Yöntem makalesi

Aferezli İnsan Ürününden Gama-Delta (φδ) T Hücrelerinin Genişlemesi ve Zenginleştirilmesi

12K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/62622

⸱

22 Eylül 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Cell Therapy Facility, Moffitt Cancer Center and Research Institute, 2Department of Immunology, Moffitt Cancer Center and Research Institute

Bu makalede

Özet

Sunulan Gama-Delta (φδ) T hücreli ilaç ürününün genişletilmesi için bir protokoldür. Lenfositler elütriasyon ile izole edilir ve zoledronik asit ve interlökin-2 ile zenginleştirilir. Alfa-beta T hücreleri klinik sınıf manyetik ayırma cihazı kullanılarak tükeniyor. δδ hücreleri K562 türevi, yapay antijen sunan hücrelerle birlikte kültürlenir ve genişletilir.

Özet

Vφ9Vδ2 T hücreleri T lenfositlerinin küçük bir alt kümesi olmasına rağmen, bu popülasyon antijenleri büyük bir histocompabilite kompleksinde (MHC) bağımsız bir şekilde tanıma ve kanser immünoterapisi için ideal bir aday haline getiren güçlü sitolitik efektör fonksiyonu geliştirme yeteneği için aranmaktadır. Periferik kandaki Gama-Delta (φδ) T hücrelerinin düşük sıklığı nedeniyle, akut miyeloid lösemi (AML) hastalarında allogeneik δδ T hücrelerinin insanda ilk kullanımı için son derece saf bir φδ T hücreleri ilaç ürününü büyük ölçüde genişletmek için etkili bir protokol geliştirdik. Allojenik bir hücre kaynağı olarak sağlıklı donör aferez kullanılarak, lenfositler hücreleri boyut ve yoğunluğa göre ayırmanın karşı akış santrifüjleme yöntemi için doğrulanmış bir cihaz kullanılarak izole edilir.

Lenfosit bakımından zengin fraksiyon kullanılır ve δ T hücreleri tercihen zoledronik asit (FDA onaylı) ve interlökin (IL)-2 ile 7 gün boyunca aktive edilir. φδ T hücrelerinin tercihli genişlemesinden sonra, kirletici T hücre reseptörü (TCR)αβ T hücrelerini tükenmek için klinik sınıf manyetik hücre ayırma cihazı ve TCRαβ boncukları kullanılır. Yüksek oranda zenginleştirilmiş φδ T hücreleri daha sonra CD3 ve CD28, 41BBL (CD137L) ve IL15-RA-ile zoledronik asit ve IL-2 için tek zincirli değişken parçayı (scFv) ifade etmek üzere genetik olarak tasarlanmış K562 hücrelerinden (AAPC' ler) türetilen tasarlanmış yapay antijen sunum hücreleri (AAPC'ler) kullanılarak ikinci bir genişlemeden geçer. Tüm gün-7 zenginleştirilmiş φδ T hücrelerinin aAPC'lerle birlikte üretilmesi, sağlıklı donör kanından ortalama 229.000 kat > kat genişlemesi ile son derece saf φδ T hücrelerinin üretimini kolaylaştırır.

Giriş

Lösemi nüks, AML1,2,3 hastalarında hematopoetik hücre nakli (HCT) sonrası mortalitenin önde gelen nedenidir. Daha iyi lösemisiz sağkalım, HCT sonrası kan φδ T hücrelerinin grefte karşı Konak Hastalığı (GVHD)4 riski olmadan iyileşmesinin artmasıyla bildirilmiştir. φδ T hücrelerinin antijenleri MHC'den bağımsız bir şekilde tanıma ve güçlü sitolitik ve Th1 benzeri efektör fonksiyonlar geliştirme yeteneği, T hücrelerinin bu küçük alt nüfusunu nüks riski altındaki allogeneik transplantasyon geçiren AML hastalarının tedavisi için ideal hale getirmektedir5. Vφ9Vδ2 T hücrelerinin, çevre6'daki T hücrelerinin% 0,5 ila% 5'i arasında değişen küçük bir T lenfosit alt kümesi olduğu göz önüne alındığında, klinik çalışmalar için potansiyel olarak terapötik dozlar elde etmek için bu nadir kan hücresi popülasyonunu genişletmek için sağlam bir sistem kurmak için yola çıktık.

Diğerleri zoledronik asit ve hatta aAPC'ler kullanarak φδ T hücrelerini başarıyla genişletmiş olsa da, φδ T hücrelerini potansiyel olarak 229.749 kat genişletebilen bir süreç geliştirdik. Genişleme bifaziktir: ilk olarak, lenfositler ayırma aleti kullanılarak elutriasyon ile elde edilir. Ekipman, hücrelerin boyutlarına, şekillerine ve yoğunluklarına göre ters akış santrifüjleme ile ayrılmasını sağlayan kapalı bir sistem sağlar. Lenfositler için zenginleştikten sonra, Vφ9Vδ2 T hücrelerinin seçici genişlemesi zoledronik asit ve IL-2 ile 7 gün boyunca tedavi ile elde edilir. Bu tedaviden hemen sonra, TCR-αβ T hücreleri mikrobead teknolojisi kullanılarak tükenerek K562 türevi aAPC'lerle δδ T hücrelerinin daha sonra genişlemesine izin verilir.

Proses doğrulaması için, aAPC'lerle faz-2 ortak kültür genişlemesi için sadece 5 × 106 zoledronik asit genişletilmiş φδ T hücresi kullanıldı. Genişlemenin bu ikinci aşamasında, φδ T hücreleri, Moffitt'te üretilen genetik olarak tasarlanmış K562 türevi aAPC'lerin (K562VL6(scFv-CD3-41BBL;scFv-CD28-IL15-RA)) mevcut İyi Üretim Uygulamaları (cGMP) uyumlu Çalışma Hücresi Bankası (WCB) kullanılarak etkinleştirilir. Bu bifazik genişlemenin mantığı, zoledronik asidin monositlerde farnesil difosfat sintazını (FDPS) inhibe etme yeteneğine dayanır ve Vφ2Vδ2 hücrelerini doğrudan uyaran izopentenil pirofosfat birikimine yol açmaktadır. Genişlemenin ikinci aşamasında, K562 türevli aAPC'ler (K562VL6(scFv-CD3-41BBL;scFv-CD28-IL15-RA)) tüm T hücrelerine sağlam bir uyarım sağlar. Bununla birlikte, hücre ürünü zaten φδ T hücreleri için zenginleştirilmiştir, bu da φδ T hücrelerinin sağlam bir şekilde genişlemesine neden olur.

Belirli ekipman ve şişelerin kullanımıyla, işlem işlevsel olarak kapalı bir sistemdir, böylece kontaminasyon riskini azaltır. Ek olarak, 1 L kapalı sistem biyoreaktör, minimum beslenme ihtiyacı ile toplam 1 L orta hacimde hücrelerin maksimum büyümesini ve genişlemesini kolaylaştırır. Moffitt yönteminin avantajı, allogeneik uygulama için son derece saf, donör türevi bir φδ T hücre ürünü üretmek için hızlı, tekrarlanabilir ve son derece uygulanabilir bir GMP sistemi sağlamasıdır. Bu yöntem, kısmi ve tam remisyonlu kanser hastalarında mikroplara ve tümörlere karşı bağışıklığa aracılık etmek için Vφ2Vδ2 T hücre reseptörlerini benimseyen immünoterapi olarak ifade eden insan δδ T hücrelerini kullanmayı amaçlayan herhangi bir klinik çalışmaya uygulanabilir. Ek olarak, δ oksimerik antijen reseptörü pozitif (CAR+) T hücrelerinin geliştirilmesi ve üretimi için sağlam bir platform sağlar.

Protokol

NOT: IRB onayı alınmış, bağışçılardan bilgilendirilmiş onay alınmıştır.

1. Lenfosit izolasyonu

  1. Aferez ürününü temiz bir odaya aktarın.
    NOT: Proses doğrulaması, ham hücresel malzeme toplama yönetmeliklerine uygun harici bir ticari satıcıdan normal donör aferez kullanılarak gerçekleştirildi.
  2. Sterilite testi, hücre sayısı ve hücre fenotipleme için örnekler toplayın.
  3. %1 insan serum albümini (HSA) ve ikincil bir salin çözeltisi (%0,9 sodyum klorür Enjeksiyon USP) veya Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin (DPBS) ile Hanks Dengeli Tuz Çözeltisi birincil ortamı kullanarak karşı akış santrifüjleme cihazında elütriat. Elütriasyon santrifüjleme hızını 900 × g olarak ayarlayın ve akış hızına ve zamana göre kesirleri toplayın.
  4. Kesir 2'den numuneleri toplayın ve aşağıdaki testleri yapın: sterilite testi için 2 mL; Acridine turuncu/propidium iyodür (AO/PI) kullanılarak hücre sayısı ve canlılık için 0,5 mL; Akış sitometrisi ile hücre fenotipleme için 5 × 106 hücre.
  5. 5 μmol/L zoledronik asit ve 300 IU/mL IL-2 ile 1 L kapalı sistem biyoreaktörde 10 × 106 hücre/cm2'de kültürdeki hücrelerin saf lenfosit fraksiyonunu (fraksiyon 2) genişletin.
  6. %5 CO2 ile 37 °C'de ayarlanmış bir inkübatörde yedi gün kuluçkaya yatır.

2. Alfa-beta (αβ) T hücre tükenmesi

  1. 1 L kapalı sistem biyoreaktör şişesinden hücreleri toplar. Kapalı sistem biyoreaktörün kırmızı çizgisine 1 L'lik bir transfer paketi steril kaynaklayın ve hücreleri transfer paketine aktarmak için uygun farmasötik pompayı kullanın.
  2. Aşağıdaki örnekleri alın: harcanan orta sterilite için 10 mL; AO/PI kullanarak hücre sayısı ve canlılık için 0,5 mL hücre; Akış sitometrisi için 5 × 106 hücre
  3. Hücreleri fosfat tamponlu salin (PBS) veya (PBS/etylenediaminetetraasetik asit (EDTA)) tampon + %0,5 HSA ve biyotinilasyonlu TCR αβ spesifik antikorda ~5 × 108 hücre/mL'de yeniden biriktirin.
  4. Çalkalayıcıyı buzdolabına yerleştirin ve hücreleri 2-8 °C'de yaklaşık 15 dakika sallanarak kuluçkaya yatırın.
  5. Hücreleri toplam 600 mL PBS/EDTA tampon + %0,5 HSA ile yıkayın. 200-500 × g'daki ilişkisiz antikorun 2-8 °C'de 15 dakika boyunca çıkarılması için santrifüj. PBS/EDTA tamponunda ~5 × 108 hücre/mL + anti-biotin spesifik mikrobeadlarla (7,5 mL/1 şişe) %0,5 HSA'yı yeniden biriktirin.
  6. Çalkalayıcıyı buzdolabına yerleştirin ve hücreleri 2-8 °C'de yaklaşık 15 dakika sallanarak kuluçkaya yatırın. kuluçkadan sonra, sınırsız mikropları çıkarmak için hücreleri 200-500 × g'da 2-8 ° C'de 15 dakika santrifüj edin. PBS/EDTA tamponu + %0,5 HSA'da ~6 × 107 hücre/mL'yi yeniden biriktirin ve bir transfer paketi torbasına aktarın.
  7. Boru setini üreticinin talimatlarına uyarak klinik sınıf manyetik hücre ayırma cihazına takın, paketleri PBS/EDTA tamponu ve transfer paketini hücre ürünü ile birlikte cihaza yerleştirin ve cihaz tarafından talimat verildiğinde çivileyin.
  8. Etiketli αβ T hücrelerinin tükenmesi için Tükenme 1.2 protokolünü seçin.
  9. Hedef fraksiyonu (zenginleştirilmiş φδ T hücreleri) santrifüj edin ve hücreleri% 10 insan AB serumu ile desteklenmiş ortamda yeniden biriktirin.
  10. 0,5 mL'lik bir örnek alın ve AO/PI lekesi ile hücre sayısı ve canlılık gerçekleştirin. Hücreleri yaklaşık 1 × 106 hücre/mL'lik son konsantrasyona getirin. Akış sitometri fenotipleme sonrası tükenme için ürünün 5 × 106 hücresinden bir örnek alın.

3. AAPC'lerle ortak kültür

  1. X-ray üreten cihaza 100 Gy'de 5 × 107 aAPC/matara ışınlayın.
  2. AAPC'leri φδ T hücreleriyle 10:1 oranında birlikte kültür içinde kullanın. Işınlanmış aAPC'leri (5 × 107 hücre/şişe) ve φδ T hücrelerini (5 × 106 hücre/şişe) %10 insan AB serumu ile desteklenmiş 1 L kültür ortamına sahip 1 L kapalı sistem biyoreaktör şişelerine yerleştirin. 10 şişeye kadar tohum.
  3. 37 °C ve %5 CO2'de bir inkübatörde 10 gün boyunca kültürdeki hücreleri genişletin.
  4. Şeritler, glikoz ve laktat ölçer kullanarak her 3-4 günde bir glikoz ve laktat seviyelerini izleyin.
  5. Glikoz 250 mg/dL'ye düşerse, kapalı sistem biyoreaktörün kırmızı çizgisine 1 L'lik bir transfer paketini steril kaynak yaparak bir farmasötik pompa kullanarak şişedeki hacmi 200 mL'ye düşürün.
  6. Kalan 200 mL'deki hücreleri karıştırın ve AO-PI boyama ile hücre sayımı ve canlılık ölçümü için 0,5 mL'lik bir örnek alın. Hücre sayısı ≥109 ise, bir şişeyi iki şişeye bölün ve her şişeyi% 10 insan AB serumu ile desteklenmiş AIM-V ile 1 L'ye kadar doldurun. Hücre sayısı <109 ise, hücreleri% 10 insan AB serumu ile desteklenmiş taze bir litre kültür ortamı ile besleyin.
  7. Tüm şişeler için 3.6 adımını tekrarlayın ve 37 °C ve% 5 CO2'de inkübatöre geri verin. 3,4-3,7 arası adımları her 3 ila 4 günde bir yineleyin.

4. Hücre hasadı

  1. Ortak kültürde 10 günün sonunda, tüm biyoreaktör şişelerini hasat edin. Bir seferde 1 biyoreaktör şişesi hasat edin ve tüm hücreleri uygun boyutta bir transfer paketine toplayın. Transfer paketini kapalı sistem biyoreaktörün kırmızı çizgisine steril olarak kaynaklayın ve hücreleri transfer paketine aktarmak için farmasötik pompayı kullanın.
  2. Aşağıdaki kalite kontrol örneklerini çıkarın: kan kültürü ve gram boyama ile sterilite için ilaç ürününün (DP)% 1'i; AO/PI kullanarak hücre sayımı ve canlılık için 0,5 mL; Akış sitometrisi için 5-10 × 106 hücre (gating stratejisi için Şekil 1'e bakın); Endotoksin için 0,5 mL; Gram boyama için 0,5 mL; Mycoplasma testi için 106 hücre 10 mL harcanan ortama yükseldi.
  3. Hücreleri oda sıcaklığında 15 dakika boyunca 200-500 × g'da santrifüj edin ve üst yapıyı atın.
  4. Hücreleri dengeli kristaloid çözelti çözeltisi + 200-500'de% 0,5 HSA × g oda sıcaklığında 15 dakika yıkayın. Bunları 100-300 mL dengeli kristaloid çözelti + % 0,5 HSA hedef hacminde yeniden kullanın.

5. Sürüm testi

  1. Aşağıdakiler için δδ T hücresi DP'nin kalite kontrol testini gerçekleştirin: akış sitometrisine göre saflık ve kimlik (Canlı/ Ölü, CD45, CD3, TCR αβ, TCR φδ, CD20, CD56, CD16); AO/PI boyama ile uygulanabilirlik; endotoksin; Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile mikoplazma testi; gram boyama ve aerobik ve anaerobik kan kültürleri ile sterilite; kalıntı K562, akış sitometrisine göre test edilir (CD3-CD16-CD56-CD71+).

Sonuçlar

δδ T hücre süreci, δδ T hücreli ilaç ürününün üretimi için karakterize edildi ve optimize edildi. Proses optimizasyonu dahil 1) elütriasyon kullanılarak lenfosit zenginleştirme, 2) zoledronik asit ile φδ T hücreli ilaç maddesi (DS) hücreye özgü genleşme, 3) φδ T hücre DS'nin TÜKENMEsi TCRαβ, 4) K562 türevi aAPC'ler kullanılarak φδ T hücre DS'nin ikincil genişlemesi ve 5) son DP hasadı ve uygulama veya kriyoprezervasyon için ürünün formülasyonu. Proses optimizasyonundan sonra, hücre işleme uygunluğunu doğrulamak için üç sağlıklı donörden elde edilen malzeme kullanılarak uygun ölçekte onay çalıştırmaları gerçekleştirildi. Tüm veriler analiz edildi ve Tablo 1, Tablo 2 ve Tablo 3'te

&

figure-results-1

figure-results-2

figure-results-3

figure-results-4

Tartışma

Moffit Hücre Terapi Laboratuvarı, klinik çalışmalarda DP olarak kullanılmak üzere son derece saf φδ T hücrelerinin bifazik genişlemesi ile bir protokol geliştirmiştir. Bu protokol, zoledronik asit ve WCB aAPC'ler tarafından başarıyla etkinleştirilen ve genişletilen son derece saf bir φδ T hücre DP'si veren kapalı bir sistemde cGMP yönergeleri altında bir üretim yöntemi sağlar. Bu protokol, AML hastaları için allogeneik δ t hücre DP'si üretimi için FDA tarafından onaylanmıştır. Sağlıklı donörler kullanarak, donör φδ T hücrelerinin küçük popülasyonu sadece 7 günde 2,06'dan %0,45'± 54,45'e ± %28,34'e başarıyla genişlettik. Zoledronik asit ile 7 günlük genişlemeden sonra donör 2'nin NK popülasyonunda artış olduğu gözlendi.

Zoledronik asit, monositlerde farnesil difosfat sintazını (FDPS) inhibe eder ve bu da T hücrelerinin ve doğal NK hücrelerinin çoğalmasında önemli bir artışla ilişkili olan izopentenil pirofosfatın (IPP) birikmesine yol açar7,8,9. Bu artan NK popülasyonu, AAPC'ler yalnızca NK hücrelerinin daha fazla genişlemesine katkıda bulunacağından, AAPC'lerle genişlemenin 2. Bu nedenle, donör kriterleri yüksek NK popülasyonu olan bağışçıları hariç tutacak şekilde değiştirilmiştir. αβ T hücrelerinin tükenmesi sonrasında δδ T hücreleri %27,51 ± 76,61'e zenginleştirilmiştir. Bu benzersiz protokol, φδ T hücrelerindeki CD8, CD28 ve CD127L reseptörlerini hedeflemek için Moffit tarafından üretilen aAPC'leri kullanan ikinci bir genişletme içerir. AAPC'lerle yapılan bu ikinci genişleme aşaması, CD3+TCR φδ+ T hücreleri için %65, ≤1 TCRαβ T ve %<35 CD3-CD16+CD56+ NK hücreleri için %≥65 dp verdi. K562 türevi aAPC'lerin kullanımı nedeniyle, bu APC'lerin nihai ürünün% 1'ini <1'ini oluşturduğunu göstermek gerekiyordu.

Moffit CTF, son DP'deki artık K562 hücrelerinin yüzdesini ölçmek için serbest bırakma kriterleri için kullanılan bir akış sitometrik testi geliştirdi. Bu akış sitometrik tahlili, K562 hücrelerini tanımlamak için hücre yüzey antijenlerinin kullanılmasıyla ilgili tüm sorunları azaltır. Aktif T hücreleri CD71'i ifade edebildiği için, CD3- CD56 ve CD16- popülasyonlarını eleyerek ve daha sonra sadece K562 hücreleri olacak CD71+ hücrelerini inceleyerek tüm T hücrelerini ve NK hücrelerini dışlamak için bir strateji tasarladık. Bu protokol, δδ T hücre DP'sinin artık K562 hücrelerinin% 0.48'ini ± 0.42 verdiğini ve %≥70 canlılık, PCR ile Mycoplasma olumsuzluğu, gram boyama ile görülen organizmalar, ≤2 AB/mL endotoksin ve büyüme finali (14 gün) kan kültürü sterilitesinin tüm salınım kriterlerini karşıladığını göstermektedir.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.

Teşekkürler

Bu protokol geliştirme için finansman sağladığı için Moffitt Kanser Merkezi'nden Hücresel İmmünoterapiler-Araştırmacı Başlatılan Denemeler Ödülü Intramural Finansman Fırsatı'na teşekkür ediyoruz. Dr. Claudio Anasetti'ye de bu projedeki paha biçilmez yardımları ve rehberliği için teşekkür ederiz. Son olarak, Dr. Justin Boucher'e makale hakkındaki görüşleri ve incelemesi için teşekkür ederiz.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Hanks Dengeli Tuz ÇözeltisiR& D285-GMP
İnsan Albümini% 25Grifolis65483-16-071
Plazmalit AFisher2B2543Q
Zoledronik Asit (Zometa)Hos pira4215-04--8FDA onaylı ilaç
DMSOWAK-CHEMIE MEDICAL GMBHWAK-DMSO-10
CS10BIOLIFE SOLÜSYONLARI210374
3 mL şırıngaBD309657
10 mL şırıngaBD309604
20 mL şırıngaBD302830
50 mL şırıngaBD309653
100 mL şırıngaJMS992861
18g İğne Fisher305198
Kriyoviyaller 1.8 mLFisher375418
5 mL pipetFisher1367811D
50 mL pipetFisher1367610Q
10 mL pipetFisher1367811E
100 mL pipetFisher07-200-620
15 mL konikFisher05-539-12
50 mL konikFisher05-539-7
250 mL konikFisher430776
600 mL Transfer PaketiTERUMO BCT INC1BBT060CB71
4" Plazma Transfer SetiINDEPENDENT MEDICSL ASSOCIATES03-220-90
Elutra Boru SetiTerumoBCT70800
100 MCS GREXWILSON WOLF MFG CORP81100-CS
Ashton Steril Pumpmatic Sıvı dağıtım sistemiFisher Scientific22-246660
Akasya Pompa önyüklemesiMPS Medical In17789HP3MLL
CliniMACS PBS/EDTA TamponMiltenyi Biotec Inc130-070-525
Dornase AlphaGenentech, Inc50242-100-40/186-0055FDA onaylı ilaç
1000 mL 0.22 um FiltreFisher157-0020
Kan Filtresi 170umB. BraunV2500
CliniMACs Boru setiMiltenyi Biotec Inc130-090-719
CliniMACS TCRα/β KitMiltenyi Biotec Inc130-021-301
Y-Tipi kan setiFenwalFWL4C2498H
75 mL ŞişeFisher430641U
IL-2Prometheus65483-116-071FDA onaylı ilaç
AIM-VFisher0870112BK
İnsan AB serumuİkizler Biyo-Ürün100H41T
3 Litre Transfer paketiBağımsız Tıbbi OrtaklarT3109
1000 ve nbsp pipet uçlarıFisher Scientific5991040
CF-250KOLBioCF-250
ElutraTERUMOBCT
CliniMACSMiltenyi Biotec Inc
GatheRex Sıvı İşleme, Hücre Hasat PompasıWILSON WOLF MFG CORP
HERAcell Vios CO2 İnkübatörüTermo Bilimsel

Kaynaklar

  1. Bejanyan, N., et al. Survival of patients with acute myeloid leukemia relapsing after allogeneic hematopoietic cell transplantation: a center for international blood and marrow transplant research study. Biology of Blood and Marrow Transplantation. 21 (3), 454-459 (2015).
  2. Bejanyan, N., et al. Clinical outcomes of AML patients relapsing after matched-related donor and umbilical cord blood transplantation. Bone Marrow Transplantation. 49 (8), 1029-1035 (2014).
  3. Schmid, C., et al. Treatment, risk factors, and outcome of adults with relapsed AML after reduced intensity conditioning for allogeneic stem cell transplantation. Blood. 119 (6), 1599-1606 (2012).
  4. Siegers, G. M., et al. Anti-leukemia activity of in vitro-expanded human gamma delta T cells in a xenogeneic Ph+ leukemia model. PLoS One. 6 (2), 16700(2011).
  5. Airoldi, I., et al. γδ T-cell reconstitution after HLA-haploidentical hematopoietic transplantation depleted of TCR-αβ+/CD19+ lymphocytes. Blood. 125 (15), 2349-2358 (2015).
  6. Acuto, O., et al. The human T cell receptor: appearance in ontogeny and biochemical relationship of alpha and beta subunits on IL-2 dependent clones and T cell tumors. Cell. 34 (3), 717-726 (1983).
  7. Xiao, L., et al. Large-scale expansion of Vγ9Vδ2 T cells with engineered K562 feeder cells in G-Rex vessels and their use as chimeric antigen receptor-modified effector cells. Cytotherapy. 20 (3), 420-435 (2018).
  8. Peters, C., Kouakanou, L., Oberg, H. H., Wesch, D., Kabelitz, D. In vitro expansion of Vγ9Vδ2 T cells for immunotherapy. Methods in Enzymology. 631, 223-237 (2020).
  9. Xu, Y., et al. Allogeneic Vγ9Vδ2 T-cell immunotherapy exhibits promising clinical safety and prolongs the survival of patients with late-stage lung or liver cancer. Cellular & Molecular Immunology. 18 (2), 427-439 (2021).

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

T Hücresi GenişletilmesiAferez ÜrünüAkut Miyeloid LösemiManyetik Hücre AyırımıAkış SitometrisiAlfa Beta T Hücresi EksiltmeYapay Antijen Sunan HücrelerZoledronik Asit AktivasyonuLenfosit Zenginleştirme
Aferezli İnsan Ürününden Gama-Delta (φδ) T Hücrelerinin Genişlemesi ve Zenginleştirilmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.