Jinekolojik ve Ürolojik Kanserleri Incelemek Için Vivo Modelinde Tavuk Chorioallantoic Membran Kullanma

Summary

Tavuk koryoallantoik membran modelini jinekolojik ve ürolojik kanser hücre hatlarının ve hasta kaynaklı tümörlerin engraftment için alternatif, nakledilebilir, in vivo modeli olarak sıyoruz.

Abstract

Fare modelleri in vivo kanser çalışmaları için kriter testleri dir. Ancak, maliyet, zaman, ve etik hususlar alternatif in vivo kanser modelleri için çağrılara yol açmıştır. Tavuk koryoallantoik membran (CAM) modeli tümör gelişiminin doğrudan görselleştirilmesine izin veren ve in vivo görüntüleme için uygun olan ucuz, hızlı bir alternatif sağlar. Bu nedenle, jinekolojik ve ürolojik tümörlerin bu modele engrafting için optimize edilmiş bir protokol geliştirmeye çalıştık, burada sunduğumuz. Yaklaşık 7 gün sonra döllenme sonrası, hava hücresi yumurtanın vaskülarize tarafına taşınır ve kabukta bir açıklık oluşur. Daha sonra murine ve insan hücre hatları ve primer dokulardan tümörler engrafted olabilir. Bu genellikle hücre dışı matris ve orta hücresel dağılım önlemek ve hücreler bir vasküler kaynağı işe kadar besin desteği sağlamak için bir karışımı tohumlu vardır. Tümörler yumurtadan çıkmadan 14 gün öncesine kadar büyüyebilir. Ateş böceği luciferase ile transeksif hücreleri yerleştirerek, biyolüminesans görüntüleme membran ve kanser hücresi embriyo yayılmış tümör büyüme hassas tespiti için kullanılabilir. Bu model potansiyel tümörijenite, invazyon, metastaz ve terapötik etkinliğini incelemek için kullanılabilir. Tavuk CAM modeli geleneksel murine modelleri ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha az zaman ve mali kaynaklar gerektirir. Yumurtalar bağışıklık sistemi zayıf ve bağışıklık toleranslı olduğundan, herhangi bir organizmanın dokuları potansiyel olarak insan dokularının implantasyonu için gerekli pahalı transgenik hayvanlar (örneğin, fareler) olmadan implante edilebilir. Ancak, Bu modelin avantajları nın çoğu potansiyel olarak da sınırlamalar olabilir, kısa tümör üretimi süresi ve immün/immün toleranslı durum da dahil olmak üzere. Ayrıca, tavuk koryoallantoik membran modelinde burada engraft sunulan tüm tümör tipleri rağmen, tümör büyüme değişen derecelerde bunu.

Introduction

Fareler malignite de dahil olmak üzere insan hastalıklarının incelenmesi için klasik model organizma olarak hizmet vermiştir. Memeliler olarak, insanlarla birçok benzerlikleri vardır. Genetik benzerlik onların yüksek derecede insan hastalıklarının genetik kontrolü içine büyük bir fikir sağlamak için fare genomunun transgenik manipülasyon izin verdi^1. Farelerin kullanımı ve deneyleri konusunda geniş deneyim, biyomedikal araştırmalar için tercih edilen model olmalarına yol açmıştır. Ancak, murine modelleri ile ilgili etik ve bilimsel endişelere ek olarak, onlar da oldukça pahalı ve zaman alıcı olabilir^2,

Protocol

Burada sunulan tüm deneyler Kaliforniya Üniversitesi, Los Angeles (UCLA) tarafından gözden geçirildi ve onaylandı. Deidentified, primer insan tümörlerinin kullanımı UCLA Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır (Protokol numaraları 17-000037, 17-001169 ve 11-001363). UCLA anda, Hayvan Araştırma Komitesi inceleme tavuk embriyoları kullanarak deneyler için gerekli değildir; protokol onayı sadece yumurtadan çıktığında gereklidir. Ancak, hayvanların ötenazi için AVMA Yönergeleri gibi en iyi uygulamalar, etik tavuk embriyoları işlemek ve mümkün olduğunca ağrı önlemek için kullanılmıştır. Araştırmacılar CAM modelleri kullanarak çalışmalar başlamadan önce kendi kuru....

Results

Şimdiye kadar, biz yumurtalık, böbrek, prostat ve mesane kanserleri için başarılı olması implantasyon bu yöntemi bulduk. Her biri implantasyon için belirli koşulları belirlemek için optimize edilse de, esneklik olabilir. Test edilen tümör tiplerinden yumurtalık kanseri büyümesi çok daha az belirgindi ve genellikle biyolüminesans görüntüleme yardımı olmadan görülemese de(Şekil 1). Ancak, CAM sertleşme implantasyon alanında forceps ile hissedilebilir. Bu biyolü.......

Discussion

CAM modeli kullanılarak tümör genişlemesi ve engraftment in vivo hayvan modelleri mevcut daha hızlı ve doğrudan gözlemlenebilir tümör büyümesi sağlar. Buna ek olarak, özellikle bağışıklık sistemi zayıf farelerin maliyeti ile karşılaştırıldığında, ekipman ilk satın alma tamamlandıktan sonra maliyetleri önemli ölçüde daha düşüktür. Tavuk embriyolarının ilk, bağışıklık sistemi kolayca insan ve murin dokusunun engraftment izin verir. Bu güçlü olsa bile, CAM modeli sınırlamaları var. Uzun süreli tedavi çalışmaları garanti edi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
-010 Teflon (PTFE) Beyaz 55 Duro Shore D O-Ringler	O-Ring Store	TEF010	Hücre tohumlama için yapışmaz halka. 1/4 "ID X 3/8" OD X 1/16 "CS Politetrafloroetilen (PTFE).
C4-2	ATCC	CRL-3314	İnsan prostat kanseri hücre hattı.
CWR22Rv1			CWR hücreleri, Dr. David Agus'un (Güney Kaliforniya Üniversitesi Keck Tıbbı)
Sitokeratin 8/18 Antikoru (C-51)	Novus Biologicals	NBP2-44929-0.02mg	İnsan yumurtalık CAM tümörlerinin immünohistokimyasal analizi için 1:100 oranında seyreltmede kullanılır.
D-Luciferin Ateşböceği, potasyum tuzu	Goldbio	LUCK-1G
Hassas Ameliyat Makası; Kıvrımlı; keskin-keskin; 30 mm bıçak uzunluğu; 4-3/4 inç Toplam Uzunluk	Roboz Cerrahi	RS6703	Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer herhangi bir kavisli makas da işe yarayacaktır.
Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Alet Kiti	Dremel	8050-N/18	Bu kit gerekli tüm aletleri içerir.
Döllenmiş tavuk yumurtası (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)	AA Lab Eggs Inc.	N/A	Yerel bir yumurta tedarikçisinin tanımlanması gerekecektir, çünkü bu tedarikçi yalnızca bölgesel olarak teslimat yapar.
HT-1376	ATCC	CRL-1472	İnsan mesane kanseri hücre hattı.
Hovabator Genesis 1588 Deluxe Yumurta Kuluçka Makinesi Combo Kit	Kuluçka Ambarı	HB1588D-YOK-1102-1588-1357	Diğer yumurta kuluçka makineleri kullanılabilir, ancak güvenilirliklerinin doğrulanması gerekir. İmplantasyondan sonra, CO2 devre dışı bırakılmış bir hücre inkübatörü de kullanılabilir.
ID8			Ticari olarak mevcut değildir, lütfen PMID: 10753190'ye bakın.
Incu-Bright Cool Light Yumurta Candler	Kuluçka Ambarı	1102	Diğer mumcular da kullanılabilir; Ancak, test ettiklerimiz arasında bu tercih edilir. Bu mumcu, yukarıda belirtilen inkübatör kitine dahildir.
İris Forseps, 10cm, Kavisli, Tırtıklı, 0.8mm uçlar	Dünya Hassas Aleti	15915	Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer kavisli forsepsler de işe yarayacaktır. Bu yöntem için birden fazla marka kullanılmıştır.
Isofluran	Kesme Makinesi	, Dağıtma 0010250
IVIS Lumina II, In Vivo Görüntüleme Sistemi	, Perkin, Elmer,
Matrigel, Membran, Matris, HC; LDEV-Free	Corning	354248	Hücre dışı matris çözeltisi
MyC-CaP	ATCC	CRL-3255	Murin prostat kanseri hücre hattı.
Taşınabilir Pipet Yardımı XP Pipet Kontrol Cihazı	Drummond Scientific	4-000-101	Benzer herhangi bir pipet kontrol cihazı uygun olacaktır.
PrecisionGlide Hipodermik İğneler	BD	305196	Bu bir örnek olarak verilmiştir. Herhangi bir 18G iğne benzer şekilde çalışır.
RENCA	ATCC	CRL-2947
Semken Forseps	Güzel Bilim Araçları	11008-13	Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer herhangi bir forseps veya araştırmacının tercihine uygun başka bir stil uygun olacaktır.
SKOV3	ATCC	HTB-77	İnsan yumurtalık kanseri hücre hattı.
Numune forseps	Elektron Mikroskobu Bilimleri	72914	Bu bir örnek olarak verilmiştir. Biyolüminesans görüntüleme için kabuğu çıkarmak için kullanılan forseps, 3 mm genişliğinde uçlar ile yaklaşık 12,8 cm uzunluğundadır.
Steril Pamuk Topları	Fisherbrand	22-456-885	Bu örnek olarak verilmiştir. Herhangi bir steril pamuk topu yeterli olacaktır.
Lastik ile Karıştırma Çubukları Policeman; 5 mm çap, 6 inç uzunluk	United Scientific Supplies	GRPL06	Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer herhangi bir cam karıştırma çubuğu da işe yarayacaktır.
T24	ATCC	HTB-4	İnsan mesane kanseri hücre hattı.
Tegaderm Şeffaf Pansuman Orijinal Çerçeve Stili 2 3/8" x 2 3/4"	Moore Medical	21272
Doku Kültürü Kapları, 10 cm çapında	Corning	353803	Bu örnek olarak verilmiştir. Benzer, steril 10 cm'lik bir tabak kullanılabilir. Doku kültürü tedavisi gerekli değildir.
Tygon Clear Laboratuvar Tüpü - 1/4 x 3/8 x 1/16 duvar (50 fit)	Tygon	AACUN017	Bu bir örnek olarak verilmiştir. Benzer büyüklükteki herhangi bir boru da işe yarayacaktır.