Yöntem makalesi
Deneysel otoimmün ensefalomiyelit, multipl sklerozun en yaygın kullanılan murin modellerinden biridir. Mevcut protokolde, her iki cinsiyetten C57BL / 6J fareleri, miyelin oligodendrosit glikoprotein peptidi ile aşılanır ve bu da esas olarak kuyruk ve uzuvların artan parezi ile sonuçlanır. Burada EAE indüksiyonu ve değerlendirme protokolünü tartışıyoruz.
Multipl Skleroz (MS), merkezi sinir sistemini (MSS) etkileyen kronik otoimmün inflamatuar bir hastalıktır. Cinsiyetlerde farklı prevalans, erkeklerden daha fazla kadını etkileme ve erkeklerde kadınlardan daha agresif formlar gösteren farklı sonuçlar ile karakterizedir. Ayrıca MS, klinik yönleri, radyolojik ve patolojik özellikleri açısından oldukça heterojendir. Bu nedenle, patolojinin mümkün olduğunca çok yönünün araştırılmasına izin veren deneysel hayvan modellerinden yararlanmak gerekir. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), farelerde en çok kullanılan MS modellerinden birini temsil eder ve bağışıklık sisteminin aktivasyonundan CNS hasarına kadar farklı hastalık özelliklerini modeller. Burada, miyelin oligodendrosit glikoprotein peptid 35-55 (MOG35-55) bağışıklaması kullanılarak hem erkek hem de dişi C57BL / 6J farelerinde EAE'nin indüksiyonu için bir protokol tanımlanmıştır, bu da hastalığın kronik bir formunun gelişmesine yol açar. Ayrıca, bu farelerin bağışıklamadan sonraki 28 gün boyunca günlük klinik skor ve motor performanslarının değerlendirilmesini de rapor ediyoruz (28 dpi). Son olarak, hastalığa bağlı hasarın birincil bölgesi olarak omuriliğe odaklanarak CNS düzeyinde bazı temel histolojik analizleri gösteriyoruz.
Multipl Skleroz (MS), merkezi sinir sistemini (MSS) etkileyen kronik otoimmün inflamatuar bir hastalıktır. İnflamatuar hücrelerin perivasküler infiltrasyonu, demiyelinizasyon, aksonal kayıp ve gliozis1 varlığını gösterir. Etiyolojisi tam olarak bilinmemektedir ve klinik yönleri, radyografik ve patolojik özellikleri hastalıkta dikkate değer heterojenliği düşündürmektedir2.
Etiyolojisinin bilinmemesi ve karmaşıklığı nedeniyle, şu anda hiçbir hayvan modeli, insan MS'de görüntülenen tüm klinik ve radyolojik özellikleri özetlememektedir 3,4....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışmada hayvanların bakımı ve idaresi, 22Eylül 2010 tarihli Avrupa Birliği Konseyi Direktifine (2010/63/UE) göre gerçekleştirilmiştir; Bu çalışmada bildirilen tüm prosedürler İtalya Sağlık Bakanlığı (407/2018-PR) ve Torino Üniversitesi Etik Komitesi (Proje n° 360384) tarafından onaylanmıştır. Deneysel tasarıma, ilk olarak Kilkenny ve ark. 2010'da20. Başlamadan önce gerekli malzemelerin mevcut olduğundan emin olun (bkz. MOG35-55 emülsiyonunun hazırlanmasında kullanılan tüm cam eşyaları ve kapları bir otoklavda sterilize edin. Deneysel prosedürlerin bir özeti Şekil 1'de gös....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bağışıklama sonrası EAE takibi
Bu, aşağıda açıklandığı gibi değerlendirildi.
Vücut ağırlığı ve gıda alımı
İki yönlü varyans analizi (ANOVA) (bağımsız değişkenler olarak cinsiyet ve zaman), özellikle indüksiyondan sonraki ikinci hafta içinde, her iki cinsiyetten EAE hayvanlarının BW'sinde bir azalma olduğunu göstermektedir (F(1,57) = 4.952, p < 0.001; Şekil 2A). Bununla birlikte, BW'deki cinsel.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tanımladığımız MOG35-55 kaynaklı EAE protokolü, C57BL / 6J farelerinde kronik bir MS formunun gelişmesine yol açtı 7,8,13. Bu temsili sonuçlarda, bağışıklama prosedürüne tabi tutulan her iki cinsiyetten hayvanların hastalığın kronik bir formunu geliştirdiğini bildirdik (yani, hastalık başlangıcından sonra tam olarak iyileşmezler, açıklar biriktirirler ve kronik fazda en az 1.5'lik bir CS'yi korurlar).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların hiçbirinin bu makalenin araştırılması, yazarlığı ve/veya yayınlanması ile ilgili olarak beyan edeceği herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Bu çalışma Ministero dell'Istruzione, dell'Università e della Ricerca - MIUR projesi Dipartimenti di Eccellenza 2018-2022 ve 2023-2027 tarafından Sinirbilim Bölümü Rita Levi Montalcini'ye; Cavalieri-Ottolenghi Vakfı, Orbassano, İtalya. BB, INFRA-P, Piedmont Bölgesi (n.378-35) (2022-2023) ve PRIN 2020 - 20203AMKTW üyesiydi. Desteği için Fondazione per la Ricerca Biomedica Onlus'a (FORB) teşekkür ederiz. Yayın ücretleri, Distretto Rotaract 2031'in ve özellikle Rotaract Club Torino Nord-Est'in bağışlarıyla desteklenmiştir. Elaine Miller'a makalemizin redaksiyonu için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 18 G x 1 ve frak12; “ Cam şırınga için 1,2 x 40 mm iğne | Terumo | TER-HYP-18G-112-PIN | |
| Optik mikroskoba bağlı dijital kamera | NIKON DS-U1 dijital kamera | ||
| Elektronik hassas terazi | Merck | Mod. Kern-440-47N, çözünürlük 0.1 g | |
| Eosin Y | Sigma-Aldrich | HT110216 | |
| Cam şırınga pipeti " Ultra Asept" 10 ml | Sacco Sistemi | ||
| Züccaciye (yani, emülsiyonu hazırlamak için becker) | VWR | 213-1170, 213-1172 | |
| Hematoksilen (Mayer' s) | Kullanmadan önce Sigma-Aldrich | MHS32 | Filtresi. |
| Görüntü analiz yazılımı | Fiji | ||
| Incomplete Freund' s adjuvan (IFA) | Sigma-Aldrich | F5506 | +4 & derece C. |
| Isoflurane | Wellona Pharma | Bu ilaç inhalasyon anestezik olarak kullanılır. | |
| Erkek ve dişi C57BL/6J fareler | Jackson Laboratuvarı, Envigo | Yaş 8-10 hafta, optimal vücut ağırlığı ~ 20 g. | |
| Microtome | Leica HistoCore BIOCUT R | ||
| Montaj Ortamı | Merck | 107961 | |
| Fare Rotarod | Ugo Basile | #47600 | |
| Mycobacterium tüberküloz (MT), suş H37Ra | Difco Laboratuvarlar A.Ş. | 231141 | +4 &� C'de saklayın. |
| Miyelin oligodendrosit glikoprotein peptidi 35-55 (MOG < alt > 35-55 < / alt >) | Espikem | EPK1 | -80 ° C'de saklayın; C fizyolojik çözelti içinde seyreltilmiş (2 mg / mL); Mümkün olduğunca değişiklik veya kontaminasyondan kaçınmak için aşılama gününde hazırlayın. |
| Optik mikroskop | NIKON eclipse 90i | ||
| Paraformaldehit (PFA) | Sigma-Aldrich | 158127 | +4 &°C'de saklayın; C bir kez fosfat tamponu içinde seyreltilir (% 4); |
| Boğmaca toksini (PT) | Duotech | PT.181 | -80 ° C'de saklayın; C seyreltilmiş (konsantrasyon 5 & mikro; g/mL) fizyolojik çözelti içinde |
| Fizyolojik çözelti (sodyum klorür% 0.9 çözelti) | B. Eurospital | A 032182038 | +4 &°C'de saklayın; C bir kez açıldı. |
| Tuzlu fosfat tamponu (PBS) | Thermo Scientific | J61196. | |
| Görüntü alımı için AP Yazılımı | NIS-Element AR 2.10 | ||
| Şırıngalar U-100 0.5 mL, 30 G x 5/16" (0.30 x 8 mm) sabit iğnede | Nipro | SYMS-0.5U100-3008B-EC | |
| Şırıngalar U-100 1 mL, 26G x ½ ile; ” (0.45 x 12.7 mm) iğnede | PIC | 20,71,26,03,00,354 | |
| Gözler için veteriner merhemi | Lacrilube, Lacrigel Europhta | ||
| Xylazine | Rompun | Bu ilaç karışımı enjekte edilebilir anestezik ve yatıştırıcı olarak kullanılır. | |
| Zolazepam ve Tiletamin | Zoletil 100 | Bu ilaç enjekte edilebilir anestezik, yatıştırıcı, kas gevşetici ve analjezik olarak kullanılır |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin isteAn erratum was issued for: Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. The Authors section was updated. An additional affiliation (School of Pharmacy, Pharmacology Unit, University of Camerino) was added for author Antonino Casile.