Miyokard Enfarktüsü Sonrası Yetişkin Fare Kalbinden Tek Hücreli RNA Dizilimi için Kardiyomiyosit Olmayan Hücre Süspansiyonunun Hazırlanması

Chengchen Huang; Jiahe Han; Shuo Sun; Guosheng Fu; Min Shang

doi:10.3791/64290

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Miyokard Enfarktüsü Sonrası Yetişkin Fare Kalbinden Tek Hücreli RNA Dizilimi için Kardiyomiyosit Olmayan Hücre Süspansiyonunun Hazırlanması

2.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/64290

⸱

3 Şubat 2023

Chengchen Huang¹^,² , Jiahe Han¹^,² , Shuo Sun¹^,² , Guosheng Fu^*¹^,² , Min Shang^*¹^,²

¹Key Laboratory of Cardiovascular Intervention and Regenerative Medicine of Zhejiang Province, ²Department of Cardiology, Sir Run Run Shaw Hospital, School of Medicine, Zhejiang University Hangzhou

^* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Burada, miyokard enfarktüsü sonrası (MI) fare kalbinden yüksek canlılığa sahip yeterli miktarda tek kardiyomiyosit olmayan izole etmek için bir protokol açıklanmaktadır. Bu, sonraki tek hücreli dizileme, akış sitometri analizi ve birincil hücre kültürü için kullanılabilir.

Özet

Miyokard enfarktüsü (MI), tüm dünyada mortalitesi giderek artan en yaygın kardiyovasküler hastalıklardan biridir. Non-kardiyomiyositler toplam kardiyak hücre popülasyonunun yarısından fazlasını oluşturur ve enflamatuar yanıtlar, doku onarımı ve skar oluşumu dahil olmak üzere miyokard hasarı üzerine adaptif kompanzasyonlara katkıda bulunurlar. MI sonrası kardiyak mikroçevreyi incelemek için, tek hücreli RNA dizilimi (scRNA-seq), farklı kardiyak hücre tiplerini ve hücreler arası iletişimi tanımlamak için yaygın olarak kullanılmaktadır. ScRNA-seq numune hazırlama prosedürleri arasında, hücre süspansiyonunun hazırlanması en kritik adımlardan biridir, çünkü hücre canlılığı scRNA-seq sonuçlarının kalitesini etkileyebilir. Bu nedenle, hafif sindirim enzimlerini seçerek, sindirim süresini kontrol ederek ve floresan ile aktive edilmiş hücre sıralama (FACS) uygulayarak hücre canlılığını iyileştirmeye odaklanarak, MI sonrası fare kalplerinden kardiyomiyosit olmayan bir hücre süspansiyonu hazırlamak için deneysel bir protokol tasarladık. Son olarak, CD45⁺ hücrelerini bu protokol ile elde edilen kardiyomiyosit olmayan hücre süspansiyonundan izole ettik ve daha sonra scRNA-seq uyguladık.

Giriş

Miyokard enfarktüsü (MI) en sık görülen kardiyovasküler hastalıklardan biridir ve mortalitesi tüm dünyada artmaktadır¹. MI, aterosklerotik plak rüptürü ile ortaya çıkan koroner arter tıkanıklığının bir sonucu olabilen çevredeki miyokarda yetersiz kan akışından kaynaklanır. Perkütan koroner girişim (PKG) akut MI hastalarının mortalite oranlarını azaltmış olsa da, MI sonrası kalp yetmezliği prevalansının yüksek olması bir sorun olmaya devam etmektedir². MI sonrası kalp yetmezliğinin altında yatan anahtar patofizyoloji, ölü kalp kasının kontraktil olmayan fibrotik yara izleriyle değiştirilmesini içeren vücudun kalp yaralanm....