İskemi/Reperfüzyon Porsin Modelinde Omurilik Mikroperfüzyonunun Gerçek Zamanlı Değerlendirilmesi

İskemi/reperfüzyon (SCI) ile indüklenen omurilik hasarı, aort onarımınınazaltılmış sonuç 1 , 2^,3,4ile ilişkili en yıkıcı komplikasyonlarından biridir. SCI için mevcut önleme ve tedavi seçenekleri arasında makrohemodynamik parametrelerin optimizasyonu ve omurilik perfüzyon basıncını iyileştirmek için beyin omurilik sıvı basıncının (CSP) normalleştirilmesi 2 ,^5,6,7,^8,9bulunur. Bu manevraların uygulanmasına rağmen, SCI insidansı hala aort onarımının karmaşıklığına bağlı olarak% 2 ila%³¹arasında değişmektedir 10^,11,12.

Son zamanlarda, mikrosirkülasyon artan dikkat kazanmıştır^13,14. Mikroskrkülasyon hücresel oksijen alımı ve metabolik değişim alanıdır ve bu nedenle organ fonksiyonu ve hücresel bütünlükte kritik bir rol oynar¹³. Bozulmuş mikrosirkülatör kan akışı, artan mortalite^{15 , 16 , 17 , 18,19}ile ilişkili doku iskemisinin önemli bir belirleyicisidir. Omurilik mikrosirkülasyonunun bozulması, nörolojik fonksiyonun azalması ve sonucu^{20 , 21,22,23}ile ilişkilidir. Bu nedenle, SCI tedavisi için mikroperfüzyonun optimizasyonu en umut verici bir yaklaşımdır. Makrosikülatör optimizasyonuna rağmen mikro sirkülatör bozuklukların kalıcılığı^{26 , 27,28,29}olarak tanımlanmıştır. Bu hemodinamik tutarlılık kaybı, iskemi/reperfüzyon dahil olmak üzere çeşitli koşullarda sıklıkla meydana gelir ve doğrudan mikro sirkülasyon hedefli tedavilere duyulan ihtiyacı vurgular^26,27,30.

Şimdiye kadar, sadece birkaç çalışma omurilik mikro sirkülatör davranışının gerçek zamanlı değerlendirilmesi için lazer-Doppler probları kullandı^20,31. Mevcut çalışmalar genellikle aralıklı kullanım ve ölüm sonrası analiz ile sınırlı olan mikroküreci enjeksiyon tekniklerini kullanmıştır^32,33. Mikroküreç enjeksiyon tekniği kullanılarak yapılan farklı ölçümlerin sayısı, farklı dalga boylarına sahip mikrokürelerin mevcudiyeti ile sınırlıdır. Ayrıca, Lazer-Doppler tekniklerinin aksine, bu yöntem için ölüm sonrası doku işleme ve analize ihtiyaç duyulduğu için mikroperfüzyonun gerçek zamanlı olarak değerlendirilmesi mümkün değildir. Burada, bir porcine büyük hayvan modeli olan iskemi/reperfüzyonda omurilik mikroskrkülasyonunun gerçek zamanlı olarak değerlendirilmesi için deneysel bir protokol sunuyoruz.

Bu çalışma, kristaloidlerin ve kolloidlerin iskemi/reperfüzyondaki mikroserkülasyon üzerindeki etkisini karşılaştıran randomize bir çalışmanın yanı sıra sıvıların ve vazopresörlerin omurilik mikroperfüzyonu üzerindeki etkileri üzerine yapılan keşifsel randomize bir çalışmanın bir parçasıydı. Akış probu 2 noktalı kalibrasyon ve basınç ucu kateter kalibrasyonu daha önce^{tanımlanmıştır 34}. Bildirilen protokole ek olarak, floresan mikroküreler, daha önce açıklandığı gibi, her hayvan için 12 omurilik dokusu örneği kullanılarak, üst omuriliği temsil eden 1-6 ve alt omuriliği temsil eden 7-12 örnekleri kullanılarak omurilik mikroperfüzyonunun ölçümü için kullanılmıştır^35,36. Lazer-Doppler kayıtları ve makrohemodynamik değerlendirmenin tamamlanmasından sonra her ölçüm adımı için mikrosfer enjeksiyonu yapıldı. Histopatolojik değerlendirme daha önce açıklandığı gibi Kleinman-Score kullanılarak yapıldı³⁷.

Çalışma Hamburg ŞehriNin Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Hükümet Komisyonu tarafından onaylanmıştır (Referans-No. 60/17). Hayvanlar, 'Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu' (NIH yayını No. 86-23, revize edilmiş 2011) ve FELASA önerileri ve deneyleri ARRIVE yönergeleri^24,25uyarınca yapılmıştır. Bu çalışma akut bir denemeydi ve protokolün sonunda tüm hayvanlar ötenaziye tabi tökezlendi.

NOT: Çalışma yaklaşık 40 kg ağırlığında altı üç aylık erkek ve dişi domuzlarda (Alman Landrace) gerçekleştirildi. Hayvanlar deneylerden en az 7 gün önce hayvan bakım tesislerine getirildi ve hayvan refahı önerileri doğrultusunda barındırıldı. Hayvanlara mama ve su ad libitum sağlandı ve sağlık durumları sorumlu veteriner tarafından düzenli olarak değerlendirildi. Deneylerden önce 12 saat oruç tutma süresi korunmuştu. Hayvanların tüm deneysel prosedürü ve kullanımı sorumlu veteriner tarafından denetlendi.

1. Anestezi indüksiyonu ve anestezinin bakımı

1. Anestezi indüksiyonu ve anestezinin sürdürülmesi için, endotrakeal entübasyon yapmak için gerekirse intravenöz enjeksiyonlar ile takip edilen intramüsküler enjeksiyon kullanarak hayvanları önceden planlayın ve derinden yatıştırın. Bundan sonra, ek bir opioid bolus enjeksiyonu ile tamamlanan sürekli bir opioid uygulaması ile uçucu bir anestezi ajanının bir kombinasyonunu kullanarak anesteziyi teşvik edin ve koruyun.
2. Premedikasyon ve sedasyon için ketamin 20 mg·kg^-1, azaperone 4 mg·kg^-1ve midazolam 0.1 mg·kg^-1 kas içi enjeksiyonları gerçekleştirin.
3. Bir kulak damarı içine venöz kateter yerleştirin, uygun sabitlemleri güvence altına alın ve 10 mL tuzlu su hızlı bir şekilde uygulanarak işlevselliği değerlendirin.
4. Isı kaybını önlemek için hayvanı ısınan bir battaniyeye supine pozisyonuna yerleştirin.
5. Hayvanların kardiyo-pulmoner durumunu izlemek için elektrokardiyografi (EKG) ve nabız oksimetresi ile temel izlemeyi oluşturun ve temel izleme donanımına bağlayın.
6. Preoksijenasyon için domuz şeklinde bir maske ile 15 L·dk^-1 oksijen verin.
7. Gerekirse 0.1 mg·kg^-1%1 propofol intravenöz boli enjekte edin ve endotrakeal entübasyon gerçekleştirin.
8. Uç gelgit kapnografisi ve auscultation ile doğru yerleşimi sağlayın, 0,1 mg•kg^-1 panküronyum verin ve endotrakeal tüpün uygun şekilde sabitlenmesini sağlayın.
9. Anestezi makinesini kullanarak 10 mL·kg^-1 vücut ağırlığı^-1gelgit hacimleri, 10 cmH 2 O pozitif uç ekspirasyon basıncı ve_0,3'lükilham verici oksijenin (FiO₂₎bir kısmını kullanarak hacim kontrollü havalandırma oluşturun. 35-45 mmHg'lik bir uç ekspiratuar karbondioksit gerilimini (etCO₂₎korumak için ventilatör frekansını ayarlayın.
10. Bir mide tüpü tanıtın, mide sıvılarının emişini gerçekleştirin, tüpü düzgün bir şekilde sabitlayın ve bir toplama torbasına bağlayın. Anestezi sırasında gözlerin kurumasını önlemek için hayvanın gözlerini dikkatlice kapatın.
11. Fentanil (10 μg·kg -1 ·h^-1)ve sevoflurane (%3,0 süresi dolmuş konsantrasyon, buhar tarafından teslim edilir) sürekli infüzyonu ile anesteziyi koruyun. Tüm protokol sırasında herhangi bir hareketin olmamasının yanı sıra hayati belirtilerin ve ventilasyon parametrelerinin dikkatli bir şekilde gözlemlenmesi ve cerrahi uyaranın evrelerine özel dikkat larak yeterli anestezi seviyesini sağlayın. Ağrı veya sıkıntı belirtisi varsa ek bolus dozlarında fentanil (50 μg) verin.
    NOT: Tüm prosedür boyunca hayvan anestezisinde deneyimli araştırmacıların varlığını sağlayın ve uygun anesteziyi güvence altına almak için deneyimli bir veteriner tarafından gözetim kullanın.
12. Anestezi, cerrahi hazırlık ve deneysel protokolün uygulanması sırasında sıvı kayıplarını telafi etmek için¹⁰mL·kg -1 ·h^-1 dengeli kristaloidler taban çizgisi infüzyon oranı uygulanır. Isı kaybını önlemek için bir sıvı ısıtıcı kullanın.
13. Sabun suyu kullanarak domuzun derisini hafifçe temizleyin. Cilt kirlenmesini azaltmak için povidon-iyot içeren bir cilt dezenfeksiyon çözeltisi kullanın. Cerrahi preparatlar için steril eldiven kullanın. Antimikrobiyal profilaksi olarak 300 mg klindamisin uygulayın ve 6 saat sonra dozrayı tekrarlayın.

2. Prob yerleşimi

1. Hayvanı sağ yanal konuma yerleştirin ve omurlar arasındaki boşluğu genişletmek için hayvanın sırtını esnetin.
2. Dikenli proseslerin ve omur kemerlerinin hazırlanması için paravertebral alanı cerrahi olarak maruz bırakmak (Şekil 1A).
3. Omurlara torasik omur (Th) 13/14 veya bel omur (L) 1/2 düzeyinde iki omur kemeri(Şekil 1B)arasında vasküler 14 G periferik kateter paramedian yerleştirin.
4. İğneyi çıkarın, lazer/Doppler iğne probını damar kateterinin üzerine yerleştirin (Şekil 1C) ve belirlenen sert ve yazılıma bağlanarak sinyal kalitesini test edin. Orta derecede pulsatiliteli kararlı bir sinyal olduğundan emin olun.
5. Probu dikişlerle dikkatlice sabitleyin (Şekil 1D) ve probun yerinden çıkmasını veya bükülmesini önlemek için dolgu kullanın.
6. Beyin omurilik basıncını ölçmek ve kontrol etmek için beyin omurilik sıvı drenajının perkütan yerleşimi için L 4/5 veya L 5/6 seviyesini tanımlayın, cildi ve deri altı boşluğu indeksleyici iğne ile delin ve kakma iğnesini çıkarın.
7. İğneye tuzlu su dolu bir şırınga yerleştirin ve iğneyi sıvı dolu şırıngaya sabit basınçla dikkatlice sokun.
8. Bir direnç kaybı epidural pozisyon için kanıt olarak hissedildikten sonra, kakma iğnesini yeniden tanıtın ve dura mater'i delmek ve kakma iğnesini çıkarmak için iğneyi 2-3 mm daha sokun.
9. Temiz likörün hızlı damlatılarak intratekal konumunu doğrulayın. Drenajı 20 cm derinliğe kadar tanıtın, Luer-lock adaptörünü takın ve dikkatli bir likör aspirasyonu ile pozisyonu doğrulayın.
10. Drenajı dikişlerle dikkatlice sabitleyin ve beyin omurilik sıvısı drenaj sistemine bağlayın.
11. Kafatasını sol kulağın arkasına maruz bırak ve 6 mm matkap ataşmanı kullanarak cildin matkap deliği trepanasyonunu dikkatlice gerçekleştirin.
12. İkinci bir lazer doppler prob doğrudan beyne tanıtın. Probu dikişlerle dikkatlice sabitle ve belirlenen sert ve yazılıma bağlanarak sinyal kalitesini test edin. Yine, orta derecede pulsatiliteli kararlı bir sinyal olduğundan emin olun.
13. Tüm probların bağlantısını kesin, hayvanı dikkatlice bir destek konumuna yerleştirin ve etkilenmemiş prob konumunu sağlayın. En az 4-5 araştırmacının bu manevrayı yaptığından emin olun.
14. Probları yeniden bağlayın ve sinyal kalitesini yeniden kontrol edin.
15. Lazer-Doppler donanımının çıkış kanallarını amplifikatöre ve senkronik alım donanımına ve yazılımına bağlayarak lazer/Doppler Flux'u makrohemodynamik sinyallerle aynı anda kaydedin.
16. Akı'yı 2 noktalı kalibrasyon ile üniteye (PU) göre kalibre edin.
    1. Menüyü açmak ve analog çıkış ayarını seçmek için Enter tuşuna basın.
    2. Flux'u senkronik satın alma yazılımıyla kullanılmak üzere 2 nokta kalibrasyonla kalibre etmek için görüntülenen dönüştürme faktörünü (5.0 V = 1000 PU)kullanın.
    3. Önceki menüye dönmek için İade Et'i seçin ve ölçüme devam etmek için Ölçü'nün öğesini seçin.
    4. Senkronik alma yazılımını açın. Kurulum menüsünden tüm girişleri sıfır olarak seçin. Tüm girişleri kullanılan cihazlara ve problara bağlayın.
    5. Flux kanalınınaçılır menüsüne tıklayarak Flux için 2 noktalı kalibrasyon gerçekleştirin. 2 noktalı kalibrasyon seçin. Birimleri dönüştürmeyi açık olarak ayarlayın ve birim olarak BPU'yu seçin. Nokta 1için, 0 V'yi 0 BPU olarak ayarlayın. Nokta 2 için, 5.0 V'yi 1000 BPU olarak ayarlayın. Tüm ve yeni verileriçin birimleri ayarla 'yı seçin. Menüyü kapatmak için Tamam'a basın.
17. 10 mmHg hedef basınç ve 20 mL·h^-1drenaj hacmi ile sürekli beyin omurilik sıvı drenajı başlatın.

3. Kateter yerleşimi

1. Her iki uyluk atardamarını da açığa çıkar.
2. Sağ femoral arterin distal kısmını bağlayın, bir damar döngüsü kullanarak atardamarın proksimal lümenini geçici olarak tıkayın, bir Potts makası kullanarak damarın 2 mm'lik bir kesimini gerçekleştirin ve kılavuz teli tanıtın.
3. Kılavuz teli daha fazla tanıtın, dirençsiz yerleştirme sağlayın ve telin bükülmesini önleyin; kateteri telin üzerine tanıtın.
4. Kateteri dikişlerle sabitle.
5. Kan basıncına uygun bağlantı ve trans-kardiyopulmoner izleme sert ve yazılımdan sonra kan gazı analizi ve arteriyel sinyal ölçümü ile doğrulanan arteriyel kanın aspirasyonu ile doğru pozisyonu sağlayın.
6. Sol uyluk atardamarı üzerine 5 mm'lik bir akış probu yerleştirin ve akış cihazına bağlanarak sinyal kalitesini test edin.
7. Her iki kasıkları dikişlerle kapatın.
8. 8 Fr. indeksleyici kılıtların yerleştirilmesi için doğru şahdamarının yanı sıra sağ iç juguler damarı da açığa çıkarın.
9. Kateter yerleşimi için, 3.2-3.4'te açıklanan şekilde devam edin.
10. Şahdamar indirgisi kılıbının yan lümenini, arteriyel basınç ölçümü için temel basınç izleme ve pulmoner termodilüzasyon donanımına bağlayın.
11. Yükselen aort içine bir basınç ucu kateteri sokun ve amplifikatöre ve senkron alım sert ve yazılıma bağlanarak konumu doğrulayın.
12. Balonu 20 cm derinlikte hava ile şişirerek ve hemodinamik eğride kama basıncı görülene kadar hafifçe yerleştirerek pulmoner arterdeki venöz kılıt üzerinden bir Swan-Ganz pulmoner arter kateteri yerleştirin. Balonu söndür ve kateteri 2 cm geri çekin. Pulmoner arter basıncının tatmin edici sinyal kalitesini sağlayın. Termistörleri temel basınç izleme ve pulmoner termodilüzyon donanımına bağlayın.
13. İlaç kullanımı için 12 Fr. 5-Lumen merkezi venöz kateterin perkütan yerleşimi ve dış sağ şahdamarına merkezi venöz basınç ölçümü için sonografik rehberlik kullanın. Sonografik yerleştirme için 6 adım yaklaşımını kullanın³⁸
14. Kateterin distal lümenini kan basıncına ve trans-kardiyopulmoner izleme sert ve yazılıma bağlayın. Tüm ilaçları ve infüzyonları merkezi venöz katetere geçirin. Analjezikler, sıvılar ve katekolaminler için farklı lümenler kullanın ve hacim yükleme adımları sırasında kolloidlerin yönetimi için büyük lümeni ayırın.

4. Cerrahi hazırlık

1. Mini laparotomi gerçekleştirin, mesaneyi harekete geçirin, idrar drenajı için bir foley kateteri yerleştirin, balonu salinle şişirin ve kateteri kese dikişleriyle sabitleyin.
2. Kateteri idrar miktarını mL olarak gösteren bir idrar toplama torbasına bağlayın.
3. FiO_2'yi 1.0'a çıkarın ve 0.1 mg·kg^-1 panküronyumu intravenöz olarak yeniden uygulayın.
4. Sternuma hazırlık için elektrokoter kullanarak ortanca sternotomi gerçekleştirin. Sternumu çevre dokudan hafifçe parçalara temizleyin. Yaralanmaları önlemek için kompresin retrosternal yerleşimini gerçekleştirin.
5. Havalandırmayı durdurun ve kemiği salınımlı bir testere ile bölün. Havalandırmaya devam edin ve FiO_2'yi 0,3'e düşürün. Kanamayı azaltmak için elektrokoter kullanın ve sternumu kemik balmumu ile kapatın.
6. Sol akciğerin tepesini dikkatlice harekete geçirin ve cerrahi maruziyeti kolaylaştırmak için diyaframın sol yan kısmını bölün.
7. Sol akciğerin hafifçe geri çekilmesiyle azalan aort proksimalini çölyak gövdesine maruz bırakarak bozulmamış havalandırmayı sağlayın ve sol akciğerde travmayı önleyin (Şekil 2A) ve çevre dokuyu bölün (Şekil 2B). Hemodinamik stabilizasyon gerekiyorsa 7 mL·kg^-1 hidroksiyetil nişaste kolloidi uygulayun.
8. Uygun pozlamayı sağlamak için azalan aortun etrafına bir fazla tutma yerleştirin (Şekil 2C).
9. Azalan torasik aortun etrafına bir akış probu takın (Şekil 2D). Akış modülüne ve senkron alım sert ve yazılıma bağlanarak uygun sinyal kalitesini sağlayın. Gerekirse sinyal kalitesini artırmak için kontak jeli kullanın.
10. Aort çapraz sıkıştırma alanını işaretlemek için akış probuna distal olarak alçalanın aortunun etrafına bir damar halkası takın.

5. Değerlendirme ve veri toplama

1. Doğru atriyal seviyeye yerleştirilmiş sıvı dolu çizgiler kullanarak tüm kateterleri ve seviye kateterlerini sıfır.
2. İğne EKG elektrotlarını yerleştirin ve senkronik edinme sert ve yazılıma bağlayın.
3. Trans-kardiyopulmoner termodilüzasyonun yanı sıra aort akışı ve basınç ölçümlerinin değerlendirilmesi daha önce tanımlanmıştır ³⁴.
4. Pulmoner arter termodilüsyon kullanarak kardiyak çıkış ölçümü için 10 mL soğuk salin ile 3 enjeksiyon yapın ve temel izleme donanımı tarafından görüntülenen ortalama değeri not edin.
5. Sadece Başlat tuşuna basarak lazer-Doppler yazılımını başlatınve adımları M0 ila M5olarak dikkatlice etiketleyerek her ölçüm adımı için bir işaret ayarlayın.

6. Deneysel protokol

1. Taban çizgisi ölçümleri (M0) gerçekleştirin.
2. 7 mL·kg^-1 hidroksiyetil nişaste kolloid hacim yükleme adımlarını kullanarak hemodinamik optimizasyon gerçekleştirin. Basınçlı infüzyonları kullanarak 5 dakika boyunca her birim yükleme adımlarını gerçekleştirin. Her hacim yükleme adımı tamamlandıktan sonra, denge için 5 dakika bekleyin. Kardiyak çıkıştaki artış %15 < olana kadar hacim yüklemeye başlayın.
3. Hemodinamik optimizasyonun tamamlanmasından sonra ölçümleri (M1) tekrarlayın.
4. İşaretli bölgeye aort kelepçesi yerleştirerek toplam 48 dk supra-çölyak aort çapraz sıkma için iskemi/reperfüzyon indükleyin.
5. Çalışma protokolü sırasında hayvanların hayatta kalmasını iyileştirmek için aort bağlamayı 1,2, 5, 10 ve 30 dakikalık aralıklarla artan sırayla uygulayın.
6. En fazla 5 dakika sonra veya femoral arter akışının normalleştirilmesinden sonra her aralık sonra aort çapraz kenetleme devam edin.
7. 100 mmHg'lik kan basıncı artışlarını önlemek için alt vena kavanın manuel giriş tıkanıklığını gerçekleştirin > arteriyel basınç anlamına gelir.
8. 40 mmHg'nin altındaki ortalama arteriyel basınçtaki düşüşleri önlemek için gerekirse, sıkma aşamasında norepinefrin veya epinefrin bolus enjeksiyonlarını verin.
9. Reperfüzyondan (M2) önce 30 dakikalık sıkıştırma aralığının sonunda ölçümleri tekrarlayın.
10. Hemodinamik stabiliteyi sağlamak için kelepçeyi yavaş yavaş açın. Kan basıncı çok hızlı düşerse kelepçeyi kapatın ve stabilizasyona izin verin.
11. Stabilizasyon için 7 mL·kg^-1 hidroksiyetil nişasta kolloidinin yanı sıra 10-20 μg norepinefrin ve/veya epinefrin ilave bolus enjeksiyonları verin. pH 7.1'in altına düşerse 2 mL kg^-1% 8.4 sodyum bikarbonatın 1'ini izleyin. Normocapnia'yı sağlamak için solunum hızının uygun şekilde ayarlanmasından emin olun.
12. Reperfüzyondan 1 saat sonra (M3) ölçümleri tekrarlayın.
13. 6.2 altında açıklandığı gibi hemodinamik optimizasyonu tekrarlayın ve ölçümleri (M4) tekrarlayın.
14. İskemi/reperfüzyon indüksiyonu (M5) sonrasında 4,5 saat son ölçümleri gerçekleştirin.

7. Ötenazi

1. Ventriküler fibrilasyon ve asystole indüklenmesi için ötanazi için intravenöz olarak 40 mmol potasyum klorür sürün.
2. Havalandırmayı sonlandır ve tüm kateterleri çıkarın.

8. Organ hasadı

1. Hayvanı eğilimli bir konuma getirin ve iğne problarını ve drenajı çıkarın.
2. Neşter ve tostlar kullanarak deri kesisi ve kas dokusunun alınması ile omurgayı açığa çıkarın.
3. Omur kemeri paramedianını her iki tarafa bölmek için salınımlı bir testere kullanın ve kalan bağlantıları gevşetmek için dikenli işlemi dikkatlice yan hareket ettirerek omur kemiğinin dorsal kısmını çıkarın.
4. Omuriliği kaudalden kranial uçlara dikkatlice kaldırmak için ön ayak kullanın ve omuriliği çıkarmak için omurilik sinirlerini kesmek için bir neşter kullanın.
5. Histopatolojik değerlendirme veya mikrokürez nicelemesi için daha fazla kullanıma kadar omuriliği% 4 formalinde saklayın.

9. İstatistiksel analiz

1. İstatistiksel yazılım kullanın.
2. Gerekirse histogramların ve log-transform değişkenlerinin incelenmesiyle normal dağılımı sağlayın.
3. Bağımlı değişkenleri-omurilik Akısını tabi edin, kardiyak çıkış, kalp atış hızı, inme hacmi, sistolik arteriyel basınç, ortalama arteriyel basınç, diyastolik arteriyel basınç, merkezi venöz basınç, sistemik vasküler direnç - ayrıca istenirse floresan mikroküreciklerle değerlendirildiği gibi üst ve alt omurilik mikroperfüzyonu - genel doğrusal karışık model analizlerine, kimlik bağlantı işlevine sahip sürekli veriler için GENLINMIXED rutinini kullanarak.
4. Taban çizgisi ayarlamalarını kullanın.
5. Değişken taban çizgisi ve ölçüm noktası için sabit efektli modeller belirtin. Ölçüm noktasını hayvanlar içinde tekrarlanan önlemler olarak düşünün.
6. Her parametre için ölçüm noktası için sabit efektlerin p değerlerini rapor edin.
7. Omurilik floresan mikrosfer analizi için, bölgeler ve ölçüm noktası arasındaki etkileşimleri değerlendirmek ve etkileşim için sabit etkilerin p değerlerini raporlamak için bölge ve ölçüm noktası arasında sabit etki ve etkileşim olarak bölge (alt omurilik, üst omurilik) kullanın.
8. M1-M5 ölçüm noktalarındaki tüm bağımlı değişkenler için %95 güven aralığı (CI) ile temel olarak ayarlanmış marjinal araçları hesaplayın ve ardından en az önemli fark testleri ile çift yönlü karşılaştırmalar yapın.
9. Değişkenleri ortalama olarak ifade eder (%95 CI). Hayvan ağırlığını standart sapma ± ortalama olarak ifade edin.
10. Haksız p-değerlerini sanın.

Altı hayvan da protokolün tamamlanmasına kadar hayatta kaldı. Hayvan ağırlığı 48.2 ± 2.9 kg; beş hayvan erkekti ve bir hayvan dişiydi. Omurilik iğnesi probu takılması ve omurilik Flux ölçümü tüm hayvanlarda mümkündü.

İskemi indüksiyonu için aort çapraz kenetleme sırasında ve unclamping ve reperfüzyon sırasında serebral mikro sirkülatör ve makrohemodynamik kayıtlarla birlikte gerçek zamanlı omurilik mikro sirkülatör kayıtlarının örnekleri Şekil 3A , Şekil 3B'degösterilmiştir. Azalan aort akışının bozulmasını omurilik Akısında belirgin bir azalma takip ederken, yükselen aorttaki basınç artmıştır (Şekil 3A). Reperfüzyon zıt etkilere yol açtı (Şekil 3B).

Makro ve mikro sirkülatör parametrelerin istatistiksel analizi Tablo 1'degösterilmiştir. Karışık model tahmini marjinal araçlar ve güven aralıkları iskemi sırasında omurilik Akısının belirgin bir şekilde azalmasına işaret eder. Buna karşılık, serebral Flux, tahmini marjinal araçlar ve güven aralıklarında belirtildiği gibi, iskemi sırasında belirgin bir şekilde artmıştır. Buna arteriyel basınç, kalp atış hızı ve sistemik vasküler dirençte artış eşlik ederken, kardiyak çıkış ve inme hacmi azaldı. Floresan mikrosfer analizi, alt omurilikteki omurilik mikrosikülatör kan akışında belirgin bir azalma olduğunu ortaya koydu, ancak üst omurilikte tahmini marjinal araçlar ve güven aralıklarında belirtildiği gibi önemli bir değişiklik olmadı. Reperfüzyon zıt etkilere yol açtı. Protokol sonunda kardiyak çıkış, inme hacmi ve arteriyel basınçta daha fazla azalma olmasına rağmen, omurilik Akısı ve omurilik mikrosikülatör kan akışı stabildi.

Bu çalışmanın sonuçları Lazer/Doppler iğne problarının omurilik mikroperfüzyonunda gerçek zamanlı değişiklikleri tespit etme yeteneğini göstermektedir. Beklendiği gibi, iskemi sırasında omurilik mikro sirkülasyonundaki azalma minimal mikrosikülatör Akı ile sertti. Omurilik Akısının iyileşmesi reperfüzyondan sonra meydana geldi. Floresan mikroküreçlerle değerlendirildiği gibi daha düşük omurilik perfüzyonu benzer bir davranış gösterdi, böylece yöntemi destekledi. Beklendiği gibi, üst omurilik perfüzyonu ve serebral Flux farklı davranışlar gösterdi. Omurilik mikroskrkülasyonu stabil olmasına rağmen, protokolün sonunda makroserkülasyon azalarak hemodinamik tutarlılık kaybı gösterdi. İnen aorttaki akış iskemi sırasında sıfır iken, reperfüzyon aort akışının iyileşmesine yol açtı. Histopatolojik analiz, omuriliğin hafif nekrozunu 0 ile 2 arasındaki alt omurilik ve 0 ile 1 arasındaki üst omurilik için Kleinman skoru ile ortaya koydu.

Şekil 1: Lazer/Doppler iğne probunun omuriliğe yerleştirilmesi. (A) Omur yapılarının cerrahi olarak maruz kalması. (B) Damar kateteri kullanılarak omuriliğin delinmesi. (C) Kakma iğnesi çıkarıldıktan sonra iğne probunun yerleştirilmesi. (D) İğne probunun sabitlenmesi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Azalan aortun maruz kalması ve akış probu ve damar döngüsünün yerleştirilmesi. (A) Sol akciğerin tepesini harekete geçirdikten ve diyaframın sol-yan kısmını böldükten sonra alçalandan aortun maruz kalması. (B) Cerrahi maruziyet için çevre dokunun bölünmesi. (C) Uygun dairesel pozlamayı güvence altına almak için alçalanın etrafına bir aşırı tutma yerleştirilmesi. (D) Akış probunun yanı sıra azalan aort etrafında damar halkasının yerleştirilmesi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: İskemi sırasında mikro sirkülatör ve makrohemodynamik sinyallerin örnek kayıtlarının yanı sıra reperfüzyon. EKG'nin örnek kayıtları, bir mikrotip kateter kullanılarak ölçülen artan aorttaki basınç, ultrasonik akış probu, omurilik ve lazer / Doppler iğne probları kullanılarak ölçülen serebral mikro sirkülatör FLUX kullanılarak ölçülen alçalma aortunda akış. (A) Supra-çölyak aort çapraz sıkma ile iskemi indüksiyonu sırasında 50 s örnek. (B) Aort çapraz kelepçesinin hafifçe yeniden açılmasıyla reperfüzyon indüksiyonu sırasında 20 s numune. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tablo 1: Protokol sırasında hemodinamik parametrelerdeki değişiklikler.

Constantin J.C. Trepte, Maquet'in dersleri için onur ödülü aldı. Diğer tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder. Bu çalışma Avrupa Anesteziyoloji Derneği Genç Araştırmacı Start-Up Grant 2018 tarafından desteklendi.