Kronik Salmonella EnfeksiyonuNa Bağlı Bağırsak Fibrozisi

Özet

Bu protokol, transmural inflamasyon ve fibrozis de dahil olmak üzere Crohn hastalığının önemli patolojik işaretleri benzer Salmonella tahrikli bağırsak fibrozis bir fare modeli açıklar. Bu yöntem, C57Bl/6 genetik arka planda tutulan mutant fareler kullanılarak fibrotik sonuçları değiştiren konak faktörlerinin değerlendirilmesi için kullanılabilir.

Özet

Kollajen gibi ekstrasellüler matriksin patolojik birikimi ile karakterize doku fibrozisi kalıcı inflamasyon ve disregulated onarım Sonucudur. İnflamatuar barsak hastalığında (İBH) fibrozis, cerrahi rezeksiyon dışında etkili bir tedavi nin olmadığı tekrarlayan darlık oluşumlarına yol açar. Geç başlangıcı nedeniyle, fibrozis sürücü süreçleri daha az çalışılır ve büyük ölçüde bilinmemektedir. Bu nedenle, fibrotik komplikasyonlar IBD önemli bir sorun temsil eder. Bu protokolde, streptomisin in vivo modeli nde C57Bl/6 farelerinin streptomisin ön tedavisi ve ardından aşı sınıfı Salmonella Typhimurium ΔAroA mutantmutantının kalıcı patojen kolonizasyonuna yol açtığı ve çekum fibrozis. S. hazırlanması için metodolojiler. Timülasyon için Tiphimurium ΔAroA, çekum ve dalaktaki patojen yüklerinin ölçülmesi ve bağırsak dokularında kollajen birikiminin değerlendirilmesi açıklanmıştır. Bu deneysel hastalık modeli ya geliştirmek veya CD benzeri bağırsak fibrozis iliklerine ev sahibi faktörleri incelemek için yararlıdır.

Giriş

Ülseratif kolit (UC) ve Crohn hastalığı (CD) IBD'nin iki ana formudur ve gastrointestinal sistem ^1,2kronik ve nüks eden inflamatuar bozukluklar olarak karakterizedir. Bu bozukluklar hastaların yaşam kalitesi üzerinde önemli bir etkiye sahiptir. IBD belirtileri karın ağrısı dahil, ishal, mide bulantısı, kilo kaybı, ateş, ve yorgunluk³. Son çalışmalar, hastalık patogenezine katkıda bulunan genetik ve çevresel faktörleri belirlemiş; bu tür risk faktörlerinin, luminal antijenlerin translokasyonu veya aşırı örneklemesi ile sonuçlanan epitelyal bariyerin bozulmasına katkıda bulunduğu düşünülm....

Protokol

Tüm hayvan protokolleri British Columbia Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylandı.

1. Salmonella Typhimurium ΔAroA kültürlerinin farelerin oral gavajı için hazırlanması

1. Dondurulmuş gliserol stoğundan. Typhimurium ΔAroA, steril aşılama halkası ile 100 μg/mL streptomisin içeren LB agar kullanarak bir çizgi plaka hazırlayın. Bir gecede 37 °C'de kuluçkaya yatırın. Çizgi plakaları 4 °C'de bir haftaya kadar saklanabilir.
2. Enfeksiyondan bir gün önce, 2,5 mL suda 0,5 g streptomisin eriterek antibiyotik hazırlayın. Streptomisin çözeltisini sterilize ettikten sonra, orjen olarak fareleri ampul uçlu ....

Sonuçlar

Streptomisin tedavisi nin ardından S. ile oral enfeksiyon Typhimurium ΔAroA özellikle çekumda sağlam bağırsak iltihabı ve fibrozise yol açar (Şekil 1). Tipik patojen yükleri 1 g çekum başına 10⁸ ila 10⁹ CFU ve 1 g dalak başına 10⁴ CFU enfekte hayvanlardan kurtarılabilir(Şekil 2). Pikrosirius kırmızı lekeli çekal kesitlerinde fibrozisin değerlendirilmesi enfeksiyondan 21 gün sonra pik fibrozisi gösterirken patolojinin büy.......

Tartışma

IBD patogenezini anlamamız, bağırsak iltihabının fare modelleri ile büyük ölçüde geliştirilmiştir. Bu tür bireysel modeller karmaşık ve multifaktöriyel insan hastalığının tüm özelliklerini özetlemese de, hastalığın ilerlemesinin temel özelliklerini belirlemede yararlı olmuştur. Mevcut tedaviler hastalık gelişimini tersine çevirmede etkisiz olduğundan, IBD ile ilişkili fibrotik darlıklar karşılanmamış önemli bir klinik ihtiyaç olmaya devam etmektedir. Ayrıca, bağırsak fibrozismevcut hayvan modellerinde sınırlamalar nedeni.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
2 ml yuvarlak alt güvenli kilit tüpleri	Eppendorf	22363344
Paslanmaz çelik boncuklar	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Büyük Delikli Pipet	Uçları Fisher	2707134
2 mL megablok plakalar	Sarstedt	82.1972.002
Gavaj iğneleri	FST	18061-22
Streptomisin sülfat	Sigma	S9137
Mikser değirmeni	Retsch	MM