Yöntem makalesi

Deneysel Otoimmün Üveit: Göz İçi İnflamatuar Bir Fare Modeli

DOI:

10.3791/61832

⸱

12 Ocak 2022

 ,  ,  , 
1UCL Institute of Ophthalmology, University College London

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yazıda, araştırmacının göz içi üveitinin fare modelini oluşturmasını sağlayan bir protokol sunuyoruz. Daha yaygın olarak deneysel otoimmün üveit (EAU) olarak adlandırılan bu yerleşik model, insan hastalığının birçok yönünü yakalar. Burada, birkaç okuma kullanarak hastalığın ilerlemesinin nasıl indükleneceğini ve izleneceğini açıklayacağız.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deneysel Otoimmün Üveit (EAU), kendi kendine antijenlere yanıt veren immün hücreler tarafından yönlendirilir. Bu enfeksiyöz olmayan, göz içi inflamatuar hastalık modelinin birçok özelliği, insanları etkileyen posterior üveitin klinik fenotipini özetlemektedir. EAU, yeni inflamatuar terapötiklerin etkinliğini, etki biçimlerini incelemek ve göz içi bozuklukların hastalık ilerlemesini destekleyen mekanizmaları daha fazla araştırmak için güvenilir bir şekilde kullanılmıştır. Burada, bu hastalığa duyarlılığı olan en yaygın kullanılan model organizma olan C57BL / 6J farede EAU indüksiyonu hakkında ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Hastalığın şiddeti ve progresyonunun klinik değerlendirmesi fundoskopi, histolojik inceleme ve floresein anjiyografi ile gösterilecektir. İndüksiyon prosedürü, oküler protein interfotoreseptör retinoid bağlayıcı proteinden (retinol bağlayıcı protein 3 olarak da bilinir), Complete Freund's Adjuvant'tan (CFA) bir peptid (IRBP1-20) içeren bir emülsiyonun deri altı enjeksiyonunu içerir ve öldürülmüş Mycobacterium tuberculosis ile desteklenir. Bu viskoz emülsiyonun boynun arkasına enjeksiyonunu, Bordetella boğmaca toksininin tek bir intraperitoneal enjeksiyonu izler. Semptomların başlangıcında (12-14. gün) ve genel anestezi altında, klinik muayene yoluyla hastalığın ilerlemesini değerlendirmek için fundoskopik görüntüler alınır. Bu veriler, daha sonraki zaman noktalarında ve pik hastalıkta (20-22. gün) analiz edilen farklılıklarla doğrudan karşılaştırılabilir. Aynı zamanda, bu protokol, araştırmacının floresein anjiyografi kullanarak damar geçirgenliği ve hasarındaki potansiyel farklılıkları değerlendirmesini sağlar. EAU, diğer fare suşlarında (hem vahşi tipte hem de genetiği değiştirilmiş olarak) indüklenebilir ve ilaç etkinliğini ve / veya hastalık mekanizmalarını incelemek için esneklik sunan yeni tedavilerle birleştirilebilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, C57BL / 6J farede Deneysel Otoimmün Üveitin (EAU) emülsifiye bir adjuvanda retinal antijenin tek bir deri altı enjeksiyonu ile nasıl indükleneceğini gösterecektir. Hastalığın ilerlemesini izleme ve değerlendirme yöntemleri, fundoskopik görüntüleme ve histolojik inceleme ile detaylandırılacak ve ölçüm parametreleri ana hatlarıyla belirtilecektir. Ayrıca retinal kan damarı yapısını ve geçirgenliğini incelemek için kullanılan bir teknik olan floresein anjiyografi tartışılacaktır.

Bu EAU modeli, insanlarda enfeksiyöz olmayan posterior üveitin klinik patolojik özellikleri ve hastalığı yönlendiren temel hücresel ve moleküler mekanizmalar açısından merkezi özelliklerini özetlemektedir. EAU, evlat edinilmiş transfer deneylerinde ve IFNγ tükenmiş farelerde gösterildiği gibi, kendi kendine reaktif CD4 + T lenfositlerin Th1 ve / veyaTh17 alt kümeleri tarafından aracılık edilir. Üveitte bu hücrelerin potansiyel rolleri hakkındaki anlayışımızın çoğu, retina dokularında hem Th1 hem de Th17 hücrelerinin tespit edildiği EAU2'yi incelemekten kaynaklanmaktadır3. Genellikle, EAU hastalığı hafifletmede yeni tedavilerin yararını değerlendirmek için klinik öncesi bir model olarak kullanılır. EAU hastalığını başarılı bir şekilde modüle eden terapötik yaklaşımlar klinikte bir miktar etkinlik göstermiş ve FDA onaylı statüye ulaşmıştır. Bunların örnekleri, T hücre hedefleme tedavileri gibi immünoregülatör ilaç gruplarıdır: siklosporin, FK-506 ve rapamisin 4,5,6. Son zamanlarda, bu modelde hem mekanizmayı hem de hastalık sonucu üzerindeki etkisini araştırmak için yeni yolları hedefleyen müdahaleler de araştırılmıştır. Bunlar, kromatin okuyucu Bromodomain Ekstra-Terminal (BET) proteinleri ve P-TEFb inhibitörleri3 aracılığıyla transkripsiyonel düzenlemeyi hedeflemeyi içerir. Ayrıca, VLA-4 inhibitörü gibi daha geleneksel yaklaşımlar son zamanlarda efektör CD4 + T hücrelerinin modülasyonu yoluyla EAU'da baskılanma göstermiştir7. Ek olarak, bir RORγt ters agonisti olan TMP778 ile Th17 hücrelerini hedeflemenin de EAU8'i önemli ölçüde baskıladığı bulunmuştur. Ayrıca, bu model retinadaki kronik otoimmün inflamasyonu ve lenfosit primasyonu gibi eşlik eden altta yatan mekanizmaları incelemek için bir fırsat sunmaktadır.

EAU preklinik çalışmaları için birincil okumalar, retinal fundoskopi görüntülemesi yapılarak ve daha az sıklıkla, Optik Koherens Tomografi (OCT) ile retina bütünlüğünün değerlendirilmesi yoluyla klinik değerlendirmedir. Daha sonra retinal histopatolojik değerlendirme ve retina hücrelerinin akım sitometrisi ile immünofenotiplenmesi terminasyonda yapılır. Fundoskopi, tüm retinanın hızlı ve tekrarlanabilir klinik değerlendirmesine olanak tanıyan, kullanımı kolay bir canlı görüntüleme sistemidir. İmmünohistokimyasal değerlendirmeler için, teknikler, inflamasyon ve yapısal hasar derecesi için doku mimarisini incelememize izin veren retinal kesitlerin hazırlanmasına dayanmaktadır9. Kullanılan tüm teknikler için değerlendirme kriterleri ve geleneksel puanlama sistemleri bu protokolde özetlenecektir. Fundoskopik görüntüleme kullanılarak kaydedilen hasarın boyutu genellikle histolojik değişikliklerle yakından ilişkilidir. Hastalığın ciddiyetini izlemeye ve değerlendirmeye yönelik bu ikili yaklaşım, daha fazla hassasiyet ve daha güvenilir ölçüm sonuçları sağlar.

EAU preklinik testler ve immün aracılı göz hastalığının araştırılması için iyi kurulmuş, yaygın olarak kullanılan bir modeldir. Bu model, %95 > hastalık insidansı ile güvenilir ve tekrarlanabilir olup, dünya çapında çalışma yaşı körlüğünün önemli bir nedenini temsil eden göz içi inflamatuar hastalığın tedavisi için yeni tedavileri doğrulamak veya reddetmek için kullanılabilecek kapsamlı veriler üretir10.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm deneyler, 1986 tarihli İngiltere Hayvanlar (Bilimsel Prosedürler) Yasası ve kurumsal Hayvan Refahı ve Etik İnceleme Organı (AWERB) yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Muhafaza C57BL / 6J fareler

  1. Ev fareleri belirli bir patojen içermeyen ortamda, 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsünde ve yiyecek ve su mevcut ad libitumda.
  2. Yetişkin dişi C57BL / 6J üzerinde tüm deneyleri yapın (üveit hastalarında kadınların erkeklere 1.4 ila 1 arasında bir insidansı olduğu için dişiler tercihen seçilir). 6-8 haftalık dişi C57BL / 6J farelerini ağırlık ve yaşa göre randomize edin. Fareleri, kafes başına 5-6 farelik gruplar halinde ayrı ayrı havalandırılan kafeslerde (IVC) barındırın.

2. C57BL/6 farelerin bağışıklanması

  1. IRBP1-20 - CFA Emülsiyon Hazırlama
    NOT: Emülsiyon preparatı, hastalığın tekrarlanabilirliği ve insidansı için esastır; Bu nedenle, hazırlık süreci boyunca ve deneyler boyunca tutarlılığı korumak için her türlü çaba gösterilmelidir. Emülsiyonu hazırlarken, önceden tüm reaktiflerin hesaplamalarında kayıp hesaba katılmalıdır. Bu kayıp, aşılama için planlanan fare sayısına bağlı olarak yaklaşık 1.5x (veya hazırlanan hacmin% 50'si ekstra) olabilir. Lütfen aşağıdaki örneğe bakın. 10 fareyi bağışıklamak için 15 fare hazırlayın ve 400 μg (20 g fare başına peptid) x 15 fare = 6 mg kullanın. Her fare bağışıklama için 200 μL almalıdır (toplam 3 mL). Son hacim, 1: 1 oranında peptid çözeltisi ve CFA, dolayısıyla 1.5 mL peptid çözeltisi ve 1.5 mL CFA'dan oluşur.
    1. Tüm steril çözeltileri aseptik teknikler kullanarak laminer bir akış kabininde hazırlayın.
    2. İstenilen miktarda (20 g fare başına 400 μg) insan IRBP1-20 (LAQGAYRTAVDLESLASQLT) liyofilize peptidi tartın. Peptitleri% 100 DMSO'da çözün. Stoğu liyofilize formda -20 °C'de saklayın.
      NOT: Tozun tamamen çözündüğünden emin olmak için her pul önce DMSO ile temas etmeli ve artık katı belirtisi göstermemelidir. Son birime ulaşmak için PBS'yi küçük bölümler halinde ekleyin. Bir vorteks ile karıştırmayın, bunun yerine bir pipetle nazik ajitasyon kullanın. DMSO'nun nihai konsantrasyonu, toplam peptid hazırlama hacminin% 1'ini geçmemelidir. Emülsiyonun konik tabanlı 20 mL'lik bir plastik tüp içinde hazırlanması, DMSO'nun liyofilize toza daha iyi erişilebilmesini sağlamalıdır.
    3. DMSO-PBS peptid çözeltisini 1: 1 v / v'de CFA'ya ekleyin, bu da 1.5 mg / mL'lik bir nihai konsantrasyon vermek için 1.5 mg / mL öldürülmüş Mycobacterium tuberculosis ile desteklenmiştir. Viskoz ve eşit olarak dağıtılmış bir emülsiyon oluşturmak için damla damla, nazikçe ve sık sık pipetleme ekleyin.
    4. Peptit çözeltisini ve CFA'yı 1000 μL'lik bir pipet (daha fazla kaybı önlemek için 700 μL'ye ayarlanmış) ve kremsi kalın bir kıvam oluşturmak için pipet kullanarak havalandırın. Bu teknik, istenen kalınlığa ulaşana kadar tekrar tekrar yukarı ve aşağı aspire etmek için pipetin kullanılmasını içerir. Optimal sonuçlar için, enjekte etmeden önce antijen çözeltisinin ve adjuvanın iyice karıştırıldığından emin olun.
  2. Boğmaca toksininin intraperitoneal enjeksiyonu
    1. 1.5 μg Bordetella boğmaca toksinini 100 μL RPMI 1640 ortamında %1fare serumu 11 ile desteklenmiş olarak askıya alın.
    2. İ.P. enjeksiyonunu steril bir şırınga ve 23G iğne ile gerçekleştirin.
      NOT: Enjeksiyon bölgesinde rahatsızlık oluşmasını önlemek için, antijen enjekte edilmeden önce boğmaca toksini uygulanmalıdır.
    3. Tek bir 100 μL i.p. Bordetella boğmaca toksini enjeksiyonu almak için her fareyi geçici olarak ayrı bir kafese aktarın.
  3. IRBP emülsiyonunun deri altı enjeksiyonu
    1. Daha sonra, IRBP emülsiyonunu deri altından enjekte edin. Bu süreç, sağlık ve güvenlik düzenlemelerine göre koruma ile uygun şekilde giyinmiş iki hayvan işleyicisi gerektirir.
    2. Eğitimli bir kişinin, kafesin üstündeki fareyi hafifçe tırmık benzeri bir pozisyonda, midesi aşağı bakacak şekilde tutmasını sağlarken, diğer eğitimli kişi, iğnenin parmak ve başparmak arasındaki yuvaya yerleştirilebileceği boynun arkasında çadır benzeri bir yapı oluşturmak için cildi sıkıştırır.
      DİKKAT: İğne çubuğu yaralanması tehlikesi vardır.
    3. İğne yerleştirildikten sonra, IRBP emülsiyonunun 200 μL'sini enjekte edin. İğneyi çıkarırken, dışarı çekmeden önce cildi kapatmak için iğne kafasını döndürün ve emülsiyonun reflüsünü önlemek için enjeksiyon bölgesine daha sonra basınç uygulayın.
      DİKKAT: Emülsiyon fare derisi veya kürkü ile temas etmemelidir, çünkü bu tahrişe ve daha ciddi vakalarda bir lezyonun gelişmesine neden olabilir. Bu durumda, alan% 70 etanol kullanılarak derhal ve iyice silinmeli ve daha sonra kurutulmalıdır.
      NOT: Drenaj lenf düğümleri çalışmanın sonunda muayene için gerekliyse, enjeksiyon bölgesi farklı olacaktır. Bu durumda, kanadın her iki tarafına deri altından 100 μL enjekte edin. Bu, drenaj yapan kasık lenf düğümlerinde, hasat sırasında eksize edilebilen daha güçlü bir yanıt üretecektir. Bununla birlikte, amaçlanan sonuç yalnızca EAU'yu geliştirmekse, çoklu enjeksiyon bölgelerinden rahatsızlık duymamak için boynun arkasına 200 μL'lik tek bir enjeksiyon tercih edilir.

3. Klinik Değerlendirme - Fare Fundus Muayenesi

NOT: Klinik hastalık, fundus muayenesi kullanılarak, bir fundoskop ve görselleştirme için kullanılan Discover yazılımı kullanılarak parlak alan canlı görüntüleme yoluyla puanlandırılmalıdır.

  1. Hastalığın başlangıcında (12-14. gün), hem Ketamin (50 mg / mL) hem de Domitor (Medetomidin; 1 mg / mL) kombinasyonunu kullanarak genel anestezi altında fareleri sakinleştirin. 1 parçalı Domitor'u seyreltin; 1.5 parça Ketamin ve 2.5 parça steril enjekte edilebilir su, daha sonra intraperitoneal olarak 30 g başına 100 μL enjekte edin. Yukarıdaki anestezi kombinasyonu için 1 mL steril şırıngalar ve 23G iğneler kullanın.
  2. Bunu takiben, tüm reflekslerin kaybolduğundan ve uyaranlara yanıt vermediğinden emin olmak için fareyi izleyin.
  3. İ.P. enjeksiyonunu aldıktan hemen sonra ve fare hala bir pürüz içinde tutulurken, pupilla genişlemesi için her göze topikal olarak% 1 tropikamid% ve% 2.5 fenilefrin uygulayın. Korneayı her iki dilatasyon çözeltisiyle tamamen kaplamayı hedefleyin. Öğrencinin tamamen genişlemesi birkaç dakika sürebilir.
  4. Daha sonra, göz viskoziyatı merhemine cömertçe uygulayın ve gözü tamamen yağlanmış ve nemli tutmak için görüntüleme işlemi boyunca koruyun.
  5. Bu arada, yazılımı açın (örneğin, Keşfet) ve fundoskopu (örneğin, Micron) parlak alan altında görüntü yakalamak için ayarlayın. Her bir fareye bir klasör ayırın ve fotoğraflanan her göze göre görüntüleri R veya L ile etiketleyin.
  6. Fareyi canlı görselleştirme için amaca yönelik olarak oluşturulmuş bir sahneye monte edin ve mikroskopu retinaya tam erişim için konumlandırın.
  7. Hastalığın doğru bir temsilini elde etmek için, optik diske ek olarak çevrenin tüm köşelerini kaplayan tüm retina bölgesinin görüntülerini alın. Bunu başarmak için, göz merceğini baştan sona ayarlayın. Gözün görüntüleme işlemi boyunca her zaman tamamen yağlanmış kalması çok önemlidir; göz merhemini sabit bir oranda doldurarak bunu sağlayın.
  8. Floresein anjiyografi yapmak için bu aşamada bölüm 4'e (aşağıda) bakınız.
  9. Tüm görüntüleme tamamlandıktan sonra, anestezik reversal anti-sedasyonu (5 mg / mL Antisedan) enjekte edilebilir suda seyreltin ve 0.1 mg / kg i.p'de uygulayın. Fareyi bir kafese geri döndürün ve iyileşene kadar ıslak ıslatılmış bir diyete erişimi olan önceden ısıtılmış bir paspasa yerleştirin. Tam iyileşme, tüm vücut hareketi ve kafesin etrafında sabit yürüyüşle yürümek, tipik olarak birkaç saat sürmek ile karakterizedir.
  10. Belirlenen deneysel bitiş noktasında (örneğin, 21-23. gün), 4.1-4.5 adımlarını tekrarlayın ve hastalığın doğru bir temsilini yakalamak için optik diski ve çevrenin tüm köşelerini kaplayan tüm retina bölgesinin fotoğraflarını tekrar çekin.

4. Floresein anjiyografi

  1. Bu hayvanlarda damar sızıntısını ölçmek için, anestezi altındayken, her fareye boynun arkasına deri altından% 2'lik bir floresein enjeksiyonu yapın ve retina canlı görüntünün ortasında merkezileştirilecek şekilde konumlandırın.
  2. Fundoskopu 465-490 nm'de mavi ışık uyarma filtresine ayarlayın. Uyarılmış floreseinden yakalanan ışık 520-530 nm arasındadır.
  3. Floresein enjeksiyonundan 1,5 dakika sonra, her retinanın fotoğrafını çekin ve 7 dakikada tekrar edin.
    NOT: Bu olaylar için zamanlama çok önemlidir, eğer her ikisini de yakalayamazsa, sadece bir gözü görüntüleyin.

5. Klinik Hastalık Puanlaması

  1. Klinik değerlendirmeyi aşağıdaki kriterlerin ciddiyetine dayandırın: optik disk iltihabı, retinal damar kelepçelenmesi, retina dokusuna sızma ve yapısal hasar.
  2. Bu parametrelerin her birine 0'dan 5'e kadar bir ölçekte bir puan verin ve kolektif toplam, göz başına elde edilebilecek maksimum 20 puan ile tüm göz için klinik hastalığı temsil eder. Tablo 1 , puanlama kriterleri için bir kılavuz olarak kullanılabilir.

6. Histoloji ve Histolojik Puanlama

  1. Servikal çıkık ile fareleri ötenazi yaptıktan sonra, tüm göze kolay erişim için göz kapaklarını birbirinden ayırarak gözleri enüklee edin.
  2. Daha sonra, yörüngesel bağ dokusunu ve optik siniri kavramak amacıyla kavisli forsepsleri dünyanın arkasına yerleştirin. Dünyayı sıkmaktan kaçınmaya dikkat edin.
  3. Fiksasyon için, retina dekolmanı en aza indirmek için gözü en az 15 dakika boyunca% 4 glutaraldehit içine yerleştirin ve daha sonra en az 24 saat boyunca% 10 formaldehit'e aktarın.
  4. Parafine gömme, mikrotom üzerinde bölümleme ve standart protokollere göre boyama işlemini gerçekleştirin. Her türlü boyama için 3-4 μm kesit kalınlığı önerilir.
  5. Hematoksilin ve Eozin (H&E) boyama için standart protokolleri kullanarak gözlerin histolojik incelemesini yapın.
  6. Retina ve koroid içindeki immün hücre infiltrasyonunun derecesine, retina tabakalarının bozulmasına, granülom oluşum derecesine ve retina dekolmanının derecesine bağlı olarak, daha önce tarif edildiği gibi (Agarwal 2013) retina hasarını gösteren retina dekolmanı derecesine dayanarak, EAU skorlaması kriterlerine göre 0-4 ölçeğinde puanlar atayın (Agarwal 2013) ve Tablo 211'de özetlenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolde, IRBP'den türetilen bir uveitojenik retinal peptid ile fareleri bağışıklayarak deneysel otoimmün üveit (EAU) modelini indüklemek için adım adım bir yöntem tanımlamaktayız. Yaygın olarak kullanılan ve kolayca erişilebilen yaklaşımların kullanıldığı hastalığın değerlendirilmesi, bunlar münhasır olmamasına ve diğer görüntüleme tekniklerine eklenebilmesine veya kısmen değiştirilmesine rağmen, ele alınmaktadır. C57BL/6J farelerde EAU belirtileri, Şekil 1'de gösterildiği gibi bağışık...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deneysel hayvan modelleri, hastalık patogenezini incelemek ve yeni terapötik paradigmaların klinik öncesi testlerini incelemek için gerekli araçlardır. Bu protokolde, göz içi inflamatuar üveitin deneysel bir modeli olan EAU'yu indüklemek, izlemek ve puanlamak için bir metodolojiyi tartıştık. Bu EAU modeli, tüm prosedürler burada özetlenen protokole göre yapıldığında hastalık insidansı% 95'ten fazladır ve kronik, monofazik EAU'nun gelişmesiyle sonuçlanır. Bu insidans seviyesine ulaşmak için, her ikisi de yukarıda ayrıntıl...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların bu eserle beyan edecekleri çıkar çatışmaları yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

JG, CB'yi desteklemek için UCL Etki Öğrenciliği ve Rosetrees Trust fonu ile ödüllendirildi. VC, Akari Therapeutics Inc.'den bir araştırma işbirliği hibesi alıyordu. UCL Oftalmoloji Enstitüsü, Biyolojik Hizmet Birimi, özellikle Bayan Alison O'Hara ve ekibine teknik destekleri için teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
antisedanZOETIS, ABD'yiuyandırmak için
Complete Freund' s Adjuvan; CFASigma, İngiltereF5881bağışıklama için 
DomitorOrion Pharma, Finlandiyaanestezi için
FlouresceinSigma, İngiltereAnjiyografi içinF2456
IRBP1-20< / sub>Chamberidge peptidi, İngilterepeptidi; antijen ve nbsp;
Anestezi içinKetaminOrion Pharma, Finlandiya
Micron IIIPhoenix Research, ABDfundoskopi için
Mouse SerumSigma, İngiltereM5905bağışıklama için 
Mycobacterium terberculosisSigma, İngiltereBağışıklama 344289 
Boğmaca ToksinSigma, İngiltereP2980bağışıklama için 
fenilefrin hidroklorür% 2.5 & nbsp;Bausch & Lomb İngiltere Dilatasyon için PHEN25 
Dilatasyon için Tropicamide %1SANDOZ 
Göz yağlanması içinViscotearsWELDRICKS Eczanesi, İngiltere2082642

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lyu, C., et al. TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations. The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).
  2. Klaska, I. P., Forrester, J. V. Mouse models of autoimmune uveitis. Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).
  3. Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells. The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).
  4. Mochizuki, M., et al. Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis. Current Eye Research. 11, Suppl 87-95 (1992).
  5. Nguyen, Q. D., et al. Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies. Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).
  6. Leal, I., et al. Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104(2019).
  7. Chen, Y. H., et al. Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response. European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).
  8. Xu, H., et al. A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images. Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).
  9. Copland, D. A., et al. The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).
  10. Dick, A. D. Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation. Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).
  11. Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. Rodent models of experimental autoimmune uveitis. Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).
  12. Caspi, R. R. A look at autoimmunity and inflammation in the eye. Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).
  13. Caspi, R. R., et al. Mouse models of experimental autoimmune uveitis. Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).
  14. Shao, H., et al. Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells. Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).
  15. Horai, R., et al. Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site. Immunity. 43, 343-353 (2015).
  16. Chen, J., et al. Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein. PLoS One. 8, 72161(2013).
  17. Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis. PLoS One. 8, 63904(2013).
  18. Harry, R., et al. Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction. Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

IRBP 1 20 PeptitKomple Freund AdjuvanBordetella Pertussis ToksiniFundoskopik G r nt lemeFloresein AnjiyografiHistolojik AnalizC57BL 6J Farentraok ler nflamasyonHastal k Progresyonu

İlgili makaleler