Method Article

Fare koklea belirli frekans bölgelerinde şerit synapses morfolojik ve fonksiyonel değerlendirilmesi

DOI:

10.3791/59189

⸱

May 10th, 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Beijing Friendship Hospital, Capital Medical University, 2Department of Otology, Shengjing Hospital of China Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yazıda normal farelerde morfolojik özellikleri ve kurdele sinüslerinin fonksiyonel durumunu değerlendirmek için deneysel bir protokol açıklanmaktadır. Bu model aynı zamanda gürültüye bağlı ve yaşa bağlı Cochlear synaptopathy-kısıtlanmış modeller için de uygundur. Önceki fare çalışmalarından gelen göreli sonuçlar da tartışılmaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cochlear iç saç hücreleri (ıhcs), şerit sinaps ile Spiral ganglion nöronlara (SGNs) akustik sinyalleri iletir. Çeşitli deneysel çalışmalar saç hücrelerinin sinaps sensorineval işitme kaybı (SNHL) ilk hedefler olabilir belirtti. Bu tür çalışmalar koklear "synaptopathy" kavramını önermiştir, hangi Şerit sinaps numarası, yapı veya fonksiyon değişiklikler anlamına gelir, ıhcs ve Sgns arasında anormal sinaptik iletim neden. Cochlear synaptopathy geri dönüşümsüz durumdayken işitme eşiğini etkilemez. Gürültü kaynaklı deneysel modellerde, belirli frekans bölgelerinde ıHC sinaps sınırlı hasar özellikle synaptopathy neden çevresel faktörleri belirlemek için istihdam edilir, yanı sıra bu iç kulak rahatsız edici fizyolojik sonuçları Devre. Burada, yetişkin fareler belirli bir frekans bölgesinde Cochlear sinaptik Morfoloji ve fonksiyon analiz etmek için bir protokol sunuyoruz. Bu protokolde, belirli frekans bölgelerinin Cochlear lokalizasyonu, kokleogram verileriyle birlikte yer frekansı haritaları kullanılarak gerçekleştirilir, bu da şerit sinapsların morfolojik özelliklerinin sinaptik ile değerlendirildiği aşağıdaki immün boyama. Şerit sinapsların fonksiyonel durumu daha sonra işitsel beyin tepkisinin genlikleri göre belirlenir (ABR) dalga ı. Bu rapor, bu yaklaşımın, yeni terapötik müdahalelerin gelişmesine yardımcı olabilecek koklea 'daki sinaptik disfonksiyon patogenezi ve mekanizmalarının anlayışımızı derinleştirmek için kullanılabileceğinizi göstermektedir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yaklaşık aralığında Frekanslar 20 \ u201220, 000 Hz insanlar tarafından işitsel uyaranlara olarak algılanabilir. İnsan işitme normalde en 1.000 Hz, Ortalama ses basıncı düzeyi 20 μPa genç yetişkinlerde (yani, 0 desibel ses basıncı seviyesi [dB SPL]) yakın duyarlıdır. Bazı patolojik koşullarda, işitme kaybı belirli frekanslarla sınırlıdır. Örneğin, gürültü kaynaklı işitme kaybı (NIL) erken aşamalarında, bir "çentik" (yani, işitme eşik yüksekliği) 4 kHz1' de odyogram görülebilir. Memelinin koklear bölme boyunca, sertlik ve kütle geçişte bir üstel frekans Haritası üretir, koklea tabanında yüksek frekanslı ses algılama ve Apex2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm prosedürler, Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı (8. baskı) için NRC/ıLAR Kılavuzu uyarınca gerçekleştirilmiştir. Çalışma protokolü, kurumsal hayvan bakımı ve sermaye Tıp Üniversitesi kullanım Komitesi, Pekin, Çin tarafından onaylandı.

1. hayvan seçimi

  1. Tüm deneyler için, Yetişkin C57BL/6J erkek fareler (8 hafta eski) hayvan modeli olarak kullanın.
    Not: C57BL/6J fareler Cdh23 sergi bir splice varyant taşıyan işitsel sistemde hızlandırılmış yaşlanma, koklea bazal dönüşte şerit sinsler bir% 40 kaybı olarak yansıtılır ve 6 yaş orta dönüş% 10 kayıp, takip hızlı 18yaş

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anestezi altında 10 C57BL/6J fare (8 hafta) için ABR İşitme testleri yapıldı. ABRs 4, 8, 16, 32 ve 48 kHz 'de ton patlaması uyarıcıları kullanılarak ortaya çıkmış. Her hayvanın işitme eşiği, ABR 'de en az bir net dalga formunu ayırt ederek görsel olarak algılanır. Tüm fareler, uyarıcı frekansına bağlı olarak 25 ile 70 dB SPL arasında değişen ton patlamalarına yanıt olarak ABR eşiklerini sergiledi. Sonuçlarımız, işitme eşiğinin 16 kHz 'de (Şekil 1) en düşük olduğu, kokainin yaklaşık% 43 mesaf.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cochlear synaptopathy ilk olarak, 2 saat31Için 100 dB SPL 'de 8 \ u201216 kHz oktav Band gürültü tarafından indüklenen geçici eşik KAYMASı (TTS) ile yetişkin farelerde karakterize edildi, araştırmacılar giderek çeşitli içinde synaptopati etkilerini araştırdılar memeliler, maymunlar ve insanlar dahil32,33. Gürültü maruz kalma ek olarak, diğer bazı koşullar Cochlear synaptopathy ile ilişkili olmuştur (örneğin, yaşlanma, ototoksisik ilaçların.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, ifşa etmek için ilgi çatışması yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Çin Ulusal Doğal Bilim Vakfı (81770997, 81771016, 81830030) tarafından destekleniyordu; Pekin doğal Bilim Vakfı ve Pekin Eğitim Komitesi (KZ201810025040) ortak fon projesi; Pekin doğal Bilim Vakfı (7174291); ve Çin doktora sonrası Bilim Vakfı (2016M601067).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ketamin hidroklorürGutian Pharmaceutical Co., Ltd., Fujian, ÇinH35020148100 mg / kg
Ksilazin hidroklorürSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDX-125110 mg / kg
TDT fizyoloji cihazıTucker-Davis Teknolojileri, Alachua, FL, ABDİşitsel Fizyoloji Sistemi III
SigGen / BioSig yazılımıTucker-Davis Teknolojileri, Alachua, FL, ABDİşitsel Fizyoloji Sistemi III
Elektrikli PedPet Fun11072931136
Dumont forseps 3#Güzel Bilim Araçları, Kuzey Vancouver, B.C., Kanada0203-3-PO
Dumont forseps 5#Güzel Bilim Araçları, Kuzey Vancouver, B.C., Kanada0209-5-PO
Stereo diseksiyon mikroskobuNikon Corp., Tokyo, JaponyaSMZ1270
Keçi serumuZSGB-BIO, Pekin, ÇinZLI-9021
Anti-glutamat reseptörü 2, hücre dışı, klon 6C4Millipore Corp., Billerica, MA, ABDMAB397fare ve nbsp;
Saflaştırılmış Fare Anti-CtBP2BD Biosciences, Billerica, MA, ABD612044fare 
Alexa Fluor 568 keçi anti-fare IgG1antikorThermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, ABDA21124keçi
Alexa Fluor 488 keçi anti-fare IgG2a antikoruThermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, ABDA21131keçi
DAPI ZSGB-BIO içeren montaj ortamı, Pekin, ÇinZLI-9557
Konfokal floresan mikroskobuLeica Microsystems, Wetzlar, AlmanyaTCS SP8 II
Image Pro Plus yazılımıMedya Sibernetik, Bethesda, MD, ABDsürüm 6.0
Profesyonel teşhis cep otoskopuLude Tıbbi Cihaz ve Aletler Ticaret A.Ş., Şangay, ÇinHS-OT10
İğne elektrotDostluk Medical Electronics Co., Ltd., Xi'an, Çin102920 mm, 28
G Kapalı alan konuşmacıTucker-Davis Teknolojileri, Alachua, FL, ABDCF1

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lie, A., Skogstad, M., Johnsen, T. S., Engdahl, B., Tambs, K. The prevalence of notched audiograms in a cross-sectional study of 12,055 railway workers. Ear and Hearing. 36 (3), 86-92 (2015).
  2. Fettiplace, R. Hair cell transduc....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ribbon SynapsesCochlear LocalizationAuditory Brainstem ResponseSynaptic ImmunostainingConfocal MicroscopyBasilar MembraneInner Hair CellsSpiral Ganglion NeuronsPlace Frequency MapsCochleogram Data

Related Articles