır ve pro-inflamatuar lökosit, nekrotik bir çekirdek ve ince lifli kap²artan infiltrasyonu ile karakterizedir. Son yıllarda, klinik ve deneysel çalışmalar hastalığın karmaşık patofizyolojisi açıklık var. Birkaç hayvan modeli moleküler mekanizmaları ateroskleroz

Protokol

Çalışma İtalyan Ulusal kurumları sağlık bakım ve kullanım komiteler, yetkilendirme sayı 493/2016-PR tarafından kabul edildi Tüm yordamları yönergeleri deneysel hayvan kullanımı için Avrupa Topluluğu'nun başı yapılmıştır (Avrupa Yönergesi, 2010/63/UE).

Not: Araç (etanol tuzlu çözümde) veya aldosteron içeren ozmotik minipump subkutan implantasyonu (240 µg kg^-1 · · d^-1) 8-10 hafta içinde-eski erkek fareler için ApoE gen eksik. Genel, 8-10 hafta içinde-eski erkek ApoE^−/− fareler yaklaşık 25-26 g ağırlığında.

1. aldosteron eriterek

1. Aldosteron toz mutlak etanol 1 ml 5....

Sonuçlar

8-10 hafta içinde Apo^{- / -} fareler, minipumps araç veya aldosteron ile demlemek için implante edildi (Şekil 1E-1I) ve (ayarlanan kalori diyet yağ % 42) aterojenik bir diyet için 4 hafta beslenir. Tedavi sonunda fare euthanized ve PBS ve yukarıda açıklandığı gibi % 10 formalin ile derin. Aortik kök kalp apikal kısmından ayrıldı ve Ekim (Şekil 2) bulunuyordu. Kesit aort köklerin bir cryostat makinesi (

Tartışma

Ateroskleroz, makrofajlar, T-lenfositleri, endotel hücreleri ve düz kas hücreleri¹gibi birden çok hücre tipleri arasındaki etkileşimler içeren büyük ve orta damarları ile ilgili kronik bir enflamatuar hastalığıdır. Fare aterojenik modelleri sınırlamaları rağmen aterosklerotik süreç kanıtlara büyük gövdeli mevcuttur. Bu modeller hızla belirli yaş ve cinsiyet deneysel tabur üreten avantajı var. Fareler de tanımlanmış ve homojen bir genetik arka planı göster.

Ateroskleroti.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ayarlanmış kalori diyeti (yağdan %42)	Envigo	TD.88137	aterojenik diyet
realaz	Aldosteron	SIGMA A9477	ozmotik mini pompa
Etanol	SIGMA	34852-M	çözücü
%70 İzopropil Alkol ile doyurulmuş Alchol Hazırlıkları	Kendal Webcol	6818	Dezenfektan
Cerrahi tel (Vicryl 6.0)	Demas	500004	cerrahisi
%10 Povidon/iyot merhem	Aplicare-Meriden	52380-0026-1	Antiseptik
Formalin %10	SIGMA	HT5012	vaskolatürü sabitlemek için
Cryomold	Bio-Optica	07-MP1515
OCT Bileşik	Sakura Finetek	Kriyostat	Leica
		CM1900
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuzlu Kulak	Kepçesi	AU-L0615-500	tampon çözeltisi
Yapışma Slaytları Polisin	VWR	631-0107	mikroskop gözlükleri
Kapak Camları	Bio-Optica	72015	kapak camları
Formaldehit %37	SIGMA	252549	çözücü
Yağ Kırmızı O çözeltisi (izopropanol içinde% 0,5)	SIGMA	O1391	boyama çözeltisi
Mayer' s Hematoksilen	SIGMA	MHS32	boyama çözeltisi
Lityum Karbonat	SIGMA	62470	yıkama tamponu
Sulu Montaj Ortamı	Thermo Scientific	TA-125-	montaj çözeltisi
Aseton	SIGMA	179124	çözücü
Histoloji için	fosfomolibdik asit çözeltisi	SIGMA	HT153
Direct Red 80 (Picrosirius Kırmızısı)	SIGMA	365548	boyama solüsyonu
Bio Clear (terpen kökenli temizleme maddesi)	Bio-Optica	06-1782D	histolojik örneklerin hazırlanması için ürün
Eukitt Hızlı Sertleştirme montaj ortamı (Poli (bütil metakrilat-ko-metil metakrilat)	SIGMA	3989	montaj çözeltisi
Sodyum Dodesil Sülfat	Fluka	71725	tozu
Hidrojen Peroksit çözeltisi (% 30)	SIGMA	H1009	çözeltisi
Vectorstain ABC KITI şunları içerir: anti-tavşan IgG ABC, normal tavşan serumu, İkincil biyotinile Anti-Sıçan IgG,	Vektör Laboratuvarları	PK-6100	boyama çözeltisi
3-amino-9-etilkarbazol	Vektör Laboratuvarları	SK-4200	boyama çözeltisi
Mac3 antikoru	BD Biosciences	553322	Görüntüleri
analiz etmek için	ImagePro Premier 9	Media Cybernetics	050910000-2534

Sürekli hormonu için doldurma tüplü Alzet model 1004 ile gömmek için gömmek için 4583 antikor yazılımı