Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

3-b hücre kültür sistemi istila eğitim ve Mesane kanserinde tedavi değerlendirmek için

8.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/58345

⸱

13 Eylül 2018

 ,  ,  , 
1Departments of Internal Medicine, Hematology/Oncology Division, Rogel Cancer Center, University of Michigan Medical Center, 2Department of Urology, Division of GU Oncology, Rogel Cancer Center, University of Michigan Medical Center, 3Departments of Surgery and Pathology, Perlmutter Cancer Center, NYU Langone Health

Bu makalede

Özet

Mesane kanseri istila yönetim süreçleri biyomarker ve terapötik geliştirme fırsatları temsil eder. Burada hangi 3-b kültür tümör pulcuklarının, hızlandırılmış görüntüleme ve confocal mikroskobu birleştirmek bir mesane kanseri istila modeli mevcut. Bu teknik invaziv işlem özelliklerini tanımlamak için ve terapötik ajanlar süzmek için yararlıdır.

Özet

Mesane kanseri önemli sağlık sorunudur. Bu 16.000'den fazla insan mesane kanseri gelen Amerika Birleşik Devletleri'nde bu yıl ölecek tahmin edilmektedir. Mesane kanserleri % 75'i non-invaziv ve metastaz olası olsa da, yaklaşık % 25 için bir invazif büyüme desen ilerleme. İnvaziv kanser hastalarının yarısı kadar öldürücü metastatik nüks gelişecektir. Böylece, invaziv mesane kanseri ilerlemesinde mekanizmasını anlamak hasta sonuçları tahmin ve öldürücü Metastazlari önlemek çok önemlidir. Bu makalede, biz tümör hücreleri ve mesane tümörü microenvironment meydana gelen vivo içinde koşulları taklit stromal bileşenleri sağlayan bir üç boyutlu kanseri istila modeli mevcut. Bu model içinde gerçek zaman zaman hata Imaging'i kullanma invaziv işlem gözlemlemek, moleküler yollar blok işgali potansiyeline sahip confocal immünfloresan görüntüleme ve ekran bileşikleri kullanarak ilgili sorguya fırsatı sağlar. Bu iletişim kuralı mesane kanseri üzerinde duruluyor olsa da, benzer yöntemleri işgali ve motilite diğer tümör tipleri de incelemek için kullanılan olabilir muhtemeldir.

Giriş

İstila metastaz için gereklidir ve alt hayatta kalma ve hastalarda kötü prognoz ile ilişkili kanser ilerleme kritik bir adımdır. İnsan mesane kanseri, her yıl dünya çapında yaklaşık 165,000 ölümler neden olur idrar yolu en yaygın malignite kanser sahne, tedavi ve prognoz doğrudan Invasion1içinse ilişkilendirilir. Mesane kanseri vakalarının yaklaşık % 75'i olan ve olmayan-kas invaziv yerel rezeksiyon ile yönetilir. Buna ek olarak, kas invaziv mesane kanserleri (yaklaşık %25 tüm servis talepleri) yüksek metastatik oranları ile agresif tümör ve agresif mobil terapi2,3ile tedavi edilir. Bu nedenle, istila tetiklemek moleküler yolları anlamak daha iyi karakterize invaziv ilerleme riski ve invaziv ilerleme önleyebilirsiniz tedavi müdahaleler geliştirmek için önemlidir.

Tümör invaziv ilerleme bir karmaşık üç boyutlu (3-D) ortamında oluşur ve diğer tümör hücreleri, stroma, membran ve hücreleri bağışıklık hücreleri, fibroblastlar, kas hücreleri de dahil olmak üzere diğer türleri ile tümör hücre etkileşimi içerir ve vasküler endotel hücreleri. Onlar gerçek zamanlı işgali sürecinde mikroskobik izleme izin vermemesi nedeniyle geçirgen destek (Örneğin, Transwell) tahlil sistemleri yaygın kanser hücre işgali4ama bu sistemleri quantitate için istihdam sınırlıdır ve daha fazla boyama ve moleküler analiz için numune alınmasını meydan okuyor. Tanımlanmış microenvironmental bileşenleri birleşme vitro sistemleri kolaylık sağlar çünkü işgal eğitim için 3-b mesane tümörü küresel sisteminin geliştirilmesi arzu edilir.

Bu protokol için biz müfettişler hücre hareketliliği izlemek izin vermek için kollajen tabanlı jel matrisler ve confocal mikroskobu birleştirilerek bir 3-b küresel işgal tahlil kullanarak insan mesane kanser hücrelerinin invaziv işlemler sorguya çekmek için bir sistem tarif ve gerçek zamanlı (Şekil 1A)'ı işgal. Bu sistem çok yönlü ve çeşitli stromal/tümör ayarları sorgulamak için değiştirilebilir. Fibroblastlar ve bağışıklık hücreleri5,6,7kanser ilişkili gibi çoğu mesane kanseri hücre hatları veya birincil mesane tümörleri ve ek stromal hücreler ekleyebilirsiniz. Bu iletişim kuralı tip-1 kollajen oluşan bir matris açıklar, ancak diğer molekülleri fibronektin laminin veya diğer kollajen protein gibi dahil etmek için değiştirilebilir. İnvaziv işlemler için 72 saat veya daha uzun mikroskop ve kullanılan sistemi bağlı olarak izlenebilir. Fiksasyon ve 3-b matrix önce sırasında ve sonrasında işgal gömülü tümör ayirt boyama sağlar böylece çok önemli bilgiler genellikle yok veya toplamak zor sağlayan proteinler upregulated invaziv hücrelerdeki sorgulama diğer 3-b kültür modellerini kullanarak. Bu sistem ayrıca işgal engellemek ekran bileşikleri ve sinyal yollar böyle bileşikler tarafından etkilenen betimlemek için yararlı olabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. artan kanser pulcuklarının

  1. Hücre satırlarından büyüyen
    1. Kültür insan mesane kanseri hücreleri geleneksel yapışık altında hücre kültür koşulları ve % 5 CO2ile sağlanan bir 37 ° C kuluçka korumak. Hücreleri korumak < % 90'ı confluency.
      Not: kültür kullanılan ortam Dulbecco'nın 4,5 g/L D-glikoz, L-Glutamine, 110 mg/L sodyum pyruvate, içeren en az temel medya (DMEM) değiştiren ve % 10 fetal Sığır serum (FBS) boyunca bu iletişim kuralı ile birlikte değil.
    2. Deneme, başlamadan önce bir gün trypsinize (% 0.25 kullanarak tripsin-EDTA) hücreleri, hücre konsantrasyonu ölçmek ve 1 x 106 hücreler her iyi 6-şey ultra düşük ek plaka 3 mL kültür ortamda dağıtabilir.
    3. ≥16 h için 37 ° C'de düşük ek koşullar hücrelerde kuluçkaya. Bu hücreler için yeterli zaman izin vermelidir pulcuklarının çoğu mesane kanseri hücre hatları için içine toplamak için.
      Not: Pulcuklarının oluşumu ters parlak alan mikroskop tarafından görülebilir. Pulcuklarının sayısı ve en uygun boyutu üzerinde bireysel deney bağlı olabilir ama biz pulcuklarının 50 µm fan çapı 150 µm için genellikle 20 X objektif lens kullanarak zaman hata görüntüleme için uygun olduğunu öğrenin.
    4. Fibroblastlar veya pulcuklarının içine bağışıklık hücreleri gibi ek hücre türleri dahil etmek istediğiniz hücreleri kanser hücrelerinin istenilen oranında ile karıştırın (1:1, 1:10, vb.) ultra düşük bir ekinde plaka ve 37 ° c ≥16 h oluşumu izin vermek için kuluçkaya karma hücre türü pulcuklarının.
  2. Birincil tümörler büyüyor
    Not: tümör pulcuklarının-da var elde birincil mesane tümörü kaynakları kanserojen kaynaklı mesane tümörü modelleri8geliştirilen tümör gibi. Örneğin, fare oluşturulan mesane tümörleri N ile beslenen-butil - N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine (BBN), hasat ve steril cerrahi aletler kullanarak küçük parçalar halinde (yaklaşık 0,5 mm3) kıyılmış. Birincil insan mesane kanserleri Ayrıca bu sistemde okudu olabilir örnekleri sindirilir.
    1. Toplamak ve 0,5 mm3 tümör adet 5 mL buz gibi fosfat tamponlu salin (PBS) yıkayın. Santrifüjü 200 x g 4 ° C'de 5 min için de Bir kez bu çamaşır tekrarlayın.
    2. Santrifüjü 200 x g 4 ° C'de 10 dakika için de tarafından tümör parçaları toplamak Süpernatant kaldırın ve 5 mL % 10 içeren DMEM de ekleyin FBS. Tümör küresel/medya karışımı bir 6-şey ultra düşük ek tabağa aktarın. ≥16 kollajen matris gömme önce s için 37 ° C'de kuluçkaya (bkz. Adım 2.3).

2. 3-b kültür odası hazırlanması

  1. Tip-1 kollajen (sıçan kuyruk türetilmiş) % 10 içeren DMEM seyreltik FBS üreticinin yönergelerine uygun 2 mg/mL karışım yapmak.
    1. Kısacası, 1 N NaOH çözüm uygun miktarda kolajen mix ve nazik pipetting tarafından DMEM fizyolojik pH elde etmek için üreticinin talimatlarına dayalı.
    2. (Çoğu uygulama, bir numara 1.5-cam ile odası slaytlar için en uygun) kolajen ve DMEM karıştırma sonra hızlı bir şekilde odası slayt kuyu kat katılaşma (200 µL/de) önce kollajen-DMEM karışımı ile. 15 dakika oda sıcaklığında sabit olmak kaplı odası slayt izin.
      Not: Kollajen tabanlı matris bileşimi fibronektin veya laminin, gibi diğer hücre dışı matriks maddeler ekleyerek deney amaçlı göre değiştirilebilir.
  2. Yavaşça damlalıklı 500 µL pulcuklarının (veya tümör parçaları, birincil tümör örnek kullandıysanız) 6-şey ultra düşük ek tabaktan bir boş 1.5 mL microcentrifuge tüpüne içeren medya. Tüp altına yerleşmek pulcuklarının izin için 2 dakika bekleyin.
  3. Dikkatli bir şekilde süpernatant tüpünden çıkarın. Başka bir tüp tip-1 kollajen (2 mg/mL) % 10 içeren DMEM ile karışık hazırlamak FBS ve hızlı bir şekilde bu karışımdan 500 µL pulcuklarının için ekleyin. Pulcuklarının ve kollajen yavaş pipetting tarafından karışımı yavaşça.
  4. 250 µL pulcuklarının/kollajen karışımı kollajen-pre-kaplı odası slayt bir kuyu için ekleyin. Tamamen katılaşmaya pulcuklarının içeren kollajen matris (yaklaşık 30 dk 37 ° C'de) izin verir.
  5. Kollajen matris katılaşmış sonra % 10 içeren DMEM 1 mL ekleyin FBS her şey (Şekil 1B) için. Odası slayt görüntüleme için hazır kadar % 5 CO2 ile sağlanan bir 37 ° C kuluçka kuluçkaya.

3. canlı hücre zaman hata görüntüleme

  1. Üreticinin yönergelerini izleyerek confocal mikroskobunun açmak ve iklim odası 37 ° C ulaşır ve % 5 CO2ile sağlanan emin olun.
    Not: Bizim mikroskobu ve odası genellikle sistem denge ulaşmak için 1 h gereklidir.
  2. Dikkatle odası slayt için mikroskop ekli slayt adaptör aktarın.
  3. Bir düşük güç hedefi (Örneğin, 5 X) kullanarak ilgi pulcuklarının bulun ve görüntüleme daha yüksek güç amacı ile başlangıç (geçerli iletişim kuralında, 20 X amaç çoğu daha iyi görüntü kalitesi için canlı hücre görüntüleme için kullanılır).
    Not: birincil mesane tümörü örnekleri için 5 X ve 10 X hedefleri daha büyük görüntüleme alanını karşılamak için gerekli olabilir. Bizim hızlandırılmış görüntüleme için görüntüleme aralığı 30 dk ayarlanır ve Z yığın tüm küresel görüntü için kullanılır. Hücre/doku floresan protein işaretleri liman genellikle Z-dilimler arasındaki uzaklığı 4 µm için 20 X objektif ve Z ekseni toplam uzunluğu yaklaşık 200 µm. resimler DIC kullanılarak elde edilebilir için ve floresan ile küme.
  4. Hızlandırılmış görüntüleme 24-72 saat için gerçekleştirin.
    Not: Süresi hücre türüne ve deneme ihtiyaçlarına göre belirlenir.

4. örnek blok dondurulmuş doku kesit için kanser pulcuklarının içeren hazırlanması

  1. Dikkatle kollajen jel ve pulcuklarının odası slaytlardan bloğunu küçük forseps kullanarak kaldırın. Kollajen jel blok bir plastik Histoloji kalıp içine yerleştirin.
  2. Kısaca kollajen jel 1 x PBS ile durulayın ve sonra %4 paraformaldehyde (PFA) ile PBS içinde oda sıcaklığında 30 dk için düzeltebilirim.
    Dikkat: PFA olası kanserojen olduğu ve dikkatle ele alınmalıdır.
  3. PBS kollajen jel 1,5 mL 1 x PBS üzerinde 15 dk. eski yerine koymak için bir shaker ile yıkama ve önceki yıkama 3 x arasındaki adımları yineleyin.
  4. İnce bir tabaka (yaklaşık 3 mm) en uygun kesme sıcaklığı (OCT) yeni bir plastik Histoloji kalıp alt kapak bileşik uygulayın. Sabit yerleştirin ve kollajen jel OKT üstüne bileşik yıkanmış, sonra dikkatlice bütün jel OCT herhangi bir hava kabarcıklarının oluşumunu OCT'de kaçınırken bileşik ile kalıp doldurarak embed.
  5. 1s için 4 ° C'de kalıp bırakın.
  6. Örnek ve OCT bileşik üzerinde 100 mm Petri kabına sıvı azot üzerinde yüzen içeren kalıp yerleştirin. Tamamen flaş dondurma örnek sağlar.
  7. Donmuş örnek blok ileride kullanmak üzere-80 ° C'de depolayın.

5. ayirt görüntüleme için dondurulmuş kesitli kanser pulcuklarının

  1. Donmuş örnek blok-80 ° C dondurucudan bir cryostat-20 ° C odasına aktar.
  2. Geleneksel donmuş 7 µm için bölüm aralığını ayarlayarak kesit gerçekleştirin. Kesitli örnekleri kırışıklık olmadan cam slayt eklemek izin veya hava tuzağa.
    1. Slaytları-80 ° C'de daha fazla boyama yapmadan önce depolama.
      Not: Deneysel ihtiyaçlarına uygun farklı aralıkları kullanılabilir.
  3. Hava kuru oda sıcaklığında 1 h için slaytlar.
  4. Örnekleri % 0.5 içeren PBS ile permeabilize Triton X-100 15 dakika.
  5. Yıkama yıkama başına 10 min için PBS ile 3 x örnekler.
  6. Örnekleri ile hidrofobik engelleri slaytta bir hidrofobik bariyer kalemi çevreler.
  7. Örnekleri engelleme solüsyonu (%5 Sığır serum albumin (BSA) içeren 1 x PBS), muamele etmek, oda sıcaklığında 1 h için.
  8. Birincil antikor içeren çözüm (%5 BSA ile 1: 100 seyreltme, birincil antikor içeren 1 x PBS) 40 µL slaytta yer alan her örnek için geçerli.
  9. Birincil antikor için 1 h 37 ° C'de veya oda sıcaklığında (kuluçka zaman ve koşullar birincil antikor bağlı olarak değişir) bir gecede slaytları kuluçkaya.
  10. Yıkama PBS ile 3 x 15 dk (başına yıkama) için örnekler.
  11. İkincil antikor içeren çözüm (1 x PBS BSA % 5 ile 1:300 ikincil antikor seyreltme içeren) 40 µL slaytta yer alan her örnek için geçerli.
  12. Yıkama PBS ile 3 x 15 dk (başına yıkama) için örnekler.
  13. Höchst 33342 çözüm (1 µg/PBS içinde seyreltilmiş mL,) ile örnekleri, oda sıcaklığında 10 dakika için leke. Sonra PBS ile 5 min için örnekleri yıkayın.
  14. Örnekleri ile montaj orta dağ ve bunları uygun şekilde boy kapak torbalarla kapatın. Slaytları, oda sıcaklığında 24 h için karanlıkta bırakın ve sonra confocal mikroskobu gerçekleştirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

İnvaziv mesane kanseri tümörü küresel başarılı oluşturulmasını uygun boy tümör pulcuklarının hücre hatlarından veya birincil tümör oluşumu gerektirir. Resim 2 A uygun ölçekli pulcuklarının dört insan mesane kanseri hücre satırlarından (UM-UC9, UM-UC13, UM-UC14, 253J ve UM-UC18) geliştirilen gösterir. Resim 2 B bir tümör küresel kollajen matris içinde gömülü bir BBN tarafından oluşturulan fare mes...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Burada kanser ilerlemesi ve metastaz için kritik olan mesane kanseri işgalinin gerçek zamanlı gözlem izin veren bir 3-b tümör küresel modeli açıklar. Bu sistem daha iyi özetlemek için Müfettişler nerede mesane kanseri istila gerçekleşir doku microenvironment izin vermek için çeşitli stromal ve hücresel bileşenleri birleşme için mükellef. Mesane kanseri pulcuklarının hücre hatları (genetiği değiştirilmiş hücre hatları işgali süreçleri etkiler yolları sinyal sınav için yararlı da dahil olmak üzere) gibi çeşitli kaynaklarda...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının bildirin.

Teşekkürler

Yazarlar Dr Howard Crawford (Michigan Üniversitesi) laboratuvar teknik destek ve sağlayan malzemeler ve bu çalışma için donatım ve teknik destek için Alan Kelleher için teşekkür etmek istiyorum.

Bu eser Üniversitesi Michigan Rogel Kanser Merkezi çekirdek Grant CA046592-26S3, NIH K08 CA201335-01A1 (PIP), bBu YIA (PIP), NIH R01 CA17483601A1 (DMS)'nden hibe tarafından finanse edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
İnsan mesane kanseri hücre hatları UM-UC9, UM-UC13, UM-UC14, UM-UC18, 253J
DMEM hücre kültürü ortamıThermo Fisher Scientific11995065
Fetal sığır serumu Thermo Fisher Scientific26140079
Antibiyotik-Antimikotik (100x)Thermo Fisher Scientific15240062
Tripsin-EDTA (%0,25), fenol kırmızısıThermo Fisher Scientific25200056
Sığır serum albümini (BSA)Sigma-AldrichA3803
Fosfat tamponlu salin (PBS), pH 7.4 Thermo Fisher Scientific10010023
Costar Ultral-düşük ataşman 6 kuyulu küme Corning3471
Konvansiyonel ters mikroskop Carl Zeiss491206-0001-000Hücre kültürü ve sferoidlerin kontrolü için genel kullanım
Sıçan kuyruğundan kollajen tip 1, yüksek konsantrasyon Corning354249
Nunc Lab-Tek II Odacıklı Kapak CamıThermo Fisher Bilimsel155382
Konfokal mikroskop Carl ZeissLSM800İklim odası, çok konumlu görüntüleme ve Z-yığını tarama işlevine sahip bir konfokal miskoskop 
Kriyostat mikromtomuLeica BiosystemsCM3050 S
Zen 2 Görüntü işleme yazılımı Carl Zeiss
Paraformaldehit çözeltisiElektron Mikroskobu Bilimleri15710
ImmEdge Hidrofobik Bariyer PAP KalemVektör Laboratuvarları H4000
OCT bileşiği Thermo Fisher Scientific23730571
Hoechst 33342 solüsyonu Thermo Fisher Scientific62249
Anti-ATDC (Trim29) antikoruSigma-AldrichHPA020053
Anti-Sitokeratin 14 antikoruAbcamab7800
Anti-Vimentin antikoruAbcamab24525
ProLong Diamond Montaj ortamı

Kaynaklar

  1. American Cancer Society. The Society. , Atlanta, GA. (2018).
  2. Knowles, M. A., Hurst, C. D. Molecular biology of bladder cancer: new insights into pathogenesis and clinical diversity. Nature Reviews Cancer. 15 (1), 25-41 (2015).
  3. DeGeorge, K. C., Holt, H. R., Hodges, S. C. Bladder Cancer: Diagnosis and Treatment. American Family Physician. American Family Physician. 96 (8), 507-514 (2017).
  4. Repesh, L. A. A new in vitro. assay for quantitating tumor cell invasion. Invasion Metastasis. 9 (3), 192-208 (1989).
  5. Doillon, C. J., Gagnon, E., Paradis, R., Koutsilieris, M. Three-dimensional culture system as a model for studying cancer cell invasion capacity and anticancer drug sensitivity. Anticancer Research. 24 (4), 2169-2177 (2004).
  6. Duong, H. S., Le, A. D., Zhang, Q., Messadi, D. V. A novel 3-dimensional culture system as an in vitro. model for studying oral cancer cell invasion. International Journal of Expermintal Pathology. 86 (6), 365-374 (2005).
  7. Rebelo, S. P., et al. 3D-3-culture: A tool to unveil macrophage plasticity in the tumour microenvironment. Biomaterials. , 185-197 (2018).
  8. Vasconcelos-Nobrega, C., Colaco, A., Lopes, C., Oliveira, P. A. Review: BBN as an urothelial carcinogen. In Vivo. 26 (4), 727-739 (2012).
  9. Palmbos, P. L., et al. ATDC/TRIM29 Drives Invasive Bladder Cancer Formation through miRNA-Mediated and Epigenetic Mechanisms. Cancer Research. 75 (23), 5155-5166 (2015).
  10. Wang, L., et al. ATDC induces an invasive switch in KRAS-induced pancreatic tumorigenesis. Genes & Development. 29 (2), 171-183 (2015).
  11. Fife, C. M., McCarroll, J. A., Kavallaris, M. Movers and shakers: cell cytoskeleton in cancer metastasis. British Journal of Pharmacology. 171 (24), 5507-5523 (2014).
  12. Akhmanova, A., Steinmetz, M. O. Control of microtubule organization and dynamics: two ends in the limelight. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 16 (12), 711-726 (2015).
  13. Cheung, K. J., Gabrielson, E., Werb, Z., Ewald, A. J. Collective invasion in breast cancer requires a conserved basal epithelial program. Cell. 155 (7), 1639-1651 (2013).
  14. Kidd, M. E., Shumaker, D. K., Ridge, K. M. The role of vimentin intermediate filaments in the progression of lung cancer. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (1), 1-6 (2014).
  15. Lowery, J., Kuczmarski, E. R., Herrmann, H., Goldman, R. D. Intermediate Filaments Play a Pivotal Role in Regulating Cell Architecture and Function. Journal of Biological Chemistry. 290 (28), 17145-17153 (2015).
  16. Papafotiou, G., et al. KRT14 marks a subpopulation of bladder basal cells with pivotal role in regeneration and tumorigenesis. Nature Communications. 7, 11914(2016).
  17. Sun, W., Lim, C. T., Kurniawan, N. A. Mechanistic adaptability of cancer cells strongly affects anti-migratory drug efficacy. Journal of the Royal Society Interface. 11 (99), (2014).
  18. Goddette, D. W., Frieden, C. Actin polymerization. The mechanism of action of cytochalasin D. Journal of Biological Chemistry. 261 (34), 15974-15980 (1986).
  19. Berrier, A. L., Yamada, K. M. Cell-matrix adhesion. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 565-573 (2007).
  20. Lee, J. H., et al. Collagen gel three-dimensional matrices combined with adhesive proteins stimulate neuronal differentiation of mesenchymal stem cells. Journal of the Royal Society Interface. 8 (60), 998-1010 (2011).
  21. LeBleu, V. S., Macdonald, B., Kalluri, R. Structure and function of basement membranes. Experimental Biology and Medicine. 232 (9), 1121-1129 (2007).
  22. Rakha, E. A., et al. Invasion in breast lesions: the role of the epithelial-stroma barrier. Histopathology. , (2017).
  23. Erler, J. T., Weaver, V. M. Three-dimensional context regulation of metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 26 (1), 35-49 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Mesane Kanseri nvazyonuT m r Sferoid Olu umuKollajen Matris G mmeZaman Atlamal G r nt lemeKonfokal mm nofloresanStromal Ko K lt rFarmakolojik nhibit r TaramaEpitelden Mezen ime Ge iGer ek Zamanl nvazyon zleme
3-b hücre kültür sistemi istila eğitim ve Mesane kanserinde tedavi değerlendirmek için
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.