Yöntem makalesi

Kızılötesi termometre pasif sistemik anafilaksi ve gıda Anti değerlendirme sırasında kullanarak fare vücut sıcaklık ölçümü

DOI:

10.3791/58391

⸱

14 Eylül 2018

 ,  , 
1Division of Cell Biology, La Jolla Institute for Allergy and Immunology

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada doğru bir şekilde pasif sistemik anafilaksi (PSA) ve bir kızılötesi termometre kullanarak gıda Anti fare modelleri vücut sıcaklık farklılıkları ölçmek için yeni bir yöntem mevcut. Bu yordamı doğru önceki PSA sonuçlarında yinelenen.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fare vücut sıcaklık ölçüm araştırma alerji ve anafilaktik semptomlar için büyük önem taşımaktadır. Rektal sonda sıcaklığı okumalar için ortak ve bu konuda doğru ve çok değerli olduğu kanıtlanmıştır. Ancak, bu yöntem bir sıcaklık ölçüm fareler hayvan yaralanma olmadan sonda eklemek için anestezi gerektirir. Bu diğer fenotipleri fare aynı anda gözlemlemek yeteneğini sınırlar. Sıcaklık ölçme sırasında diğer fenotipleri araştırmak için rektal sonda ideal değildir ve başka bir yöntem istenen. Burada, vücut sıcaklığı ölçme içinde rektal sonda için eşit güvenilirliği korurken fare anestezi gereksinimini güzel sıcaklık ölçümü invaziv olmayan bir yöntem tanıtmak. Biz vücut yüzey sıcaklıkları aralıkları 2 ve 150 mm arasında algılar bir kızılötesi termometre kullanın. Bu yöntem vücut sıcaklık ölçüm güvenilir bir şekilde sıcaklık değişikliği trendleri farelerde pasif sistem anafilaksi deneyler sırasında çoğaltma içinde başarılı olur. Biz vücut yüzey sıcaklığı yaklaşık 2.0 ° C rektal sonda ölçümleri düşük olan ancak aynı eğilim sıcaklık damla derecesini takip gösterir. Ayrıca, sıcaklık ve aktivite düzeyleri aynı anda değerlendirmek için gıda Anti modeli farelerde gözlemlemek için aynı yöntemleri kullanabilirsiniz.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vücut ısısı ölçümü hayvan anafilaktik semptomlar etkilerinin izlenmesi önemli bir parçası1,2modelleri olmuştur. Sıcaklık farkları geleneksel olarak rektal sonda termometreler fareler3,4tarafından ölçülen. Bu ölçümler ile müfettişler güvenilir değişkenler arasındaki sıcaklık farklılıkları tasvir; Ancak, bu yöntem zaman alan bir işlemdir ve vücut ısısı artırabilir fareler için sıkıntı neden olur. Rektal sondalama da mukozal yırtılma ve enfeksiyon3neden olabilir. Ayrıca, fareyi insanca sıcaklık3ölçmek için rektal sonda eklemek için anestezi. Bu yavaş bir süreçtir ve art arda gelen sıcaklık ölçüm kısa bir süre içinde yasaklar. Ayrıca, fare aktivite fenotipleri anestezi tamamen hangi başka bir zaman alan bir süreçtir, yıpranmış kadar bu dönemde gözlenen olamaz. Daha yakın zamanlarda, vücut ısısını ölçmek için güvenilir diğer yöntemleri subkutan implante Pasif kızılötesi verici Etiketler veya bir sıcaklık sensörü3,5,6dahil radyo vericileri kullanmış. Her ne kadar bazı araştırmacılar tarafından ideal Yöntem olarak kabul edilir, bu yöntemler yüksek ilk maliyetleri ve farelere, deri veya vücudun başka bir bölümü altında bir sıcaklık sensörü cerrahi implantasyon nedeniyle sıkıntı nedeniyle yaygın olarak kullanılmaz.

Sıcaklık farkı belirtileri hastalık modeli1,2doğru bir yansıması olduğunu göstermek için fare sıcaklık ölçüm sırasında uyanık olmalı ve normal fenotipik faaliyetlerini iade edebilmek hemen önce ve sonra ölçüm. Bu amaçla, biz hangi tarafından bu elde edilebilir bir yöntem aranan.

Amacımız doğru ve ucuz fare vücut ısısı, anestezi için gerek kalmadan ve davranışsal fenotipleri gözlem sırasında ve sıcaklık ölçüm zaman sonra etkinleştirmek için etkinlik, kısıtlamalar olmadan ölçmek için yapıldı. Bu hedefe ulaşmak için standart rektal ısı probları daha az invaziv bir teknik gerekli belirgin oldu. Kızılötesi termometreler özellikle içinde Pediatri, klinik tıp yıllardır hassas sıcaklık okuma elde etmek için kullanılmıştır. Klinisyenler hızlı ve doğru sıcaklık ölçümleri bebekler ve aktif mobil telaşlı çocuklarda elde etmek izin verdi alternatif bir yöntem olmuştur. Bu aynı teknikle farelerde uygulanan ve anestezi olmadan sıcaklıklar elde etmek için başarılı bir yöntem geliştirdik. Önemlisi, bu yöntem aynı zamanda ölçüm boyunca fare etkinliklerini gözlemlemek mümkün olurken köklü pasif sistemik anafilaksi sonuçları ile ilgili sıcaklık değişiklikleri, çoğaltma yetenekli olduğunu göstereceğiz. Ayrıca, biz aynı anda vücut sıcaklığı gerçekten faaliyet düzeyi doğru bir yansıması ve genel fenotip olduğunu göstermek için diğer belirtiler araştırırken vücut sıcaklığı gıda alerjisi farelerin değerlendirmek için aynı yöntemi kullanın fare.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan deneyleri hayvan bakım ve kullanım Komitesi La Jolla Enstitüsü tarafından alerji ve İmmünoloji için kabul edildi.

1. fare vücut sıcaklık ölçüm Anesthetization sırasında

  1. Fareyi bir anestezi indüksiyon kutuya koyun. %5 isoflurane ile oksijen 1 L/dak akışını kullanarak anestezi.
    Not: fare gönüllü hareketi sona erer ve 30 'un üzerinde alternatif olarak, solunum hızı monitörü s. için ve bir kez fareler her 2 başına 1 nefes, nefes hareketsiz oldu Anesthetization onaylandıktan s ya da daha uzun, anesthetization doğruladı.
  2. Bir işaret parmağı ve başparmak ile boynun ense tarafından fare basılı tutun ve alt karın göstermek bir serçe parmak ile kuyruk tutun.
  3. Kızılötesi termometre sensörü alt karın altında onun bedenimle fare yere paralel tutarken yerleştirin.
    Not: Termometre (değil sensör yüzeyi) düz dış yüzeyinin yaklaşık 2-5 mm karın yüzeyine uzak olmalıdır. Fareler (2 bölümünde açıklanan) anestezi değil iken sıcaklıklar Çoğalt bu sonuçlar ölçülen. Karın hedef site belirlemek önemlidir. İki üst göğüs uçları arasında amaçlayan tutarlı sonuçlar sağlar.
  4. Sıcaklığı ölçmek için tetikleyici tutun. Fare ve Termometre sabit tutan olun.

2. fare vücut sıcaklık ölçüm anestezi olmadan

  1. Fare kuyruğu ortalarında seç.
  2. Karın fare maruz.
    1. Fareyi bir açık kafes veya kafes-üst onun forepaws ile dudak gibi bir düz-kenar yüzeye tutmak izin.
      Not: Bu onun üst vücut esner ve karın ortaya çıkarmak için fareyi sağlar.
    2. Alternatif olarak, üst düz-kenarına için termometre tutmak fare izin ve onun karın ile termometre düz dış yüzeyinde sadece kızılötesi sensör üzerinde oturup fare olun.
      Not: herhangi bir zamanda arka paws termometre, yüzeyde dinlenme ayak karın yüzey sensöründen tıkayan değil emin olun. Termometreler ayak tıkanıklığı ile karın daha düşük sıcaklık ölçecek.
  3. Sıcaklığı ölçmek için tetikleyici tutun.
    Not: Fare hareket eğilimindedir; vücudun aynı konuma sürekli olarak fareler nispeten daha az telefon ne zaman sıcaklık ölçümleri alarak ölçme içinde iyi bak.

3. pasif sistemik anafilaksi7

  1. 0. gün: immünglobulin E (IgE) ile duyarlı.
    1. Anti-dinitrophenyl (DNP) IgE, PBS 100 µg/mL konsantrasyonu (fare) başına 200 µL hazırlayın.
    2. İntraperitoneally anti-dinitrophenyl (DNP) IgE adım 3.1.1 veya PBS sadece hazırlanan 200 µL enjekte (salt PBS negatif kontrol). 26 G iğne enjeksiyon için kullanın. Sadece iki en aşağı meme arasında yaklaşık orta hat için yanal enjeksiyonları gerçekleştirin.
  2. 1. gün: anafilaksi DNP HSA ile neden.
    1. 10 mg/mL % 0,9 bir konsantrasyon, DNP HSA (fare) başına 100 µL hazırlamak NaCl.
    2. Fareler 1.1 adımda anlatıldığı gibi anestezi.
    3. 1. adımda açıklanan tekniği kullanarak vücut ısısını ölçmek.
    4. DNP HSA 3.2.1. adımda hazırlanan 100 µL intravenöz enjekte. 30 G iğne enjeksiyon için kullanın. Enjeksiyonları yapmanız retroorbital venöz sinüs üzerinde gerçekleştirin. Gözün arkasında amaçlayan sığ bir açıyla göz medial tarafında iğne yerleştirin.
    5. Enjeksiyon sonra bireysel kafeslerde fareler yer. Fareler anesteziden kurtarmak emin olun. Uyandırmak ve gönüllü olarak mobil olmak gözlemlemek.
    6. Kızılötesi termometre kullanarak vücut sıcaklığı ölçmek ve her 10 min 70 dk için faaliyetlerini gözlemlemek.

4. fare modeli gıda Anti8,9

Not: Şematik Şekil 2' de gösterilmiştir.

  1. 0. gün: OVA/şap ile fare duyarlı.
    1. (Fare) başına 100 µL OVA (0,5 mg/mL) ve şap (10 mg/mL) PBS içinde birlikte hazırlamak. Vortex tarih 30 dk için düşük ayarı.
    2. Fareler 1.1 adımda anlatıldığı gibi anestezi.
    3. 26 G iğne kullanarak, intraperitoneally her fare ile 100 µL 4.1.1 adımda hazırlanan OVA/şap karışımı enjekte.
      Not: Girdap OVA/şap karışımı tekrar, kısa bir süre önce her iğne, en iyi olun homojen bir karışım. Adım 3.1.3 ayrıntılı bilgi için bkz: enjeksiyon ücreti.
    4. Enjeksiyon sonra kendi özgün kafeslerde fareler yer. Fareler anesteziden kurtarmak emin olun. Uyandırmak ve gönüllü olarak mobil olmak gözlemlemek.
  2. Gün 14: OVA/şap ile ikinci bir Sensitizasyonu gerçekleştirin.
    1. 4.1.1, 4.1.2 ve 4.1.3 adımları yineleyin.
  3. Gün 28-46: OVA ile fareler her gün meydan.
    1. 250 mg/mL PBS bir konsantrasyon, OVA (fare) başına 100 µL hazırlayın.
      Not: Karışımı yavaşça ileri geri el ile yerine bir girdap ile Rock yaparak kabarcık oluşumu en aza indirmek için yapılmalıdır.
      1. Yiyecek Alerji inhibitörleri kullanıyorsanız, inhibitörleri9hazırlayın. İnhibitör konsantrasyonu 1 mg/mL PBS, (fare) başına 100 µL hazırlayın. Bu engelleyici her fare için 100 µg teslimini sağlar.
        Not: fare sadece bir meydan okuma gündüz toplam sonda ile besleme birimin 200 µL idare edebiliyoruz gibi önleyici fare, başına 100 µL fazla olamaz. 100 µL OVA challenge için de gerekli 100 µL birim inhibitörü kullanımı için önerilen en fazla olduğu.
    2. Fareler 1.1 adımda anlatıldığı gibi anestezi.
    3. Sözlü olarak sonda ile besleme her adımda 4.3.1 hazırlanan OVA çözüm (PBS fare gavaged 100 µL içinde OVA 25 mg) 100 µL ile fare.
      1. İnhibitörleri kullanıyorsanız, sonda ile besleme 30 dakika kala OVA meydan 4.3.1.1. adımda hazırlanan inhibitörü (veya PBS denetimin) için aşağıdaki adımlarda açıklanan teknikleri kullanmaktadır. 30 dakika sonra sonraki adıma geçin.
      2. Bir sonda ile besleme iğne ile 1 mL şırınga kullanın. OVA 100 µL içine şırınga kaplar.
      3. İğneyi ağız içine yerleştirin; sonra sol veya sağ tarafta Boğaz doğru iğne işaret, yavaşça iğneyi yemek borusu yoluyla kaydırın. OVA 100 µL enjekte.
        Not: iğne borusunda değil emin olmak için OVA enjekte önce nefes etkin gözlemlemek. Yemek borusu yerine trakea girdiyse iğne ekleme de erken direndi.
    4. Fareler bireysel onların kafes yerleştirin. Dışkı kalitesi kolay müşahede kafesleri yatak olmadan kullanın.
    5. Anestezi kurtarma olun. Fareler uyandırmak ve gönüllü olarak mobil olmak gözlemlemek.
    6. Timepoints 10, 20, 40 ve 60 dk 2 bölümünde açıklanan tekniği kullanılarak farelerin vücut sıcaklığı ölçmek.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pasif sistemik anafilaksi: IV enjeksiyon için 10 hafta yaşlı kadın BALB/c fare anestezi. Önce enjeksiyon, 1. adımda açıklandığı gibi kendi vücut sıcaklığı (Video 1) ölçülür. Şekil 1 her iki popülasyonun sıcaklık eğilim IV enjeksiyon sonra gösterir. PBS kontrol fare 1.1 ° C en yüksek bir damla 20 dk7' de varken IgE hassas fare 3.0 ° C en yüksek sıcaklık damla 20 dk az gösterdi. Ayrıca, bu süreç boyunca, her fare hareket...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Açıklanan protokol anestezi kullanmadan vücut sıcaklığı ölçme amacı ile kurulmuştur. Hangi sıcaklık ile okuma elde edilebilir göreli kolaylığı rağmen bu teknik, stres ve farklı ortam sıcaklığı gibi daha belirgin efektler ek karşılamak çeşitli uyarılar vardır.

İlk olarak, deneme boyunca sabit sıcaklık okuma sağlamak için sıcaklık ölçülür nerede konum anatomik işaretlerini kullanarak önceden belirlenmiş gerekir ve müfettişler dedi vücut ölçümü çoğaltmak gerekir konum. Fare forepaws bir kafes vey...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Araştırma laboratuarı NIH tarafından desteklenen Kawakami verir: R01 AR064418-01A1, R01 HL124283-01, R21 AI 115534-01 ve R41AI124734-01.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Temassız kızılötesi termometreSinoPieDT-8861
Anti-dinitrofenil (DNP) IgESigma AldrichD8406-.2MG
PrecisionGlide 30 G iğneBD305128
PrecisionGlide 26 G iğne ve nbsp;BD305111
1 mL şırıngaBD309659
Dinitrofenil - insan serum albüminiBiyoarama TeknolojileriD-5059-10
Tavuk yumurtası beyazından elde edilen OvalbuminSigma AldrichA5503-50G
Imject ŞapThermoFisher Scientific77161
Hayvan Besleme İğneleri, tek kullanımlıkFisher Scientific01-208-87

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Finkelman, F. D. Anaphylaxis: lessons from mouse models. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 120 (3), Quiz 516-507 506-515 (2007).
  2. Lee, J. K., Vadas, P. Anaphylaxis: mechanisms and management. Clinical and Experimental Allergy: Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology. 41 (7), 923-938 (2011).
  3. Newsom, D. M., Bolgos, G. L., Colby, L., Nemzek, J. A. Comparison of body surface temperature measurement and conventional methods for measuring temperature in the mouse. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 43 (5), 13-18 (2004).
  4. Wong, J. P., Saravolac, E. G., Clement, J. G., Nagata, L. P. Development of a murine hypothermia model for study of respiratory tract influenza virus infection. Laboratory Animal Science. 47 (2), 143-147 (1997).
  5. Quimby, J. M., Olea-Popelka, F., Lappin, M. R. Comparison of digital rectal and microchip transponder thermometry in cats. Journal of American Association for Laboratory Animal Science. 48 (4), 402-404 (2009).
  6. Mei, J., Riedel, N., Grittner, U., Endres, M., Banneke, S., Emmrich, J. V. Body temperature measurement in mice during acute illness: implantable temperature transponder versus surface infrared thermometry. Scientific Reports. 8 (1), 3526(2018).
  7. Doyle, E., Trosien, J., Metz, M. Protocols for the induction and evaluation of systemic anaphylaxis in mice. Methods in Molecular Biology. 1032, 133-138 (2013).
  8. Brandt, E. B., et al. Mast cells are required for experimental oral allergen-induced diarrhea. The Journal of Clinical Investigations. 112 (11), 1666-1677 (2003).
  9. Ando, T., et al. Histamine-releasing factor enhances food allergy. The Journal of Clinical Investigations. 127 (12), 4541-4553 (2017).
  10. Brandt, E. B., et al. Targeting IL-4/IL-13 signaling to alleviate oral allergen-induced diarrhea. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 123 (1), 53-58 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

G da Alerjisi Modelinvaziv Olmayan S cakl k l mRektal Prob Kar la t rmasS cakl k D AnaliziDavran sal Fenotip De erlendirmesiAnestezisiz Y ntemS cakl k Aktivite Korelasyonu

İlgili makaleler