Yöntem makalesi

Doku ve kütle spektrometresi Imaging kullanarak hücreleri arasında küçük molekül iletişim yakalama

DOI:

10.3791/59490

⸱

3 Nisan 2019

 ,  ,  , 
1Department of Medicinal Chemistry and Pharmacognosy, University of Illinois at Chicago, 2Department of Animal Science, University of Illinois at Urbana-Champaign

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Numune hazırlama bir roman yöntemi görüntüleme kütle spektrometresi kullanılarak küçük molekül alışverişte algılamak için hücre ve doku coculture karşılamak için geliştirilmiştir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kütle spektrometresi (IMS) görüntüleme rutin olarak uygulanmış örnekleri üç tür: doku bölümler, pulcuklarının ve mikrobiyal koloniler. Bu örnek türleri faiz biyolojik örnek arasında proteinler, lipidler ve metabolitleri dağılımını görselleştirmenizi matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma uçuş zaman kütle spektrometresi (MALDI-TOF MS) kullanılarak analiz. Memeli hücre kültürleri içinde özel içine tohum tarafından kanser, kimyasal iletişim tanımlamak için underexplored bir yaklaşım adrese üç önceki uygulama güçlü bir araya getiren bir roman örnek hazırlama yöntemi geliştirdik sağlıklı dokulara kuruma örnek tarafından takip ile coculture. Memeli doku ve hücreleri yakın üzerinden Difüzyon doku ve hücreleri arasındaki kimyasal iletişim sağlayan cocultured. Zaman belirli noktalarda, mikrobiyal kolonileri IMS analiz için hazırlanan aynı şekilde özel tabanlı örnek kurutulur. Bizim yöntem yüksek dereceli seröz over kanseri metastaz sırasında yumurtalık ile etkileşim gibi fallopian tüp sizden türetilmiş arasındaki iletişimi modellemek için geliştirilmiştir. Numune hazırlama duruma getirilmesi norepinefrin kimlik anahtar kimyasal bileşen olarak yumurtalık microenvironment sonuçlandı. Yeni geliştirilen bu yöntem bitişik hücreleri veya doku arasındaki kimyasal iletişim bir anlayış gerektiren diğer biyolojik sistemleri uygulanabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kütle spektrometresi (IMS) görüntüleme en iyi duruma getirilmiş üç yaygın olarak kullanılan uygulamalarda moleküler özelliklerinin mekansal dağılımı niteleyen: dokusu dilimlerin, pulcuklarının ve mikrobiyal kolonileri1,2,3. Dokusu dilimlerin metabolitleri, hedeflenen ya da belirli bir kitle aralığı içinde hedefsiz bir ev sahibi, biyolojik koşullar bağlamında lokalizasyonu değerlendirmek için kullanılabilir. Ancak, bir sağlıklı doku hastalıklı bir durum, örneğin, bir tümör karşılaştırıldığında moleküler özellikleri arasındaki farklar en önemli ve açık vardır. Bu IMS yaklaşım özellikle hastalık biyolojik tespiti için adapte, ancak, hastalık ilerleme (tümör notlar gibi) farklı aşamalarında doku örnekleri alınıyor kabul töreni için önemli olabilir sinyalleri tanımlaması engellemektedir hastalık. Uzayda bilgi alışverişi birçok biyolojik sistemleri her yerde bulunan bir özelliktir ve dokusu dilimlerin dinamik bu kimyasal aktarma yakalamak değildir. Kimyasal değişimi ve Difüzyon görselleştirme kapasitesine sahip bir mikrobiyal kolonileri Ağar kaplamalar üzerinde yetiştirilen IMS tekniktir; küçük moleküller aracılığıyla ve agar genelinde yaygın edebiliyoruz ve matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma (MALDI-TOF) kütle spektrometresi4yolu ile yakalanabilir. Bu büyüme Kur ayrı biyolojik varlıklar (kolonileri) arasında değiş tokuş molekülleri tanımlamak için kullanılan ve yön metaboliti üretim öğeleri de belirleyebilirsiniz. Mikrobiyal koloni büyüme için tasarlanan platformu doku explants memeli hücreleri ile yetiştirilen birincil metabolizma keşfetmek için adapte oldu ve IMS dinamik kimyasal değişimi tüp bebek bir memeli sisteminde değerlendirmek için kullanıldı.

Son birkaç yıl içinde yüksek dereceli seröz over kanseri (HGSOC) kez fallopian tüp epitel (FTE) kaynaklanan ve yumurtalık için erken hastalığı geliştirme5,6sırasında, metastaz açık hale gelmiştir 7 , 8. tumorigenic FTE nerede büyük tümör sonunda oluşturmak ve daha fazla metastaz, yumurtalık yayılmasına hücreleri nedeni şu anda belli değil. Önceki araştırma yumurtalık için birincil metastaz yumurtalık proteinlerin rolü üzerinde odaklanmıştır; Ancak, bu son zamanlarda tumorigenic bir doku için sağlıklı bir geçiş hücre metabolizması büyük bozulma sonuçları ve üretim küçük moleküller9,10,11değiştirir kanıtlanmıştır. Bu nedenle, biz olan küçük moleküller FTE yumurtalık arasında değiş tokuş kısmen HGSOC birincil metastaz için sorumlu olabilir.

Bizim yeni geliştirilen IMS işlemi uygulayarak, biz coculture tumorigenic FTE ve sağlıklı yumurtalık dokusu yumurtalık üzerinden norepinefrin üretimini indükler belirledik. Ancak, diğer hücre tipleri veya normal FTE hücreleri bu etkiyi temin değil. Bu yöntem olağanüstü bir avantajı nedir Moleküler üretim ve Satım gerçek moleküller temsil sinyallerin görselleştirildiği, bu yüzden bile bir coculture bir sinyalin kaynağını saptamak mümkündür. Bu analiz homojenize örnekleri, üzerinde bir avantaj nerede bütün mekansal bilgi kaybolur. Modeli sistemimizde açıkça norepinephrine üretimi için yumurtalık atamak başardık. Metastaz ve yumurtalık kanserlerinin chemoresistance norepinefrin bağlantılı ve bu molekül bizim tespiti roman IMS yöntemi biyolojik ilgili molekülleri12,13, ortaya çıkarabilir geçerliliği 14. bu doğrulama IMS bu yeni uygulama coculture ortamlarda küçük moleküller tanıtmakta ve hücre dönüşüm etkisi erken olayları anlamaya çalışıyorsunuz gruplar araştırma özellikle yararlı olabilir teklif izin veriyor ve metastaz. Bu yöntem genel kimlik ve küçük moleküller kayma dağılımını doku ve organları, vitro 3D hücre kültürleri veya ex vivo dokusu tarafından temsil edilen arasında değişim sırasında aydınlatmak için hedeftir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan yordamlar ulusal sağlık kuralları Enstitüleri bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları için uygun olduğunu ve Chicago Illinois Üniversitesi'nde Kurumsal hayvan kullanımı ve Bakımı (IACUC) Komitesi tarafından onaylanmış.

1. hazırlanması reaktifler

  1. Fare oviductal epitel (MOE) %5 CO2 Alfa en az gerekli orta (αMEM) medya % 10 fetal sığır serum ile desteklenmiş bir oksijen kuluçka 37 ° C'de (FBS), 2 mM L-glutamin, 10 mg/mL insülin, transferrin, selenyum (ITS) hücreleri korumak , 1.8 ng/mL epidermal büyüme faktörü (EGF), 100 U/mL penisilin-streptomisin, 1 mg/mL viomisin ve 18,2 ng/mL estradiol-17β. Hücreleri her 3-4 gün geçirmek, aynı gün yetecek sayıda hücre sağlayarak fareler feda.
  2. % 2 özel düşük erime özel 1 g 50 mL distile su karıştırılarak hazır olun. Otoklav özel izin soğumaya ve özel katılaşır önce sonra aliquot (1 mL) 2 ml ( Tablo malzemelerigörmek) tüpleri. Özel-20 ° C'de süresiz olarak depolanabilir.
  3. En az 2 mL 1 x Dulbecco'nın modifiye kartal orta (DMEM) ortam hazırlamak.
  4. 1:1 alfa-cyano-4-hyroxycinnamic asit (CHCA) 5 mg/mL 10 mL için matris MALDI-TOF MS için hazırlamak: dihidroksibenzoik asit (DHB) ( Tablo malzemelerigörmek) 90:10 ACN:H2O + %0,1 trifluoroacetic asit (TFA). Matris eriyene kadar çözüm solüsyon içeren temizleyicide.

2. fare koloni ve yumurtalık kaldırma

  1. Standart konut yordamları kullanarak CD-1 fareler çiftlerini üreme korumak. Doğum gün yakın belgili tanımlık pups yaş bilinen fareler her gün denetleyin.
  2. Yavruların başına NIH yönergeleri CO2 Solunduğunda yaş 16-18 gün ötenazi. CO2 (% 100) teslim bir akış oranı % 10-%20 dakika başına birim odası ve iki dakika sonra solunum durmuştu devam. Ötenazi tarafından servikal çıkığı onaylayın.
  3. Tüm cerrahi ekipman % 70 etanol batış tarafından dezenfekte. İyi'nın L-15 medya ile 1 x penisilin-streptomisin 37 ° c sıcak
  4. Bölgeyi dezenfekte edin ve saç ile kirlenme en aza indirmek için % 70 etanol ile karın yüzey ıslak. Karın duvarının kapsayan deriyi büyük yapmak künt forseps ve kullanım Cerrahi makas kullanarak şekil V cilt ve karın duvarı iç organların açığa kesme kavramak.
  5. İç organları forseps kullanarak kenara çek. Tek tek iyi Forseps ile rahim her boynuzun kapmak ve biraz kaldırın.
  6. Hemen altındaki böbrek rahim boynuz sonunda olacak yumurtalık bulun. Cerrahi makas bağ dokusu ücretsiz yumurtalık incelemek için kullanın. O zaman, yumurtalık boynuz yarıya.
  7. Yumurtalık, ovidukt ve yaklaşık bir hareket Önceden ısıtılmış iyi'nın L-15 medya için rahim her boynuzun yarısı.
  8. Diseksiyon mikroskop altında her yumurtalık ovidukt, bursa ve herhangi bir yağ dokusu serbest bırakarak çevreleyen bursa dikkatli taşıyın. Her yumurtalık iyi'nın L-15 medya yeni bir tabak için hareket.
  9. Eksenel her yumurtalık yarıya. Özel kaplama kadar 37 ° C'de muhafaza (şu anda explants olarak) yumurtalık parçaları tutmak.

3. Kurulum ve Ito tedavi slayt Cocultures için kuluçka

  1. Bölünmemiş cocultures
    1. 70 ° c sıcak tabakta özel Sıvılaştır.
    2. 8-şey bölücü indiyum tinoxide (ITO) üstüne koyun-tedavi slayt (şekil 1A). Bölücü kauçuk altta yapışma slayda davranacak bir parça, ama hiçbir sızıntı veya kuyu arasında karıştırma sağlamak için özel kaplama sırasında sürekli hafif aşağı doğru basınç uygulamak emin olun.
    3. Hücreleri bir 15 mL konik tüp, santrifüj (800 rpm'de 5 dk) toplamak ve 50 k için 1 x DMEM medya 150 µL başına hücre resuspend. Farklı hücre yoğunluğu en iyi ise, bu adımda 2 x için (örneğin, bir son 300 µL, bu aşamada hücre yoğunluğu 50.000 hücreleri 150 µL 50.000 hücreleri bölgedir) son yoğunluk istenen hücre süspansiyon olduğundan emin olun.
    4. Hücre kültürü kaplama önce yumurtalık explant eklemek için merkezi iyi (şekil 1B).
    5. Özel bireysel 2 mL tüpler hemen önce kaplama her hücre kültüründe ekleyin. Her şey için hücre süspansiyon, 200 µL ve sıvılaştırılmış özel 2 mL tüp içinde 200 µL birleştirir. Örneğin, dört kuyular için 800 µL hücre süspansiyon ve 800 µL % 2 özel birleştirir. Bazı karışımı sol olacaktır, ama biraz daha fazla gerekli olduğunun pipetting sırasında hava kabarcıkları önler.
      1. Özel bireysel hücre kültürleri için hemen o hücre kültürü kaplama önce ekleyin. Özel bir dakika altında serin, çok hızlı bir şekilde plaka için hazır olun.
    6. Hemen her şey (şekil 1 c) 300 µL hücre/özel karışımı ekleyin. Şekil 1 c üç hücre koşulları ve bir medya durumu, her kaplama ile ve bir yumurtalık olmadan gösterir.
    7. Slayt 37 ° C ve % 5 CO2 oksijen kuluçka kuluçkaya.
  2. Bölünmüş Cocultures.
    1. Bölücüler ince, pürüzsüz plastik (şekil 2A) kesti.
      Not: düz ve ince oldukları için bu deney bir tek kullanımlık steril ortam lavabo kenarlarında kullanır. Cut onları iyi (~ 13 mm) hipotenüs rahatça uyacak kadar geniş.
    2. 70 ° c sıcak tabakta özel Sıvılaştır.
    3. 8-şey bölücü ITO tedavi slayt (şekil 2B) üstüne yerleştirin. Bölücü kauçuk altta yapışma slayda davranacak bir parça, ama hiçbir sızıntı veya kuyu arasında karıştırma sağlamak için özel kaplama sırasında sürekli hafif aşağı doğru basınç uygulamak emin olun.
    4. Hücreleri bir 15 mL konik tüp, santrifüj (800 rpm'de 5 dk) toplamak ve 50 k için 1 x DMEM medya 150 µL başına hücre resuspend. Farklı hücre yoğunluğu en iyi ise, bu aşamada hücre süspansiyon 2 x istenen son yoğunluk olduğundan emin olun (örneğin bir son 300 µL 50.000 hücreleri için hücre yoğunluğu bu aşamada 150 µL 50.000 hücreleri bölgedir).
    5. Plastik bölücüler çapraz wells (şekil 2C) yerleştirin.
    6. Özel bir zaman hemen önce kaplama her hücre süspansiyon bir ekleyin. Her şey için hücre süspansiyon, 100 µL ve sıvılaştırılmış özel bir 2 mL tüp 100 µL birleştirir. Örneğin, dört kuyular için 400 µL hücre kültür ve 400 µL % 2 özel birleştirir. Bazı hücre/özel karışımı sol olacaktır ama biraz daha fazla gerekli olduğunun pipetting sırasında hava kabarcıkları önler.
      1. Özel bireysel hücre kültürleri için hemen o hücre kültürü kaplama önce ekleyin. Özel bir dakika altında serin, çok hızlı bir şekilde plaka için hazır olun.
    7. Bölücü, plaka 150 µL hücre/özel karışımı bir tarafında. Serin ve (yaklaşık bir dakika) kuvvetlendirmek ve bölücü (şekil 2B) kaldırmak özel izin.
    8. Yumurtalık explant iyi boş yarısı ortasına yerleştirin. Yer 150 µL medya/özel karışımı üst yumurtalık ve sadece iyi (şekil 2E) doğru yüzü üzerinde.
    9. Slayt 37 ° C ve % 5 CO2 oksijen kuluçka kuluçkaya.

4. slayt kurutma ve MALDI-TOF MS için hazırlanıyor

  1. Sonra dört gün (ya da herhangi bir tercih edilen zaman noktası), özel Prizler ve slayt (şekil 1 d) odası bölücü çıkarın. Yavaşça düz bir spatula ile özel odası üzerinden tarafını ayırmak ve yavaşça yukarı doğru herhangi bir özel prizler oynatmamaya dikkat odası çekin. Onlar taşırsanız, her birbirlerine dokunuyorlar değil bu yüzden nazikçe onları yeniden konumlandırın.
  2. Slayt yaklaşık 4 h her h 90 ° döner, 37 ° C fırında yerleştirin.
    Not: Döndürme slayt boyunca örnek bile ısı dağılımı sağlamak önemlidir.
  3. Kuru bir kez, slayt (şekil 1E) fırından çıkarın.
  4. Matris çözüm püskürtme (şekil 1F) kullanarak aşağıdaki parametrelerle geçerlidir: sıcaklığı 30 ° C arasında akış hızı = 0.2 mL/dak, geçişleri sayısı = = 8, yön CC ve meme mesafe = = 40 mm.
    Not: bir matris püskürtücü yerine sanatsal Pistole sıvı matris uygulamak için kullanılabilir. Aynı matris çözüm sprey için kullanılabilir, ancak yaklaşık iki kat daha fazla çözüm gereklidir. Böylece dikey olarak asılı klempe slayt ile slayt sprey bir açıdan 90° yaklaşık bir ayak üzerinden (Hoffmann15uyarlama) matrix kadar katman görülür.
  5. Calibrant 1 µL ekleyin (fosfor kırmızı hedefleri için < 500 Da, peptid karışımı ( Tablo malzemelerigörmek) hedefleri için < 5000 Da) için slayt üzerinde net nokta. Fosfor kırmızı yok matris ile karıştırma gerektirir, ancak peptid karışımı iyonlaşma yardım için matris ile 1:1 karışımı gerektirir. Calibrant kurumasını bekleyin.
  6. Bir X çizmek kalıcı bir kalem kullanarak slayt her köşedeki ve 1200 dpi çözünürlükte bir kamera veya tarayıcı kullanarak bir optik görüntü al.

5. görüntüleme kütle spektrometresi veri toplama

  1. IMS verileri analiz yazılımı yeni bir sıra açın (bkz. Tablo malzeme). Raster genişliği istediğiniz uzamsal çözünürlük, en az 50 µm ayarlayın.
  2. Slaydın optik görüntü analiz yazılımı yüklemek ve set üç öğretmek ile kavşak noktaları x her köşede çizilmiş.
  3. Bölgeler edinme yazılım görüntüleme için ilgi atayın ve bunları uygun şekilde adlandırın.
  4. Veri toplama yazılımı kullanarak araç kalibre ( Tablo malzemelerigörmek) 5 ppm hata içinde.
  5. En iyi duruma getirilmiş yöntemi Kaydet ve Çalıştır başlar. Bu deneme aşağıdaki parametreler optimize: polarite pozitif, dedektörü = reflektron, lazer boyutu = = 2, lazer güç % 50, reflektör modu dedektörü kazanç = 3 x =.

6. işleme IMS verileri

  1. Alma .mis istatistiksel yazılım dosyasına ( Tablo malzemelerigörmek) önemi çözümlenmesi için.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En iyi şekilde kurutulmuş ITO slayt ile düz bir kabuktan örnek yol açacak hiçbir kırışıklıkları özel ve slayt (şekil 3) üzerinde kayma ayrılık korumak özel parçalar yüzey üzerinde çok az. Şekil 3A şekil 3B kaçınılmalıdır kırışıklıkları gösterirken en iyi kurutma gösterir. Bu iyileştirme üzerinde bağıl nem tabanlı fırında, slaydın tam zaman değişebilir gibi izleme dikkatli gerektirir. Kırışıklıkları b...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HGSOC12,17,18norepinefrin'ın rolü implicates kanıt büyüyen bir ceset ve bu teknik daha mekanik bilgi katkıda bulunmuştur. Gen ve hücre özgüllük yanı sıra tek bir IMS medya denetimleri çalıştırmak gibi en az sekiz biyolojik koşullar ile aynı slayt üzerinde mevcut, biyolojik denetimler için yöntem hesap. Yöntem optimize edildi, ancak değerlendirmek için birincil metastaz HGSOC, herhangi bir hücre, bir modeli küçük moleküller değiş...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa yoktur

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Finansman desteği ile Chicago Biyomedikal Konsorsiyumu tarafından Chicago toplum güven (C-076) (L.M.S.); Searle fonlarından sağlanan University of Illinois Chicago başlangıç (L.M.S.) fonları; Grant 543296 üzerinden yumurtalık kanseri araştırma fonu İttifak (MD); ve UG3 ES029073 (J.E.B.) ve Ulusal Merkezi ilerleyen translasyonel Bilimler, Ulusal Enstitüsü sağlık, hibe UL1TR002003 yoluyla (JEB & LMS) tarafından.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
15 mL Falcon tüpleriDenvilleC1017-OHücreleri toplamak için
8 oyuklu oda (Millipore EZ-slayt odası)MilliporePEZGS0816Millipore Millicell EZ-slayt odası slaytından yeniden tasarlandı
AsetonitrilSigma-Aldrich34998-4LPüskürtülmüş matris için çözücü
Alfa Minimum Temel Orta (&alfa; MEM)Fisher10-022-CVHücre kültürü ortamı
Otofleks hızı MALDI-TOF LRFBrukerIMS veri analizi için
SantrifüjEppendorf5810 RHücreleri toplamak ve süpernatanı çıkarmak için
CHCA MatrisiBruker Daltonic8201344Matrix kurutulmuş slayt üzerine püskürtülür
DHB MatrixBruker Daltonic8201346Matrix püskürtülür kurutulmuş slayt üzerine
Tek Kullanımlık NeşterlerFisher22-079-707Yumurtalıkların çıkarılması için
Diseksiyon MakasıFisher13-804-6Yumurtalıkların çıkarılması için
DMEM MediaGibco11995-065Agaroz
epidermal büyüme faktörüPeprotech Inc.100-15Hücre kültürü ortamı takviyesi
Eppendorf tüpleriGenesee Scientific22-282Agaroz alikotları
için Estradiol-17 ve beta;Simga-AldrichE2758Hücre kültürü ortamı takviyesi
Fetal Sığır SerumuDenvillefb5001Hücre kültürü ortamı takviyesi
FlexControl 3.4Bruker DaltonicIMS veri toplama yazılımı
FlexImaging 4.1Bruker DaltonicIMS veri analiz yazılımı
Forseps (ince)Fsiher22-327379Hücre kültürü ortamının çıkarılması için yumurtalıklar
GentamisinCellgro30-005-CRHücre kültürü ortamı takviyesi
İnsülin, Transferrin, Selenyum (ITS)Sigma-Aldrich11074547001Hücre kültürü ortamı takviyesi
ITO kaplı slaytBruker8237001Ko-kültür inkübasyonu için platform
Leibovitz'in L-15 OrtamıGibco11415064Doku sırasında kullanılan ortam diseksiyon
L-glutaminGibco25030-081Hücre kültürü ortamı takviyesi
Düşük erime noktalı agarozSigma-AldrichA9414-10GKaplama için ortam ile karıştırılmış
Ortam havzasıCorning4870Bölünmüş odalar için plastik bölücüleri kesmek için kullanılır
Penisilin-streptomisinGibco15140-122Hücre kültürü ortamı takviyesi
Peptit Kalibrasyon StandardıBruker Daltonic8206195Kalibrantı
Phophorus kırmızıSigma-Aldrich343-242-5GDüşük kütle aralığı için Kalibrant
SCiLS Lab 2015Bruker DaltonicIMS verileri istatistiksel analiz
Cerrahi Forseps (künt)Fisher08-875-8BYumurtalıkların çıkarılması için
TFA Fisher TeknolojilerA116-50Matris çözümüne eklendi
TM PüskürtücüHTX TeknolojileriMatris uygulamak için
ile karıştırılmış ortam Orta kütle aralığı için

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Paine, M. R., et al. Whole Reproductive System Non-Negative Matrix Factorization Mass Spectrometry Imaging of an Early-Stage Ovarian Cancer Mouse Model. PLoS One. 11 (5), e0154837(2016).
  2. Yang, Y. L., Xu, Y., Straight, P., Dorrestein, P. C. Translating Metabolic Exchange with Imaging Mass Spectrometry. Nature Chemical Biology. 5 (12), 885-887 (2009).
  3. Li, H., Hummon, A. B. Imaging Mass Spectrometry of Three-Dimensional Cell Culture Systems. Analytical Chemistry. 83 (22), 8794-8801 (2011).
  4. Yang, J. Y., et al. Primer on Agar-Based Microbial Imaging Mass Spectrometry. Journal of Bacteriology. 194 (22), 6023-6028 (2012).
  5. Coscia, F., et al. Integrative Proteomic Profiling of Ovarian Cancer Cell Lines Reveals Precursor Cell Associated Proteins and Functional Status. Nature Communications. 7, 12645(2016).
  6. Labidi-Galy, S. I., et al. High Grade Serous Ovarian Carcinomas Originate in the Fallopian Tube. Nature Communications. 8 (1), (2018).
  7. Klinkebiel, D., Zhang, W., Akers, S. N., Odunsi, K., Karpf, A. R. DNA Methylome Analyses Implicate Fallopian Tube Epithelia as the Origin for High-Grade Serous Ovarian Cancer. Molecular Cancer Research. 14 (9), 787-794 (2016).
  8. Falconer, H., Yin, L., Gronberg, H., Altman, D. Ovarian Cancer Risk After Salpingectomy: A Nationwide Population-Based Study. JNCI Journal of the National Cancer Institute. 107 (2), dju410(2015).
  9. Dean, M., Davis, D. A., Burdette, J. E. Activin A Stimulates Migration of the Fallopian Tube Epithelium, an Origin of High-Grade Serous Ovarian Cancer, through Non-Canonical Signaling. Cancer Letters. 391, 114-124 (2017).
  10. King, S. M., Burdette, J. E. Evaluating the Progenitor Cells of Ovarian Cancer: Analysis of Current Animal Models. BMB Reports. 44 (7), 435(2011).
  11. Reznik, E., et al. Landscape of Metabolic Variation across Tumor Types. Cell Systems. 6 (3), 301-313 (2018).
  12. Watkins, J. L., et al. Clinical Impact of Selective and Nonselective Beta-Blockers on Survival in Patients with Ovarian Cancer: Beta-Blockers and Ovarian Cancer Survival. Cancer. 121 (19), 3444-3451 (2015).
  13. Lutgendorf, S. K., et al. Stress-Related Mediators Stimulate Vascular Endothelial Growth Factor Secretion by Two Ovarian Cancer Cell Lines. Clinical Cancer Research. 9 (12), 4514-4521 (2003).
  14. Sood, A. K. Stress Hormone-Mediated Invasion of Ovarian Cancer Cells. Clinical Cancer Research. 12 (2), 369-375 (2006).
  15. Hoffmann, T., Dorrestein, P. C. Homogeneous Matrix Deposition on Dried Agar for MALDI Imaging Mass Spectrometry of Microbial Cultures. Journal of The American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1959-1962 (2015).
  16. Zink, K. E., Dean, M., Burdette, J. E., Sanchez, L. M. Imaging Mass Spectrometry Reveals Crosstalk between the Fallopian Tube and the Ovary That Drives Primary Metastasis of Ovarian Cancer. ACS Central Science. 4 (10), 1360-1370 (2018).
  17. Armaiz-Pena, G. N., et al. Src Activation by β-Adrenoreceptors Is a Key Switch for Tumour Metastasis. Nature Communications. 4, 1403(2013).
  18. Choi, M. J., et al. HTERT Mediates Norepinephrine-Induced Slug Expression and Ovarian Cancer Aggressiveness. Oncogene. 34 (26), 3402(2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Imaging Mass SpectrometryMALDI TOF MSSmall Molecule CommunicationOvarian Cancer MetastasisAgarose CocultureTissue Cell CocultureSample Preparation MethodDesiccation ProcessSpatial IntegrityLabel Free Analysis

İlgili makaleler