Yöntem makalesi

Aptamer Afinite Boncukları Kullanılarak Gram-Negatif Bakterilerin Akış Yoluyla Ayrılması için Mikroakışkan Akustoforez

DOI:

10.3791/63300

⸱

17 Ekim 2022

 ,  ,  , 
1Department of Digital Anti-Aging Health Care, Inje University, 2Micro device Lab Co., Ltd, 3Biohealth Products Research Center (BPRC), Inje University, 4Department of Biomedical Engineering, Inje University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede, mikroakışkan akustoforez tekniği ve Gram-negatif bakterilerin bir ortamdan hızlı ve verimli bir şekilde izole edilmesi için kullanılabilecek aptamer modifiye mikroboncuklar kullanılarak mikroakışkan akustohoretik çiplerin üretimi ve işletilmesi açıklanmaktadır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede, mikroakışkan akustoforez tekniği ve Gram-negatif bakterilerin bir ortamdan hızlı ve verimli bir şekilde izole edilmesi için kullanılabilecek aptamer modifiye mikroboncuklar kullanılarak mikroakışkan akustohoretik çiplerin üretimi ve işletilmesi açıklanmaktadır. Bu yöntem, uzun, kare mikro kanalların bir karışımını kullanarak ayırma verimliliğini artırır. Bu sistemde, numune ve tampon bir akış kontrolörü aracılığıyla giriş portuna enjekte edilir. Boncuk merkezleme ve numune ayırma için, AC gücü, mikrokanalda akustik radyasyon kuvveti üretmek için bir güç amplifikatörü ile bir fonksiyon üreteci aracılığıyla piezoelektrik dönüştürücüye uygulanır. Hem giriş hem de çıkışta çatallı bir kanal vardır, bu da aynı anda ayırma, saflaştırma ve konsantrasyon sağlar. Cihaz,% >98'lik bir iyileşme oranına ve% 97.8'lik bir saflığa, 10x doz konsantrasyonuna kadar% 97.8'lik bir saflığa sahiptir. Bu çalışma, bakterileri ayırmak için mevcut yöntemlerden daha yüksek bir iyileşme oranı ve saflık göstermiştir, bu da cihazın bakterileri verimli bir şekilde ayırabileceğini düşündürmektedir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dielektrik transfer, manyetoforez, boncuk ekstraksiyonu, filtreleme, santrifüjlü mikroakışkanlar ve atalet etkileri ve yüzey akustik dalgaları 1,2'ye dayalı yöntemlere ek olarak, bakterileri tıbbi ve çevresel örneklerden izole etmek için mikroakışkan platformlar geliştirilmektedir. Patojenik bakterilerin tespiti polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanılarak devam eder, ancak genellikle zahmetli, karmaşık ve zaman alıcıdır 3,4. Mikroakışkan akustoforez sistemleri, makul verim ve temassız hücre izolasyonu 5,6,7 yoluyla bunu ele almak için bir alternatiftir. Akustoforez, bir ses dalgası boyunca maddi hareket fenomenini kullanarak boncukları ayıran veya yoğunlaştıran bir teknolojidir. Ses dalgaları mikrokanala girdiğinde, boncukların büyüklüğüne, yoğunluğuna vb. göre sıralanır ve hücreler, süspansiyon ortamı 7,8'in biyokimyasal ve elektriksel özelliklerine göre ayrılabilir. Buna göre, birçok akustophoretic çalışma aktif olarak 9,10,11 takip edilmiş ve son zamanlarda, ayakta duran yüzey akustik dalga mikroakışkanlarında sınır güdümlü akustik akış tarafından indüklenen akustophoretik hareketin 3D sayısal simülasyonları tanıtılmıştır 12.

Çeşitli alanlardaki çalışmalar antikorların nasıl değiştirileceğini incelemektedir 2,3. Aptamer, yüksek seçiciliğe ve özgüllüğe sahip bir hedef malzemedir vebirçok çalışma 2,9,10,13 yürütülmektedir. Aptamerler, antikorlara kıyasla küçük boyutlu, mükemmel biyolojik stabilite, düşük maliyetli ve yüksek tekrarlanabilirlik avantajlarına sahiptir ve tanı ve tedavi uygulamalarında incelenmektedir 2,3,14.

Burada, bu makalede, aptamer modifiye mikroboncuklar kullanılarak Gram-negatif (GN) bakterilerin bir ortamdan hızlı ve verimli bir şekilde ayrılması için kullanılabilecek bir mikroakışkan akustoforez teknolojisi protokolü açıklanmaktadır. Bu sistem, uzun bir dikdörtgen mikrokanal içindeki iki ortogonal rezonansı aynı anda uyararak, ayırma verimliliği için düğüm ve anti-düğüm noktalarında aptamer bağlı mikroboncukları hizalamak ve odaklamak için tek piezoelektrik çalıştırma yoluyla iki boyutlu (2B) akustik durağan bir dalga üretir 2,11,15,16 . Hem giriş hem de çıkışta çatallı bir kanal vardır, bu da aynı anda ayırma, saflaştırma ve konsantrasyon sağlar.

Bu protokol, bakteriyel bulaşıcı hastalıkların erken teşhisi ve gerçek zamanlı su izleme yoluyla patojenik bakteriyel enfeksiyonlara hızlı, seçici ve hassas bir yanıt alanında yardımcı olabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Mikroakışkan akustoforez çip tasarımı

NOT: Şekil 1 , hedef mikroboncukların mikrokanallardan akustoforez ile ayrılması ve toplanmasının bir şemasını göstermektedir. Mikroakışkan akustoforez çipi bir CAD programı ile tasarlanmıştır.

  1. Cihazın ayırma performansını incelemek için bakterilerin boyutuna karşılık gelen aptamer modifiye boncuklar ve streptavidin kaplı polistiren (PS) boncukların bir karışımını kullanan mikroakışkan bir akustoforez çipi tasarlayın.
  2. PS boncuklarını hedef çıkışta toplayan ve numune girişine bir PS numune karışımı enjekte ettikten sonra geri kalanını çıkıştan atan bir mikroakışkan akustoforez çipi tasarlayın (bkz. Şekil 2 ve Tablo 1).
    NOT: Bu amaçla, akustoakışkan çip, numunelerin ve tamponun enjekte edilmesi için iki girişten, mikroboncukların merkezi olarak hizalanmasını sağlamak için bağlı bir piezoelektrik dönüştürücüye (PZT) sahip bir ana kanaldan ve numunelerin toplandığı ve atıkların boşaltıldığı iki çıkıştan oluşan tasarlanmıştır (Şekil 3A)
  3. Mikroboncukların, tamponların, bakterilerin ve aptamerlerin ana kanaldan geçtiği, mikroboncukların PZT tarafından indüklenen çip içi akustoforez yoluyla merkezi olarak hizalandığı bir mikroakışkan akustoforez çipi tasarlayın (Şekil 3B, C)

2. Mikroakışkan akustoforez çip imalatı

NOT: Dört katmanı aşağıdaki sırayla birleştirin: Şekil 3A, B'de gösterildiği gibi bir borosilikat cam-silikon tabaka, bir silikon tabaka, bir borosilikat cam tabaka ve bir PZT tabakası.

  1. Polietereterikon (PEEK) tüplerini bağlamak için giriş ve çıkışta17 kumlama ile 2 mm çapında deliklere sahip borosilikat cam (en üst tabaka) hazırlayın. Borosilikat cam 20 × 80 × 0,5mm3 ölçer.
  2. Bir fotodirenç ve derin reaktif iyon aşındırma (RIE)18 ile elde edilen bir silikon desen kullanılarak oluşturulmuş 0,2 ×0,2 mm2 kesit alanına sahip bir mikrokanala sahip 200 μm kalınlığında bir silikon kanal tabakası hazırlayın. Reaktif iyon aşındırma sırasında numune ve tampon giriş kanalları ile toplama ve atık çıkış kanalları için 1 mm çapında delikler açın.
    NOT: Burada, iyon aşındırma, mikrokanallar oluşturmak için RIE işlemini kullanır. Silikon kanal tabakası için silikon gofret üzerinde bir kanal şeklinde bir fotodirenç uygulandı. PR kaplı silikon gofret, flor18'e 13.56 Mhz uygulanarak üretilen plazma ile kazındı.
  3. Adım 2.1'de borosilikat cama bağlanmış 2.2 (20 × 80 × 0.5 mm 3) 'de hazırlanan silikon tabakanın (20 × 80 × 0.5 mm3) üstündeki ve altındaki katmanlarla bir çip ve 1.000 V ve 400 ° C19'da eloksal kullanılarak üçüncü bir borosilikat cam tabakası hazırlayın.
  4. Bir siyanoakrilat yapıştırıcı (10 μL veya daha az) kullanarak mikroakışkan kanal boyunca borosilikat cam tabakaya bir PZT (20 × 40mm2) takın.
    NOT: Yükseklikteki herhangi bir değişikliği en aza indirmek için yapıştırıcıyı kanalda çok ince bir tabaka halinde pamuklu çubukla uygulayın. Şekil 3C , cihazın bir resmidir.

3. Bakteri suşları ve kültürü

NOT: Deneyler için GN ve Gram-pozitif (GP) bakterileri seçmek ve inkübe etmek için Tablo 2'ye bakınız. Kültür yöntemi için 3.1-3.4 numaralı adımlara bakın. Tüm bakteriler, 600 nm'de (OD 600) 0.4'lük bir absorbans elde edilene kadar aerobik koşullar altında inkübe edilmelidir.

  1. Escherichia coli DH5α, Escherichia coli KCTC2571, Sphingomonas insulae ve Pseudomonas pictorum gibi GN bakterileri ve Staphylococcus epidermidis ve Staphylococcus pasteuri gibi GP bakterileri için, Luria-Bertani ortamında 37 ° C'de ve 16 saat boyunca 220 rpm'de kuluçkaya yatırılır.
  2. Enterobacter (GN) ve Bacillus megaterium (GP; KCTC 1021), 37 ° C'de ve 16 saat boyunca 220 rpm'de besin suyu ortamında inkübe edin.
  3. Enterococcus thailandicus (GP) için, de Man, Rogosa ve Sharpe (MRS) ortamında 37 ° C'de ve 16 saat boyunca 220 rpm'de inkübe edin.
  4. Listeria grayi (GP) için, beyin kalp infüzyon ortamında 37 ° C'de ve 16 saat boyunca 220 rpm'de inkübe edin.
  5. Kültürlenmiş bakterileri oda sıcaklığında (RT) 1 dakika boyunca santrifüj (9056 x g), daha sonra 1x fosfat tamponlu salin (PBS) tamponu ile iki kez yıkayın.
  6. Seçilen GN ve GP bakterilerini PBS tamponunda yeniden askıya alarak analiz için hazırlayın.

4. Mikroboncuklar ve aptamer'in mikroboncuklar üzerine immobilizasyonu

  1. Streptavidin kaplı mikroboncuk (10 μm) karışımını (Malzeme Tablosu) kullanmadan önce tekrar askıya alın (20 saniye boyunca vorteks yoluyla karıştırın).
  2. Aptamer'i 3 dakika boyunca 95 °C'de denatüre ederek ve ardından 2 dakika boyunca 0 °C'de tekrar katlayarak hazırlayın.
  3. Yeniden askıya alınmış streptavidin kaplı mikroboncuk karışımının 250 μL'sini 1,5 mL'lik bir tüpe aktarın ve RT'de Tris-HCl tamponu (50 mM Tris, pH 7,4, 1 mM MgCl2, 5 mM KCL, 100 mM NaCl) ile yıkayın. Daha sonra tüpe 100 μL biyotinillenmiş DNA aptamer ekleyin.
  4. RT'de karışımı döndürürken (25 rpm) 30 dakika boyunca inkübe edin.
  5. Santrifüjlemeden sonra (9056 x g), tüpü RT'de 200 μL Tris-HCl tamponu ile iki kez yıkayın.
  6. Yıkanmış numune tüpüne 10 μL BSA (100 mg/mL) ekleyin ve RT'de rotasyonla (25 rpm) 30 dakika inkübe edin.
  7. Son olarak, aptamer modifiye mikroboncukları RT'de Tris-HCl tamponunda santrifüjleme (9056 x g) ile iki kez yıkayın.

5. Akustoforez kurulumu ve çalışması

  1. PEEK tüplerini, iki numune ve tampon enjekte etmek için iki girişe ve atıkların toplanması ve boşaltılması için iki çıkışa bağlayın (Şekil 4).
  2. Mikroakışkan akustoforez kanalını, 10 mL'lik bir şırınga kullanarak kabarcıksız demineralize su ile manuel olarak doldurun.
  3. Sıvı akışını kontrol etmek için iki veya daha fazla çıkış kanalına sahip hassas bir basınç kontrolörü hazırlayın. Ardından, şişeleri sırasıyla kapaklarında iki delik bulunan numune ve tamponla yarı yarıya doldurun ve talaş girişine bağlayın.
    NOT: İki veya daha fazla çıkış kanalına sahip bir hassas basınç kontrolörü, birden fazla hassas basınç kontrolörü ile değiştirilebilir. Tampon girişinde, numune enjeksiyonu sırasında numunenin merkeze hareket etmesini önleyen laminer bir akış oluşturabilen bir tampon, bir akış kontrolörü aracılığıyla enjekte edilir.
  4. Cihazı hazırladıktan sonra, hassas basınç kontrol cihazını kullanarak numune girişine 2 kPa ve tampon girişine 4 kPa basınç uygulayarak numuneyi ve tamponu enjekte edin.
    NOT: Şu anda, pürüzsüz laminer akış için, tamponun enjeksiyon basıncı, numunenin enjeksiyon basıncından daha yüksek olmalıdır. Akış, giriş kanalına bağlı aspiratöre sabitlenmiş bir akış kontrolörü ile kontrol edilir.
  5. Mikroskoptan kontrol ederken PZT'yi kullanarak mikroakışkan kanalın merkezine taşımak için bir boncuğa odaklanın.
    NOT: Boncuk ne kadar büyük olursa, dalga formu üzerindeki etki o kadar büyük olur, bu nedenle düğüm noktasıyla hizalamak daha kolaydır. Amplifikatörlü fonksiyon üreteci, mikrokanalda sinüs dalgası üretmek için PZT'ye güç uygular. Mikrokanalın üst ve alt kısımları camdan yapıldığı için, üretilen sinüs dalgası yansır ve bir düğüm noktası7 oluşturur.
  6. Tek kanallı bir fonksiyon üreteci kullanarak 3,66 MHz'lik bir rezonans frekansı oluşturun ve bir güç amplifikatörü kullanarak tipik bir sinyali 16 dB (yaklaşık dokuz kat) yükseltin (Şekil 4).
    NOT: Aktüatörün rezonans frekansı kanalın boyutuyla eşleşmelidir; Kanal kare olduğundan, PZT tek bir düğüm oluşturmak için doğru bir frekansta çalışır.
  7. Bir floresan mikroskobu ve 1.200 fps'de çalışan yüksek hızlı bir kamera ile akustoakışkan çip üzerindeki ayırma ve zenginleştirme işlemlerini gözlemleyin.
  8. GN bakterilerinin ve GP bakterilerinin varlığını veya yokluğunu, toplama ve atık çıkış numuneleri yoluyla boşaltılan bakteri bağlı boncukların ve bakterilerin floresan mikroskop kamerasıyla çekilen görüntüleri kontrol ederek ölçün ve analiz edin.
    NOT: Tampon, bakteri ve aptamer içeren mikroboncuklar ana kanaldan geçer ve mikroboncuklar PZT tarafından indüklenen çip içi akustoforez yoluyla merkezi olarak hizalanır. Son olarak, GN bakterilerini bağlayan mikroboncuklar toplama çıkışında toplanır ve toplanmamış bakteriler atık çıkışından boşaltılır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 5, PZT voltajının bir fonksiyonu olarak boncuk akışının görüntüsünü göstermektedir (KAPALI, 0,1 V, 0,5 V, 5 V). Bu çalışmada tanıtılan akustophoretic çip durumunda, PZT'nin voltajı arttıkça, 10 μm büyüklüğündeki boncukların merkezi konsantrasyonunun arttığı doğrulanmıştır. 10 μm büyüklüğündeki boncukların çoğu, PZT voltajının 5 V'unda merkezde yoğunlaşmıştır. Bu sonuç sayesinde, tek kanallı bir fonksiyon üretecinde 3.66 MHz'lik bir rezonans frekansı üretildi ve bir güç amplifikatörü ku...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

GN bakterilerini kültür örneklerinden boyutlarına ve türlerine göre sürekli çalışan bir yönteme ve aptamer modifiye edilmiş mikro boncuklara dayanarak yüksek hızda yakalamak ve aktarmak için sonik bir levitasyon mikroakışkan cihazı geliştirdik. Uzun, kare mikrokanal, 2D akustoforez için daha önce bildirilen 20,21,22,23,24,25,26'dan daha basit bir tasarım ve daha fazla maliyet verimliliği sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Kore hükümeti (Bilim ve BİT Bakanlığı) tarafından finanse edilen Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NMG) hibesi tarafından desteklenmiştir. (Hayır. NMK-2021R1A2C1011380)

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1 ve mikro; m polistiren mikro boncuklarBang LaboratoriesPS04001Hücre boyutu boncukları
10 ve mikro; m Streptavidin kaplı mikro boncuklarBang LaboratoriesCP01007Aptamer afinite boncukları
4 inç Silikon Gofret / SU-8 kalıp4science29-03573-01
Bakteri konjugasyonu içinAptamerEntegre DNA TeknolojileriGN3-6'RNA'nın
Borosilikat camSchottBOROFLOAT 33Çip Santrifüjünün Bileşenleri
DaihanCF-10Wasing parçacıkları
Siyanoakrilat tutkal3MAD100PZT'yi mikroçip
Escherichia coli DH5 & alpha'ya takın;KCTCKCTC2571Hedef bakteri
Fonksiyonel jeneratörGW InstekAFG-2225Frekans üret
Yüksek hızlı kameraPhotronFASTCAM MiniAyrılma gözlemi
Sıcak plakaBirHI-1000Sıvının kürlenmesi için ısıtma plakası PDMS
KOVAX-ŞIRINGA 10 mL ŞırıngaKoreavaccine22G-10MLMikroakışkan akustoforez kanalını kabarcıksız demineralize su ile doldurun.
Sıvı polidimetilsiloksan, PDMSDow Corning Inc.Sylgard 184Çip bileşenleri
LB Et suyu MillerBD Difco244620Hücre kültürü (Luria-Bertani ortamı)
MikroskopOlympus Corp.IX-81Ayrılma gözlemi
PBS tamponuOğlak bilimselPBS-1AKayıp bakteri
PEEK TüpleriSaint-Gobain Ppl Corp.AAD04103Parçacıkları enjekte edin veya toplayın
Piezoelektrik dönüştürücüFuji SeramikC-213Kanalda belirli bir dalga oluşturun
Güç amplifikatörüAmplifikatör Araştırması75A250AYükseltme frekansı
Basınç kontrolörü/μ fluconAMEDAMED-μ fluconHava basıncı/akış kontrol cihazının kontrolü
Tris-HCl tamponinvitrojen15567027Boşa harcanan parçacıklar
Tüp döndürücüSeouLin BioscienceSLRM-3Modifiye edici aptamer ve boncuk
çip bileşenleri olarak

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wu, M., et al. Acoustofluidic separation of cells and particles. Microsystem & Nanoengineering. 5 (1), 1-18 (2019).
  2. Lee, S. W., et al. Aptamer affinity-bead mediated capture and displacement of Gram-negative bacteria using acoustophoresis. Micromachines. 10 (11), 770(2019).
  3. Hirvonen, J. J., et al. One-step sample preparation of positive blood cultures for the direct detection of methicillin-sensitive and -resistant Staphylococcus aureus and methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci within one hour using the automated GenomEra CDXTM PCR system. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 31 (10), 2835-2842 (2012).
  4. Swaminathan, B., Feng, P. Rapid detection of food-borne pathogenic bacteria. Annual Review of Microbiology. 48 (1), 401-426 (1994).
  5. Ding, X., et al. On-chip manipulation of single microparticles, cells, and organisms using surface acoustic waves. Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (28), 11105-11109 (2012).
  6. Karthick, S., et al. Acoustic impedance-based size independent isolation of circulating tumor cells from blood using acoustophoresis. Lab on a Chip. 18 (24), 2802(2018).
  7. Lenshof, A., et al. Acoustofluidics 8: Applications of acoustophoresis in continuous flow microsystems. Lab on a Chip. 12 (7), 1210-1223 (2012).
  8. Persson, J., et al. Acoustic microfluidic chip technology to facilitate automation of phage display selection. The FEBS journal. 275 (22), 5657-5666 (2008).
  9. Klussmann, S. The aptamer handbook: Functional oligonucleotides and their applications. , John Wiley & Sons. Hoboken, New Jersey. (2006).
  10. Ellington, A., Szostak, J. W. In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands. Nature. 346 (6287), 818-822 (1990).
  11. Tuerk, C., Gold, L. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase. Science. 249 (4968), 505-510 (1990).
  12. Namnabat, M. S., et al. 3D numerical simulation of acoustophoretic motion induced by boundary-driven acoustic streaming in standing surface acoustic wave microfluidics. Scientific Reports. 11 (1), 11326(2021).
  13. Nimjee, S. M., et al. Aptamer as therapeutics. Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 57, 61-79 (2017).
  14. Zhang, Y., et al. Recent advances in aptamer discovery and application. Molecules. 24 (5), 941(2019).
  15. Park, J. W., et al. Acousto-microfluidics for screening of ssDNA aptamer. Scientific Reports. 6 (1), 1-9 (2016).
  16. Persson, J., et al. Acoustic microfluidic chip technology to facilitate automation of phage display selection. The FEBS Journal. 275 (22), 5657-5666 (2008).
  17. Van Toan, N., et al. An investigation of processes for glass micromachining. Micromachines. 7 (3), 51(2016).
  18. Jansen, H., et al. A survey on the reactive ion etching of silicon in microtechnology. Journal of Micromechanics and Microengineering. 6 (1), 14(1996).
  19. Hanneborg, A., et al. Silicon-to-silicon anodic bonding with a borosilicate glass layer. Journal of Micromechanics and Microengineering. 1 (3), 139(1991).
  20. Mach, A. J., Di Carlo, D. Continuous scalable blood filtration device using inertial microfluidics. Biotechnology and bioengineering. 107 (2), 302-311 (2010).
  21. Wang, S., et al. Simple filter microchip for rapid separation of plasma and viruses from whole blood. International Journal of Nanomedicine. 7, 5019-5028 (2012).
  22. Ai, Y., et al. Separation of Escherichia coli bacteria from peripheral blood mononuclear cells using standing surface acoustic waves. Analytical Chemistry. 85 (19), 9126-9134 (2013).
  23. Ohlsson, P., et al. Acoustic impedance matched buffers enable separation of bacteria from blood cells at high cell concentrations. Scientific Reports. 8 (1), 1-11 (2018).
  24. Park, S., et al. Continuous dielectrophoretic bacterial separation and concentration from physiological media of high conductivity. Lab on a Chip. 11 (17), 2893-2900 (2011).
  25. Kim, U., Soh, H. T. Simultaneous sorting of multiple bacterial targets using integrated Dielectrophoretic-Magnetic Activated Cell Sorter. Lab on a Chip. 9 (16), 2313-2318 (2009).
  26. Cai, G., et al. A fluidic device for immunomagnetic separation of foodborne bacteria using self-assembled magnetic nanoparticle chains. Micromachines. 9 (12), 624(2018).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Bakteri Ay rmaMikroak kan ipAkustik Radyasyon KuvvetiStreptavidin Kapl BoncuklarFloresan MikroskobuBas n Kontrol CihazBakteriyel Biyobelirte Tespiti

İlgili makaleler