Yöntem makalesi

Fareler içinde Apical periodontitis İndükleme

DOI:

10.3791/59521

⸱

6 Ağustos 2019

 ,  ,  , 
1Institute of Dental Sciences, Faculty of Dental Medicine, Hebrew University of Jerusalem, 2Department of Endodontics, Hadassah Ein Kerem Medical Center

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, yerel olarak farelerde apikal periodontitis teşvik etmek için bir protokol sunuyoruz. Biz nasıl fare diş bir delik matkap ve onun hamuru maruz göstermek, amacıyla lokal inflamasyon neden. Mikro-CT ve histoloji gibi bu inflamasyonun doğasını araştırmak için analiz yöntemleri de gösterilmiştir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yerel kaynaklı inflamasyona katılan mekanizmalar, mevcut birçok hayvan modeli kullanılarak incelenebilir. Bunlardan biri apikal periodontitis indüksiyonu (AP). Apical periodontitis, diş kökünü çevreleyen periodontal dokularda inflamatuar bir doğanın yaygın bir patolojisidir. Bu patolojinin yapısını ve mekanizmasını daha iyi anlamak için farelerde prosedürü gerçekleştirmek avantajlıdır. Bu odontojenik inflamasyonun indüksiyon diş hamuru maruz kadar fare diş içine sondaj ile elde edilir. Sonra, diş hamuru zaman içinde doğal oral Flora tarafından kontamine maruz kalır, apikal periodontitis neden. Bu süre sonra, hayvan feda edilir ve diş ve çene kemiği çeşitli şekillerde analiz edilebilir. Tipik analizler arasında mikro-CT görüntüleme (kemik reorpsiyonu değerlendirmek), histolojik boyama, immünhistokimya ve RNA ifadesi yer aldı. Bu protokol, oral biyoloji alanında, bu inflamatuar süreci uniform koşullara sahip bir In vivo Deneysel ortamda daha iyi anlamak için araştırma için yararlıdır. Prosedür fareler ve izole çene dikkatli bir şekilde işlenmesi gerekir, ve tekniğin görsel bir gösteri yararlıdır. İndüklenen apikal periodontitis ve bir fare modelinde karakterizasyonu için yol açan prosedürlerin tüm teknik yönleri gösterilmiştir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yöntemin amacı, doğal mikroflora ile Apex kontamine ve daha sonra bu patolojik sürecin çeşitli özelliklerini incelemek için bir fare içinde apikal periodontitis ikna etmektir.

Apical periodontitis (AP), diş kökünü çevreleyen periodontal dokularda inflamatuar bir doğanın yaygın bir patolojisidir. Bu diş hastalığı şiddetli ağrıya neden olabilir ve bir diş hekimi tarafından tedavi edilmelidir. Tedavi seçenekleri arasında kök kanal tedavisi (primer veya ikincil), Endodontik cerrahi, diş çıkarma veya klinik ve radyografik bulgulara bağlı olarak takip ve klinisyen görüşü yer aldı. Bu inflamatuar sürecin mekanizması, birkaç yıl1,2,3için okudu rağmen, hala kapsamlı olarak anlaşılmamıştır. Bu patolojinin şiddetini göz önünde bulundurarak, bu nedenle temel doğasını ele alan araştırma için net bir ihtiyaç vardır. Böylece AP 'nin çalışmasında mümkün olan sistemler büyük bilimsel ilgi görmektedir.

AP, yerel dokulara ve bağışıklık sistemini içeren karmaşık bir patolojik süreçtir, in vitro çalışmalar süreçlerin tam bir anlayış için yetersiz. Bu hastalığın klinik örneklerinin incelenmesi aynı zamanda etik sınırlamalar ve farklı insanlar ve farklı klinik aşamaları arasında önemli değişkenlik nedeniyle sorunlu4,5, ve dolayısıyla in vivo modellerin gereksinimi. Bu modeller, diş hamuru kirliliğine maruz ve periapikal dokularda Bu uyarıcı için vücudun inflamatuar reaksiyonu gözlemleme kavramını temel alan6,7. Ortak in vivo modelleri kemirgenler veya köpekler gibi büyük hayvanları içerir. Minyatür dişler ile çok küçük hayvanlar olan fareler tedavisinde klinik zorluk rağmen, fare modelinin avantajları önemlidir: pratikte, fareler ile çalışmak teknik tesisler açısından basit ve en uygun maliyetli ve bilimsel olarak, fare, kolayca mevcut genetik ve moleküler araçlar ve iyi okudu genom ile iyi incelenmiştir hayvan modelidir. Nitekim, önceki çalışmalar inflamatuar ve kemik reorpsiyon sinyalleri ve hücreler apikal periodontitis katılan okumak için bir fare modeli kullanılan8,9,10,11. Bu nedenle, AP çalışması için bir fare modelinin nasıl kullanılacağı konusunda net bir protokol gereklidir. Burada, böyle bir protokol tarif ediyoruz.

Burada açıklanan protokol knock-out (Ko) fareler çalışmak için uygun olmanın büyük avantajı vardır ve nasıl belirli bir gen eksikliği diş iltihabı etkiler öğrenmek7,12. Bu protokolün diğer kullanışlı uygulamaları, apikal periodontitis13' ün gelişimi üzerine ilaçların ve sistemik koşulların etkileri, apikal Periodontitin çenelerin osteatrosis gelişimi üzerine etkisi14 , 15 ve kemik rejenerasyonu için kök hücre terapisi16.

Bu protokol Ayrıca yerel inflamasyon çalışmak için bir model olarak Genelleştirilmiş olabilir. Enflamatuar süreci incelemek için, örneğin indüklenen kolit veya artrit17,18dahil olmak üzere çeşitli fare modelleri geliştirilmiştir. Bu modellerin sistemik etkileri vardır ve aynı hayvan içinde hiçbir yerleşik kontrol vardır. İnflamasyon olmadan kontralateral kontrol içeren indüklenen apikal periodontitis için modeller, bu sınırlamalar14,19üstesinden avantajı vardır.

Aşağıda açıklanan protokol bu nedenle yerel inflamatuar süreçlerle ilgilenen araştırmacılar için yararlıdır. Bu iltihap kontrollü doğası, belirli bir yere onun hapis, ve kontralateral kontrol diş, tüm bu süreç içinde yer alan mekanizmaları incelemek için bu protokol değerli olun. Ayrıca, protokol periapikal inflamasyonun klinik yönleri ile ilgilenen araştırmacılar için yararlıdır. Fare modeli, hastalığın farklı değişkenlerini incelemek için idealdir, fare modelinde genetik manipülasyonları kolayca gerçekleştirebilmek için, periapikal inflamasyonda spesifik genlerin aktivitesini araştırmak için avantajına ek olarak.

Teknik olarak, klinik prosedür fareler dişlerin küçük boyutları nedeniyle yürütmek için zordur. Konumlandırma, gerekli ekipman ve performans hakkında bilgi edinmek için bu prosedürü görselleştirmek yararlı olacaktır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada açıklanan tüm yöntemler, Ibranice Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıAYUC) tarafından onaylanmıştır (etik No. MD-17-15093-5).

1. hayvan anestezi ve konumlandırma

  1. Aşağıda açıklandığı gibi steril çözümler hazırlayın.
    1. Hazırlamak 5 mL 7 mg/mL ketamin ve 0,09 mg/mL Medetomidin fosfat tampon solüsyonu seyreltilmiş (PBS)/Saline.
    2. PBS/Saline (5 mL 'Lik bir miktar hazırlamak için tavsiye edilir) seyreltilmiş atipamezol (0,4 mg/mL) steril bir çözelti hazırlayın.
    3. Hazırlamak mepivacaine steril bir çözüm (7,5 mg/mL) Yerel anestezi için PBS/Saline seyreltilmiş (mepivacaine bir sağlanan şişe 7,2 mL bir stok için yeterlidir).
  2. Deneme için 6-8 hafta eski kadın C57BL/6 fareler kullanın. Hayvanları belirli bir patojen ücretsiz (SPF) hayvan ünitesinde, standart su ve gıda tesisi tarafından sağlanan ve hayvan besleme reklam libitum ile tutun.
  3. Fare tartmak ve intraperitoneal enjekte (IP) ağırlığı her gram için 10 μL bir hacim. Örneğin, 20 gram ağırlığında bir fare için,
    200 μL ketamin/Medetomidin çözeltisi enjekte edilir. Bu son konsantrasyon verecektir (70 mg/kg) ketamin ve (0,9 mg/kg) Medetomidine
    Her hayvan için.
  4. Prosedür sırasında kuruluk nedeniyle göz ülserasyonu önlemek için, Kloramphenicol (% 5) içeren göz merhem uygulayın Onlar anestezi altında iken hayvanların gözleri üzerinde. Onlar anestezize iken bir lamba ile hayvanları sıcak tutun. Pedal refleks kontrol ederek anestezi derinliğini kontrol edin (firma ayak tutam performans).
  5. Fare anestezi sonra, sağ tarafında (sağ el araştırmacı için) kapalı hücre Ekstrüze Polistiren köpük yüzeyi üzerinde döşeme ve bant kullanarak yüzeye ayak eklemek fare konumlandırın.
  6. Kapalı hücre ekstrüde Polistiren köpük yüzeyine sabitlenmiş uzun iğneler ile yerinde tutulan (üst kesici ve 1 alt kesici için 1) kesici taşları etrafında küçük kauçuk bantları kullanarak ağzını açın.
  7. Yüzeye bantlanmış forseps kullanarak sağ yanağını geri çekin. Sabit durumda kapalı olan forseps kullanın.
  8. Uygun büyütme (bir dürbün mikroskop veya klinik mikroskop) ve ışık kullanarak, mandibular Molars erişim sağlayan rahat bir çalışma konumda fare ile yüzeyi yerleştirin.
  9. Forseps veya diş spatula kullanarak dili geri çekin ve ilk mandibular molar bitişik Mukozit kat içine 27 Gauge iğne ile lokal anestezi enjekte. 25-50 μL yeterlidir. Enjeksiyon yerinde dokuların şişmesi görüntülenmesi gerekir.

2. Selüloz pozlama

  1. Bir 1/4 yuvarlak diş Burr kullanın, ya da aynı boyutta elmas Burr (uzun bir şaft önerilir) dakika başına 800 mermi hızı (rpm), herhangi bir uygun diş motoru bağlı (örneğin bir otomatik tork azaltma (ATR) motor).
  2. İlk sağ mandibular molar oklüzal parçası üzerinde sondaj hamuru boynuzları dentin aracılığıyla görünür kadar. aşırı Isıtma alanı önlemek için motorun kısa patlamaları kullanın.
  3. Bir K-dosya veya H-dosya #8 veya hamuru delmek ve onları kapsayan dentin kırarak Pulp boynuzları (Mesial ve distal) içine dosya eklemek için #10 kullanın. Dosyalar autoclave tarafından sterilize edilir.
  4. Dosyaları ile açıklıkları genişletirken, mümkün olduğunca derin hamuru içinde dosyaları ile çalışmaya devam edin. Genellikle selüloz görünür kanama olacaktır.
  5. Deney sırasında ağrıyı azaltmak için, dişin keskin kenarlarını Burr ile yuvarlamak ve dişini oklüzyondan çıkarmak için emin olun. Bir mikrofırça ile prosedür sırasında temiz enkaz.
  6. Kontralateral diş (sol ilk mandibular molar) bir kontrol olarak bırakın.

3. klinik prosedürün sonu

  1. Fare sabitleme durumundan bırakın ve Atipamezole IP enjekte (her vücut ağırlığı gram için 10 μL. Bu son doz verecektir (4 mg/kg) Atipamezole.
  2. PBS/Saline (0,05 mg/kg) IP (prosedür gününde 3 mL 'Lik bir miktar hazırlamak için tavsiye edilir) seyreltilmiş buprenorfik enjekte. Ağrı kesici neden gerekli olduğunu açıklamak için tartışma konusuna bakın.
  3. Hayvanlar onları ayrılmadan önce anestezi kurtarmak emin olun. Onlar diş ağrısı nedeniyle sert gıda yeme aciz olabilir çünkü onlara yumuşak yiyecek verin.

4. prosedür takip sonrası (42 gün)

  1. Prosedürden sonra ilk 3 gün için, hayvanları tartmak ve Buprenorfik enjekte (0,1 mg/kg) IP günde bir kez (6mL bir miktar hazırlamak için önerilir).
  2. Deneme süresi boyunca (42 gün inflamasyon oluşturur) kilo ve genel davranışsal değerlendirme 2-3 kez bir hafta hayvanları izlemek.
  3. Takip süresi boyunca hayvanlara yumuşak yiyecekler sunun. Suyu su ile ıslak ve kafesin katında bir petri-çanak koydu.

5. deney sonlandırma ve analiz

  1. Zaman 42 gün11 takip tamamlandığında, anestezize hayvanlar IP ile ketamin/xylazine bir konsantrasyonda 106,25 mg/kg ketamin, ve 75 mg/kg xylazine (bir stok çözüm 42,5 mg/ml ketamin, ve 1,5 mg/ml xylazine toplam hacminde 2 ml Önerilen) ve servikal dislocation preform.
    Not: inflamasyonu değerlendirmek için olası analizler için farklı seçenekler vardır20,21. Burada mikro-CT ve histolojik boyama ile dokusunun Analizi tarif edilecektir.
  2. Ötenazi sonra, 3 azı da dahil olmak üzere çenenin bir kısmını kesmek için cerrahi makas ve forseps kullanın (ayrı her yan-tedavi ve tedavi olmayan kontrol için). Forseps kullanarak mümkün olduğunca yumuşak doku kadar Peel, çoğunlukla kemik ve diş numunenin üzerinde bırakarak.
  3. Doku PBS kısaca durulayın ve sonra civarında formaldehite koymak (PFA) 4% (PBS seyreltilmiş) için 24-48 saat sabitleme için.
    DIKKAT: PFA 'yı kimyasal bir kaput içinde ve malzeme güvenliği veri belgesi (MSDS) yönergelerine göre kullanın.
  4. 24-48 saat sonra PFA 'yı yıkamak için PBS 3x ile durulayın.
  5. Mikro-CT
    1. Mikro-CT analizi için, hasat edilen dokulara (yaklaşık 4 mm x 5 MMX 1 mm boyutlarında 3 Molars dahil olmak üzere) bir Micro-CT tarayıcısını alın, onları 1,5 ml 'lik PBS odaklı 12 mm çapında bir tüpün içine yerleştirin, böylece bukkal veya dilli yüzeyler Diş ve kök tüpün altına paralel döşenmesi. Sünger ile numune arasında ayrı, ve esnek film ile tüp üst kapak.
    2. Tarama panelini açın ve ölçüm numarasını seçin. Aşağıdaki parametrelerle kontrol dosyasını seçin: 70 kV enerji, 114 μA yoğunluğu ve 6 μm3 Voksel boyutu çözünürlüğü.
    3. Scout görünümünetıklayın ve görüntü göründüğünde, Referans satırı 'na tıklayın ve numunelerin tarama için alanını işaretleyin. Her örnek sonra Tarama Ekle'yi tıklatın. Örnekleri işaretleme bittiğinde, görev listesine gidin ve etkileşimi Başlat görevleri'ni seçin.
      Not: aynı numune daha sonra Histoloji için kullanılabilir. CT-Scan sırasında kuruması önemlidir.
  6. Mikro-CT hizalama ve analiz için uygun bir bilgisayar programı kullanın.
    1. Mikroct değerlendirmesinde XY düzleminde örnek açın. Her örnekteki hizalama için üç nokta seçin:
      Mezial apikal konstriksiyon-koordinat sisteminin kökeni tanımlar.
      Mezial kanalın koronal parçası-Z ekseninde bir nokta tanımlar.
      Distal apikal konstriksiyon-XZ düzleminde bir nokta tanımlar.
    2. Sol paneldeki ölçüm aracını kullanın ve her noktaya ulaşan bir çizgi çizin. Her üç noktayı, sağ panelde göründüğü gibi X, Y & Z değerine göre tanımlayın.
    3. Μct değerlendirmealtında görev seçerek örnek Ilgi alanı tanımlayın ve 3B değerlendirme'i tıklatın. Bir dikdörtgen ve eksen başına ölçümlendirmelere sahip bir pencere ekranda görünecektir. Dikdörtgenin boyutlarını, farenin orta düğmesiyle köşelere tıklayarak XY eksenindeki ilgi alanına sığacak şekilde eşleştirin. Z ekseninde, VOI Başlat'ın altında yer alan ilk dilim sayısını ve ilk dilimdeki z karesi altında yer alan son dilim sayısına kadar olan dilimler sayısını ekleyerek z ekseni içindeki boyutları seçin.
    4. Oturum Yöneticisialtında uygulamalar ' ı tıklatın ve dectermseçin. Bir pencerenin açılması için birkaç saniye bekleyin ve ardından aşağıdaki yönergelere göre aşağıda açıklanan eğimli komut dosyasının beş adımını yazın (satırlar arasında ENTER'a tıklayın):
      ıpl
      isq_to_aim
      aim1
    5. ISQ (ilgi dosyası) adını kopyalayın: oturum Yöneticisi altında Görünümler 'ı seçin ve microctdata'yı tıklatın. Üzerinde çalışan dosyayı bulun ve dosyaya orta tıklayın. Sonra orta tıklayın geri DECterm penceresinde.
    6. Faiz bölgesini seçerken VOI altında belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.
    7. İlgi bölgesini seçerken Dim altında belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.
    8. Bir ileti almaya kadar bekleyin: ISQ tamamlanmış amaç için.
      (adım II-hizalama):
      (z)
      aim1
      aim2
    9. Koordinat sisteminin kökeni için belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.
    10. Z eksenindeki nokta için belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.
    11. XZ düzleminde nokta için belirlenen X, Y & Z değerlerini (aralarında bir boşluk) girin.
    12. Bir mesaj almadan bekleyin: "align_Z tamamlandı"
      (adım III-başlık):
      Üstbilgi
      aim2
      0 0 0
      0 0 0
    13. ENTER'a tıklayın.
      (adım IV-yeniden hedef ISQiçin dosya dönüştürme):
      toisq
      aim2
    14. ISQ (ilgi dosyası) adını kopyalayın: oturum Yöneticisi altında Görünümler 'ı seçin ve MicroCT verileri'ni tıklatın. Üzerinde çalıştığınız dosyayı bulun ve dosyaya orta tıklayın. Sonra orta tıklayın geri DECterm penceresinde. Sil ("Backspace" kullanarak) ". ISQ "dosyasının sonunda ve yazma:" _new. ISQ "hizalanmış dosyayı tanımak için.
    15. ENTER | girin.
    16. Bir ileti almadan bekleyin: "toisq_from_aim tamamlandı"
      (adım V-Flip):
      ISQ
      A
    17. Yeni ISQ (ilgi dosyası) adını kopyalayın: oturum Yöneticisi altında Görünümler 'i seçin ve MicroCT verileri'ni tıklatın. Üzerinde çalışan dosyayı bulun ve dosyaya orta tıklayın. Sonra orta tıklayın geri DECterm penceresinde.
    18. ENTER | girin. Bir ileti almak için bekleyin: "isq_to_aim tamamlandı"
      Flip
      A
      Acar
      Zx
      bir mesaj almak için bekleyin: "flip_aim Completed"
      Kaynak
      Acar
    19. Yeni ISQ adını kopyalayın: oturum Yöneticisi altında Görünümler 'i seçin ve MicroCT verileri'ni tıklatın. Üzerinde çalışan dosyayı bulun ve dosyaya orta tıklayın. Sonra orta tıklayın geri DECterm penceresinde. Sil ("Backspace" kullanarak) ". ISQ "dosyasının sonunda ve yazma:" _flip. ISQ "hizalanmış dosyayı tanımak için.
    20. Bir ileti almadan bekleyin: "from_aim_to_isq tamamlandı"
  7. Şekillendirme
    1. Dişin yaklaşık ortasını temsil eden dilimi seçin, her iki kanalın koronal hamuru, radiküler hamuru ve her iki apikal foramat sunulmaktadır.
    2. Sol üst kontur paneline tıklayarak orta dilimdeki ilginin konturunu el ile işaretle-distal kökünün distal noktasından başlayarak, mezial kök ekinin mezial sınırında, radyopak apikal alanına Cor, apikal sınırını işaretleyerek , mezial kökünün distal sınırını ve distal kökünün mezial sınırını furkasyon bölgesi aracılığıyla takiben (bkz. Şekil 3 II, IV).
    3. Bu konturu kopyalayın (CTRL + C, CTRL + V) ve orta dilimin her iki tarafında konumlandırılmış 5 dilime göre ayarlayın.
    4. Her örnek için işaretlenmiş kontur doku hacmi hesaplamak için görev μct değerlendirmealtında seçin ve 3B değerlendirmetıklayın. 3B değerlendirme penceresinde tıklayın yakın görev seçin ve doku hacmi (TV) hesaplamak için bir filtre seçin.
  8. Histoloji
    1. Mikro-CT tarayıcıdan dokuların kaldırılmasından sonra, 1 ml etilendiamintetraasetik asit (EDTA) 0,5 M pH 8,0 ile bir mikrosantrifüjle tüpte her numuneyi koyarak dokulara kireç koyma 10 gün. EDTA çözümünü her 3 günde bir değiştirin.
    2. Dehidrasyon: histolojik kasetleri örnekleri koymak, ve artan etanol konsantrasyonları içine, bir saat her, aşağıdaki gibi: 70% etanol (Bu noktada süreç birkaç hafta boyunca durdurulabilir, sürece örnekleri etanol tutulur), 90% etanol 2x, 100% etanol 2x, ksilen 2x (dikkat: bir kimyasal kaput içinde ksile kullanın, ve onun MSDS yönergelerine göre).
      1. Kasetleri sıvı parafine (60 °C) aktarabilir ve Ksilin Buharlık için bir gecede kimyasal kaput bırakın.
    3. Engelleme: numuneleri parafine gömmek için histolojik engelleme makinesini kullanın. Doğru bir konumda onları katıştırmak için dikkatli olun (yani, taç ve kökleri kalıp alt kısmına paralel odaklı olmalıdır, bir şekilde diş "yatıyor") amacıyla sagittal bölümler almak için. Numuneler şimdi bir mikrotome ile kesilmeye hazırdır.
    4. Bölümleri kesme: doku ilgili kısmına ulaşıncaya kadar ~ 20 μm kalın dilimleri keserek başlayın. Bir kez diş (taç veya kökleri) herhangi bir kısmını tanıma 6 μm bölümlere değiştirin ve önceki bölüme göre kesme açısını değiştirin.
      1. Örneğin, önceki bölümde taç ancak kökleri dahil, böylece kökleri bıçak daha yakın gelir ve taç geri gider mikrotome bloğunun açısını değiştirmek (diş parçaları blok kendisi üzerinde çıplak bir göz ile tanınabilir).
      2. Koronal ve radiküler Selüloz ve apikal foramen gibi sagittal bölümler elde edene kadar açısını ayarlamaya devam edin. Bu yönde, mümkün olduğunca çok sayıda dilim olarak kesilmiş, ilgili doku tüm kesilir kadar.
    5. Boyama protokolleri (örn., hemotoxylin ve Eosin boyama (H & e), kahverengi & Brenn boyama, tartrat dirençli asit fosfataz (tuzak) boyama, immünhistokimya), bkz.20,21.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deneysel adımların akış çizelgesi Şekil 1' de sunulmuştur. Protokolde belirtildiği gibi, fareler anestezize edilir, ve bir tarafta ilk mandibular molar hamuru pozlama kadar delinmiş, kontralateral diş bir kontrol olarak bırakılır iken. Ardından, dişler 42 gün boyunca oral Flora tarafından kontamine edilir, bunlar izlenen ve ağrı kesici alır. 42 gün sonra fareler ötenize edilir ve diş ve bitişik çene analizi için alınır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Farelerde apikal periodontitis indüksiyonu için burada bir yöntem tanıtıldı. Yöntemin amacı, bu inflamatuar sürecin mekanizmaları ve sonuçlarını incelemek için apikal periodontitis koşulunu yararlanmasıdır. Apical periodontitis 6-8 hafta eski fareler, kökleri tamamen24geliştirilen bir yaş indüklenen oldu. Bu modelde apikal periodontitis neden için, fare mandibular azı diş hamuru bir diş Burr kullanılarak maruz kalır. Fareler (SPF koşullarında) oral floradan bakteriler diş hamuru ve kö...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar açıklamak için hiçbir şey var

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dr. kanlı Heyman 'a hayvan konumlandırma, Raphael Lieber ile birlikte mikro-CT analizinde yardım için ve Prof. Andiara de Rossi Daldegan 'ın deney öncesi konusunda tavsiyelerde bulunmasını istiyoruz. Biz de kritik okuma ve düzenleme için Dr Sidney Cohen kabul etmek istiyorum.

Bu çalışma, Dr. ızador ı. Cabakoff araştırma Bağış Fonu 'ndan MK ve IA 'ya bir hibe ve Israil bilim ve Teknoloji Bakanlığı 'ndan ÖRNEĞIN Yitzhak Navon bursu ile destekleniyordu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Atipamezol hidroklorürEurovet Hayvan SağlığıCAS 104075-48-1
ATRdentsplytecnika
engelleme makinesiLeicaEG1150H
buprenorfinvetmarket163451
klinik mikroskop/dürbünOlympusSz61
diş burKomet dişZR8801L 315 008
diş spatulasıPremier1003737
EDTAJ.T Baker8993
entelancıva1.07961
Eozin Y çözeltisi, alkolikSIGMAHT110116
hematoksilen çözeltisi, Mayer'inSIGMAMHS 16
Ketamin hidroklorürVetoquinolCAS 1867-669
Medetomidin hidroklorür (cepetor)CP-pharma GmbHCAS 86347-15-1
Mepivakain HCl% 3TevaCAS 96-88-8
mikro fırçalar - ayarlanabilir hassas aplikatörlerPARKELLS379
mikro-ct tarayıcıscancouCT 40
parafinLeica39602004
PBSSIGMAD8537
PFAEMS15710
Kloramfenikol göz merhemi (% 5)Rekah ilaçCAS 56-75-7
cımbızWAMRef-CT
ksilazinEurovet Hayvan SağlığıCAS 7361-61-7
ksilenGadotCAS 1330-20-7

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Azuma, M. M., Samuel, R. O., Gomes-Filho, J. E., Dezan-Junior, E., Cintra, L. T. The role of IL-6 on apical periodontitis: a systematic review. International Endodontics Journal. 47 (7), 615-621 (2014).
  2. Marton, I. J., Kiss, C. Overlapping protective and destructive regulatory pathways in apical periodontitis. Journal of Endodontics. 40 (2), 155-163 (2014).
  3. Graunaite, I., Lodiene, G., Maciulskiene, V. Pathogenesis of apical periodontitis: a literature review. Journal of Oral and Maxillofacial Research. 2 (4), e1(2012).
  4. Hussein, F. E., Liew, A. K., Ramlee, R. A., Abdullah, D., Chong, B. S. Factors Associated with Apical Periodontitis: A Multilevel Analysis. Journal of Endodontics. 42 (10), 1441-1445 (2016).
  5. Takahashi, K., MacDonald, D. G., Kinane, D. F. Analysis of immunoglobulin-synthesizing cells in human dental periapical lesions by in situ hybridization and immunohistochemistry. Journal of Oral Pathology Medicine. 25 (6), 331-335 (1996).
  6. Lin, D., et al. Enterococcus faecalis lipoteichoic acid regulates macrophages autophagy via PI3K/Akt/mTOR pathway. Biochemical and Biophysical Research Community. 498 (4), 1028-1036 (2018).
  7. Wu, Y., Sun, H., Yang, B., Liu, X., Wang, J. 5-Lipoxygenase Knockout Aggravated Apical Periodontitis in a Murine Model. Journal of Dental Research. 97 (4), 442-450 (2018).
  8. Barreiros, D., et al. Immunohistochemical and mRNA expression of RANK, RANKL, OPG, TLR2 and MyD88 during apical periodontitis progression in mice. Journal of Applied Oral Science. 26, e20170512(2018).
  9. Barreiros, D., et al. MMP2 and MMP9 are Associated with Apical Periodontitis Progression and Might be Modulated by TLR2 and MyD88. Brazillian Dentistry Journal. 29 (1), 43-47 (2018).
  10. Virtej, A., Papadakou, P., Sasaki, H., Bletsa, A., Berggreen, E. VEGFR-2 reduces while combined VEGFR-2 and -3 signaling increases inflammation in apical periodontitis. Journal of Oral Microbiology. 8, 32433(2016).
  11. De Rossi, A., et al. Cementocytes Express Receptor Activator of the Nuclear Factor Kappa-B Ligand in Response to Endodontic Infection in Mice. Journal of Endodontics. 42 (8), 1251-1257 (2016).
  12. Rider, D., et al. Elevated CD14 (Cluster of Differentiation 14) and Toll-Like Receptor (TLR) 4 Signaling Deteriorate Periapical Inflammation in TLR2 Deficient Mice. Anatomy Records (Hoboken). 299 (9), 1281-1292 (2016).
  13. Martins, C. M., Sasaki, H., Hirai, K., Andrada, A. C., Gomes-Filho, J. E. Relationship between hypertension and periapical lesion: an in vitro and in vivo study. Brazillian Oral Research. 30 (1), e78(2016).
  14. Rao, N. J., Wang, J. Y., Yu, R. Q., Leung, Y. Y., Zheng, L. W. Role of Periapical Diseases in Medication-Related Osteonecrosis of the Jaws. Biomedical Research International. 2017, 1560175(2017).
  15. Song, M., et al. Preexisting Periapical Inflammatory Condition Exacerbates Tooth Extraction-induced Bisphosphonate-related Osteonecrosis of the Jaw Lesions in Mice. Journal of Endodontics. 42 (11), 1641-1646 (2016).
  16. Wu, Y., et al. Hypoxic Preconditioning Enhances Dental Pulp Stem Cell Therapy for Infection-Caused Bone Destruction. Tissue Engineering Part A. 22 (19-20), 1191-1203 (2016).
  17. Eichele, D. D., Kharbanda, K. K. Dextran sodium sulfate colitis murine model: An indispensable tool for advancing our understanding of inflammatory bowel diseases pathogenesis. World Journal of Gastroenterology. 23 (33), 6016-6029 (2017).
  18. Choudhary, N., Bhatt, L. K., Prabhavalkar, K. S. Experimental animal models for rheumatoid arthritis. Immunopharmacology and Immunotoxicology. 40 (3), 193-200 (2018).
  19. Shah, A., et al. Clastic cells are absent around the root surface in pulp-exposed periapical periodontitis lesions in mice. Oral Disease. 24 (1-2), 57-62 (2018).
  20. Wan, C., et al. MMP9 deficiency increased the size of experimentally induced apical periodontitis. Journal of Endodontics. 40 (5), 658-664 (2014).
  21. Bezerra da Silva, R. A., et al. MyD88 knockout mice develop initial enlarged periapical lesions with increased numbers of neutrophils. International Endod Journal. 47 (7), 675-686 (2014).
  22. Mehrazarin, S., Alshaikh, A., Kang, M. K. Molecular Mechanisms of Apical Periodontitis: Emerging Role of Epigenetic Regulators. Dental Clinics of North America. 61 (1), 17-35 (2017).
  23. Metzger, Z. Macrophages in periapical lesions. Endodontics Dentisrty and Traumatology. 16 (1), 1-8 (2000).
  24. Lungova, V., et al. Tooth-bone morphogenesis during postnatal stages of mouse first molar development. Journal of Anatomy. 218 (6), 699-716 (2011).
  25. Zilberstein, L. F., Moens, Y. P., Leterrier, E. The effect of local anaesthesia on anaesthetic requirements for feline ovariectomy. Veterinary Journal. 178 (2), 214-218 (2008).
  26. Kaufman, E., Epstein, J. B., Gorsky, M., Jackson, D. L., Kadari, A. Preemptive analgesia and local anesthesia as a supplement to general anesthesia: a review. Anesthesia Progress. 52 (1), 29-38 (2005).
  27. Song, M., et al. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. Journal of Visual Experimentalization. (119), (2017).
  28. Yoneda, N., et al. Development of a root canal treatment model in the rat. Scientific Reports. 7 (1), 3315(2017).
  29. AlShwaimi, E., et al. Regulatory T cells in mouse periapical lesions. Journal of Endodontics. 35 (9), 1229-1233 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Apical PeriodontitisMouse ModelPulp ExposurePeriapical InflammationMicro CT ImagingHistological StainingImmunohistochemistryBone ResorptionDental Pulp NecrosisJaw Tissue Analysis

İlgili makaleler