Method Article

Tam Kat Kıkırdak Defektlerinin Sıçan Modelinin Geliştirilmesi ve Değerlendirilmesi

DOI:

10.3791/64475

⸱

May 19th, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First Affiliated Hospital, Zhejiang Chinese Medical University, 2Fuyang Orthopaedics and Traumatology Affiliated Hospital, Zhejiang Chinese Medical University, 3College of Pharmaceutical Science, Zhejiang Chinese Medical University, 4Affiliated Zhejiang Hospital, Zhejiang University School of Medicine, 5Xianju County Hospital of Chinese Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, sıçanların femoral troklear oluğunda delikler açarak ve sonraki ağrı davranışını ve histopatolojik değişiklikleri ölçerek tam kat kıkırdak defektleri (FTCD) modeli oluşturur.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Travma sonucu diz ekleminin kıkırdak defektleri klinikte sık görülen bir spor eklemi yaralanmasıdır ve bu defektler eklem ağrısı, hareket bozukluğu ve sonunda diz osteoartriti (kOA) ile sonuçlanır. Bununla birlikte, kıkırdak kusurları ve hatta kOA için çok az etkili tedavi vardır. Terapötik ilaçlar geliştirmek için hayvan modelleri önemlidir, ancak kıkırdak kusurları için mevcut modeller tatmin edici değildir. Bu çalışma, sıçanların femoral troklear oluğunda delikler açarak tam kalınlıkta bir kıkırdak defekti (FTCD) modeli oluşturdu ve sonraki ağrı davranışı ve histopatolojik değişiklikler okuma deneyleri olarak kullanıldı. Ameliyattan sonra, insan kıkırdak defektlerinde gözlenen patolojik değişikliklerle tutarlı olarak mekanik geri çekilme eşiği azaldı, yaralı bölgedeki kondrositler kayboldu, matriks metalloproteinaz MMP13 ekspresyonu arttı ve tip II kollajen ekspresyonu azaldı. Bu metodolojinin uygulanması kolay ve basittir ve yaralanmadan hemen sonra büyük gözlem sağlar. Ayrıca, bu model klinik kıkırdak kusurlarını başarılı bir şekilde taklit edebilir, böylece kıkırdak defektlerinin patolojik sürecini incelemek ve karşılık gelen terapötik ilaçları geliştirmek için bir platform sağlar.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eklem kıkırdağı, kondrositler ve hücre dışı matriks1'den oluşan oldukça farklılaşmış ve yoğun bir dokudur. Eklem kıkırdağının yüzey tabakası, pürüzsüz bir yüzeye, düşük sürtünmeye, iyi mukavemete ve elastikiyete ve mükemmel mekanik stres toleransına sahip bir hiyalin kıkırdak şeklidir2. Hücre dışı matris, kollajen proteoglikan ve sudan oluşur ve tip II kollajen, toplam kollajenin yaklaşık %90'ını oluşturduğu için kollajenin ana yapısal bileşenidir3. Kıkırdak dokusunda kan damarı veya sinir bulunmadığından, yaralanmadan sonra kendi kendini onarma yeteneğinden yoksundur4. Bu ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan deneyleri, laboratuvar hayvanlarının kullanımı ve bakımı ile ilgili Çin mevzuatına uygun olan Zhejiang Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Tıbbi Standartlar ve Etik Komitesi tarafından onaylandı. Bu çalışmada 150-180 g ağırlığında 6 haftalık erkek Sprague-Dawley (SD) sıçanlar kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz.

1. Sıçanlarda tam kalınlıkta kıkırdak defektleri modelinin oluşturulması

  1. Yeni ortama alıştıktan 1 hafta sonra, sıçanları rastgele ve eşit olarak iki gruba ayırın (n = 8 sıçan / grup). Sahte gruptaki sıçanlar sahte cerrahiye sahip olurken, model grubundaki s....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, femoral troklear olukta delikler açılarak ve sonraki ağrı davranışı ve histopatolojik değişiklikler tespit edilerek FTCD'nin bir sıçan modeli oluşturulmuştur. Şekil 1'de gösterildiği gibi, modellemeden 3 gün sonra, sahte grupla karşılaştırıldığında, model grubundaki sıçanların MWT'si önemli ölçüde azaldı ve bu da FTCD'nin neden olduğu hiperaljeziyi düşündürdü. Modellemeden 17 gün sonra, model grubundaki sıçanların mekanik geri çekilme eşiği düşük bir seviyede kaldı, bu da ağrı .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, sıçanların femoral troklear oluğunda delikler açarak klinik kıkırdak defektlerini taklit etmek için bir hayvan modelini açıklamaktadır (Ek Şekil 1). Kıkırdak yaralanmasından sonra, periferik nosiseptörlerin uyarılabilirliği veya duyarlılığı artar, bu da ağrı eşiğinde bir azalmaya ve stimülasyona yanıtın artmasına neden olabilir18. Klinik öncesi çalışmalarda, farklı hayvan türlerinde kıkırdak defektlerinin modellenmesi her zaman ağrıya neden olmuştur

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Zhejiang Doğa Bilimleri Vakfı (hibe numarası LQ20H270009), Çin Doğa Bilimleri Vakfı (hibe numaraları 82074464 ve 82104890), Zhejiang Geleneksel Çin Tıp Bilimleri Vakfı (hibe numaraları 2020ZA039, 2020ZA096 ve 2022ZB137) ve Zhejiang İl Sağlık Komisyonu Tıbbi Sağlık Bilimi ve Teknolojisi Projesi (hibe numarası 2016KYA196) tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
3, 3 '-diaminobenzidin & nbsp;Hangzhou Zhengbo Biyoteknoloji Co, LtdZLI-9019IHC boyama için boya
Anti-Kollajen III antikoruNovusNB600-594için birincil antikor
Abcam (İngiltere)34712için birincil antikor
NovusNB600-408için birincil antikor
Shanghai Yuanye Technology Co., Ltd.R20381Masson boyama boyası
Celestite mavisiShanghai Yuanye Technology Co., Ltd.R20381Masson boyama için boya
Mısır koçanı dolguları  Xiaohe Technology Co., Ltd Hayvanlar için yatak takımları 
EosinSigma-Aldrich861006HE boyama için boya
Hızlı Yeşil FCFSigma-AldrichF7252SO boyama için boya
Keçi anti-fare antikoruZSGQ-BIO (Pekin, Çin)PV-9002IHC
Keçi anti-tavşan antikoruZSGQ-BIO (Pekin, Çin)PV-9001IHC Hematoksilen için ikincil antikor
Sigma-AldrichH3163HE boyama için boya
MassonShanghai Yuanye Technology Co., Ltd.R20381Masson boyama için boya
MicrodrillRwd Life Science Co., Ltd78001Ameliyat ekipmanı
MMP13Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, ABD)69926için birincil antikor
Thermo Fisher Scientific (ABD)EC 350Parafin blokları üretin
Nötr reçineHangzhou Zhengbo Biyoteknoloji Co., Ltd.ZLI-9555IHC
Emilemeyen sütüriçin Mühür Hangzhou Huawei Medical Supplies Co., Ltd.4-0Ameliyat ekipmanları
Pentobarbital sodyum Hangzhou Zhengbo Biyoteknoloji Co, LtdWBBTN5GAnestezi uygulanmış hayvan
fosfomolibdik asit Şanghay Yuanye Technology Co., Ltd.R20381Masson boyama için boya
Ponceau fuchsinShanghai Yuanye Technology Co., Ltd.R20381Masson boyama için boya
Döner ve Kayar MikrotomlarThermo Fisher Scientific (ABD)HM325Hassas parafin bölümleri
Safranin-OSigma-AldrichS2255SO boyama için boya
Neşter bıçağıShanghai Lianhui Medical Supplies Co., Ltd.11Ameliyat ekipmanı
Sodyum sitrat çözeltisi (20x)Hangzhou Haoke Biotechnology Co., Ltd.HK1222antijen alımı
  Şangay Slake Deney Hayvanları Co., Ltd.SDDeney hayvanı
Doku-Tek VIP 5 JrSakura (Japonya)Vakum İnfiltrasyon İşlemcisi
Toluidin BlueSigma-Aldrich89640TB boyama boyası
Von Frey filamentUGO Basile (İtalya) 37450-275MWT tahlili için ekipman
Tel örgü platformu Şangay Yuyan Instruments Co., Ltd.MWT tahlili için donatım
IHC Anti-Kollajen II antikoru IHC Anti-Kollajen I antikoru IHC Bouin çözeltisi için ikincil antikor IHC Modüler doku gömme merkezi IHC Sprague Dawley (SD) sıçanları için

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhang, Z. Chondrons and the pericellular matrix of chondrocytes. Tissue Engineering. Part B, Reviews. 21 (3), 267-277 (2015).
  2. Correa, D., Lietman, S. A. Articular cartilage repair: Current needs, methods and research directions.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cartilage DefectsFull Thickness CartilageRat ModelKnee Joint InjuryFemoral CondylePain BehaviorHistopathological StainingChondrocyte LossType II CollagenMatrix Metalloproteinase MMP13

Related Articles