IMMUNO-Onkoloji araştırmalar Formalin sabit Karsinomu doku örnekleri Multiplex ayirt Panel otomatik

Michael Surace; Karma DaCosta; Anna Huntley; Weiguang Zhao; Christopher Bagnall; Charles Brown; Chichung Wang; Kristin Roman; Jennifer Cann; Arthur Lewis; Keith Steele; Marlon Rebelatto; Edwin R. Parra; Clifford C. Hoyt; Jaime Rodriguez-Canales

doi:10.3791/58390

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

IMMUNO-Onkoloji araştırmalar Formalin sabit Karsinomu doku örnekleri Multiplex ayirt Panel otomatik

20.8K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/58390

⸱

21 Ocak 2019

Michael Surace¹ , Karma DaCosta¹ , Anna Huntley¹ , Weiguang Zhao¹ , Christopher Bagnall² , Charles Brown¹ , Chichung Wang³ , Kristin Roman³ , Jennifer Cann¹ , Arthur Lewis² , Keith Steele¹ , Marlon Rebelatto¹ , Edwin R. Parra⁴ , Clifford C. Hoyt³ , Jaime Rodriguez-Canales¹

¹Laboratory of Pathology, MedImmune, ²Laboratory of Pathology, MedImmune, ³Akoya Biosciences Inc., ⁴Department of Translational Molecular Pathology, University of Texas - MD Anderson Cancer Center

Bu makalede

Özet

Detaylı bir iletişim kuralı için bir altı-marker multiplex ayirt panel en iyi duruma getirilmiş ve gerçekleştirilen, daha tutarlı sonuçlar ve daha kısa işlem süresi için bir otomatik stainer kullanarak. Bu yaklaşım doğrudan IMMUNO-Onkoloji araştırmalar amaçlı herhangi bir laboratuvar tarafından adapte edilebilir.

Özet

IMMUNO-Onkoloji devam eden gelişmeler kanser İmmünoloji mekanizmaları artan bir anlayış gerektirir. Doku örnekleri formalin sabit, parafin gömülü (FFPE) biyopsi immunoprofiling analizini roman akıllı biyolojik kanserli hastalarda için keşfetmek ve tümör İmmünoloji karmaşıklığını anlamak için önemli bir araç haline gelmiştir. Immunoprofiling analiz dokuların inflamatuar hücre altgrupları ve bağışıklık denetim noktaları, tümör microenvironment dahil olmak üzere birleştirilmiş işaretleyicilerin görünümünü değerlendirme gerektirir. Standart monoplex immünhistokimya (IHC) daha roman multiplex immunohistokimyasal yöntemleri gelişiyle tek doku bölümler daha verimli multiparametric analiz için izin verir. Yöntemi tyramide-sinyal güçlendirme üzerinde temel ve spektral mikroskobik analizi ile birlikte (), bir piyasada bulunan çok katmanlı ayirt doku çeşitli işaretlerinin daha iyi bir sinyal ayrılması için sağlar. Bu metodoloji FFPE doku örnekleri üzerinde standart IHC için optimize edilmiş çekimsiz birincil antikor kullanımı ile uyumludur. Burada biz ayrıntılı olarak multiplex sağlayan otomatik bir protokol Karsinomu doku örnekleri PD-L1, oluşan bir altı-marker multiplex antikor panel ile etiketleme tarif PD-1, CD68, CD8, Ki-67 ve AE1/AE3 cytokeratins ile 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole Nükleer hücre counterstain. Çok katmanlı masası iletişim kuralı bir otomatik IHC stainer bundan el ile iletişim kuralı daha kısadır ve doğrudan uygulanan ve herhangi bir laboratuvar araştırmacı IMMUNO-Onkoloji araştırmalar insan FFPE doku örneklerini tarafından uyarlanmış bir boyama süre için optimize edilmiştir. Ayrıca açıklanan çeşitli denetimler ve en iyi duruma getirme ve doğrulama tekniği için yararlı olan yeni bir multiplex Eğer panel iyi kalite kontrolü için bir damla-denetim yöntemi de dahil olmak üzere araçları vardır.

Giriş

Immunoprofiling analiz FFPE tümör doku örnekleri IMMUNO-Onkoloji çalışmaları, keşif ve Roman akıllı biyolojik kanserli hastalarda klinik^{1 bağlamında için doğrulama için özellikle önemli bir bileşeni haline gelmiştir} ^,². Diaminobenzidine gibi kimyasal chromogens kullanarak chromogenic IHC standart tekniği biyopsi doku³immunolabeling için tanılama patoloji kalır. Standart IHC Nefelometri tümör ilişkili lenfosit altgrupları ve değerlendirme (PD-L1)^{4 programlı hücre ölümü ligand 1 gibi bağışıklık denetim noktaları ifade düzeylerinin de dahil olmak üzere kanser dokusu immu....}