Yöntem makalesi

Kardiyak İskemi / Reperfüzyonu In Vitro Taklit Etmek için Bir Hücre Ko-Kültür Modelinin Geliştirilmesi

DOI:

10.3791/62913

⸱

13 Ekim 2021

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, Vanderbilt University Medical Center, 2Anesthesiology, TVHS VA Medical Center, 3Department of Pharmacology, Vanderbilt University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Uzamsal mesafe, ayrı endotel ve kardiyomiyosit hücre katmanlarının bir ko-kültür modelinde hipoksi / reoksijenasyon hasarının değerlendirilmesinde anahtar bir parametredir, bu da ilk kez, kardiyomiyosit korumasında endotel hücrelerinin rolünü test etmek için uygun bir in vitro model sağlamak için ko-kültür uzamsal ortamının optimize edilmesinin gerekli olduğunu düşündürmektedir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İskemik kalp hastalığı dünya çapında önde gelen ölüm ve sakatlık nedenidir. Reperfüzyon iskeminin ötesinde ek yaralanmalara neden olur. Endotel hücreleri (ECs), kardiyomiyositleri (CM'ler) hücre-hücre etkileşimleri yoluyla reperfüzyon hasarından koruyabilir. Ko-kültürler, hücre-hücre etkileşimlerinin rolünü araştırmaya yardımcı olabilir. Karışık bir ko-kültür en basit yaklaşımdır, ancak izole tedaviler ve tek hücre tiplerinin aşağı akış analizleri mümkün olmadığından sınırlıdır. ECs'nin CM hücre hasarını doza bağımlı olarak zayıflatıp zayıflatamayacağını ve bu korumanın iki hücre hattı arasındaki temas mesafesini değiştirerek daha da optimize edilip edilemeyeceğini araştırmak için, hücreler arası katman mesafelerinde 0.5'te değişen üç tip hücre kültürü ekini test etmek için Fare Primer Koroner Arter Endotel Hücreleri ve Yetişkin Fare Kardiyomiyositlerini kullandık. Sırasıyla 1,0 ve 2,0 mm. Sadece CM'lerde, laktat dehidrogenaz (LDH) salınımı ile değerlendirilen hücresel hasar, hipoksi sırasında ve mesafe 0.5 ve 1.0 mm'ye kıyasla 2.0 mm olduğunda reoksijenasyon sonrasında önemli ölçüde artmıştır. ECS ve CM'ler neredeyse doğrudan temas halinde olduğunda (0.5 mm), hipoksi sonrası CM'lerin reoksijenasyon hasarında sadece hafif bir zayıflama vardı. 2.0 mm mesafe ile ECs, hem hipoksi hem de hipoksi / reoksijenasyon sırasında CM yaralanmasını zayıflattı, bu da EC'lerin CM'lerle çapraz konuşması için yeterli kültür mesafesinin gerekli olduğunu gösterdi, böylece salgılanan sinyal molekülleri dolaşabilir ve koruyucu yolları tamamen uyarabilir. Bulgularımız, ilk kez, EC / CM ortak kültür mekansal ortamının optimize edilmesinin, EC'lerin simüle iskemi / reperfüzyon hasarına karşı CM korumasındaki rolünü test etmek için uygun bir in vitro model sağlamak için gerekli olduğunu göstermektedir. Bu raporun amacı, araştırmacıların bu önemli modeli kendi avantajlarına kullanmaları için adım adım bir yaklaşım sağlamaktır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İskemik kalp hastalığı dünya çapında önde gelen ölüm ve sakatlık nedenidir 1,2. Bununla birlikte, reperfüzyonun tedavi sürecinin kendisi, miyokard iskemisi / reperfüzyon (IR) hasarı olarak bilinen kardiyomiyosit ölümüne neden olabilir, bunun için hala etkili bir ilaç yoktur3. Endotel hücrelerinin (ECs), kardiyomiyositleri (CM'ler) parakrin sinyallerin salgılanması ve hücreden hücreye etkileşimler yoluyla koruduğu öne sürülmüştür4.

Hücre ko-kültürü modelleri, otokrin ve / veya parakrin hücre-hücre etkileşimlerinin hücre fonksiyonu ve farklılaşması üzerindeki rolünü araştırmak için yaygın olarak kullanılmıştır. Ko-kültür modelleri arasında, karışık ko-kültür, iki farklı hücre tipinin, istenen hücre oranında tek bir kültür bölmesinde doğrudan temas halinde olduğu en basitolanıdır 5. Bununla birlikte, hücre tipleri arasındaki ayrı tedaviler ve tek bir hücre tipinin aşağı akış analizi, karışık popülasyon göz önüne alındığında kolayca mümkün değildir.

Önceki çalışmalar, hipoksik ve iskemik hakaretlerin, laktat dehidrogenaz (LDH) salınımı ile ölçülen hücre zarının bütünlüğünde önemli hasara neden olduğunu göstermiştir. Bu yaralanma reoksijenasyon üzerine kötüleşirve reperfüzyon hasarı 6,7,8'i taklit eder. Mevcut protokolün amacı, EC'lerin varlığının, hipoksi ve reoksijenasyonun (HR) neden olduğu CM'lerin hücre zarı sızıntısını doza bağımlı olarak azaltabileceği ve EC'lerin koruyucu etkisinin iki hücre hattı arasındaki temas mesafesinin değiştirilmesiyle optimize edilebileceği hipotezlerini test etmekti. Bu nedenle, üç tip hücre kültürü inserti ve Fare Primer Koroner Arter Endotel Hücreleri ve Yetişkin Fare Kardiyomiyositleri kullandık. Corning, Merck Millipore ve Greiner Bio-One markalı kesici uçlar, sırasıyla 0,5, 1,0 ve 2,0 mm'lik hücreler arası hat mesafelerine sahip üç farklı hücre kültürü çapraz konuşma koşulu oluşturmamızı sağladı. Her durumda kesici uç başına 100.000 ECs kaplandı.

Ek olarak, ko-kültürdeki EC'lerin yoğunluğunun bu modelde İK hasarının zayıflamasına katkıda bulunup bulunmadığını belirlemek için, CM'ler tarafından EC konsantrasyonu ve LDH salınımı arasındaki doz-yanıt ilişkisini inceledik. ECs, 2.0 mm'lik kesici uçta kesici uç başına sırasıyla 25.000, 50.000 ve 100.000 olarak kaplandı.

Bu rapor, araştırmacıların bu önemli modeli kendi avantajlarına kullanmaları için adım adım bir yaklaşım sunmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Deneysel hazırlama/kaplama

  1. CM'leri ve EC'leri üreticinin talimatlarına göre koruyun.
    1. Satıcılardan geldiklerinde her iki hücre hattını da çözün. Taze maddelerle yıkandıktan sonra T25 şişelerde plaka. Her hücre kültürü ortamının, hücrelerin satın alındığı aynı satıcılardan satın alınması önerilir. Ertesi gün, hücreleri medya ile yenileyin ve birleştiğinde kullanın.
    2. Hücre kültürü inkübatörünü %21 O2, %5 CO2, %74N2 ile 37 °C'de tutun ve nemlendirilmiş halde tutun.
      NOT: Bu protokolde kullanılan Fare Primer Koroner Arter Endotel Hücreleri, C57BL/6 farelerin koroner arterlerinden izole edilir ve Yetişkin Fare Kardiyomiyositleri yetişkin C57BL/6J fare kalplerinden izole edilir ve ticari olarak elde edilir (bkz.
  2. Steril koşullar altında plaka CM'leri 24 delikli plakaların dibine (alt tabaka) yerleştirin. 24 saat sonra, plaka EC'leri ko-kültür kuyusunun ekine (veya üst kısmına) sokar. EC kaplamadan 24 saat sonra, EC uçlarını CM plaka tabanlarına yerleştirerek ko-kültür periyoduna başlayın. Kullanmadan önce hücrelerin en az 12-24 saat boyunca birlikte kültürlenmesine izin verin. Bu adımlar aşağıda ayrıntılı olarak açıklanmıştır.
    1. Bir ışık mikroskobu altında CM hücre hattı akıcılığını tahmin edin. Kültür şişelerinde hücreler% 90 -% 100 oranında akıtılmış gibi göründüğünde, deneysel kaplamaya devam edin.
    2. Ortamları birleşik hücre kültürleri içeren şişelerden çıkarın ve T25 şişeleri için 3-5 mL Tripsin/Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ile tripsinize edin. Şişeyi nazikçe çalkalayın, 2-5 dakika boyunca 37 ° C'de inkübe edin ve ardından enzimatik ilerlemeyi bir ışık mikroskobu altında değerlendirin. Hücreler yuvarlanmaya başladığında, hücreleri yüzeyden ayırmak için bir hücre kazıyıcı kullanın.
    3. Ayrılmadan sonra, tripsin / hücre çözeltisini T25 şişeleri için 10 mL ortam içeren 50 mL'lik bir tüpe ekleyerek tripsin çözeltisini etkisiz hale getirin. Yumuşak bir hücre peleti elde etmek için hücre süspansiyonunu 120 x g'de 2 dakika boyunca santrifüj yapın. Süpernatantı çıkarın ve peleti 5 mL ortamda yeniden askıya alın.
    4. Hücre sayımı yapmak ve hücre canlılığını doğrulamak için, 10 μL yeniden askıya alınmış hücre ve 10 μL tripan mavi boyadan oluşan bir aliquot karıştırın. Bir hücre sayacı kullanarak canlı hücreleri sayın. İstenilen tohumlama yoğunluklarını elde etmek için hücreleri taze normal ortamlarla seyreltin. Hacimler, istenen tohum yoğunluğuna ve stok çözeltilerinin hücre konsantrasyonuna bağlı olarak hesaplanır. Tüm kaplamalar steril koşullar altında yapılmalıdır.
    5. Hücre dışı matris ile önceden kaplanmış 24 delikli bir plakanın dibine kuyu başına 300.000 tohumlama yoğunluğunda plaka CM'leri. Hücrelerigece boyunca% 21 O2 ve% 5 CO2 ile 37 ° C'de tutun.
    6. 24 saat sonra, plaka uçlara kesici uç başına 100.000 optimum kaplama yoğunluğunda (kültür alanı 33,6mm2'dir) plakalanır (Şekil 1). 24 saatlik EC kaplamasından sonra, EC uçlarını CM kuyucuklarının içine yerleştirin ve ko-kültürü başlatın. Deneyleri yapmadan önce hücrelerin 12-24 saat boyunca birlikte kültürlenmesine izin verin.
    7. Deneyler gerçekleştirildiğinde, hem CM'lerin hem de EC'lerin %80-%90 akıcılığa ulaştığından emin olun.

2. İskemi / reperfüzyon hasarını simüle etmek için hipoksi / reoksijenasyon In Vitro

NOT: Aşağıdaki adımların açıklandığı gibi gerçekleştirilmesi gerekir, arada duraklamayın.

  1. Hipoksik ortamı, 50 mL'lik bir konik tüpe ~ 25 mL ortam dökerek hazırlayın. Üstünü silikon bir membranla hava ile kapatın ve bir delik açmak için sterilize edilmiş bir pipet kullanın. Başka bir delik oluşturun, bu sefer pipeti ortama yaklaşık 2/3 batırılmış halde bırakın.
  2. Ortamı hipoksik gazla (%0,0125 O2, %5 CO 2, %94,99 N2) 5 dakika boyunca 30 L/dak akış hızında yıkayın. Bu, hipoksi başladığında ortamda çözünenO2'yi en aza indirir (adım 2.5).
  3. Ekli hücreler içeren 24 delikli plakaların veya kültür eklerinin ortamını atın ve 100 μL/kuyucuk dolusu %10 Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS) ile çok nazikçe yıkayın. Daha sonra, taze hazırlanmış hipoksik ortamın 500 μL'sini plakaların veya eklerin her bir oluğuna ekleyin.
    NOT: Ortamdaki hipoksi, hücreler ve medya için gerçek hipoksi adım 2.5'te başlamadan önce bu adımda mümkün olduğunca kısa bir süre kesintiye uğrar.
    1. Normoksik kontrol grubunda, orijinal ortamı glikoz ve serum içeren taze normal ortamlarla değiştirin.
  4. Hipoksi odasını, odanın içine steril suyla dolu bir Petri kabı yerleştirerek nemlendirin. Daha sonra, hipoksik grupları içeren plakaları odaya yerleştirin.
  5. Hipoksi odacığını hipoksik gazla (%0.0125 O 2, %5 CO 2, %94.99 N2) 5 dakika boyunca 30 L/dk'lık bir akışla yıkayın. Odayı 24 saat boyunca 37 °C inkübatöre yerleştirin.
  6. Hipoksiden sonra, normal koşullar altında CM'leri ve EC'leri yetiştirin. Bunu yapmak için, plakaların/kesici uçların eski ortamını atın, normal ortamla değiştirin (glikoz ve serum içeren; her kuyucuk / ekin 500 μL'si) ve reperfüzyonu taklit etmek için 2 saat boyunca normal kültür koşulları altında (%21 O 2,% 5 CO2,% 74 N2, 37 ° C) inkübatörde saklayın.
  7. Ortam değişiminin herhangi bir etkisini kontrol etmek için, hipoksik ortam değiştirilirken aynı zamanda normoksik hücrelerin ortamını değiştirin.
    NOT: Şekil 2 , bu protokole şematik bir genel bakış sağlar.

3. Uç nokta değerlendirmesi

  1. Hücre kültürü ortamını 24 delikli plakadan 96 delikli bir plakaya aktarın. 24 delikli plakanın her bir kuyucuğundan 200 μL ortam kullanın ve buna göre 96 delikli plakanın dört kuyucuğuna eşit olarak dağıtın. Normoksiye karşı hipoksiye karşı HR için her biri bir plaka kullanın.
  2. Hücresel yaralanma derecesini, örneğin, üreticinin talimatlarını izleyerek bir sitotoksisite tahlil kiti kullanarak LDH için absorbansı ölçerek belirleyin. Tahlil protokolünde belirtildiği gibi tahlili 96 kuyucuklu bir plakada gerçekleştirin.

4. İstatistik

  1. Parametrik verileri ortalama/standart sapma olarak ve parametrik olmayan verileri medyan/çeyrekler arası aralıklı kutu grafikleri olarak görüntüleyin. Tip-1 hata olasılığını azaltmak için kabul edilebilir post-hoc testlerle yeterli parametrik ve parametrik olmayan çoklu karşılaştırma testleri yapılmalıdır. Anlamlılık tipik olarak 0,05 alfaya (iki kuyruklu) ayarlanır.
  2. Mevcut çalışmada yapılan tüm deneyler için, bir deneyde en az üç iyi replikasyon gerçekleştirin. İstatistiksel analiz için kullanılan her deneyin üç ila altı tekrarı vardı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu deneyde kullanılan üç kesici uç türü (A, B, C) 0,4 μm'lik aynı gözenek boyutuna sahiptir. Aralarındaki tek fark, iki ortak kültürlü hücre katmanı arasındaki mesafelerin sırasıyla 0,5, 1,0 ve 2,0 mm olmasını sağlayan (Şekil 3) ve farklı satıcılardan (ayrıntılar için bkz.

IR hasarını simüle etmek için HR'ye maruz kalan iki hücre hattının ayrı katmanlarıyla in vitro bir ko-kültür modeli oluşturmak için, ECS ile birlikte kültürlenmiş veya ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokoldeki kritik adımlar
Kardiyoproteksiyonun hücresel mekanizmalarını incelemek için hücre ko-kültürü modelleri kullanılmıştır. Bu nedenle, aralarında anlamlı bir mesafe olan iki ayrı katmanın nasıl oluşturulacağı, uygun bir ortak kültür modelinin geliştirilmesi için çok önemlidir. Simüle edilmiş IR, yani HR, yaralanma çalışmasındaki bir zorluk, sadece iskeminin (hipoksi) kendisinin değil, aynı zamanda reperfüzyonun (reoksijenasyon) hücresel işlev bozukluğunu şiddetlendirmesidir. Bu nedenle, gerçe...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma kısmen ABD Gazi İşleri Bakanlığı Biyomedikal Laboratuvar Ar-Ge Servisi (I01 BX003482) ve M.L.R.'ye kurumsal fonlar tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Yetişkin Fare Kardiyomiyositleri (CM'ler)Celprogen Inc11041-14Yetişkin C57BL/6J fare kalp dokusundan izole edilmiştir
Otomatik Hücre Sayacı Kontes IIInvitrogenA27977Hücre sayılarını hesaplamak için hücre sayımı
Biyo-Güvenlik KabiniNuaireNU425400Hücre kültürü steril başlık
Hücre Kültürü Dondurma OrtamıHücre Biyolojikleri Inc6916Uzun süreli hücre hattı depolaması için hücre dondurma için kullanılır
Hücre Kültürü İnkübatörüNuaireNu-5500Normal hücre yaşam koşullarını sağlamak için (% 21 O < alt > 2 < / alt >,% 5 CO< alt > 2 < / alt >,% 74 N < alt > 2 < / alt >, 37 derece; C, nemlendirilmiş)
Hücre Kültürü İnkübatörü Gaz TankıAL Sıkıştırılmış GazlarUN1013Hücre kültürü inkübatörü için gerekli gaz 
Hücre Kültürü Ekleri A (0,5 mm)Corning Inc353095EC-CM ko-kültürü için kullanılır
Hücre Kültürü Ekleri B (1,0 mm)Milicell MilliporePIHP01250EC-CM ko-kültürü için kullanılır
Hücre Kültürü Ekleri C (2,0 mm)Greiner Bio-One662640EC-CM ko-kültür
SantrifüjüAnstel Enterprises Inc4235Hücre kültürü kaplama ve pasajlama için
CMs Hücre Kültürü Şişeleri T25Celprogen IncE11041-14CMs normal kültür için kullanılır, üretici tarafından kaplanmıştır
CMs Hücre Kültürü Ortamı KompleCelprogen IncM11041-14SCMs kültürü komple
ortam CMs Hücre Kültürü Ortamı Komple Fenol içermeyenCelprogen IncM11041-14PNLDH ölçümü sırasında kullanılan fenol kırmızısı içermeyen CMs kültür ortamı
CMs Hücre Kültürü Plakaları 96 kuyuCelprogen IncE11041-14-96wellLDH ölçümü deneyleri için kullanılır, üretici
CMs Hipoksi Hücre Kültürü OrtamıCelprogen IncM11041-14GFPNCMs hipoksik durumda hücre kültürü (glikoz ve serum içermeyen)
Kontes hücre sayma odası slaytlarıInvitrogenC10283Hücre sayacı için kullanılan sayma slaytları
Cyquant LDH Sitotoksisite KitiTermo Bilimsel C20301LDH ölçüm kiti
ECS Hücre Kültürü Şişeleri T25Fisher Scientific FB012935EC'ler için kullanılır normal kültür
EC'ler Hücre Kültürü Ortamı KompleHücre Biyolojikleri A.ŞM1168ECS kültürü tam ortamı
ECS Hücre Kültürü Ortamı Komple Fenol içermeyenHücre Biyolojileri A.Ş. M1168PFLDH ölçümü sırasında kullanılan fenol kırmızısı içermeyen ECS kültür ortamı
ECS Hücre Kültürü Plakaları 96 kuyuluFisher Scientific (Costar)3370LDH deneyleri için kullanılır ölçüm
ECS Kültürü Jelatin Bazlı Kaplama ÇözeltisiCell Biologics Inc6950şişe ve plakaları kaplamak için kullanılır
Cell Biologics IncGPF1168ECs hücre kültürü hipoksik durumda (glikoz ve serum içermez)
Fetal Sığır Serumu (FBS)Fisher ScientificMT35011CVHücre kültürü ve bakımı için FBS-HI USDA onaylı
Hipoksi Odası KökHücre Teknolojileri27310%0.01 O2 ortamı ile hipoksik bir durum oluşturmak için
Hipoksi Odası Akış ÖlçerStemCell Teknolojileri27311Tutarlı bir gaz akış hızı için hipoksik gaz tankına bağlanmak için
Hipoksik Gaz Tankı (%0.01 O2 Silindir)AL Sıkıştırılmış GazlarUN1956Hipoksik ortamı ve odayı yıkamak için kullanılır (% 0.01 O < alt > 2 < / alt > % 5 CO< alt > 2 < / alt > / 94.99N < alt > 2 < / alt >)
Mikroskop ve nbsp;NikonTMSHücre durumunu gözlemlemek için
Fare Primer Koroner Arter Endotel Hücreleri (EC'ler)Cell Biologics IncC57-6093C57BL/6 farelerin koroner arterinden izole
NUNC 15ML CONICL TüpleriFisher Scientific12565269Hücre kültürü işlemi, deneyler, çözelti hazırlama vb. için.
NUNC 50ML CONICL TüpleriFisher Scientific12565271Hücre kültürü işlemi, deneyler, çözelti hazırlama vb. için.
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS)Sigma-AldrichD8662Kültür veya deneyler sırasında hücre yıkama için kullanılır
Plaka OkuyucuBioTek Enstrüman11120533Kolorimetrik veya florometrik plaka okuma
Reaksiyonu 96 Well Palte (kapağı temizle)Fisher Scientific12565226LDH ölçüm plakası okuması için kullanılır
CM'ler için Tripsin/EDTACelprogen IncT1509-0141 x steril filtreli ve doku kültürü test edilmiş
Cell Biologics Inc6914/0619Tripsin/EDTA%0,25, hücre kültürü test edilmiştir
için kullanılır CMs tarafından kaplanmıştır . ECS Hipoksi Hücre Kültürü Ortamı için edilmiştir ECS için

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hausenloy, D. J., et al. Ischaemic conditioning and targeting reperfusion injury: a 30 year voyage of discovery. Basic Research in Cardiology. 111 (6), 70(2016).
  2. Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. Myocardial ischemia-reperfusion injury: a neglected therapeutic target. The Journal of Clinical Investigation. 123 (1), 92-100 (2013).
  3. Gottlieb, R. A. Cell death pathways in acute ischemia/reperfusion injury. Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 16 (3-4), 233-238 (2011).
  4. Colliva, A., Braga, L., Giacca, M., Zacchigna, S. Endothelial cell-cardiomyocyte crosstalk in heart development and disease. The Journal of Physiology. 598 (14), 2923-2939 (2020).
  5. Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. Studying cell-cell communication in co-culture. Biotechnology Journal. 8 (4), 395-396 (2013).
  6. Salzman, M. M., Bartos, J. A., Yannopoulos, D., Riess, M. L. Poloxamer 188 protects isolated adult mouse cardiomyocytes from reoxygenation injury. Pharmacology Research & Perspectives. 8 (6), 00639(2020).
  7. Kalogeris, T., Baines, C. P., Krenz, M., Korthuis, R. J. Cell biology of ischemia/reperfusion injury. International Review of Cell and Molecular Biology. 298, 229-317 (2012).
  8. Martindale, J. J., Metzger, J. M. Uncoupling of increased cellular oxidative stress and myocardial ischemia reperfusion injury by directed sarcolemma stabilization. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 67, 26-37 (2014).
  9. vander Meer, A. D., Orlova, V. V., ten Dijke, P., vanden Berg, A., Mummery, C. L. Three-dimensional co-cultures of human endothelial cells and embryonic stem cell-derived pericytes inside a microfluidic device. Lab on a Chip. 13, 3562-3568 (2013).
  10. Bidarra, S. J., et al. Phenotypic and proliferative modulation of human mesenchymal stem cells via crosstalk with endothelial cells. Stem Cell Research. 7, 186-197 (2011).
  11. Campbell, J. J., Davidenko, N., Caffarel, M. M., Cameron, R. E., Watson, C. J. A multifunctional 3D co-culture system for studies of mammary tissue morphogenesis and stem cell biology. PloS One. 6, 25661(2011).
  12. Mehes, E., Mones, E., Nemeth, V., Vicsek, T. Collective motion of cells mediates segregation and pattern formation in co-cultures. PloS One. 7, 31711(2012).
  13. Miki, Y., et al. The advantages of co-culture over mono cell culture in simulating in vivo environment. The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 131 (3-5), 68-75 (2012).
  14. Moraes, C., Mehta, G., Lesher-Perez, S. C., Takayama, S. Organs-on-a-chip: a focus on compartmentalized microdevices. Annals of Biomedical Engineering. 40 (6), 1211-1227 (2012).
  15. Campbell, J., Davidenko, N., Caffarel, M., Cameron, R., Watson, C. A multifunctional 3D co-culture system for studies of mammary tissue morphogenesis and stem cell biology. PLoS One. 6, 25661(2011).
  16. Wu, M. H., Huang, S. B., Lee, G. B. Microfluidic cell culture systems for drug research. Lab on a Chip. 10, 939-956 (2010).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Reperf zyon HasarEndotel H creleriKardiyomiyositlerHipoksi ReoksijenasyonLDH Sal n mH cre H cre Etkile imleriIn Vitro ModelK lt r nsetleri

İlgili makaleler