Protokol, sürekli video-elektroensefalogram (EEG) monitörizasyonuna paralel olarak gerçekleştirilen epileptik sıçanlardan tekrarlanan beyin omurilik sıvısı ve kan alımlarını gösterir. Bunlar, çeşitli vücut sıvısı moleküllerindeki değişiklikler ile nöbet aktivitesi arasındaki olası bağlantıları araştırmak için etkilidir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
EEG Kayıtları Sırasında Sıçanlarda Lateral Kuyruk Veninden Beyin Omurilik Sıvısı ve Kan Örneği Alınması
Bu makalede
Özet
Özet
Vücut sıvılarının bileşimi birçok fizyolojik ve patolojik dinamiği yansıttığından, hormonlar, büyüme faktörleri, proteinler veya küçük kodlamayan RNA'lar gibi ilgilenilen molekülleri ölçmek için birçok deneysel bağlamda biyolojik sıvı örnekleri yaygın olarak elde edilir. Spesifik bir örnek, epilepsi için biyobelirteçlerin araştırılmasında biyolojik sıvıların örneklenmesidir. Bu çalışmalarda, beyin omurilik sıvısındaki (BOS) ve plazmadaki molekül düzeylerinin, BOS ve plazmayı paralel olarak geri çekerek ve örneklemenin nöbetlerden ve nöbetlere olan zaman mesafesini göz önünde bulundurarak karşılaştırılması arzu edilir. Epileptik hayvanlarda video-EEG monitörizasyonu ile birlikte kombine BOS ve plazma örneklemesi, varsayılan tanısal ve prognostik biyobelirteçlerin doğrulanması için umut verici bir yaklaşımdır. Burada, sürekli video-EEG izlenen epileptik sıçanlarda cisterna magna'dan kombine BOS çekilmesi ve lateral kuyruk veninden kan örneklemesi prosedürü anlatılmaktadır. Bu prosedür, yaygın olarak kullanılan diğer tekniklere göre önemli avantajlar sunar. Minimum ağrı veya invazivlik ve daha kısa anestezi süresi ile hızlı örneklemeye izin verir. Ek olarak, hem bağlı hem de telemetri EEG kayıtlı sıçanlarda BOS ve plazma örnekleri elde etmek için kullanılabilir ve birkaç günlük deney boyunca tekrar tekrar kullanılabilir. İzofluran anestezisini kısaltarak örneklemeden kaynaklanan stresi en aza indirerek, önlemlerin biyosıvılarda araştırılan moleküllerin gerçek seviyelerini daha doğru bir şekilde yansıtması beklenir. Uygun bir analitik testin mevcudiyetine bağlı olarak, bu teknik, aynı anda EEG kaydı yaparken birden fazla, farklı molekülün seviyelerini ölçmek için kullanılabilir.
Giriş
Beyin omurilik sıvısı (BOS) ve kan örneklemesi, hem klinik öncesi hem de klinik araştırmalarda epilepsinin biyobelirteçlerini tanımlamak ve doğrulamak için önemlidir 1,2. Günümüzde epilepsi tanısı ve epilepsi biyobelirteçleri ile ilgili araştırmaların çoğu EEG ve nörogörüntüleme üzerine odaklanmaktadır 3,4,5. Bununla birlikte, bu yaklaşımlar çeşitli sınırlamalar sunar. Rutin kafa derisi ölçümlerinin yanı sıra, çoğu durumda EEG, derinlik elektrotları gibi invaziv teknikler gerektirir6. Beyin gör....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneysel prosedürler, deneysel ve diğer bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunmasına ilişkin 24 Kasım 1986 tarihli Avrupa Toplulukları Konseyi Direktifi'nde (86/609/EEC) belirtilen yönergelere uygun olarak Ferrara Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi ve İtalya Sağlık Bakanlığı (yetkilendirme: DM 603/2022-PR) tarafından onaylanmıştır. Bu protokol, sıçan BOS'undaki küçük kodlamayan ribonükleik asidin (sncRNA'lar) ve epileptik hayvanlarda EEG kontrolü altında elde edilen plazmanın daha fazla kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) analizleri için özel olarak ayarlanmıştır. İsteğe bağlı olarak, ameliyatın daha iyi anlaşılması ve iyile....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Tümü SE'den 1 ay sonra elektrot implante edilen 9 kontrol ve 18 kronik epileptik sıçanda gerçekleştirilen farklı BOS ve kan alma işlemlerinin sonuçları başarı oranı açısından bildirilmiştir. İmplantasyondan sonra, tüm sıçanlar 1 ay boyunca video-EEG izlendi, bu süre zarfında BOS artı kan, deneyin son iki haftasında her 3 günde bir 5 kez çekildi (yani, 52, 55, 58, 61 ve 64. günlerde; dpSE sonrası). Farklı hayvanlarda çoklu geri çekilmeden elde edilen veriler, çift başlı implant donanımlı sıçanlarda (BOS çekilmesi için kan.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışma, sadece epilepsi modellerinde değil, aynı zamanda Alzheimer, Parkinson veya multipl skleroz gibi diğer nörolojik durumlar veya hastalıklar için de yararlı olabilecek, sıçanlarda BOS ve kan toplama konusunda ustalaşması kolay bir tekniği göstermektedir. Epilepsi araştırmalarında, video-EEG ile birleştirilmiş her iki örnekleme prosedürü, farklı çözünür moleküllerin seviyeleri ile nöbet aktivitesi arasında bir korelasyon izlendiğinde idealdir. Bu özel nedenden dolayı, i) epilepsiyi doğru bir şekilde teşhis etmek .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Avrupa Birliği'nin Horizon 2020 Çalışma Programı'ndan (H2020-FETOPEN-2018-2020 çağrısı) 964712 hibe sözleşmesi (PRIME; M. Simonato'ya) hibe ile desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kan alma seti BD Vacutainer Safety-Lok | BD Italy SpA, Milano, İtalya | 367246 | |
| Malzeme Kan Alma tüpleri (Microtainer K2E) | BD Italy SpA, Milano, İtalya | 365975 | Malzeme |
| Kelebek Kanatlı İnfüzyon Seti 23G x 3/4 '' 0.6 x 19 mm | Nipro, Osaka, Japonya | PSY-23-ET-ICU | Malzeme |
| Santrifüjü soğutmalı ALC PK 130R | DJB Labcare Ltd, Buckinghamshire, İngiltere | 112000033 | |
| Malzeme Pamuk sütür 3-0 | Ethicon, Johnson & Johnson cerrahi teknolojileri, Raritan, New Jersey, ABD | 7343H | Malzeme |
| Diazepam 5 mg / 2ml, Solupam | Dechra Veteriner Ürünleri, Torino, İtalya | 105183014 (AIC) | Çözümü |
| Telemetri EEG kurulumu için dijital video 8 kanallı medya kayıt sistemi | Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, ABD | PNM-VİDEO-008 | Ekipmanı |
| Bağlı EEG kurulumunun | dijital video gözetim sistemiEZVIZ Network, Hangzhou, Çin | EZVIZ (V5.3.2) | |
| Ekipman Stabilize peroksitler ve kuaterner amonyum aktivitesine dayalı dezenfektan | Laboratoire Garcin-Bactinyl, Fransa | LB 920111 | Çözümü |
| Kukla kılavuz kanül 8 mm | Agn Tho's, Lindigö, İsveç | CXD-8 | Malzeme |
| Elektrodu 3 kanallı iki bükümlü | Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginia, ABD | MS333/3-B/SPC | |
| Stereoteksik cerrahi için malzeme elektrot tutucusu | Agn Tho's, Lindigö, İsveç | 1776-P1 | Ekipman |
| Eppendorf Biyospektrometre temel | Eppendorf AG, Hamburg, Almanya | 6137 | Ekipman |
Eppendorf PCR Tüpleri 0.2 mL | Eppendorf Srl, Milano, İtalya | 30124332 | Malzeme |
| Eppendorf μ Cuvette G1.0 | Eppendorf AG, Hamburg, Almanya | 6138 | Ekipman |
| için besleme iğnesi esnek 17G | ; İsveç | 7206 | Malzeme |
| Çim Teknolojisi aparatı | Çim Teknolojileri, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, California, ABD | M665G08 | Ekipmanları (AS40 amplifikatörü, kafa kutusu, ara bağlantı kabloları, telefaktör modeli RPSA S40) |
| İzofluran %100, IsoFlo | Zoetis, Roma, İtalya | 103287025 (AIC) | Çözelti |
| Ketamin (Imalgene) | Merial, Toulouse, Fransa | 221300288 ( AIC) | |
| Çözelti Lityum klorür & nbsp; | Sigma-Aldrich, Milano, İtalya | L9650 | Malzeme |
| Mikroenjeksiyon kanülü 31G 9 mm | Agn Tho's, Lindigö İsveç | CXMI-9 | Malzeme |
| MP150 modüler veri toplama ve Analiz Sistemi | Biopac, Goleta, California, ABD | MP150WSW | Ekipmanları |
| Oftalmik veteriner merhemi, Hylo night | Ursapharm, Milano, İtalya | 941791927 (AIC) | Malzeme |
| Pilokarpin hidroklorür | Sigma-Aldrich, Milano, İtalya | P6503 | Malzeme |
| Eklemli PTFE Tüp | , Agn Tho's, Lindigö, İsveç | JT-10 | Malzeme |
| Tuzlu | 0.9 NaCl, pH 7.0 | Çözelti | |
| Skopolamin hidrobromür trihidrat | Sigma-Aldrich, Milano, İtalya | S2250 | Malzeme |
| Skopolamin metil nitrat | Sigma-Aldrich, Milano, İtalya | S1876 | Malzeme |
| Gümüş sülfadiazin% 1 krem | Sofar, Trezzano Rosa, Milano, İtalya | 025561010 (AIC) | Malzeme: |
| Simpleks hızlı dental metakrilik çimento | Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, Birleşik Krallık | ACR811 | |
| Malzeme Stereotaksik cihaz | David Kopf Instruments, Los Angeles, CA, ABD | Model 963 | Ekipman |
| Sükroz çözeltisi | Damıtılmış suda %10 sükroz | Ev Yapımı | |
| Çözelti Şırınga 1 mL | Biosigma, Cona, Venezia, İtalya | 20,71,26,03,00,350 | Malzeme |
| Telemetreleri | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI), St Paul, MN, ABD | CTA-F40 | Malzeme |
| Telemetrisi EEG iz analizörü | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI), St Paul, MN, ABD | NeuroScore v3-0 | Ekipman |
| Telemetri sistemi | Veri Bilimleri Uluslararası (DSI), St Paul, MN, ABD | Donanım artı yazılım Ponemah çekirdek 6.51 | Ekipman |
| Ksilazin hidroklorür | Sigma-Aldrich, Milano, İtalya | X1251 | Malzeme |
Kaynaklar
- Hanin, A., et al. Cerebrospinal fluid and blood biomarkers of status epilepticus. Epilepsia. 61 (1), 6-18 (2020).
- Pitkänen, A., et al. Advances in the development of biomarkers for epilepsy. The Lancet Neurology. 15 (8), 843-856 (2016).
- Dl....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
