Burada, hepatosellüler kanserin (HCC) tipik bağışıklık özelliklerini özetlemek için karaciğer kanserinin klinik olarak ilgili bir murine modelinin gelişimini açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Hepatik İnflamasyon ve Fibrozis Ortamında Ortaya Çıkan Hepatosellüler Kanserin Onkojenik Hepatositkaynaklı Ortotopik Fare Modeli
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Hepatosellüler kanserin (HCC) tipik bağışıklık özelliklerini ele alan klinik olarak alakalı bir hayvan modelinin olmaması, altta yatan mekanizmaların açıklanmasını ve yenilikçi immünterapötik stratejilerin geliştirilmesini önemli ölçüde engellemiştir. İnsan HCC'yi recapite eden ideal bir hayvan modeli geliştirmek için, immün omübusta erkek C57BL/6J fareler önce karaciğer fibrozisini tetiklemek için karbon tetraklorür (CCl4)enjeksiyonu alır, sonra genç erkekten histolojik olarak normal onkojenik hepatosit alırlar SV40 T antijeni (TAg)-transgenik fareler (MTD2) intra-dalak (ISPL) aşısı ile. Ergenlik te alıcı erkek farelerde üretilen Androjen karaciğere özgü bir organizatörün kontrolü altında TAg ifadesini başlatır. Sonuç olarak, transfer hepatositler kanser hücresi haline gelir ve karaciğer fibrozis / siroz ayarında tümör kitleleri oluşturur. Bu yeni model karaciğer fibrozis / siroz bağlamında insan HCC inisiyasyon ve ilerleme taklit ve bağışıklık disfonksiyonu da dahil olmak üzere insan HCC en tipik özelliklerini yansıtır.
Giriş
Hepatosellüler kanser (HCC) Amerika Birleşik Devletleri'nde kanser in en hızlı artan türüdür (ABD)1,2,3. Her yıl, yaklaşık 850.000 yeni olgu teşhis edilir4,5 ve 700,000 hasta bu ölümcül hastalıktan ölür6,7,8,9,10 , kansere bağlı ölüm dünya çapında ikinci en yüksek nedeni yapma. HCC'nin yönetimi cerrahi rezeksiyon, transplantasyon, ablasyon, kemoembolizasyon....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: Hayvan konuları da dahil olmak üzere tüm prosedür Missouri Üniversitesi'nde IACUC tarafından onaylanmıştır. Tüm fareler "Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu"nda belirtilen kriterlere göre insancıl bakım almıştır. Hücre izolasyonu ve aşılama için aşağıdaki prosedür bir başlık içinde yapılmalıdır. Tüm sanatçılar fare ve doku kullanımı için standart kişisel koruyucu ekipman giymelidir.
1. Karbon Tetraklorür IP Enjeksiyonu ile Karaciğer Fibrozis ve Siroz İndüksiyonu (CCl4)
NOT: Bkz. Şekil 1. (CCl4 son derece tehlikeli reaktif, dikkatle ve kimyasal dirençli ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
TAg-transgenik farelerden izole edilen onkojenik hepatositler(Şekil 2)intra-dalak enjeksiyonu ile yabani tip farelerin karaciğerinde tohumlandılar (Şekil 3). Nakledilen hepatositler hepatik inflamasyon ve fibrozis ortamında tümöre özgü antijen SV40 TAg(Şekil 5)ile başarılı ve güvenilir bir şekilde büyümüş ortotopik HCC tümörleri(Şekil 4)(Şekil 1).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol ile, insan HCC inisiyasyon ve ilerlemesini taklit eden güvenilir ve tekrarlanabilir bir hcc murine modeli oluşturduk. Klinik olarak, birçok risk faktörü art arda karaciğer hasarı, karaciğer fibrozisi, siroz ve HCC son aşaması neden. Protokolümüzde, CCl4 IP enjeksiyonu ilk olarak yabani tip farelerde karaciğer fibrozisi üretmek için kullanılır, bu da sonraki onkojenik hepatositlerin karaciğer fibrozisi ortamında tümörleri oluşturmasına olanak sağlar. CCl4 tedavisinden iki hafta sonra hepa.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Beyan ediletecek bir şey yok.
Teşekkürler
Bu çalışma NIH/NCI R01 CA164335-01A1 (K. F. Staveley-O'Carroll, PI) ve NIH/NCI R01CA208396 (Mark Kester, Guangfu Li, Kevin F. Staveley-O'Carroll) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Anestezi makinesi | VETEQUIP | IMPAC6 | ameliyat için anestezi makinesi |
| Kelebek iğne | BD | 8122963 | Karaciğer perfüzyonu için kullanılan iğne |
| C57BL / 6 fare | Jackson Lab | 000664 | Prototol'de Kullanılan Fareler |
| Carprofen | CRESCENT CHEMICAL | 20402 | ağrı kesici için carprofen |
| Hücre Süzgeci | CORNING | REF 431751 | Hücre süzgeci, 70&mikro; m, hepatosit izolasyonu için |
| Santrifüj | Beckman Coulter | Allegra X-30R | hücre izolasyonu için santrifüj |
| Klipsler | Teleflex Medical | REF 523700 | Dalak |
| Mikroskobu | için Titanyum Klipsler Zeiss | Primovert | Hücre gözlemi için mikroskop |
| 2002 yılında Roswell Park Kanser Enstitüsü'nde düzenlenen Dr. William A'dan | Mtd2 fareleri | N/A | |
| İğne | BD | REF 305109 | BD precisionglide iğne, 27G x 1/2 (0,4 mm x 13 mm) |
| Sütür | ETHICON | J303H | kaplı VICRYL sütür |
| SV40 T Ag antikoru | Abcam | ab16879 | anti-SV40 T-antijen antikoru IHC |
| Şırınga | BD için | Hücre enjeksiyonu için REF 309626 1 mL TB şırınga | |
| Tripan mavisi | SIGMA | T 8154 | Hücre canlılığı testi için tripan mavisi çözeltisi |
| Yara klipsleri | Refleks | refleks9, Parça No. 201-1000 | paslanmaz çelik yara klipsleri yara kapatmak için |
Kaynaklar
- O'Connor, S., Ward, J. W. Hepatocellular carcinoma - United States. Morbidity and Mortality Weekly Report. 59, 517-520 (2010).
- Petrick, J., Kelly, S., Altekruse, S., McGlynn, K., Rosenberg, P.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
