Eşzamanlı Optogenetik Modülasyon ve Elektriksel Nöral Kayıt için Optrode Dizisi

Nöral aktiviteyi kaydetmek ve kontrol etmek, beynin bir sinir ağında ve hücresel seviyelerde nasıl çalıştığını anlamak için gereklidir. Geleneksel elektrofizyolojik kayıt yöntemleri, bir mikropipet kullanılarak yama kelepçesi 1,2,3,4 ve mikronöral elektrotlar 5,6,7,8 kullanılarak hücre dışı kaydı içerir. Bir nöromodülasyon yöntemi olarak, elektriksel stimülasyon, nöronal hücrelerin doğrudan veya dolaylı depolarizasyonu yoluyla fokal bir beyin bölgesini doğrudan uyarmak için sıklıkla kullanılmıştır. Bununla birlikte, elektriksel yöntem, kayıt veya stimülasyon için nöronal hücre tiplerini ayırt edemez, çünkü elektrik akımları her yöne yayılır.

Gelişmekte olan bir teknoloji olarak, optogenetik, sinir sisteminin nasıl çalıştığını anlamada yeni bir çağ başlattı 9,10,11,12,13,14,15,16. Optogenetik tekniklerin özü, genetiği değiştirilmiş hücreler tarafından eksprese edilen ışığa duyarlı opsin proteinlerinin aktivitesini kontrol etmek için ışığı kullanmaktır. Böylece, optogenetik, karmaşık nöral devrelerde genetik olarak seçilmiş hücrelerin sofistike modülasyonunu veya izlenmesini sağlar^14,17. Optogenetik yaklaşımın daha geniş kullanımı, optik nöromodülasyonu doğrudan doğrulamak için eşzamanlı nöral kayıt gerektirmiştir. Bu nedenle, ışık kontrolü ve kayıt işlevlerine sahip entegre bir cihaz son derece değerli olacaktır 16,18,19,20,21,22,23,24,25.

Geleneksel, lazer tabanlı optogenetik stimülasyonun sınırlamaları vardır, bu da hantal ve pahalı bir ışık dağıtım sistemi gerektirir 26,27,28,29,30. Bu nedenle, bazı araştırma grupları, ışık dağıtım sisteminin boyutunu en aza indirmek için μLED tabanlı silikon problar kullandı^31,32,33,34. Bununla birlikte, LED'lerin düşük enerji dönüşüm verimliliği nedeniyle μLED'lerle doğrudan temasın neden olduğu termal beyin hasarı riski vardır. Optik fiberler, SU-8 ve silikon oksinitrür (SiON) gibi hafif dalga kılavuzları, termal hasarı önlemek için uygulanmıştır 30,35,36,37,38,39. Bununla birlikte, bu stratejinin ışık kaynakları ve dalga kılavuzları arasındaki düşük bağlantı verimliliği nedeniyle de bir dezavantajı vardır.

Mikrolens dizisi daha önce LED'ler ve optik fiberler arasındaki ışık bağlantısı verimliliğini artırmak için tanıtılmıştı⁴⁰. Optik stimülasyon ve mikro ölçekte elektriksel kayıt için mikroelektromekanik sistemler (MEMS) teknolojilerine dayanan bir optrode sistemi geliştirilmiştir⁴⁰. LED ve optik fiberler arasındaki mikrolens dizisi, ışık verimliliğini 3,13 dB artırdı. Şekil 1'de gösterildiği gibi, 4x4 mikrolens dizisi üzerinde 2x2 optik fiber dizisi hizalanır ve LED, mikrolens dizisinin altına yerleştirilir. Beyin hasarını azaltmak için 4x4 yerine 2x2 optik fiberler monte edilir. Bir tungsten elektrot dizisi, elektrofizyolojik kayıt için delikler yoluyla silikon kullanılarak optrode dizisine bitişik olarak konumlandırılmıştır (Şekil 1B).

Sistem tek kullanımlık üst kısım ve sökülebilir alt parçalardan oluşmaktadır. Optik fiber dizisini, mikrolens dizisini ve tungsten elektrot dizisini içeren üst tek kullanımlık kısım, in vivo deneyler için beyne kalıcı olarak implante edilmek üzere tasarlanmıştır. Alt kısımda bir LED ışık kaynağı ve başka bir hayvan deneyi için kolayca çıkarılabilen ve yeniden kullanılabilen harici bir güç kaynağı hattı bulunur. Takılabilir plastik kapak, çıkarılabilir parça çıkarıldığında tek kullanımlık parçayı korur.

Sistemin fizibilitesi, Ca 2 + / kalmodüline bağımlı protein kinaz II-pozitif nöronlarda (CaMKIIα: : ChR2 fare) channelrhodopsin-2'yi (^ChR2) eksprese eden transgenik farelerin beyinlerine implantasyon ile doğrulanır. Kayıt elektrotları, nöronların optik stimülasyonu sırasında bireysel nöronlardan gelen nöral aktiviteleri kaydetmek için kullanıldı.

Hayvan bakımı ve cerrahi prosedürler, Ewha Womans Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır (no. 20-029).

1. Bir optrode dizisinin hazırlanması (Şekil 1 ve Şekil 2)

1. Optik fiberleri mikrolens dizisine takın.
   1. Optik fiberin pasivasyon kaplamasını çıkarın ve hassas bir optik fiber kırıcı kullanarak 5 mm uzunluğunda parçalara ayırın.
   2. Optik fiberi şeffaf UV reçinesine batırın ve optik fiberleri mikrolens dizisine yerleştirin.
   3. UV lambası kullanarak reçineyi kürleyin.
   4. Epoksi kullanarak mikrolens dizisini 3D baskılı muhafazaya takın.
2. Perfloroalkoksi (PFA) kaplı tungsten telleri hizalayın.
   1. 4 adet 30 mm uzunluğunda PFA tungsten tel ve 1 gümüş teli 5 pimli, 1,27 mm aralıklı dişi konektöre lehimleyin. Referans elektrodu olarak gümüş tel kullanın.
   2. 1,27 mm aralıklı dişi konnektörü baş ön amplifikatörüne bağlayın.
   3. Tungsten elektrotlarının ince hizalanmasına yardımcı olmak için tungsten tellerini silikondan deliklerden dikkatlice yerleştirin (Şekil 1B).
   4. Hizalanmış tungsten telleri optik fiber uzunluğundan 1 mm daha kısa kesin.
   5. Epoksi kullanarak konektörü 3D baskılı muhafazaya takın.
3. LED yerleşimi
   1. LED'i 3D baskılı muhafazaya yerleştirin.
   2. LED'i, darbe genişliği modülasyonu (PWM) üreten sürüş devresine bağlayın.
      NOT: PWM darbesi mikrodenetleyici tarafından oluşturulur.
   3. LED sürüş devresinin neden olduğu gürültü göz önüne alındığında, kayıt elektrotlarının LED sürüş devresinden 50 mm uzakta olduğundan emin olun.
   4. Bir fotodiyot kullanarak optik fiber ucun ucundaki ışık yoğunluğunu ölçün.
4. Tungsten elektrotları ve optik fiberleri 15 dakika boyunca alkole batırın. Daha sonra sistemi steril D.I suya batırın ve etilen oksit gazı ile sterilize edin.

2. İmplantasyon cerrahisi (Şekil 3 ve Şekil 4)

NOT: Ameliyat sırasında steril teknik izlenmelidir.

1. Spesifik nöronal hücre tipinde ışığa duyarlı opsin proteinlerini eksprese etmek için genetik olarak modifiye edilmiş transgenik hayvanları hazırlayın.
   NOT: Bu çalışmada Ca 2+/calmodulin-dependent protein kinaz II-pozitif nöronlarda (CaMKIIα::^ChR2 fare) channelrhodopsin-2 (ChR2) eksprese eden 2 aylık transgenik fare⁴¹ kullanıldı.
2. Fareyi intraperitoneal uygulama ile bir ketamin-ksilazin kokteyli - ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) karışımı - ile anestezi altına alın.
   1. Bıyık hareketini ve pençe sıkışmasına tepkiyi izleyerek anestezi uygulanan hayvanı her 30 dakikada bir kontrol edin.
   2. Ek anestezi gerekiyorsa, ketamin-ksilazin kokteylini başlangıç dozunun yarısında enjekte edin.
3. Kafa derisini tıraş edin ve anestezi uygulanan fareyi stereotaktik çerçeveye yerleştirin.
   NOT: Cerrahi deri hazırlığı ve örtü hayvanı yapın. Cilt hazırlığı, epilasyonun ardından cildin antimikrobiyal ajanlarla temizlenmesini içerir.
   1. Kafayı stereotaktik çerçeve içine yerleştirin ve kulak çubuklarını meatusun içine yerleştirin.
   2. Tam konumlandırma için kulak çubuklarını tekrar tekrar gevşetip sıkarak fare kafasını stereotaktik çerçevede ortalayın.
   3. Kesici çubuğu, üst kesici dişler ön iç kenarın üzerine takılacak şekilde yerleştirin.
   4. Kesici çubuğun yüksekliğini ayarlamak için kesici çubuğu ayarlayın ve burun kelepçesini buruna doğru sıkın.
   5. Cerrahi prosedürler boyunca vücut ısısını 37 ° C'de tutmak için stereotaktik çerçeveye gömülü termal ısıtma yastığını önceden açın.
   6. Homeotermik düzenleme için termal probu farenin rektumuna yerleştirin.
      NOT: Kulak çubuğu yerleşimi, burnu hafifçe kavrayıp sallayarak kontrol edilmelidir. Burun yanal olarak ~4 mm'den fazla hareket ettirilebiliyorsa kulak çubuğu yeniden ayarlanmalıdır.
4. Kuruluğu önlemek için gözleri petrol jölesi ile örtün (Malzeme Tablosuna bakınız).
5. Kafa derisine% 1 lidokain enjekte edin. Başın derisini forsepslerle kaldırın, bir enjeksiyon boşluğu tutun ve lidokaini kafa derisinin altına enjekte edin.
6. Bir neşter ve ince makas kullanarak sagital bir kesi yapın. Cerrahi alanın görünürlüğünü genişletmek için kesilmiş cildi bir mikrokelepçe ile tutun.
   NOT: Kesi uzunluğu, interparietal kemiğin bregma ve kaudal kenarının <1 cm üzerindedir.
7. Periosteumu pamuklu çubuklarla çıkarın. Kanama varsa, kan damarlarını kapatmak için bir bovie kullanarak kafatasını koterize edin.
8. Kafatasını salinle temizleyin ve manipülatör bir kol kullanarak kraniyotomi bölgelerini işaretleyin: hipokampus Anterior-Posterior (AP) -1.8 ila -2.8 mm, Medial-Lateral (ML) 0.5-2.5 mm ve Dorsal-Ventral (DV) -1 ila -2 mm.
   NOT: Fare kafatasının kalınlığını göz önünde bulundurarak, optrode dizisini -1,2 ila -2,2 mm arasında maruz kalan beyin bölgesinden yerleştirin. Hipokampal yol göz önüne alındığında, CA3'ün piramidal hücreleri aksonlarını CA1'e gönderir. Bu nedenle, optik fiberler kayıt elektrotlarından 1 mm daha uzundur, böylece optik fiberler CA3'e ve kayıt elektrotları CA1'e yerleştirilir.
9. Beyinciğin üzerinde bir delik açın ve toprak için bir vida yerleştirin. Topraklama vidasını, beyinciğin tepesine ulaşana kadar hassas bir vida ile 0,5 mm derinliğe yerleştirin.
   NOT: Diş çimentosunun yapışması için üç boyutlu yüzeyi arttırdığından, implantasyonun uzun vadeli stabilitesini en üst düzeye çıkarmak için bir toprak elektrodu ve destekleyici bir yapı olarak kullanılacak olan vidanın sıkıca yerleştirildiğinden emin olun.
10. İşaretli alanı delin ve kafatasının bir parçasını forseps ile çıkarın.
11. 26 G'lık bir iğne ucunu saat yönünde 120 ° 'ye bükün ve iğnenin yukarı bakan eğim tarafını yerleştirerek beyin bölgesini açığa çıkarın. Beyne ve kan damarlarına zarar vermemeye dikkat edin.
12. Kemik tozunu ve yabancı maddeleri temizlemek için maruz kalan beyni tuzlu suyla temizleyin.
13. Optrode dizisini manipülatör koluna sabitleyin ve maruz kalan bölgeye yaklaşın.
    NOT: Cihazı yerleştirirken, hedef alanın bregma'dan tekrar hesaplanması, yerleşimin doğruluğunu artırabilir.
14. Optrode dizisini yavaşça takın ve topraklama vidasını sisteme bağlı gümüş tel^42'ye bağlayın.
    NOT: Bu işlemde, yerleştirme sırasında mikro hareketten kaynaklanan beyin hasarını önlemek için yalpalamayı en aza indirmek için dizi, manipülatör koluna sıkıca sabitlenmelidir. Yerleştirme yavaşça yapılmalı, yerleştirildikten sonra bastırılmış olabilecek beynin şişmesini hesaba katmak için 10 dakika dinlendirilmelidir. Sinyal-gürültü oranının yüksek kalitesi ve ayrılabilir tek ünite sayısı⁴² için beyin dokusuna 1 μm / s'nin altında yerleştirme hızı önerilir.
15. Kanama varsa, kuru pamuklu çubukla ağartıcılara doğrudan basınç uygulayın veya koter kullanın. Kanama tamamen durana kadar sonraki adımlara geçmeyin.
16. Kimyasalları beyinle doğrudan temastan korumak için maruz kalan beyin ile cihaz arasına jel köpük yerleştirin.
    NOT: Jel köpük ayrıca hemostaza yardımcı olur ve beyni nemli tutar.
17. Nemi mümkün olduğunca gidermek için kafatasını pamuklu çubuklarla silin ve bir sonraki sabitleme adımına geçin.
18. Cihazı sabitlemek ve jel köpüğü örtmek için kafatasına diş çimentosunu dikkatlice uygulayın. Diş çimentosu tamamen sertleşmeden önce, diş çimentosuna tutturulmuşsa kafa derisini ayırın. Sertleşmiş diş çimentosunu örtmek ve kafa derisini dikmek için kesilmiş cildi forseps ile çekin. Ardından, cihazı manipülatör kolundan serbest bırakın.
    NOT: Diş çimentosunun cilde yapışmadığından ve sadece kafatası bölgesini kapladığından emin olun. Cilt büyüdüğünde, çimentoyu uzaklaştırabilir ve sonunda cihaz düşer. Bu, uzun vadeli in vivo deneyler için kritik bir soruna neden olacaktır.

3. İyileşme ve implant bakımı

1. Fareyi stereotaktik çerçeveden çıkarın.
2. Carprofen çözeltisini 26 G'lık bir iğne kullanarak uygulayın. Ağrıyı azaltmak için ameliyattan önce bir kez ve 12 saat (öğleden sonra ameliyatı durumunda ertesi sabah) ve ameliyattan 24 saat sonra enjekte edin.
   NOT: Şişedeki ilaç konsantrasyonu 50 mg/mL'dir ve 4 °C'de saklanır. Karprofen viskozdur ve steril suda 1:10 oranında seyreltilmesi gerekir. Sterilite korunursa, çözelti 4 haftaya kadar saklanabilir. İlacın etkili süresini korumak için, Carprofen çözeltisini 12 saatlik aralıklarla enjekte edin.
3. Fareyi ısıtma yastığının üzerine yerleştirin ve anesteziden iyi iyileşip iyileşmediğini kontrol edin.
   NOT: Hayvan, yeterli bilinci yeniden kazanana kadar gözetimsiz bırakılmaz.
4. Ameliyattan 7-10 gün sonra dikiş ipliklerini çıkarın.
5. Hayvanın 1 hafta boyunca iyileşmesine izin verin. İyileşme süresi boyunca yiyecek ve su alımını izleyin. Analjeziği uygulayın ve rahatsızlık veya ağrı belirtilerini kontrol edin.
   NOT: Ameliyat olan hayvanlar, tamamen iyileşene kadar diğer hayvanlarla birlikte kalamazlar.
   1. İyileşme döneminde, ağırlık değişikliklerini kontrol etmek için fareyi her gün tartın. Yaş ve cinsiyete uygun kontrol hayvanlarına kıyasla% 20 kilo kaybı varsa, fareyi feda edin (bkz. bölüm 6).

4. Optogenetik stimülasyon ve elektrofizyolojik kayıt

1. Fareyi anestezi altına alın ve anestezi uygulanan fareyi stereotaktik çerçeveye yerleştirin.
2. Stimülasyon parametrelerini ayarlayın.
   1. Işık darbesi tarifini %4 görev döngüsüne ve 10 Hz frekans^43'e ayarlayın. Nöral kayıt sırasında 2 s (20 darbe) için ışık stimülasyonunu ayarlayın.
   2. Optik fiber ucunda 3 mW/^mm2 ışık yoğunluğu sağlamak için 50 mA akım kullanın. Bir fotodiyot ve güç ölçer kullanarak ışık gücünü ölçün ve ışık gücünü optik fiber faset alanına bölün.
3. Plastik kapağı çıkarın ve ışık dağıtım sistemini içeren üst kısmı yeniden kullanılabilir LED ve devrelerle takın.
4. Baş ön amplifikatörünü implante edilmiş 5 pimli konektöre bağlayın.
5. Nöral sinyalleri kaydetmek için yazılımı açın.
6. Yazılım filtrelerini ayarlayın. 0,1-20 kHz'de bir bandpass filtresi ve 60 Hz'de bir çentik filtresi kullanın. amplifikatör örnekleme hızını 20 kHz'e ayarlayın.
7. Kayıttan önce, nöral ani yükseliş sinyallerinin algılanıp algılanmadığını kontrol edin.
   NOT: Nöral sinyaller çok küçük olduğu için gürültü önleme önemlidir. Gürültü seviyesi çok yüksekse, nöral sinyaller gürültü tarafından gizlenebilir ve görünmez hale gelebilir. Gürültüyü azaltmak için uygun topraklama ve elektromanyetik dalga kalkanı kullanın.
8. Sinyal kontrolünden sonra, temel kayıt için ışık uyarımı olmadan nöral sinyalleri kaydedin.
9. LED ışığı verin ve aynı anda nöronal yanıtları kaydedin (Şekil 5 ve Şekil 6).
   NOT: Bir kez uyarıldıktan sonra, bir sonraki stimülasyon deneyi en az 5 dakikalık bir aralıktan sonra yapılmalıdır, böylece önceki stimülasyon tarafından uyarılan nöronal aktivite bir sonraki deneyi etkilemez.

5. Veri analizi

1. Alınan verileri MATLAB programını kullanarak yükleyin.
2. Bir başak sıralama algoritması "Wave-Clus"^44,45 kullanarak tek nöral aktiviteler elde ^edin. Her kanaldaki ani artışları Eq (1)^45'te olduğu gibi bir genlik eşiği ile tespit edin.
   Eşik = 5 × medyan (1)
   Burada x, bandpass filtreli sinyaldir.
   1. "Wave-Clus"u yüklemek için Malzeme Tablosu'ndaki indirme bağlantısına bakın.
   2. Grafik kullanıcı arabirimini (GUI) açmak için, MATLAB'ın komut istemine wave_clus yazın.
   3. Başak algılamaya hazırlanan dosya uzantısı için Get_spikes('filename.ext') işlevi yazın. Ardından, ani sıralama için Do_clustering('filename_spikes.mat') çalıştırın.
3. Belirli zaman kutuları ile ışık stimülasyonundan önce, sırasında ve sonrasında sıralanmış sivri uçları sayın. Analiz için 0,2 s ve 2 s zaman kutuları kullanın.
4. Her kayıt kanalından ani artışların sayısını çizin.
   NOT: Standart hata ile ortalamanın ortalamaları (SEM) 8 tekrarlanan deneyin sonuçlarından elde edilen veriler hesaplanmış ve çizilmiştir.

6. Ötenazi

1. Tüm deneylerden sonra, fareyi karbondioksit (CO₂) solumasıyla kurban edin.
2. Odayı önceden şarj etmeden, fareyi CO₂ beslemesi ve / veya sızıntısı olmadan şeffaf ötenazi odasına yerleştirin.
3. CO₂ gazını açın ve havayı dakikada ötenazi odası havasının hacminin% 30 - 50'si oranında değiştirin.
   NOT: Hava yer değiştirme hızının dakikada ötenazi odasının hacminin% 30-50'si olmasını sağlamak için CO₂ gaz silindirine bir debimetre bağlanmalıdır.
4. Kurban edilen fareyi solunum eksikliği ve değişen göz rengi açısından izleyin.
   NOT: Ötanazi için beklenen süre genellikle 10 ila 15 dakika arasındadır.
5. Ölüm işaretlerini gözlemledikten sonra, fareyi ötenazi odasından çıkarın.
6. Ötanazi prosedürünü tamamlamak için, solunum ve kalp durmasını doğrulayarak ölümü doğrulayın.

Optrode sistemi, hedef nöronları aktive etmek için yeterli ışık gücü sağlamak için başarıyla üretilmiştir. Tungsten elektrotlarının ince hizalaması, mikrofabrikasyon silikon yoluyla delikler yoluyla elde edilir. 50 mA akım uygulandığında optik fiber ucunda ölçülen ışık yoğunluğu 3,6 mW/mm2'dir . Mikrolens, ışık verimliliğini 3,13 dB artırdı. Işık bağlantısını geliştiren mikrolens dizisi nedeniyle, uygulanan akım, mikrolens dizi sistemi olmadan aynı ışık yoğunluğunu elde etmek için gereken akımın yaklaşık yarısıdır. LED daha fazla akımla daha fazla ısı ürettiğinden, cihazın ısısını düşürmek için mikrolens dizisini kullanmak açıkça avantajlıdır. 4 elektrotun ortalama empedansı, aksiyon potansiyellerinin tespiti için yeterince düşük olan 1 kHz frekansta 71.39 kΩ idi. Ayrıca, optrode dizisi, maliyeti düşürmek ve implantasyonun toplam ağırlığını en aza indirmek için tek kullanımlık ve yeniden kullanılabilir parçalardan oluşur. Tek kullanımlık parçanın ağırlığı ~ 0.58 g'dır.

ChR2 eksprese eden nöronları doğrudan uyarmak için bir CaMKIIα::ChR2 faresi kullanıldı ve Şekil 6'da gösterildiği gibi uyarılan nöral sivri uçlar başarıyla kaydedildi. Kaydedilen tüm dalga formlarını, ortada 2 s ışık açma periyodu da dahil olmak üzere kesin koşullarla gösterdik (Şekil 6A). Ham veri sinyalinden ani sıralama, özel yapım bir MATLAB kaynak kodu kullanılarak gerçekleştirildi. Toplam nöral aktivite, iki farklı birim ayrıldıktan sonra analiz edildi. Her ışık stimülasyon darbesini takiben uyarılan bireysel nöral sivri uçların sayısı, 2 s ve 0.2 s'lik farklı zaman kutuları ile taban çizgisine (Şekil 6A, B) kıyasla önemli ölçüde artmıştır. Sonuç olarak, optogenetik stimülasyonun nöronlar üzerindeki net etkisini tanımlayabiliriz.

Resim 1: Optrode dizisi ve mikrolens dizisinin şematik diyagramı. (A) 3B şematik görünüm ve kesitsel görünüm; (B) 4X4 mikrolens dizisinin ve silikon vias'ın SEM görüntüsü. Ölçek çubuğu = 1 mm (B). Kısaltma: LED = ışık yayan diyot. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Optrode sisteminin cihaz prototipi . (A) Sistemin tüm görünümü. (B) Optrode dizisinin genişletilmiş görünümü. Ölçek çubukları = 5 mm (A), 2 mm (B). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: İmplantasyon cerrahisi . (A) Kafatası açığa çıkarılır ve periost çıkarılarak temizlenir. (B) Hedef beyin bölgesi açığa çıkarıldı ve beyincik üzerine topraklama vidası yerleştirildi. (C) Optrode dizisi, derinliği hedeflemek için beyne yerleştirildi. Zemin elektriksel olarak bağlandı. (D) Cihazı sabitlemek için diş çimentosu uygulanır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: Yönetim, işlem ve in vivo deney zaman çizelgesinin şematik diyagramı. Bu şeklin daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Resim 5: Elektrofizyolojik kayıt sisteminin deneysel kurulumu . (A) LED ışığı kapalı, (B) LED ışık yanıyor. Kısaltma: LED = ışık yayan diyot. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 6: Elektrofizyolojik kayıt sonuçları . (A) Nöral kaydın temsili dalga formları ve iki ışık uyaranını (mavi çubuklar) ve sıralanmış sivri uçları (kırmızı ve siyah ok uçları) gösteren kırmızı kesikli dikdörtgen içinde genişlemiş dalga formu. (B) Işık stimülasyonu öncesinde, sırasında ve sonrasında her kanal için ani histogram. Dahili şekil, implante edilmiş optrode dizisinin yerini gösterir. (C) 100 ms zaman bölmeli ani histogram. Mavi çubuk, LED ışığının yanma süresini gösterir. Kısaltma: LED = ışık yayan diyot. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.