Yöntem makalesi

Aşağı Akış Dolaşımsız DNA Uygulamaları için Standartlaştırılmış Bir Sıvı Biyopsi Preanalitik Protokolü

DOI:

10.3791/64123

⸱

16 Eylül 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Liquid Biopsy and Biomarker Working Module, the Biomedical Research Network in Cancer (CIBERONC)

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sıvı biyopsi, onkoloji translasyonel çalışmalarına yaklaşımımızda devrim yarattı ve örnek toplama, kalite ve depolama, başarılı klinik uygulaması için çok önemli adımlardı. Burada, çoğu translasyonel araştırma laboratuvarında uygulanabilecek aşağı akış dolaşımsız DNA uygulamaları için standartlaştırılmış ve doğrulanmış bir protokolü açıklıyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sıvı biyopsisi (LB) terimi, birincil ve / veya metastatik tümörden kaynaklanan kan ve diğer vücut sıvılarındaki proteinler, DNA, RNA, hücreler veya hücre dışı veziküller gibi molekülleri ifade eder. LB, translasyonel araştırmalarda bir dayanak noktası olarak ortaya çıkmış ve solid biyopsiye minimal invaziv bir alternatif sunarak klinik onkoloji uygulamasının bir parçası haline gelmeye başlamıştır. LB, kan gibi minimal invaziv bir numune ekstraksiyonu yoluyla bir tümörün gerçek zamanlı olarak izlenmesini sağlar. Uygulamalar arasında erken kanser tespiti, hastalık progresyonunun tespiti için hasta takibi, minimal rezidüel hastalığın değerlendirilmesi ve moleküler progresyon ve direnç mekanizmasının potansiyel olarak tanımlanması yer almaktadır. Klinikte rapor edilebilen bu örneklerin güvenilir bir analizini elde etmek için, preanalitik prosedürler dikkatlice düşünülmeli ve kesinlikle takip edilmelidir. Örnek toplama, kalite ve depolama, aşağı akış uygulamalarında kullanışlılıklarını belirleyen önemli adımlardır. Burada, dolaşımda olmayan DNA'ya dayalı aşağı akış sıvı biyopsi analizi için plazma ve serum örneklerinin toplanması, işlenmesi ve depolanması için sıvı biyopsi çalışma modülümüzden standartlaştırılmış protokoller sunuyoruz. Burada sunulan protokoller standart ekipman gerektirir ve biyolojik prosedürlere odaklanan çoğu laboratuvarda uygulanacak kadar esnektir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

"Sıvı biyopsi" terimi 2010 yılında1 birincil tümörden kaynaklanan kan ve diğer vücut sıvılarında moleküllerin (örneğin, protein, deoksiribonükleik asit (DNA), ribonükleik asit (RNA)), hücrelerin veya hücre dışı veziküllerin (örneğin, eksozomlar) varlığı olarak tanımlanmıştır. Sıvı biyopsi örneklerinin kullanımı, translasyonel onkoloji araştırmalarında devrim yaratmıştır, çünkü belirli bir anda belirli bir bölgeyle sınırlı olan doku biyopsileri, tümör heterojenliği nedeniyle ilgili klonları kaçırabilir. Ek olarak, sıvı biyopsi, primer dokunun az olduğu veya erişilemediği tümör tiplerinde ilgili bir rol oynar, çünkü invaziv bir biyopsiden kaçınabilir, hastalar için maliyetleri ve riski azaltabilir. Ayrıca, tümörün moleküler özellikleri esas olarak tedavi baskısı nedeniyle sürekli olarak gelişmektedir ve sıvı biyopsi örnekleri, tümör klonal dinamiklerini, hastalığın başlangıç, tedavi, en iyi yanıt ve hatta daha önce olduğu gibi hastalığın farklı klinik ve terapötik zamanlarında uzunlamasına alınabildikleri için yakalayabilir. "Gerçek zamanlı sıvı biyopsisi" kavramı, tümördeki dinamik değişikliklerin gerçek zamanlı olarak izlenebileceği ve böylece bu hastalıkta hassas tıbba izin verilebileceği anlamına gelir. Sıvı biyopsi, kanserin taranması ve erken teşhisi, hastalığın gerçek zamanlı izlenmesi, minimal kalıntı hastalığın tespiti, tedavi direnci için mekanizmaların incelenmesi ve hastaların terapötik düzeydesınıflandırılması dahil olmak üzere klinikte çok sayıda potansiyel uygulamaya sahiptir. Hastalığın nüksünün ve progresyonunun erken saptanması birçok tümör tipinde karşılanmamış bir klinik ihtiyaçtır ve kanser hastalarının sağkalımını ve yaşam kalitesini arttırmada anahtar faktördür. Rutin görüntüleme yöntemleri ve çözünür tümör belirteçleri bu görev için gereken duyarlılık ve/veya özgüllükten yoksun olabilir. Bu nedenle, klinikte, dolaşımdaki serbest nükleik asitlere dayananlar gibi yeni prediktif belirteçlere acilen ihtiyaç duyulmaktadır.

Sıvı biyopsi çalışmaları için kullanılan örnek türleri kan, idrar, tükürük ve dışkı örneklerini içerir, ancak bunlarla sınırlı değildir. Diğer tümöre özgü örnekler hücre aspiratları, beyin omurilik sıvısı, plevral sıvı, kist ve asit sıvısı, balgam ve pankreas suyu2 olabilir. Eski sıvılar, farklı tipte kanserden türetilmiş materyaller, dolaşımdaki tümör hücreleri (CTC) veya eksozomlar ve hücresiz dolaşımdaki tümör DNA'sı (ctDNA) gibi fragmanlar içerebilir. Nükleik asitler hücre dışı veziküllerde (EV'ler) kapsüllenebilir veya hücre ölümü ve hasarı nedeniyle vücut sıvılarına salınabilir. Dolaşımdaki serbest DNA (cfDNA) esas olarak apoptotik veya nekrotik hücrelerden kan dolaşımına salınır ve tüm bireylerde bulunur, enflamatuar veya onkolojik hastalıklarda artmış seviyeler gösterir3. Eksozomlar, nükleik asitler, proteinler ve lipitler içeren hücreler tarafından salgılanan küçük hücre dışı veziküllerdir (~ 30-150 nm). Bu veziküller hücreler arası iletişim ağının bir parçasını oluşturur ve birçok vücut sıvısı türünde yaygın olarak bulunur2. EV'lerin içindeki nükleik asitler, vücut sıvıları içindeki sert ortamdan korunur, böylece bu molekülleri sıvı biyopsi ortamında incelemek için daha sağlam bir yol sağlar.

Genel olarak, sıvı biyopsi örneklerinde dolaşımdaki nükleik asit seviyeleri çok düşüktür ve bu nedenle dijital PCR veya yeni nesil dizileme (NGS) gibi algılama için hassas yöntemlere ihtiyaç vardır. Numunenin preanalitik yönetimi, kan hücresi lizisini ve bozulmamış DNA'nın salınmasını önlemek için çok önemlidir, bu da cfDNA'nın genomik DNA ile kontaminasyonuna neden olur. Ayrıca, enzim bazlı analiz yöntemlerinin inhibitörlerinin varlığından kaçınmak için numuneler çıkarılırken dikkatli olunmalıdır.

Burada, dolaşımdaki nükleik asit analizleri de dahil olmak üzere sıvı biyopsi bazlı aşağı akış uygulamaları için çok önemli bir ilk adım olan plazma ve serum örneklerinin toplanması ve depolanması için standartlaştırılmış bir yöntem sunuyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kan örneklerinin çıkarılmasından önce katılımcı merkezlerden önceden etik onay alınmıştır. Serum ve plazma izolasyonu için aşağıdaki protokoller biyomedikal araştırmalar için etik ilkelere uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

NOT: Protokole başlamadan önce dikkat edilmesi gereken hususlar burada verilmiştir. İnsan örneklerinin biyomedikal araştırmalarda kullanımı için, ilgili bilgilendirilmiş onam ile önceden etik onay gereklidir. Kan örneklerini işlemek için sınıf II biyogüvenlik kabini gereklidir. Kan yoluyla bulaşan patojenlerin enfeksiyonunu önlemek için prosedür boyunca bir laboratuvar önlüğü, koruyucu eldiven ve gözlük giyilmelidir. Serum örneklerinin işlenmesi için en az 30 dakika gereklidir. Antikoagülansız tüplerde kan alındıktan sonra, pıhtı oluşumuna izin vermek için 30-45 dakika oda sıcaklığında (RT) tutun. Plazma hazırlanması için en az 40 dakika gereklidir ve numuneler, etilendiamin tetra-asetik asit (EDTA) tüpleri kullanılırken ekstraksiyon zamanından itibaren 4 saat içinde veya hücre stabilize edici toplama tüpleri veya spesifik hücresiz DNA toplama tüpleri kullanılıyorsa 24-48 saat içinde işlenmelidir. Bununla birlikte, bazı üreticilere göre, numuneler bu özel tüplerde 2 haftaya kadar stabildir. Plazma veya serum fraksiyonuna kırmızımsı bir görünüm kazandıracak olan hemolizi kontrol etmek önemlidir. Tartışmadaki hemolize örnekler için sorun giderme bölümüne bakın.

1. Sıvı biyopsi çalışmaları için serum hazırlığı

NOT: Bu adımı gerçekleştirmek için gereken toplam süre 30 dakikadır (Şekil 1).

  1. Antikoagülan içermeyen tüplerde (kırmızı veya kırmızı/gri-siyah kapak) 4-10 mL kan çıkarın ve RT'de 30-45 dakika tutun. Bu numuneleri ekstraksiyon zamanından itibaren 4 saat içinde işleyin.
  2. Numune ayıklama işleminin saatini ve tarihini ve konu kimliğini (ID) uygun şekilde tasarlanmış bir numune veritabanına kaydedin.
  3. Bir laboratuvar önlüğü, koruyucu eldiven ve gözlük giyerek, RT'de (15 ° C-25 ° C) taze kan içeren tüpü, maksimum mola uygulanarak 1.600 (± 150) x g'de 10 dakika boyunca santrifüj edin.
  4. Santrifüjlemeden sonra, tüpü santrifüjden dikkatlice çıkarın; serum süpernatantının üst fazı berrak ve sarımsı görünecektir (Şekil 2). Numunenin hemoliz belirtileri gösterip göstermediğini kontrol edin (Şekil 3) ve uygun olduğunda hemoliz varlığını kaydedin.
  5. Sınıf II biyogüvenlik kabininde, serumu toplama tüplerine 250 μL alikot olarak aktarın.
    NOT: Alikotların hacmi, çalışma gereksinimlerine göre ayarlanmalıdır.
  6. Serumu hemen -80 °C'de bir saklama kutusunda dik olarak dondurun ve numune saklama süresini kaydedin.
  7. Numunelerin gerekli 4 saatlik zaman dilimi içinde işlendiğini doğrulayın.

2. Sıvı biyopsi çalışmaları için plazma hazırlığı

NOT: Bu adımı gerçekleştirmek için gereken toplam süre 40 dakikadır (Şekil 4).

  1. Etilendiamin tetra-asetik asit (EDTA) içeren tüplerde 4-10 mL kan ekstrakte edin. Numuneleri ekstraksiyon zamanından itibaren 4 saat içinde işleyin.
  2. Numune ayıklamanın saatini ve tarihini ve konu kimliğini uygun şekilde tasarlanmış bir örnek veritabanına kaydedin.
  3. Bir laboratuvar önlüğü, koruyucu eldiven ve gözlük giyerek, EDTA tüpünü RT'de (15 ° C-25 ° C) 10 dakika boyunca 1.600 (± 150) x g'de santrifüj yapın ve maksimum mola uygulayın.
    NOT: Diğer toplama tüplerini kullanırken üreticinin talimatlarına bakın.
  4. Santrifüjlemeden sonra, plazma süpernatantı berrak ve sarımsı görünecektir. Numunenin hemoliz belirtileri gösterip göstermediğini kontrol edin (Şekil 3) ve plazmayı (süpernatant) tek kullanımlık serolojik pipet (veya tek kullanımlık ampul pipeti veya filtre uçlu p1000 pipetler) kullanarak hücresel tabakayı rahatsız etmeden 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın. Hücre tabakasının üzerinde küçük bir artık plazma hacmi bırakın (yaklaşık 5 mm).
  5. Hemoliz gözlenirse, daha ileri analizler için numuneyi atın. (Şekil 5). Hemolizi değerlendirmek için Tartışma'daki sorun giderme bölümüne bakın.
  6. Plazmayı RT'de (15 °C-25 °C) 15 mL'lik bir santrifüj tüpünde 3.000 (±150) x g'de 10-20 dakika boyunca santrifüj yapın. İlk santrifüjleme adımından taşınan artık sağlam kan hücrelerini çıkarmak için bu adımı uygulayın.
  7. Santrifüjlemeden sonra, tüpü santrifüjden dikkatlice çıkarın ve tek kullanımlık bir serolojik pipet (veya tek kullanımlık ampul pipeti veya filtre uçlu p1000 pipetler) kullanarak 1-4 mL plazmayı 1-4 mL polipropilen kriyojenik şişelere aktarın. Plazmanın kan hücreleri ile kirlenmesini önlemek için tüpün dibinde artık plazma hacmi (yaklaşık 0.3 mL veya 7 mm yükseklikte) bırakılmalıdır (Şekil 5).
  8. Plazmayı hemen saklama kutusunda -80 °C'de dik olarak dondurun ve numune depolama süresini kaydedin. Numunelerin gerekli 4 saatlik zaman dilimi içinde işlendiğini doğrulayın.
  9. Bir P1000 ve filtrelenmiş uç kullanarak hücresel tabakayı (kabarık kaplama) toplayın ve 2 mL'lik bir tüpe aktarın. Hemen dondurun ve -80 °C'de saklayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Antikoagülan olmadan kan tüplerinin santrifüjlenmesinden sonra, üst faz soluk sarı renkte görünür ve serum fraksiyonuna karşılık gelir (Şekil 2). Bu fraksiyon dikkatlice çıkarılır ve sonraki analizler için aliquoted edilir.

Hemoliz, plazma veya serum fraksiyonunda mevcut olabilir ve üst faz, hemolizin varlığını ve derecesini gösteren kırmızımsı bir görünüme sahip olacaktır (Şekil 3).

EDTA tüplerinin santrif...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sıvı biyopsi, kanser yönetimi sırasında farklı zamanlarda çok sayıda potansiyel uygulamaya sahiptir. İlk olarak, tanıda, klinik olarak daha fazla araştırılabilecek potansiyel bir tümör lezyonunun varlığını düşündürecek tümör moleküler belirteçlerini tanımlamak. İkincisi, hastalığın gerçek zamanlı izlenmesi için tedavi sırasında, tedavi moleküler yanıtının değerlendirilmesi, klonal evrim ve hastalık nükslerinin veya tedavi direncinin erken tespiti. Son olarak, cerrahi tedaviden sonra, minimal kalıntı hastalığın tespiti iç...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beatriz Bellosillo (BB): BB, Amgen, Astra-Zeneca, Biocartis, Janssen, Merck-Serono, Novartis, Qiagen, Roche Diagnostics, Roche Pharma, ThermoFisher, Pfizer ve BMS'den konuşmacı, danışmanlık veya danışmanlık rolü için onursal ödül aldı. Sara López-Tarruella (SL): SL, Astra-Zeneca/Daiichi-Sankyo, MSD, Novartis, Pfizer, Roche Pharma, Gilead, Lilly, Pierre Fabre, Seagen, GlaxoSmithKline ve Veracyte'den konuşmacı, danışmanlık veya danışmanlık rolü için onursal ödül aldı. Noelia Tarazona (NT): NT, Amgen, Pfizer, Merck-Serono, Servier, SEOM ve ESMO'dan konuşmacı, danışmanlık veya danışmanlık rolü için onur ödülü aldı. Javier Hernandez-Losa (JHL): Astra-Zeneca, Janssen, Novartis, Roche Diagnostics, Roche Pharma, ThermoFisher, Lilly ve Diaceutics'ten konuşmacı, danışmanlık veya danışmanlık rolü için onur ödülü aldı. Rodrigo Toledo (RT), Novartis'ten bu çalışmayla ilgili araştırma hibeleri ve AstraZeneca ve Beigene'den bu çalışmayla ilgisi olmayan araştırma hibeleri aldığını bildirmektedir. Geri kalan yazarların makale ile ilgili herhangi bir açıklaması bulunmamaktadır.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kanserde Biyomedikal Araştırma Ağı'na (CIBERONC) destekleri ve aşağıdaki proje hibeleri için teşekkür ederiz: LB CIBERONC PLATFORM: CIBERONC sıvı biyopsisinin standardizasyonu ve teşviki için platform. PI Rodrigo Toledo, (CIBERONC), 2019-2021.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1,5 mL Eppendorf tüpleriEppendorf0030 120.086Herhangi bir standart tüp/ekipman kullanılabilir
10 mL serolojik tek kullanımlık pipetlerBIOFILGSP010010Herhangi bir standart tüp/ekipman kullanılabilir
10 mL Vacutainer K2 EDTA tüpüBecton Dickinson367525Bu tüpler plazma toplama için kullanılabilir
15 mL polipropilen santrifüj tüpleriBIOFILCFT411150Herhangi bir standart tüp/ekipman kullanılabilir
Antikoagülan içermeyen 3,5 mL BD Vacutainer tüpBecton Dickinson368965Serum toplama için 8,5 veya 3,5 mL tüpler kullanılabilir
4 mL polipropilen kriyojenik şişe, yuvarlak tabanlı, bağımsızCorning430662Herhangi bir standart tüp/ekipman kullanılabilir
4 mL Vacutainer K2 EDTA tüpüBecton Dickinson367864Bu tüpler plazma toplama için kullanılabilir
4200 TapeStation SystemAgilentG2991BAiçin özel bir uygulama ile çeşitli miktar belirleme yöntemleri mevcuttur
BIOFILGSP010005Herhangi bir standart tüp/ekipman kullanılabilir
Antikoagülan içermeyen 8,5 mL BD Vacutainer tüpBecton Dickinson3664688.5 veya 3.5 mL'lik tüpler
, ~ 3000 x g / em<> kapasiteli serum toplama santrifüjüThermo Fisher ScientificSorvall ST 16 & nbsp; 10688725Herhangi bir standart tüp / ekipman kullanılabilir
Dondurucu saklama kutuları 1 – 4 mLkriyojenikşişeler Corning431120Depolama için 4 mL'lik şişeler kullanıldığında bu kutulara ihtiyaç vardır
p1000 pipet uçlarıCORNING4809Herhangi bir standart tüp/ekipman kullanılabilir
QIAamp Dolaşımdaki Nükleik Asit KitiQiagen55114CfDNA izolasyonu için spesifik olan ticari olarak temin edilebilen herhangi bir kit, bu kan işleme protokolü ile kullanılabilir.
Enkaz  Hücresiz DNA BCT CE tüpleri 10 mLStreck218997Bu tüpler plazma toplama için kullanılabilir
Sıcaklık Dondurucu (-80 °C; C)ESCO2180104Herhangi bir standart tüp / ekipman kullanılabilir
cfDNA 5 mL serolojik tek kullanımlık pipetler için kullanılabilir

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Alix-Panabières, C., Pantel, K. Clinical applications of circulating tumor cells and circulating tumor DNA as liquid biopsy. Cancer Discovery. 6 (5), 479-491 (2016).
  2. Zhou, B., et al. Application of exosomes as liquid biopsy in clinical diagnosis. Signal Transduction and Targeted Therapy. 5 (1), 144(2020).
  3. Bettegowda, C., et al. Liquid biopsies: Genotyping circulating tumor DNA. Nature Medicine. 4 (6), (2014).
  4. Heitzer, E., et al. Recommendations for a practical implementation of circulating tumor DNA mutation testing in metastatic non-small-cell lung cancer. ESMO Open. 7 (2), 100399(2022).
  5. Gennari, A., et al. ESMO Clinical Practice Guideline for the diagnosis, staging and treatment of patients with metastatic breast cancer. Annals of Oncology: Official Journal of the European Society for Medical Oncology. 32 (12), 1475-1495 (2021).
  6. Van Buren, T., Arwatz, G., Smits, A. J. A simple method to monitor hemolysis in real time. Scientific Reports. 10 (1), 5101(2020).
  7. Ignatiadis, M., Sledge, G. W., Jeffrey, S. S. Liquid biopsy enters the clinic - implementation issues and future challenges. Nature Reviews. Clinical Oncology. 18 (5), 297-312 (2021).
  8. Sidstedt, M., et al. Inhibition mechanisms of hemoglobin, immunoglobulin G, and whole blood in digital and real-time PCR. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410 (10), 2569-2583 (2018).
  9. Maass, K. K., et al. From sampling to sequencing: A liquid biopsy pre-analytic workflow to maximize multi-layer genomic information from a single tube. Cancers. 13 (12), 3002(2021).
  10. Greytak, S. R., et al. Harmonizing cell-free DNA collection and processing practices through evidence-based guidance. Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research. 26 (13), 3104-3109 (2020).
  11. Trigg, R. M., Martinson, L. J., Parpart-Li, S., Shaw, J. A. Factors that influence quality and yield of circulating-free DNA: A systematic review of the methodology literature. Heliyon. 4 (7), 00699(2018).
  12. Boissier, E., et al. The centrifuge brake impacts neither routine coagulation assays nor platelet count in platelet-poor plasma. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 58 (9), 185-188 (2020).
  13. Johansson, G., et al. Considerations and quality controls when analyzing cell-free tumor DNA. Biomolecular Detection and Quantification. 17, 100078(2019).
  14. Casas-Arozamena, C., et al. Genomic profiling of uterine aspirates and cfDNA as an integrative liquid biopsy strategy in endometrial cancer. Journal of Clinical Medicine. 9 (2), 585(2020).
  15. Alcoceba, M., et al. Liquid biopsy: a non-invasive approach for Hodgkin lymphoma genotyping. British Journal of Haematology. 195 (4), 542-551 (2021).
  16. Szpechcinski, A., et al. Cell-free DNA levels in plasma of patients with non-small-cell lung cancer and inflammatory lung disease. British Journal of Cancer. 113 (3), 476-483 (2015).
  17. Earl, J., et al. Somatic mutation profiling in the liquid biopsy and clinical analysis of hereditary and familial pancreatic cancer cases reveals kras negativity and a longer overall survival. Cancers. 13 (7), 1612(2021).
  18. Lampignano, R., et al. Multicenter evaluation of circulating cell-free DNA extraction and downstream analyses for the development of standardized (pre)analytical work flows. Clinical Chemistry. 66 (1), 149-160 (2020).
  19. Febbo, P. G., et al. Minimum technical data elements for liquid biopsy data submitted to public databases. Clinical Pharmacology and Therapeutics. 107 (4), 730-734 (2020).
  20. De Mattos-Arruda, L., Siravegna, G. How to use liquid biopsies to treat patients with cancer. ESMO Open. 6 (2), 100060(2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Kan rne i lemePlazma zolasyonuSerum ToplamaHemoliz Tespitirnek SaklamaSantrif j ProtokolOnkoloji Ara t rmalar

İlgili makaleler