Gerçek Zamanlı Boşluk Noktası Testi

Marianela G. Dalghi; Nicolas Montalbetti; Travis B. Wheeler; Gerard Apodaca; Marcelo D. Carattino

doi:10.3791/64621

Method Article

Gerçek Zamanlı Boşluk Noktası Testi

DOI:

10.3791/64621

⸱

February 10th, 2023

Marianela G. Dalghi¹ , Nicolas Montalbetti¹ , Travis B. Wheeler² , Gerard Apodaca¹ , Marcelo D. Carattino¹^,²

¹Renal-Electrolyte Division, Department of Medicine, University of Pittsburgh, ²Department of Cell Biology, University of Pittsburgh

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede, geleneksel boşluk noktası testine video izlemeyi dahil ederek fare işeme davranışını incelemek için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, günün aydınlık ve karanlık evrelerinde işeme olayları ve fare davranışının ayrıntıları hakkında zamansal, uzamsal ve hacimsel bilgiler sağlar.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Normal işeme davranışı, sinir sisteminin uygun kontrolü altında mesane, üretra ve üretral sfinkterlerin koordineli fonksiyonunun sonucudur. Fare modellerinde gönüllü işeme davranışını incelemek için araştırmacılar, bir hayvanın kafesinin zeminini kaplayan bir filtre kağıdı üzerinde biriken idrar lekelerinin sayısını ve alanını ölçen bir yöntem olan boşluk noktası testini (VSA) geliştirdiler. Teknik olarak basit ve ucuz olmasına rağmen, bu tahlil, işeme olaylarının zamansal çözünürlüğünün olmaması ve örtüşen idrar noktalarının ölçülmesinde zorluklar da dahil olmak üzere bir son nokta testi olarak kullanıldığında sınırlamalara sahiptir. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, gerçek zamanlı VSA (RT-VSA) olarak adlandırdığımız ve işeme frekansını belirlememize, işeme hacmini ve işeme modellerini değerlendirmemize ve günün hem karanlık hem de aydınlık fazlarında 6 saatlik zaman aralıklarında ölçümler yapmamıza olanak tanıyan video izlemeli bir VSA geliştirdik. Bu raporda açıklanan yöntem, sağlık ve hastalık durumlarında gönüllü işitmenin fizyolojik ve nörodavranışsal yönlerini araştıran çok çeşitli fare tabanlı çalışmalara uygulanabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İdrar depolanması ve işlenmesi, pelvik ve hipogastrik sinirler aracılığıyla mesane dolum durumu hakkında bilgi alan merkezi bir devre (merkezi sinir sistemi) tarafından koordine edilir. Ürotel, idrar yolunu renal pelvisten proksimal üretraya kadar kaplayan epitel, idrarda bulunan metabolik atık ürünlere ve patojenlere sıkı bir bariyer oluşturur. Mesanenin doldurma durumunu algılayan ve altta yatan dokulara ve afferent sinirlere ileten duyusal bir ağın ayrılmaz bir bileşenidir ^1,2. Ürotelyal bariyerin bozulması veya ürotelyal mekanotransdüksiyon yollarındaki değişiklikler, frekans, aciliyet, noktüri ve inkontin....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Urothelial Piezo1/2 çift nakavt fareleri (Pz1/2-KO , genotip: Piezo1 fl^/fl; Piezo2^{fl / fl}; Upk2^CRE+/-) ve kontrolleri (Pz1/2-C, genotip: Piezo1 fl^/fl; Piezo2^{fl / fl}; Upk2^CRE-/-), Jax laboratuvarlarından elde edilen ebeveyn suşlarından (Piezo1 fl^{/ fl} suşu # 029213; Piezo2^{fl / fl} suşu # 027720; Upk2^CRE+/- suş # 029281). Deneylerde hem dişi (1.5-3 aylık ve 17-20 g ağırlığında) hem de erkek (2-4 aylık ve 23-29 g ağırlığında) fareler kullanıldı. Siklofosfit kaynaklı sistit deneyleri için, vahşi tip C57Bl / 6J dişiler (3 ay....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ürotelyal Piezo1/2 nakavt farelerin işeme davranışı

Miktüritasyon döngüsünün depolama aşamasında, ürotelyumun mesanede biriken idrarın uyguladığı gerginliği algılamak ve bu mekanik uyaranı serozal ATP salınımı ^1,3 gibi hücresel yanıtlara dönüştürmek için hipotez vardır. Daha önce mekanik olarak aktive edilen PIEZO1 ve PIEZO2 kanallarının fare urothelium ^3,36.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Video izlemenin dahil edilmesi, klasik VSA'ya göre çeşitli avantajlar sunan uygun maliyetli bir değişikliktir. Tipik olarak bir son nokta testi olarak kullanılan klasik VSA'da, örtüşen boşluk noktalarını ayırt etmek zordur. Bu önemsiz bir endişe değildir, çünkü fareler, tahlil birkaç saat uzatıldığında, tipik olarak kafeslerinin köşelerinde, aynı bölgede birden çok kez idrara çıkma eğilimindedir. Bu nedenle, RT-VSA'nın ilk avantajı, araştırmacının kısmen veya tamamen birbirinin üzerine birikmiş bireysel noktaları kolayca.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, bir NIH hibe R01DK119183 (G.A. ve MDC'ye), P30DK079307 aracılığıyla bir pilot proje ödülü (M.G.D.'ye), bir Amerikan Üroloji Derneği Kariyer Geliştirme ödülü ve bir Winters Vakfı hibesi (N.M.'ye) ve Pittsburgh Böbrek Araştırmaları Merkezi'nin (P30DK079307) Hücre Fizyolojisi ve Model Organizmalar Böbrek Görüntüleme Çekirdekleri tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
1,00 inç X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 10 inç'e kadar kesilmiş	80/20	1010	Miktar: 20
1.00" X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 12 inç'e kadar kesilmiş	80/20	1010	Miktar: 6
1.00" X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 40 inç'e kadar kesilmiş	80/20	1010	Miktar: 4
1.00" X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 14,75 inç'e kadar kesilmiş	80/20	1010	Miktar: 12
1,00" X 1,00 inç T-Oluklu profil - Dört açık T-Yuvası – 32 inç'e kadar kesilmiş	80/20	1010	Miktar: 5
1/4-20 Çift Sürgülü Ekonomik T-Somun	80/20	3280	Miktar: 16
1/4-20 Üçlü Sürgülü Ekonomik T-Somun	80/20	3287	Miktar: 18
10 & 25 Seri 2 Delik - Çift Destekli 18mm Oluklu İç Köşe Braketi	80/20	14061	Miktar: 6
10 Seri 3 Delikli - Düz Düz Plaka	80/20	4118	Miktar: 8
10 Seri 5 Delik - "L" Düz Plaka	80/20	4081	Miktar: 8
10 Seri 5 Delik - "T" Düz Plaka	80/20	4080	Miktar: 8
10 Seri 5 Delikli - Tee Düz Plaka	80/20	4140	Miktar: 2
10 Serisi Standart Kaldırma Menteşesi - Sağ El Tertibatı	80/20	2064	Miktar: 2
10 ila 15 Seri 2 Delikli - Lite Geçiş İç Köşe Braketi	80/20	4509	Miktar: 6
24" uzunluğunda UV tüp ışıkları	ADJ Products LLC	T8-F20BLB24	Miktar: 2 20W ampul ve ndash; 24" dalga boyu: 365nm
Akrilik Ayna Levhası	Profesyonel Plastik		Miktar: 1 82,5 cm x 26,5 cm
Akrilik Ayna Levhası		Profesional Plastik	Miktar: 2 26,5 cm X 30,5 cm
Akrilik Ayna Levhası		Profesional Plastik	Miktar: 2 82,5 cm x 30,5 cm
AR polikarbonat (UV direnci)	80/20	65-2641	Miktar: 2 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf, 38,5 cm x 26,5 cm
AR polikarbonat (UV direnci)	80/20	65-2641	Miktar: 4 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf, 38,5 cm x 21,5 cm
AR polikarbonat (UV direnci)	80/20	65-2641	Miktar: 4 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf, 26,5 cm x 21,5 cm
AR polikarbonat (UV direnci)	80/20	65-2641	Miktar: 4 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf 37,5 cm x 23,9 cm
AR polikarbonat (UV direnci)	80/20	65-2641	Miktar: 4 4,5 mm Kalınlık, Şeffaf, 24,4 cm x 23,9 cm
Kromatografi kağıdı (ince kağıt)	Thermo Fisher Scientific	57144
Cosmos kurutma kağıdı (kalın kağıt)	Blick Art Materials	10422-1005
Excel	Microsoft Corporation
GraphPad Prism	GraphPad Yazılım	Sürümü 9.4.0	grafik ve istatistik yazılımı
ImageJ FIJI	NIH
Parafilm	Merck		şeffaf film
Quick Time Player 10.5 yazılımı	Apple		multimedya oynatıcı
Güvenlik casusu	Ben yazılımı		video gözetim yazılım sistemi
Standart Uç Bağlantı Elemanı, 1/4-20	80/20	3381	Miktar: 80
UV ileten akrilik	Spartech	Polycast Solacryl SUVT	Miktar: 2 38,5 cm x 26,5 cm
Su jeli: HydroGel	ClearH2O	70-01-5022	(https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/)
Webcam	Logitech	C930e	Miktar: 4

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dalghi, M. G., Montalbetti, N., Carattino, M. D., Apodaca, G. The urothelium: life in a liquid environment. Physiological Reviews. 100 (4), 1621(2020).
de Groat, W. C., Griffiths, D., Yoshimura, N. Neural control of the lower urinary tract. Comprehensive Physiology. 5 (1), 327(2....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Gerçek Zamanlı Boşluk Noktası Testi

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles