Yöntem makalesi

Dimethylbenz[a]Anthracene ve 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Asetat (DMBA-TPA) Kullanarak Kimyasal Kaynaklı Cilt Karsinogenez Modeli

DOI:

10.3791/60445

⸱

19 Aralık 2019

 ,  ,  ,  , 
1Faculty of Medicine and Health Technology, Tampere University and Tampere University Hospital, 2Department of Clinical Microbiology, Fimlab Laboratories

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İki aşamalı deri karsinogenezi topikal olarak uygulanan iki kimyasal tarafından indüklenir. Bir mutajen 7,12-dimethylbenz[a]anthracene) epidermal hücrelerde mutasyonlara neden olur ve genel büyüme uyarıcı sürekli bir uygulama 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-asetat cilt papilloma oluşumunu hızlandırır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kanser en yıkıcı insan hastalıklarından biridir. Deneysel kanser modelleri tümör ilerlemesini teşvik farklı hücre tipleri ve genlerin karmaşık etkileşim ilerler ve farklı terapötik yaklaşımların etkinliğini test etmek için bir platform sağlamak için önemlidir. En sık kullanılan deneysel inflamatuar kanser modellerinden biri DMBA-TPA iki aşamalı cilt karsinogenez modelidir. Tümör oluşumu bu modelde iki farklı kimyasalın topikal uygulaması ile indüklenir, 7,12-dimethylbenz[a]antracen (DMBA) ve 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-asetat (TPA), birlikte deride papilloma oluşumuna neden. Birincil sonuç deride papilloma oluşumu olduğu gibi, model hem tümör inisiyasyonu (tümörsüz sağkalım) ve tümör ilerlemesi (görünür tümörlerin sayısı ve boyutu) ele almak için ideal, güvenilir ve tekrarlanabilir bir yoldur. DMBA-TPA tedavisinin etkileri inflamatuar bir mekanizma ile iletilir, bu da bu modeli özellikle tümör oluşumunda bağışıklık sisteminin rolünü incelemek için uygun hale getirir. Ancak, bu model cilt ve kimyasallar üzerinde uygulanabilir diğer yüzeyler ile sınırlıdır. Modeli başarıyla kullanmak için bu makalede ayrıntılı bir protokol sağlanmıştır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kanser dünyada önde gelen ölüm nedenlerinden biridir. Bu nedenle, hastalığın daha iyi anlaşılması ve potansiyel tedavi yaklaşımlarının araştırılması için güvenilir deneysel hastalık modelleri geliştirilmesi talebi vardır. Cilt kanseri gelişimini incelemek için en sık kullanılan deneysel in vivo modellerinden biri kimyasal olarak indüklenen iki aşamalı cilt karsinogenez modeli1,2. Model, bağışıklık hücresi infiltrasyonu ve anjiyogenez gibi belirli olaylara ek olarak tümör inisiyasyonu, promosyon ve ilerleme yi incelemek için bir araç sağlar.

İki aşamalı deri karsinogenez modelini kul....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada açıklanan protokol Finlandiya Ulusal Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (protokol numarası ESAVI/23659/2018).

1. Deneysel Hayvanlar, Reaktifler ve Ekipmanlar

  1. Yaş ve cinsiyet uyumlu fareler kullanın. Çalışmaya 7-9 haftalık bir yaşta başlayın, çünkü çoğu faredeki deri 2yaşcivarında telogen (dinlenme aşamasında) dır.
  2. Çalışma sırasında hayvanların davranışlarını gözlemleyin ve genellikle erkeklerle olan kavga ederlerse, onları ayrı ayrı barındırın. Kavgalar tümör oluşumunu teşvik deride kesikler neden olabilir. Dişi fareler daha az agresif davranışları nedeniyle tercih edilir. Tipik ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ana sonuç tedavi veya genotip grupları arasında sağkalım (yani, papilloma serbest) zaman. İkincil sonuç her grupta haftada papillom sayısıdır(Şekil 2). Beklenen sonuçlar papilloma serbest zaman ve deneysel (iki veya daha fazla) gruplar arasında papillom sayısı istatistiksel olarak anlamlı bir fark vardır. Papillomların sayısını saymak ve promosyon (TPA) aşamasında bir eğri çizmek için bu aşamada gruplar arasındaki farklar hakkında bir fikir edinilmesi önerilir. Deneyi çok erken sonlandırmak .......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DMBA-TPA'ya bağlı cilt kanseri, son derece tekrarlanabilir olduğu ve inisiyasyondan maligniteye kadar tümör ilerlemesi hakkında bilgi verdiği için en sık kullanılan kanser modellerinden biridir. Anahtar sonuç ölçüsü, papilloma oluşumu, kolay ve güvenilir nicel. Model hem tümör inisiyasyonu (tümörsüz sağkalım) hem de progresyon (tümör sayıları ve boyutları) ile eş zamanlı olarak ele alılır. Model farklı bileşiklerin incelenmesi için uygundur, potansiyel terapötik gibi, ve genetik olarak değiştirilmiş hayvanlarda tümör ile.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Finlandiya Akademisi (25013080481 ve 25013142041 (I.J.), 286377 ve 295814 (M.P.), 287907 (T.J.),Päivikki ve Sakari Sohlberg Vakfı (M.P., T.J.), Finlandiya Tıp Vakfı (T.P.), Rekabetçi Devlet Araştırması Tampere Üniversitesi Hastanesi Uzman Sorumluluk Alanının Finansmanı (hibe 9V049 ve 9X044 (M.P.), 9X011 ve 9V010 (T.J.)), Fimlab Laboratuvarları Uzman Sorumluluk Alanının Rekabetçi Devlet Araştırma Finansmanı (grant X51409 (I.J.)), Tays Destek Vakfı (I.J., M.P., T.J.), Tampere Tüberküloz Vakfı (I.J., M.P., T.J.), Finlandiya Kültür Vakfı (M.V.), Paulo Vakfı (T.P.), Finlandiya Kanser Derneği (M.P.) ve Emil Aaltonen Vakfı (T.P.).

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1000 ul RPT XL Dereceli Filtre Ucu (Steril),Dolum StarlabS1182-1730-C
300 ul RTP Dereceli Filtre Ucu (steril), DolumStarlabS1180-9710-C
7,12-Dimetilbenz[a]antrasen (DMBA)SigmaD3254-100MGYutulması halinde zararlıdır ve kansere neden olabilir. Işıktan korunarak saklayın.
AsetonSigma1000141011hızla buharlaşır ve yanıcıdır.
Attane vet 1000 mg/gPiramal Critical Care LimitedSoluma için sıvı izofluran
Pille Çalışan Kesme Makinesi IsisAlbert Kerlb GmbHGT421Kürkü tıraş etmek için
CONTRAfluran-RestgasfilterZeoSys GmbHAnestezi için
Linex Nature N1030 Cetvel 30 cmZımba İş Avantajı60383Papillomları
ölçmek içinOrta CO2 Odası 300 x 200 x 200mm - RedVetTech Solutions LtdAN045ARKurbanlık için
MekasoftMekalasi23008Masa örtüsü
Fareler (Balb/c JRj)Janvier labsDiğer türler de mümkündür
Fareler (C57BL/6JRj)Janvier labsDiğer türler de mümkündür
Panasonic Lumix DMC-FS5 Dijital Fotoğraf MakinesiPanasonic
ParaformaldehitMerck30525-89-4Histoloji örnekleri için
Phorbol 12-miristat 13-asetat aka 12-Otetradekanoilforbol-13-asetat (TPA)EnzoBML-PE160-0001
Hassas terazi PLJ-C/PLJ-GKERN & SOHN GmbHPLJ 600-3CM
Ön Ayarlı CO2 Sistemi-2 Oda-S/S MuhafazaVetTech Solutions LtdAN044BXKurban
RNAlaterQiagen76104Nükleik asit örnekleri için
Tacta pipet 100-1000 ulSartoriusLH-729070
Tacta pipet 20-200 ulSartoriusLH-729060
UNO Anestezik Anahtar DolguScintica enstrümantasyon a.ş.Anestezi için
Scintica enstrümantasyonu inc.için UNO Yüz MaskesiAnestezi için
UNO FM2200 Akış ölçerScintica enstrümantasyon inc.Anestezi için
UNO Gaz Egzoz Ünitesi,Scintica enstrümantasyon a.ş.Anestezi için
UNO İndüksiyon KutusuScintica enstrümantasyon inc.Anestezi
için UNO200VAP BuharlaştırıcıScintica enstrümantasyon inc.Anestezi için
, Fare , inc.: , : :

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. DiGiovanni, J. Multistage carcinogenesis in mouse skin. Pharmacology & Therapeutics. 54 (1), 63-128 (1992).
  2. Abel, E. L., Angel, J. M., Kiguchi, K., DiGiovanni, J. Multi-stage chemical carcinogenesis in mouse skin: fundamentals and applications. Nature Protocols.....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

DMBA TPA ModeliT m r Ba lang cT m r ProgresyonuPapillom Olu umumm nohistokimyaAk SitometrisiGen Ekspresyon AnaliziProtein AnaliziG venlik nlemleri

İlgili makaleler