Bu makalede, geleneksel boşluk noktası testine video izlemeyi dahil ederek fare işeme davranışını incelemek için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, günün aydınlık ve karanlık evrelerinde işeme olayları ve fare davranışının ayrıntıları hakkında zamansal, uzamsal ve hacimsel bilgiler sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Normal işeme davranışı, sinir sisteminin uygun kontrolü altında mesane, üretra ve üretral sfinkterlerin koordineli fonksiyonunun sonucudur. Fare modellerinde gönüllü işeme davranışını incelemek için araştırmacılar, bir hayvanın kafesinin zeminini kaplayan bir filtre kağıdı üzerinde biriken idrar lekelerinin sayısını ve alanını ölçen bir yöntem olan boşluk noktası testini (VSA) geliştirdiler. Teknik olarak basit ve ucuz olmasına rağmen, bu tahlil, işeme olaylarının zamansal çözünürlüğünün olmaması ve örtüşen idrar noktalarının ölçülmesinde zorluklar da dahil olmak üzere bir son nokta testi olarak kullanıldığında sınırlamalara sahiptir. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, gerçek zamanlı VSA (RT-VSA) olarak adlandırdığımız ve işeme frekansını belirlememize, işeme hacmini ve işeme modellerini değerlendirmemize ve günün hem karanlık hem de aydınlık fazlarında 6 saatlik zaman aralıklarında ölçümler yapmamıza olanak tanıyan video izlemeli bir VSA geliştirdik. Bu raporda açıklanan yöntem, sağlık ve hastalık durumlarında gönüllü işitmenin fizyolojik ve nörodavranışsal yönlerini araştıran çok çeşitli fare tabanlı çalışmalara uygulanabilir.
Giriş
İdrar depolanması ve işlenmesi, pelvik ve hipogastrik sinirler aracılığıyla mesane dolum durumu hakkında bilgi alan merkezi bir devre (merkezi sinir sistemi) tarafından koordine edilir. Ürotel, idrar yolunu renal pelvisten proksimal üretraya kadar kaplayan epitel, idrarda bulunan metabolik atık ürünlere ve patojenlere sıkı bir bariyer oluşturur. Mesanenin doldurma durumunu algılayan ve altta yatan dokulara ve afferent sinirlere ileten duyusal bir ağın ayrılmaz bir bileşenidir 1,2. Ürotelyal bariyerin bozulması veya ürotelyal mekanotransdüksiyon yollarındaki değişiklikler, frekans, aciliyet, noktüri ve inkontin....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Urothelial Piezo1/2 çift nakavt fareleri (Pz1/2-KO , genotip: Piezo1 fl/fl; Piezo2fl / fl; Upk2CRE+/-) ve kontrolleri (Pz1/2-C, genotip: Piezo1 fl/fl; Piezo2fl / fl; Upk2CRE-/-), Jax laboratuvarlarından elde edilen ebeveyn suşlarından (Piezo1 fl/ fl suşu # 029213; Piezo2fl / fl suşu # 027720; Upk2CRE+/- suş # 029281). Deneylerde hem dişi (1.5-3 aylık ve 17-20 g ağırlığında) hem de erkek (2-4 aylık ve 23-29 g ağırlığında) fareler kullanıldı. Siklofosfit kaynaklı sistit deneyleri için, vahşi tip C57Bl / 6J dişiler (3 ay....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Ürotelyal Piezo1/2 nakavt farelerin işeme davranışı
Miktüritasyon döngüsünün depolama aşamasında, ürotelyumun mesanede biriken idrarın uyguladığı gerginliği algılamak ve bu mekanik uyaranı serozal ATP salınımı 1,3 gibi hücresel yanıtlara dönüştürmek için hipotez vardır. Daha önce mekanik olarak aktive edilen PIEZO1 ve PIEZO2 kanallarının fare urothelium 3,36.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Video izlemenin dahil edilmesi, klasik VSA'ya göre çeşitli avantajlar sunan uygun maliyetli bir değişikliktir. Tipik olarak bir son nokta testi olarak kullanılan klasik VSA'da, örtüşen boşluk noktalarını ayırt etmek zordur. Bu önemsiz bir endişe değildir, çünkü fareler, tahlil birkaç saat uzatıldığında, tipik olarak kafeslerinin köşelerinde, aynı bölgede birden çok kez idrara çıkma eğilimindedir. Bu nedenle, RT-VSA'nın ilk avantajı, araştırmacının kısmen veya tamamen birbirinin üzerine birikmiş bireysel noktaları kolayca.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, bir NIH hibe R01DK119183 (G.A. ve MDC'ye), P30DK079307 aracılığıyla bir pilot proje ödülü (M.G.D.'ye), bir Amerikan Üroloji Derneği Kariyer Geliştirme ödülü ve bir Winters Vakfı hibesi (N.M.'ye) ve Pittsburgh Böbrek Araştırmaları Merkezi'nin (P30DK079307) Hücre Fizyolojisi ve Model Organizmalar Böbrek Görüntüleme Çekirdekleri tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1,00 inç X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 10 inç'e kadar kesilmiş | 80/20 | 1010 | Miktar: 20 |
| 1.00" X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 12 inç'e kadar kesilmiş | 80/20 | 1010 | Miktar: 6 |
| 1.00" X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 40 inç'e kadar kesilmiş | 80/20 | 1010 | Miktar: 4 |
| 1.00" X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 14,75 inç'e kadar kesilmiş | 80/20 | 1010 | Miktar: 12 |
| 1,00" X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 32 inç'e kadar kesilmiş | 80/20 | 1010 | Miktar: 5 |
| 1/4-20 Çift Sürgülü Ekonomik T-Somun | 80/20 | 3280 | Miktar: 16 |
| 1/4-20 Üçlü Sürgülü Ekonomik T-Somun | 80/20 | 3287 | Miktar: 18 |
| 10 & 25 Seri 2 Delik - Çift Destekli 18mm Oluklu İç Köşe Braketi | 80/20 | 14061 | Miktar: 6 |
| 10 Seri 3 Delikli - Düz Düz Plaka | 80/20 | 4118 | Miktar: 8 |
| 10 Seri 5 Delik - "L" Düz Plaka | 80/20 | 4081 | Miktar: 8 |
| 10 Seri 5 Delik - "T" Düz Plaka | 80/20 | 4080 | Miktar: 8 |
| 10 Seri 5 Delikli - Tee Düz Plaka | 80/20 | 4140 | Miktar: 2 |
| 10 Serisi Standart Kaldırma Menteşesi - Sağ El Tertibatı | 80/20 | 2064 | Miktar: 2 |
| 10 ila 15 Seri 2 Delikli - Lite Geçiş İç Köşe Braketi | 80/20 | 4509 | Miktar: 6 |
| 24" uzunluğunda UV tüp ışıkları | ADJ Products LLC | T8-F20BLB24 | Miktar: 2 20W ampul ve ndash; 24" dalga boyu: 365nm |
| Akrilik Ayna Levhası | Profesyonel Plastik | Miktar: 1 82,5 cm x 26,5 cm | |
| Akrilik Ayna Levhası | Profesional Plastik | Miktar: 2 26,5 cm X 30,5 cm | |
| Akrilik Ayna Levhası | Profesional Plastik | Miktar: 2 82,5 cm x 30,5 cm | |
| AR polikarbonat (UV direnci) | 80/20 | 65-2641 | Miktar: 2 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf, 38,5 cm x 26,5 cm |
| AR polikarbonat (UV direnci) | 80/20 | 65-2641 | Miktar: 4 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf, 38,5 cm x 21,5 cm |
| AR polikarbonat (UV direnci) | 80/20 | 65-2641 | Miktar: 4 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf, 26,5 cm x 21,5 cm |
| AR polikarbonat (UV direnci) | 80/20 | 65-2641 | Miktar: 4 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf 37,5 cm x 23,9 cm |
| AR polikarbonat (UV direnci) | 80/20 | 65-2641 | Miktar: 4 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf, 24,4 cm x 23,9 cm |
| Kromatografi kağıdı (ince kağıt) | Thermo Fisher Scientific | 57144 | |
| Cosmos kurutma kağıdı (kalın kağıt) | Blick Art Materials | 10422-1005 | |
| Excel | Microsoft Corporation | ||
| GraphPad Prism | GraphPad Yazılım | Sürümü 9.4.0 | grafik ve istatistik yazılımı |
| ImageJ FIJI | NIH | ||
| Parafilm | Merck | şeffaf film | |
| Quick Time Player 10.5 yazılımı | Apple | multimedya oynatıcı | |
| Güvenlik casusu | Ben yazılımı | video gözetim yazılım sistemi | |
| Standart Uç Bağlantı Elemanı, 1/4-20 | 80/20 | 3381 | Miktar: 80 |
| UV ileten akrilik | Spartech | Polycast Solacryl SUVT | Miktar: 2 38,5 cm x 26,5 cm |
| Su jeli: HydroGel | ClearH2O | 70-01-5022 | (https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/) |
| Webcam | Logitech | C930e | Miktar: 4 |
Kaynaklar
- Dalghi, M. G., Montalbetti, N., Carattino, M. D., Apodaca, G. The urothelium: life in a liquid environment. Physiological Reviews. 100 (4), 1621(2020).
- de Groat, W. C., Griffiths, D., Yoshimura, N. Neural control of the lower urinary tract. Comprehensive Physiology. 5 (1), 327(2....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
