Bu protokol, farelerde çoklu intravenöz bolus dozu uygulaması ve invaziv hemodinamik izleme yürütmek için adım adım bir prosedür sağlar. Araştırmacılar bu protokolü pulmoner arter hipertansiyonu için gelecekteki terapötik bileşik taraması için kullanabilirler.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Hipoksi ile İndüklenen Fare Pulmoner Arter Hipertansiyon Modelinde Çoklu İntravenöz Bolus Dozu ve İnvaziv Hemodinamik Değerlendirme
Bu makalede
Özet
Özet
Pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH), primer olarak akciğerin küçük pulmoner arteriyollerini etkileyen, ilerleyici, hayatı tehdit eden bir hastalıktır. Şu anda, PAH için bir tedavi yoktur. PAH'ı tedavi etmek için kullanılabilecek yeni bileşiklerin keşfedilmesi önemlidir. Fare hipoksisinin neden olduğu PAH modeli, PAH araştırmaları için yaygın olarak kullanılan bir modeldir. Bu model, PAH Grup 3 hastalığının insan klinik belirtilerini özetlemektedir ve PAH için yeni deneysel tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için önemli bir araştırma aracıdır. Bu modeli kullanan araştırmalar genellikle farelerde bileşiklerin uygulanmasını gerektirir. Doğrudan kan dolaşımına verilmesi gereken bir bileşik için, intravenöz (IV) uygulamanın optimize edilmesi, deneysel prosedürlerin önemli bir parçasıdır. İdeal olarak, IV enjeksiyon sistemi, belirli bir süre boyunca birden fazla enjeksiyona izin vermelidir. Fare hipoksisinin neden olduğu PAH modeli birçok laboratuvarda çok popüler olmasına rağmen, bu modelde çoklu IV bolus dozu ve invaziv hemodinamik değerlendirme yapmak teknik olarak zordur. Bu protokolde, fare hipoksi ile indüklenen PAH modelinde hemodinamik değerlendirme için fare juguler veni yoluyla çoklu IV bolus dozlamasının nasıl yapılacağı ve arteriyel ve sağ ventrikül kateterizasyonunun nasıl yapılacağı hakkında adım adım talimatlar sunuyoruz.
Giriş
Pulmoner arter hipertansiyonu (PAH), istirahatte ortalama pulmoner arter sistolik basıncının 20 mmHg'dan yüksekolması ile tanımlanır 1,2. Pulmoner arter basıncında sürekli yükselme ile karakterize, sağ ventrikül aşırı yüklenmesine ve sonuçta sağ ventrikül yetmezliğine bağlı ölüme yol açan ilerleyici ve ölümcül bir hastalıktır1. Şu anda, PAH için bir tedavi yoktur.
Deneysel PAH tedavilerinin etkinliğini test etmek için pulmoner hipertansiyonun hayvan modellerinin kullanılması önemlidir. Bu modeller arasında, fare hipoksisinin neden olduğu PAH modeli, insan PAH....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan prosedürleri, Yale Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri tarafından onaylanan protokoller kapsamında gerçekleştirildi.
1. Hayvanların, aletlerin, kan basıncı ölçüm cihazlarının ve hipoksi odasının hazırlanması
- Hayvan iklimi.
NOT: Bu çalışma için kullanılan deney hayvanları, 25-27 g ağırlığındaki erkek, 8 haftalık C57BL/6 farelerdi. Deney için gerekli hayvan sayısını tahmin ederken, ameliyata bağlı mortalite, beklenmedik cerrahi komplikasyonlar ve ani beklenmedik ölüm dahil olmak üzere çeşitli faktörler göz önünde bulundurulmalıdır. İstatistiksel güce ulaşmak ve yetersiz çalışmalar....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Anestezi genellikle kan basıncını düşürür. Bu nedenle, zararlı bir uyarana yanıt olarak hareketleri ortadan kaldırmak için minimum anestezi dozu kullanıldı. Başarılı sağ ventrikül odası erişimi, venöz sistemlerin farklı bölgelerinde hemodinamik dalga formu değişiklikleri olarak görselleştirilebilir (Şekil 8).
Bu çalışmada, fareler rastgele normoksik (% 21O2) grubuna (n = 10), hipoksi (% 10O2) grubuna (n = 10) veya hipoksi + 7C1 / let-7 tedavi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
İnsan deneklerde artmış pulmoner vasküler direnç olaylarını taklit etmek için çeşitli pulmoner hipertansiyon hayvan modelleri oluşturulmuştur. Bunlar arasında, fare hipoksisinin neden olduğu PAH modeli, PAH için yeni deneysel tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu modeli kullanan araştırmalar genellikle bileşiklerin farelere uygulanmasını gerektirir. Yayınlanmış diğer intravenöz (IV) enjeksiyon ve invaziv hemodinamik değerlendirme protokolleri ile karşılaştırıldığında, bu yöntem he.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
M Simons, VasoRx, Inc.'in Bilimsel Danışma Kurulu üyesidir. Diğer yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmezler.
Teşekkürler
Bu çalışma, kısmen, NIH hibe P30AR070253 (PYC), Kardiyovasküler Tıbbi Araştırma Eğitim Fonu (PYC), VasoRx, Inc. Fonu (MS) ve NIH hibeleri HL135582 (MS), HL152197 (MS) kapsamında sağlanan bir Ortak Biyoloji Konsorsiyumu Microgrant tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 5-0 prolene sütür paketi | İnsizyon kapatma için | Ethicon | 8698G |
| 8-0 naylon sütür paketi | AROSurjik Aletler | T06A08N14-13 | ligasyon için |
| Anestezi indüksiyon odası | VETEQUIP | # 941444 | Anestezi maruziyeti sırasında hayvanı tutar |
| Kateter Arayüz Kablosu Millar | Millar | PCU-2000 | |
| Kömür bidonu filtreleri | VETEQUIP | # 931401 | kaldırmaya yardımcı olmak için atık anestezik gazlar |
| Kanamayı önlemek için enjeksiyon bölgesine basınç uygulamak için | çubuklar | McKesson | 24-106 |
| İnce makas | Güzel Bilim Araçları | 14059-11 | Cerrahi aletler |
| İnsülin şırıngası 28 G | EXEL | 26027 | juguler ven IV enjeksiyonu için |
| İzofluran Fare | anestezisi için | COVETRUS | # 029405 |
| LabChart 8 Yazılımı | Veri analizi için | ADInsables | |
| SPR-1000 (1.0 F) | İnvaziv kan basıncı ölçümü için | millar | |
| İğne-25 G | BD | 305124 | kapta küçük bir delik açmak için |
| Oksijen kontrolörü ProOx Oksijen Sensörü | Oksijen konsantrasyonu izleme için | BioSpherix | E702 |
| PCU-2000 Basınç Kontrol Ünitesi | Millar | Millar Mikro-Tip kateterini PowerLab 4/35 PowerLab | |
| 4/35 | Veri Toplama Cihazlarına bağlamak için. Araştırmacının çalışması için PowerLab 4/35'i LabChart 8 yazılımını içeren kişisel bir dizüstü bilgisayara bağlaması gerekir. | ||
| İstatistik ve bilimsel grafik için | Prism 8 | GraphPad | |
| Yarı kapatılabilir hipoksi odası | BioSpherix | , hayvanlar için yüksek irtifa koşullarını simüle eden yapay bir ortam | |
| Bahar | Makas Güzel Bilim Araçları | 15021-15 | Cerrahi aletler |
| Cımbız Stil 4 | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 0302-4-PO | Cerrahi aletler |
| VasoRx bileşiği 7C1/let-7 miRNA | VasoRx, Inc. | Lot # B2-L-16Apr | IV enjeksiyon bileşiği |
| VIP 3000 Veteriner Buharlaştırıcı | COLONIAL TIBBİ MALZEME CO., Inc. | doğru anestezi uygulaması için |
Kaynaklar
- McLaughlin, V. V., McGoon, M. D. Pulmonary arterial hypertension. Circulation. 114 (1), 1417-1431 (2006).
- Hoeper, M. M., Humbert, M. The new haemodynamic definition of pulmonary hypertension: evidence prevails, finally. European Respiratory Journal. 53....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
