Mesane kanseri istila yönetim süreçleri biyomarker ve terapötik geliştirme fırsatları temsil eder. Burada hangi 3-b kültür tümör pulcuklarının, hızlandırılmış görüntüleme ve confocal mikroskobu birleştirmek bir mesane kanseri istila modeli mevcut. Bu teknik invaziv işlem özelliklerini tanımlamak için ve terapötik ajanlar süzmek için yararlıdır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
3-b hücre kültür sistemi istila eğitim ve Mesane kanserinde tedavi değerlendirmek için
Bu makalede
Özet
Özet
Mesane kanseri önemli sağlık sorunudur. Bu 16.000'den fazla insan mesane kanseri gelen Amerika Birleşik Devletleri'nde bu yıl ölecek tahmin edilmektedir. Mesane kanserleri % 75'i non-invaziv ve metastaz olası olsa da, yaklaşık % 25 için bir invazif büyüme desen ilerleme. İnvaziv kanser hastalarının yarısı kadar öldürücü metastatik nüks gelişecektir. Böylece, invaziv mesane kanseri ilerlemesinde mekanizmasını anlamak hasta sonuçları tahmin ve öldürücü Metastazlari önlemek çok önemlidir. Bu makalede, biz tümör hücreleri ve mesane tümörü microenvironment meydana gelen vivo içinde koşulları taklit stromal bileşenleri sağlayan bir üç boyutlu kanseri istila modeli mevcut. Bu model içinde gerçek zaman zaman hata Imaging'i kullanma invaziv işlem gözlemlemek, moleküler yollar blok işgali potansiyeline sahip confocal immünfloresan görüntüleme ve ekran bileşikleri kullanarak ilgili sorguya fırsatı sağlar. Bu iletişim kuralı mesane kanseri üzerinde duruluyor olsa da, benzer yöntemleri işgali ve motilite diğer tümör tipleri de incelemek için kullanılan olabilir muhtemeldir.
Giriş
İstila metastaz için gereklidir ve alt hayatta kalma ve hastalarda kötü prognoz ile ilişkili kanser ilerleme kritik bir adımdır. İnsan mesane kanseri, her yıl dünya çapında yaklaşık 165,000 ölümler neden olur idrar yolu en yaygın malignite kanser sahne, tedavi ve prognoz doğrudan Invasion1içinse ilişkilendirilir. Mesane kanseri vakalarının yaklaşık % 75'i olan ve olmayan-kas invaziv yerel rezeksiyon ile yönetilir. Buna ek olarak, kas invaziv mesane kanserleri (yaklaşık %25 tüm servis talepleri) yüksek metastatik oranları ile agresif tümör ve agresif mobil terapi2,3ile tedavi edilir. Bu ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. artan kanser pulcuklarının
-
Hücre satırlarından büyüyen
- Kültür insan mesane kanseri hücreleri geleneksel yapışık altında hücre kültür koşulları ve % 5 CO2ile sağlanan bir 37 ° C kuluçka korumak. Hücreleri korumak < % 90'ı confluency.
Not: kültür kullanılan ortam Dulbecco'nın 4,5 g/L D-glikoz, L-Glutamine, 110 mg/L sodyum pyruvate, içeren en az temel medya (DMEM) değiştiren ve % 10 fetal Sığır serum (FBS) boyunca bu iletişim kuralı ile birlikte değil. - Deneme, başlamadan önce bir gün trypsinize (% 0.25 kullanarak tripsin-EDTA) hücreleri, hücre konsantrasyonu ölçmek ve 1 x 106 hücreler her iyi 6-....
- Kültür insan mesane kanseri hücreleri geleneksel yapışık altında hücre kültür koşulları ve % 5 CO2ile sağlanan bir 37 ° C kuluçka korumak. Hücreleri korumak < % 90'ı confluency.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
İnvaziv mesane kanseri tümörü küresel başarılı oluşturulmasını uygun boy tümör pulcuklarının hücre hatlarından veya birincil tümör oluşumu gerektirir. Resim 2 A uygun ölçekli pulcuklarının dört insan mesane kanseri hücre satırlarından (UM-UC9, UM-UC13, UM-UC14, 253J ve UM-UC18) geliştirilen gösterir. Resim 2 B bir tümör küresel kollajen matris içinde gömülü bir BBN tarafından oluşturulan fare mes.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada kanser ilerlemesi ve metastaz için kritik olan mesane kanseri işgalinin gerçek zamanlı gözlem izin veren bir 3-b tümör küresel modeli açıklar. Bu sistem daha iyi özetlemek için Müfettişler nerede mesane kanseri istila gerçekleşir doku microenvironment izin vermek için çeşitli stromal ve hücresel bileşenleri birleşme için mükellef. Mesane kanseri pulcuklarının hücre hatları (genetiği değiştirilmiş hücre hatları işgali süreçleri etkiler yolları sinyal sınav için yararlı da dahil olmak üzere) gibi çeşitli kaynaklarda.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının bildirin.
Teşekkürler
Yazarlar Dr Howard Crawford (Michigan Üniversitesi) laboratuvar teknik destek ve sağlayan malzemeler ve bu çalışma için donatım ve teknik destek için Alan Kelleher için teşekkür etmek istiyorum.
Bu eser Üniversitesi Michigan Rogel Kanser Merkezi çekirdek Grant CA046592-26S3, NIH K08 CA201335-01A1 (PIP), bBu YIA (PIP), NIH R01 CA17483601A1 (DMS)'nden hibe tarafından finanse edildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| İnsan mesane kanseri hücre hatları UM-UC9, UM-UC13, UM-UC14, UM-UC18, 253J | |||
| DMEM hücre kültürü ortamı | Thermo Fisher Scientific | 11995065 | |
| Fetal sığır serumu | Thermo Fisher Scientific | 26140079 | |
| Antibiyotik-Antimikotik (100x) | Thermo Fisher Scientific | 15240062 | |
| Tripsin-EDTA (%0,25), fenol kırmızısı | Thermo Fisher Scientific | 25200056 | |
| Sığır serum albümini (BSA) | Sigma-Aldrich | A3803 | |
| Fosfat tamponlu salin (PBS), pH 7.4 | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Costar Ultral-düşük ataşman 6 kuyulu küme | Corning | 3471 | |
| Konvansiyonel ters mikroskop | Carl Zeiss | 491206-0001-000 | Hücre kültürü ve sferoidlerin kontrolü için genel kullanım |
| Sıçan kuyruğundan kollajen tip 1, yüksek konsantrasyon | Corning | 354249 | |
| Nunc Lab-Tek II Odacıklı Kapak Camı | Thermo Fisher Bilimsel | 155382 | |
| Konfokal mikroskop | Carl Zeiss | LSM800 | İklim odası, çok konumlu görüntüleme ve Z-yığını tarama işlevine sahip bir konfokal miskoskop |
| Kriyostat mikromtomu | Leica Biosystems | CM3050 S | |
| Zen 2 Görüntü işleme yazılımı | Carl Zeiss | ||
| Paraformaldehit çözeltisi | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 15710 | |
| ImmEdge Hidrofobik Bariyer PAP Kalem | Vektör Laboratuvarları | H4000 | |
| OCT bileşiği | Thermo Fisher Scientific | 23730571 | |
| Hoechst 33342 solüsyonu | Thermo Fisher Scientific | 62249 | |
| Anti-ATDC (Trim29) antikoru | Sigma-Aldrich | HPA020053 | |
| Anti-Sitokeratin 14 antikoru | Abcam | ab7800 | |
| Anti-Vimentin antikoru | Abcam | ab24525 | |
| ProLong Diamond | Montaj ortamı |
Kaynaklar
- American Cancer Society. The Society. , Atlanta, GA. (2018).
- Knowles, M. A., Hurst, C. D. Molecular biology of bladder cancer: new insights into pathogenesis and clinical diversity. Nature Reviews Cancer. 15 (1), 25-41 (2015).
- DeGeorge, K. C., Holt, H. R., Hodges, S. C.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
