Bu protokol, murin ortak iliak arteriyovenöz fistül oluşumunun cerrahi adımlarını detaylandırır. Bu modeli hemodiyaliz erişimi ile ilişkili ekstremite patofizyolojisini incelemek için geliştirdik.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bu protokol, murin ortak iliak arteriyovenöz fistül oluşumunun cerrahi adımlarını detaylandırır. Bu modeli hemodiyaliz erişimi ile ilişkili ekstremite patofizyolojisini incelemek için geliştirdik.
Kronik böbrek hastalığı önemli bir halk sağlığı sorunudur ve hemodiyaliz gibi kronik renal replasman tedavileri gerektiren son dönem böbrek hastalığı (SDBY) prevalansı artmaya devam etmektedir. Otojen arteriyovenöz fistül (AVF) yerleştirilmesi, SDBY'li hastalar için primer vasküler erişim seçeneği olmaya devam etmektedir. Ne yazık ki, hemodiyaliz hastalarının yaklaşık yarısı, ince paresteziden dijital kangrene kadar değişen diyaliz erişimi ile ilişkili el disfonksiyonu (ARHD) yaşamaktadır. Özellikle, ARHD'den sorumlu olan altta yatan biyolojik faktörler tam olarak anlaşılamamıştır ve mekanizmaları aydınlatmak ve / veya ARHD'nin önlenmesi / tedavisi için yeni terapötikler geliştirmek için yeterli hayvan modeli yoktur. Burada, sol ortak iliak arter ve ven arasında bir AVF'nin oluşturulduğu ve böylece ekstremite patofizyolojisinin değerlendirilmesini kolaylaştıran yeni bir fare modeli tanımlanmıştır. Mikrocerrahi, damar izolasyonu, uzunlamasına venotomi, arteriyovenöz anastomoz oluşumu ve venöz rekonstrüksiyonu içerir. Sahte ameliyatlar, AVF oluşturma dışındaki tüm kritik adımları içerir. İliak AVF yerleşimi santral hemodinamik, periferik iskemi ve arka ekstremite nöromotor performansında bozulmalara klinik olarak anlamlı değişiklikler ile sonuçlanır. Bu yeni preklinik AVF modeli, hemodiyaliz hastaları tarafından bildirilen yaygın nöromotor pertürbasyonları özetleyen ve araştırmacıların ARHD patofizyolojisinin mekanizmalarını araştırmalarına ve potansiyel terapötikleri test etmelerine olanak tanıyan yararlı bir platform sunmaktadır.
Fonksiyonel vasküler erişimin sağlanması ve korunması, hemodiyaliz yoluyla renal replasman tedavisi alan son dönem böbrek hastalığı (SDBY) hastaları için önemli bir birincil hedef olmaya devam etmektedir1. Tekrarlanan hemodiyaliz tedavileri, atık ürünleri uzaklaştırmak, elektrolitleri normalleştirmek ve böbrek fonksiyonu yetersiz kaldığında sıvı dengesini korumak için gereklidir ve bu nedenle uzun süreli sağkalım için gereklidir2. Bu nedenle, vasküler erişim SDBY'li hastalar için bir "yaşam çizgisi" dir ve otojen arteriyovenöz fistül (AVF) yerleşimi bu kohort3 arasında tercih edilen bir diyaliz erişim seçeneği olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, hemodiyaliz hastalarının yaklaşık% 30-60'ı, klinik olarak erişimle ilişkili el disfonksiyonu (ARHD) olarak tanımlanan bir el sakatlığı spektrumu yaşamaktadır. ARHD'nin semptomları zayıflık ve koordinasyonsuzluktan monopleji ve dijital kangrene kadar değişebilir, bu da AVF oluşturulduktan hemen sonra ortaya çıkabilir veya fistül olgunlaşması ile yavaş yavaş gelişebilir. Ayrıca, ARHD, düşük yaşam kalitesi, yüksek kardiyovasküler hastalık riski ve artmış mortalite 2,3,4 ile ilişkili SDBY tedavi programını karmaşıklaştırmaktadır.
AVF oluşumunu takiben hemodinamik değişikliklerin neden olduğu vasküler yeniden şekillenmeyi incelemek için çeşitli hayvan modelleri geliştirilmiştir 5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15. İliak veya femoral AVF 16,17,18,19,20 olan büyük hayvan modelleri ve karotis arter-juguler ven anastomozu veya infrarenal aort-inferior vena kava fistül formasyonu kullanan kemirgen modelleri, AVF olgunlaşmasının ve açıklığının yukarıda belirtilen yönlerini incelemek için iyi kurulmuştur 21 . Örneğin, venöz hipertansiyon, daha büyük luminal çap ve artmış ven duvarı kalınlığı başarılı AVF olgunlaşmasının imzalarıdır, oysa medyanın önemli fibrozisi ve akışta herhangi bir değişiklik olmaksızın intimal hiperplazi veya trombüs gelişimi sıklıkla AVF başarısızlıklarını karakterize eder 6,15. Bununla birlikte, büyük hayvan modelleri, murin modellerinin deneysel esnekliğinden veya transgenik yeteneklerinden yoksunken, mevcut kemirgen modelleri, anatomik konum ve / veya ilişkili uzuv patolojisinin eksikliği nedeniyle ARHD'nin araştırılmasını kolayca kolaylaştırmamaktadır. Gerçekten de, ilgili klinik fenotipi özetleyen yerleşik bir preklinik hayvan modelinin eksikliği nedeniyle, semptomatik ARHD hastalarının sayısındaki ilerleyici artışa rağmen, patobiyolojik mekanizmaları aydınlatmak ve yeni terapötik stratejiler geliştirmek için araştırma ilerlemesi durgun kalmıştır. Bu nedenle, bu çalışmanın temel amacı, AVF mikrocerrahisinin prosedürel adımlarını ve AVF ile ilişkili patofizyolojinin karakterizasyonunu sağlayan benzersiz bir ARHD fare modelini tanıtmaktır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm prosedürler Florida Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) ve Malcom Randall Gazi İşleri Tıp Merkezi tarafından onaylanmıştır.
NOT: Genç yetişkin (8-10 haftalık) erkek C57BL/6J fareler Jackson Laboratuvarı'ndan satın alınmış ve ışık (12 saat ışık: 12 saat karanlık döngü), sıcaklık (22 °C ± 1 °C) ve nem (%50 ± %10) kontrollü bir hayvan tesisinde barındırılmıştır. Beş farenin kafes başına (W: 18 cm x L: 29 cm x H: 12.5 cm) oturmasına izin verildi ve yuvalama malzemeleri, yiyecek ve su ad libitum olarak sağlandı. Standart chow ile 7 günlük habitat alışmasının ardından, fareler diyet geçiş aşaması olarak 7 gün boyunca kazein bazlı bir chow diyetine dönüştürüldü. Bundan sonra, fareler, daha önce tarif edildiği gibi AVF ameliyatından önce böbrek fonksiyon bozukluğunu (KBH) indüklemek için 2-3 hafta boyunca% 0.2 -% 0.15 adenin takviyesi ile kazein bazlı chow ile beslendi 22,23,24. Kontrol fareleri, adenin takviyesi (kontrol) olmadan kazein bazlı bir chow diyeti aldı. Kontrol ve KBH diyetleri postoperatif iyileşme dönemi (POD) boyunca sürdürüldü.
1. Ameliyat öncesi ölçümler
2. Cerrahi hazırlık
3. Anestezi ve konumlandırma
4. Cerrahi hedef bölgenin araştırılması
5. Ortak iliak arteriyovenöz fistül anastomozunun oluşturulması
6. Postoperatif bakım ve ölçüm
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Adenin diyetine maruz kalan hayvanlar, kazein bazlı chow alan hayvanlara kıyasla glomerüler filtrasyon hızlarını azaltmış (kontrol: 441.3 ± 54.2 μL / dak ile KBH: 165.1 ± 118.3 μL / dak, p < 0.05) ve artmış serum kan üre azot seviyeleri (kontrol: 20.39 ± 4.2 μL / dak vs KBH: 38.20 ± 10.65 μL / dak, p < 0.05) artmış ve arteriyovenöz fistül cerrahisinden önce böbrek yetmezliğinin varlığını doğrulamıştır.
AVF açıklığının doğrulanması
Teknik başarının i...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
AVF oluşumunu takiben AHB'li hemodiyaliz hastalarının prevalansı30,31 artmaya devam etmiştir. Gerçekten de, ağrı, halsizlik, parestezi ve / veya azalmış hareket açıklığı gibi çözülmemiş semptomatik komplikasyonlar 4,32,33,34,35,36 hasta refahını olumsuz yönde etkileyebilir ve yüksek kaliteli tekrarlayan hemodiyaliz tedavisi alma kapasitelerini tehdit edebilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Florida Üniversitesi Vasküler Cerrahi ve Endovasküler Terapi Bölümü'nden Dr. Guanyi Lu'ya, iliak AVF modelinin geliştirilmesi ve cerrahi eğitim konusundaki teknik destek için ve Florida Üniversitesi Uygulamalı Fizyoloji ve Kinesiyoloji Bölümü'nden Ravi Kumar'a canlı mikrocerrahi görüntüleri elde eden teknik destek için içtenlikle teşekkür ederiz.
Bu çalışma, Ulusal Sağlık ve Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüleri, R01-HL148697 Enstitü numaraları (S.T.S.'ye) ve Amerikan Kalp Derneği hibe numarası POST903198 (K.K.'ya) tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 0.15 Adenin diyeti | ENVIGO | TD.130899 | % 20 kazein,% 0.15 adenin,% 0.9 P |
| 0.2% Adenin diyeti | ENVIGO | TD.130900 | % 20 kazein,% 0.2 adenin,% 0.9 P |
| 10-0 Naylon sütür | AD cerrahi | XXS-N1005T4 | |
| 29 G iğne şırıngaları | Exel International | 14-841-32 | |
| 31 G iğne şırıngaları | Avukat | U-100 insülin | |
| 4-0 ipek sütür | AD cerrahi | S-S41813 | |
| 45 derece açılı dumont forseps | Güzel Bilim Araçları | 11253-25 | |
| 5-0 PGA sütür | AD cerrahi | PSGU-518R13 | |
| 6-0 ipek sütür | AD cerrahi | S-S618R13 | |
| Emilebilir jelatin sünger | ETHICON | 1975 | |
| Alkol müstahzarları | Covidien | 5110-cs4000 | %70 izopropil alkol |
| Buprenorfin | NA | NA | 0.01 g/mL |
| C57BL6/J fareler | Jaxon Laboratuvar | ||
| Kazein diyeti | ENVIGO | TD.130898 | %20 kazein, %0.9 |
| P Pamuklu çubuklar | CONSTIX | SC-9 | Orta tek uçlu yuvarlak pamuklu çubuk |
| Pamuklu çubuklar | CONSTIX | SC-4 | Küçük çift uçlu sert, keskin, sivri uçlu pamuklu çubuk |
| Curity dokumasız süngerler (2x2) | Covidien | 9022 | |
| Kavisli Vannas yaylı makas | Güzel Bilim Araçları | 15001-08 | |
| Doppler ultrason | VisualSonics | Vevo 2100 | |
| Ekstra ince graefe forseps | Güzel Bilim Araçları | 11150-10 | 2 çift |
| Göz yağlayıcı | CLCMEDICA | Optixcare göz yağı | |
| Heparin (5000 U/mL) | Ulusal İlaç Kodları Listesi | 63739-953-25 | 100 IU/mL |
| Sıcak boncuk sterilizatörü | Güzel Bilim Araçları | 18000-50 | |
| Düşük sıcaklıkta koter | Bovie | AA04 | |
| Kalem düzeltici | Wahl | 5640-600 | |
| Pudrasız cerrahi eldivenler | Ansell | 7824PF | |
| Yuvarlak saplı iğne tutucular | Güzel Bilim Araçları | 12076-12 | |
| Steril havlu örtüsü | Dynarex | DY440-MI | |
| Sterilize edilmiş %0,9 salin | Ulusal İlaç Kodları Listesi | 46066-807-25 | |
| Düz dumont forseps | Güzel Bilim Araçları | 11253-20 | |
| Düz iğne tutucu | Güzel Bilimler Araçlar | FST 12001-13 | |
| Düz vannas yaylı makas | Güzel Bilim Araçları | 25001-08 | |
| TrizChLOR4 | Ulusal İlaç Kodları Listesi | 17033-279-50 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.