Tavuk koryoallantoik membran modelini jinekolojik ve ürolojik kanser hücre hatlarının ve hasta kaynaklı tümörlerin engraftment için alternatif, nakledilebilir, in vivo modeli olarak sıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Jinekolojik ve Ürolojik Kanserleri Incelemek Için Vivo Modelinde Tavuk Chorioallantoic Membran Kullanma
Bu makalede
Özet
Özet
Fare modelleri in vivo kanser çalışmaları için kriter testleri dir. Ancak, maliyet, zaman, ve etik hususlar alternatif in vivo kanser modelleri için çağrılara yol açmıştır. Tavuk koryoallantoik membran (CAM) modeli tümör gelişiminin doğrudan görselleştirilmesine izin veren ve in vivo görüntüleme için uygun olan ucuz, hızlı bir alternatif sağlar. Bu nedenle, jinekolojik ve ürolojik tümörlerin bu modele engrafting için optimize edilmiş bir protokol geliştirmeye çalıştık, burada sunduğumuz. Yaklaşık 7 gün sonra döllenme sonrası, hava hücresi yumurtanın vaskülarize tarafına taşınır ve kabukta bir açıklık oluşur. Daha sonra murine ve insan hücre hatları ve primer dokulardan tümörler engrafted olabilir. Bu genellikle hücre dışı matris ve orta hücresel dağılım önlemek ve hücreler bir vasküler kaynağı işe kadar besin desteği sağlamak için bir karışımı tohumlu vardır. Tümörler yumurtadan çıkmadan 14 gün öncesine kadar büyüyebilir. Ateş böceği luciferase ile transeksif hücreleri yerleştirerek, biyolüminesans görüntüleme membran ve kanser hücresi embriyo yayılmış tümör büyüme hassas tespiti için kullanılabilir. Bu model potansiyel tümörijenite, invazyon, metastaz ve terapötik etkinliğini incelemek için kullanılabilir. Tavuk CAM modeli geleneksel murine modelleri ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha az zaman ve mali kaynaklar gerektirir. Yumurtalar bağışıklık sistemi zayıf ve bağışıklık toleranslı olduğundan, herhangi bir organizmanın dokuları potansiyel olarak insan dokularının implantasyonu için gerekli pahalı transgenik hayvanlar (örneğin, fareler) olmadan implante edilebilir. Ancak, Bu modelin avantajları nın çoğu potansiyel olarak da sınırlamalar olabilir, kısa tümör üretimi süresi ve immün/immün toleranslı durum da dahil olmak üzere. Ayrıca, tavuk koryoallantoik membran modelinde burada engraft sunulan tüm tümör tipleri rağmen, tümör büyüme değişen derecelerde bunu.
Giriş
Fareler malignite de dahil olmak üzere insan hastalıklarının incelenmesi için klasik model organizma olarak hizmet vermiştir. Memeliler olarak, insanlarla birçok benzerlikleri vardır. Genetik benzerlik onların yüksek derecede insan hastalıklarının genetik kontrolü içine büyük bir fikir sağlamak için fare genomunun transgenik manipülasyon izin verdi1. Farelerin kullanımı ve deneyleri konusunda geniş deneyim, biyomedikal araştırmalar için tercih edilen model olmalarına yol açmıştır. Ancak, murine modelleri ile ilgili etik ve bilimsel endişelere ek olarak, onlar da oldukça pahalı ve zaman alıcı olabilir2,
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada sunulan tüm deneyler Kaliforniya Üniversitesi, Los Angeles (UCLA) tarafından gözden geçirildi ve onaylandı. Deidentified, primer insan tümörlerinin kullanımı UCLA Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır (Protokol numaraları 17-000037, 17-001169 ve 11-001363). UCLA anda, Hayvan Araştırma Komitesi inceleme tavuk embriyoları kullanarak deneyler için gerekli değildir; protokol onayı sadece yumurtadan çıktığında gereklidir. Ancak, hayvanların ötenazi için AVMA Yönergeleri gibi en iyi uygulamalar, etik tavuk embriyoları işlemek ve mümkün olduğunca ağrı önlemek için kullanılmıştır. Araştırmacılar CAM modelleri kullanarak çalışmalar başlamadan önce kendi kuru....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şimdiye kadar, biz yumurtalık, böbrek, prostat ve mesane kanserleri için başarılı olması implantasyon bu yöntemi bulduk. Her biri implantasyon için belirli koşulları belirlemek için optimize edilse de, esneklik olabilir. Test edilen tümör tiplerinden yumurtalık kanseri büyümesi çok daha az belirgindi ve genellikle biyolüminesans görüntüleme yardımı olmadan görülemese de(Şekil 1). Ancak, CAM sertleşme implantasyon alanında forceps ile hissedilebilir. Bu biyolü.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
CAM modeli kullanılarak tümör genişlemesi ve engraftment in vivo hayvan modelleri mevcut daha hızlı ve doğrudan gözlemlenebilir tümör büyümesi sağlar. Buna ek olarak, özellikle bağışıklık sistemi zayıf farelerin maliyeti ile karşılaştırıldığında, ekipman ilk satın alma tamamlandıktan sonra maliyetleri önemli ölçüde daha düşüktür. Tavuk embriyolarının ilk, bağışıklık sistemi kolayca insan ve murin dokusunun engraftment izin verir. Bu güçlü olsa bile, CAM modeli sınırlamaları var. Uzun süreli tedavi çalışmaları garanti edi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Yazarlar dr Fuyuhiko Tamanoi ve Binh Vu bu yöntem üzerinde ilk eğitim için teşekkür etmek istiyorum. Dr. Eva Koziolek ile yapılan görüşmeler bu yaklaşımın optimizasyonunda etkili olmuştur ve çok beğenilmiştir. Bu çalışma aşağıdaki kaynaklardan kaynak olmadan mümkün olmazdı: Tütün Ile İlgili Hastalık Araştırma Programı Doktora Sonrası Bursu (27FT-0023, ACS), Savunma Bakanlığı (DoD) Yumurtalık Kanseri Araştırma Programı (W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH (1R21CA216770), Tütünle İlgili Hastalık Araştırma Programı Yüksek Etki Pilot Ödülü (27IR-0016) ve UCLA kurumsal desteği, JCCC Tohum Hibesi (NCI/NIH P30CA016042) ve LW Araştırma Başkan Yardımcısı Ofisinden 3R Grant dahil.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| -010 Teflon (PTFE) Beyaz 55 Duro Shore D O-Ringler | O-Ring Store | TEF010 | Hücre tohumlama için yapışmaz halka. 1/4 "ID X 3/8" OD X 1/16 "CS Politetrafloroetilen (PTFE). |
| C4-2 | ATCC | CRL-3314 | İnsan prostat kanseri hücre hattı. |
| CWR22Rv1 | CWR hücreleri, Dr. David Agus'un (Güney Kaliforniya Üniversitesi Keck Tıbbı) | ||
| Sitokeratin 8/18 Antikoru (C-51) | Novus Biologicals | NBP2-44929-0.02mg | İnsan yumurtalık CAM tümörlerinin immünohistokimyasal analizi için 1:100 oranında seyreltmede kullanılır. |
| D-Luciferin Ateşböceği, potasyum tuzu | Goldbio | LUCK-1G | |
| Hassas Ameliyat Makası; Kıvrımlı; keskin-keskin; 30 mm bıçak uzunluğu; 4-3/4 inç Toplam Uzunluk | Roboz Cerrahi | RS6703 | Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer herhangi bir kavisli makas da işe yarayacaktır. |
| Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Alet Kiti | Dremel | 8050-N/18 | Bu kit gerekli tüm aletleri içerir. |
| Döllenmiş tavuk yumurtası (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade) | AA Lab Eggs Inc. | N/A | Yerel bir yumurta tedarikçisinin tanımlanması gerekecektir, çünkü bu tedarikçi yalnızca bölgesel olarak teslimat yapar. |
| HT-1376 | ATCC | CRL-1472 | İnsan mesane kanseri hücre hattı. |
| Hovabator Genesis 1588 Deluxe Yumurta Kuluçka Makinesi Combo Kit | Kuluçka Ambarı | HB1588D-YOK-1102-1588-1357 | Diğer yumurta kuluçka makineleri kullanılabilir, ancak güvenilirliklerinin doğrulanması gerekir. İmplantasyondan sonra, CO2 devre dışı bırakılmış bir hücre inkübatörü de kullanılabilir. |
| ID8 | Ticari olarak mevcut değildir, lütfen PMID: 10753190'ye bakın. | ||
| Incu-Bright Cool Light Yumurta Candler | Kuluçka Ambarı | 1102 | Diğer mumcular da kullanılabilir; Ancak, test ettiklerimiz arasında bu tercih edilir. Bu mumcu, yukarıda belirtilen inkübatör kitine dahildir. |
| İris Forseps, 10cm, Kavisli, Tırtıklı, 0.8mm uçlar | Dünya Hassas Aleti | 15915 | Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer kavisli forsepsler de işe yarayacaktır. Bu yöntem için birden fazla marka kullanılmıştır. |
| Isofluran | Kesme Makinesi | , Dağıtma 0010250 | |
| IVIS Lumina II, In Vivo Görüntüleme Sistemi | , Perkin, Elmer, | ||
| Matrigel, Membran, Matris, HC; LDEV-Free | Corning | 354248 | Hücre dışı matris çözeltisi |
| MyC-CaP | ATCC | CRL-3255 | Murin prostat kanseri hücre hattı. |
| Taşınabilir Pipet Yardımı XP Pipet Kontrol Cihazı | Drummond Scientific | 4-000-101 | Benzer herhangi bir pipet kontrol cihazı uygun olacaktır. |
| PrecisionGlide Hipodermik İğneler | BD | 305196 | Bu bir örnek olarak verilmiştir. Herhangi bir 18G iğne benzer şekilde çalışır. |
| RENCA | ATCC | CRL-2947 | |
| Semken Forseps | Güzel Bilim Araçları | 11008-13 | Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer herhangi bir forseps veya araştırmacının tercihine uygun başka bir stil uygun olacaktır. |
| SKOV3 | ATCC | HTB-77 | İnsan yumurtalık kanseri hücre hattı. |
| Numune forseps | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 72914 | Bu bir örnek olarak verilmiştir. Biyolüminesans görüntüleme için kabuğu çıkarmak için kullanılan forseps, 3 mm genişliğinde uçlar ile yaklaşık 12,8 cm uzunluğundadır. |
| Steril Pamuk Topları | Fisherbrand | 22-456-885 | Bu örnek olarak verilmiştir. Herhangi bir steril pamuk topu yeterli olacaktır. |
| Lastik ile Karıştırma Çubukları Policeman; 5 mm çap, 6 inç uzunluk | United Scientific Supplies | GRPL06 | Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer herhangi bir cam karıştırma çubuğu da işe yarayacaktır. |
| T24 | ATCC | HTB-4 | İnsan mesane kanseri hücre hattı. |
| Tegaderm Şeffaf Pansuman Orijinal Çerçeve Stili 2 3/8" x 2 3/4" | Moore Medical | 21272 | |
| Doku Kültürü Kapları, 10 cm çapında | Corning | 353803 | Bu örnek olarak verilmiştir. Benzer, steril 10 cm'lik bir tabak kullanılabilir. Doku kültürü tedavisi gerekli değildir. |
| Tygon Clear Laboratuvar Tüpü - 1/4 x 3/8 x 1/16 duvar (50 fit) | Tygon | AACUN017 | Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer büyüklükteki herhangi bir boru da işe yarayacaktır. |
Kaynaklar
- Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine. EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).
- Jackson, S. J., Thomas, G. J. Human tissue models in ca....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
