Method Article

Doku ve kütle spektrometresi Imaging kullanarak hücreleri arasında küçük molekül iletişim yakalama

DOI:

10.3791/59490

⸱

April 3rd, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Medicinal Chemistry and Pharmacognosy, University of Illinois at Chicago, 2Department of Animal Science, University of Illinois at Urbana-Champaign

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Numune hazırlama bir roman yöntemi görüntüleme kütle spektrometresi kullanılarak küçük molekül alışverişte algılamak için hücre ve doku coculture karşılamak için geliştirilmiştir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kütle spektrometresi (IMS) görüntüleme rutin olarak uygulanmış örnekleri üç tür: doku bölümler, pulcuklarının ve mikrobiyal koloniler. Bu örnek türleri faiz biyolojik örnek arasında proteinler, lipidler ve metabolitleri dağılımını görselleştirmenizi matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma uçuş zaman kütle spektrometresi (MALDI-TOF MS) kullanılarak analiz. Memeli hücre kültürleri içinde özel içine tohum tarafından kanser, kimyasal iletişim tanımlamak için underexplored bir yaklaşım adrese üç önceki uygulama güçlü bir araya getiren bir roman örnek hazırlama yöntemi geliştirdik sağlıklı dokulara kuruma örnek tarafından takip ile coculture. Memeli doku ve hücreleri yakın üzerinden Difüzyon doku ve hücreleri arasındaki kimyasal iletişim sağlayan cocultured. Zaman belirli noktalarda, mikrobiyal kolonileri IMS analiz için hazırlanan aynı şekilde özel tabanlı örnek kurutulur. Bizim yöntem yüksek dereceli seröz over kanseri metastaz sırasında yumurtalık ile etkileşim gibi fallopian tüp sizden türetilmiş arasındaki iletişimi modellemek için geliştirilmiştir. Numune hazırlama duruma getirilmesi norepinefrin kimlik anahtar kimyasal bileşen olarak yumurtalık microenvironment sonuçlandı. Yeni geliştirilen bu yöntem bitişik hücreleri veya doku arasındaki kimyasal iletişim bir anlayış gerektiren diğer biyolojik sistemleri uygulanabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kütle spektrometresi (IMS) görüntüleme en iyi duruma getirilmiş üç yaygın olarak kullanılan uygulamalarda moleküler özelliklerinin mekansal dağılımı niteleyen: dokusu dilimlerin, pulcuklarının ve mikrobiyal kolonileri1,2,3. Dokusu dilimlerin metabolitleri, hedeflenen ya da belirli bir kitle aralığı içinde hedefsiz bir ev sahibi, biyolojik koşullar bağlamında lokalizasyonu değerlendirmek için kullanılabilir. Ancak, bir sağlıklı doku hastalıklı bir durum, örneğin, bir tümör karşılaştırıldığında moleküler özellikleri arasındaki farklar en önemli ve açık vardır. Bu IMS yaklaşım ö....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan yordamlar ulusal sağlık kuralları Enstitüleri bakım ve kullanım laboratuvar hayvanları için uygun olduğunu ve Chicago Illinois Üniversitesi'nde Kurumsal hayvan kullanımı ve Bakımı (IACUC) Komitesi tarafından onaylanmış.

1. hazırlanması reaktifler

  1. Fare oviductal epitel (MOE) %5 CO2 Alfa en az gerekli orta (αMEM) medya % 10 fetal sığır serum ile desteklenmiş bir oksijen kuluçka 37 ° C'de (FBS), 2 mM L-glutamin, 10 mg/mL insülin, transferrin, selenyum (ITS) hücreleri korumak , 1.8 ng/mL epidermal büyüme faktörü (EGF), 100 U/mL penisilin-streptomisin, 1 mg/mL viomisin ve 18,2 ng/mL estradiol-17β. Hücreleri her 3-....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En iyi şekilde kurutulmuş ITO slayt ile düz bir kabuktan örnek yol açacak hiçbir kırışıklıkları özel ve slayt (şekil 3) üzerinde kayma ayrılık korumak özel parçalar yüzey üzerinde çok az. Şekil 3A şekil 3B kaçınılmalıdır kırışıklıkları gösterirken en iyi kurutma gösterir. Bu iyileştirme üzerinde bağıl nem tabanlı fırında, slaydın tam zaman değişebilir gibi izleme dikkatli gerektirir. Kırışıklıkları b.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HGSOC12,17,18norepinefrin'ın rolü implicates kanıt büyüyen bir ceset ve bu teknik daha mekanik bilgi katkıda bulunmuştur. Gen ve hücre özgüllük yanı sıra tek bir IMS medya denetimleri çalıştırmak gibi en az sekiz biyolojik koşullar ile aynı slayt üzerinde mevcut, biyolojik denetimler için yöntem hesap. Yöntem optimize edildi, ancak değerlendirmek için birincil metastaz HGSOC, herhangi bir hücre, bir modeli küçük moleküller değiş.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa yoktur

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Finansman desteği ile Chicago Biyomedikal Konsorsiyumu tarafından Chicago toplum güven (C-076) (L.M.S.); Searle fonlarından sağlanan University of Illinois Chicago başlangıç (L.M.S.) fonları; Grant 543296 üzerinden yumurtalık kanseri araştırma fonu İttifak (MD); ve UG3 ES029073 (J.E.B.) ve Ulusal Merkezi ilerleyen translasyonel Bilimler, Ulusal Enstitüsü sağlık, hibe UL1TR002003 yoluyla (JEB & LMS) tarafından.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
15 mL Falcon tüpleriDenvilleC1017-OHücreleri toplamak için
8 oyuklu oda (Millipore EZ-slayt odası)MilliporePEZGS0816Millipore Millicell EZ-slayt odası slaytından yeniden tasarlandı
AsetonitrilSigma-Aldrich34998-4LPüskürtülmüş matris için çözücü
Alfa Minimum Temel Orta (&alfa; MEM)Fisher10-022-CVHücre kültürü ortamı
Otofleks hızı MALDI-TOF LRFBrukerIMS veri analizi için
SantrifüjEppendorf5810 RHücreleri toplamak ve süpernatanı çıkarmak için
CHCA MatrisiBruker Daltonic8201344Matrix kurutulmuş slayt üzerine püskürtülür
DHB MatrixBruker Daltonic8201346Matrix püskürtülür kurutulmuş slayt üzerine
Tek Kullanımlık NeşterlerFisher22-079-707Yumurtalıkların çıkarılması için
Diseksiyon MakasıFisher13-804-6Yumurtalıkların çıkarılması için
DMEM MediaGibco11995-065Agaroz
epidermal büyüme faktörüPeprotech Inc.100-15Hücre kültürü ortamı takviyesi
Eppendorf tüpleriGenesee Scientific22-282Agaroz alikotları
için Estradiol-17 ve beta;Simga-AldrichE2758Hücre kültürü ortamı takviyesi
Fetal Sığır SerumuDenvillefb5001Hücre kültürü ortamı takviyesi
FlexControl 3.4Bruker DaltonicIMS veri toplama yazılımı
FlexImaging 4.1Bruker DaltonicIMS veri analiz yazılımı
Forseps (ince)Fsiher22-327379Hücre kültürü ortamının çıkarılması için yumurtalıklar
GentamisinCellgro30-005-CRHücre kültürü ortamı takviyesi
İnsülin, Transferrin, Selenyum (ITS)Sigma-Aldrich11074547001Hücre kültürü ortamı takviyesi
ITO kaplı slaytBruker8237001Ko-kültür inkübasyonu için platform
Leibovitz'in L-15 OrtamıGibco11415064Doku sırasında kullanılan ortam diseksiyon
L-glutaminGibco25030-081Hücre kültürü ortamı takviyesi
Düşük erime noktalı agarozSigma-AldrichA9414-10GKaplama için ortam ile karıştırılmış
Ortam havzasıCorning4870Bölünmüş odalar için plastik bölücüleri kesmek için kullanılır
Penisilin-streptomisinGibco15140-122Hücre kültürü ortamı takviyesi
Peptit Kalibrasyon StandardıBruker Daltonic8206195Kalibrantı
Phophorus kırmızıSigma-Aldrich343-242-5GDüşük kütle aralığı için Kalibrant
SCiLS Lab 2015Bruker DaltonicIMS verileri istatistiksel analiz
Cerrahi Forseps (künt)Fisher08-875-8BYumurtalıkların çıkarılması için
TFA Fisher TeknolojilerA116-50Matris çözümüne eklendi
TM PüskürtücüHTX TeknolojileriMatris uygulamak için
ile karıştırılmış ortam Orta kütle aralığı için

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Paine, M. R., et al. Whole Reproductive System Non-Negative Matrix Factorization Mass Spectrometry Imaging of an Early-Stage Ovarian Cancer Mouse Model. PLoS One. 11 (5), e0154837(2016).
  2. Yang, Y. L., Xu, Y., Straight, P., Dorrestein, P. C.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Imaging Mass SpectrometryMALDI TOF MSSmall Molecule CommunicationOvarian Cancer MetastasisAgarose CocultureTissue Cell CocultureSample Preparation MethodDesiccation ProcessSpatial IntegrityLabel Free Analysis

Related Articles