Yöntem makalesi

Kanser Araştırmaları için Fizyolojik İnsan Vaskülarize Mikro-Tümör Modelinin Oluşturulması

DOI:

10.3791/65865

⸱

15 Eylül 2023

 ,  , 
1Molecular Biology and Biochemistry, University of California, Irvine, 2Biomedical Engineering, University of California, Irvine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, yükleme, bakım ve değerlendirme prosedürlerinin bir açıklamasıyla birlikte yüksek verimli temel ve translasyonel insan kanseri araştırmaları, gelişmiş ilaç taraması, hastalık modellemesi ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımları gerçekleştirmek için fizyolojik olarak ilgili bir çip üzerinde tümör modeli sunar.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Solid kanserlerin tümör mikroçevresini in vitro olarak özetleyen doğrulanmış kanser modellerinin eksikliği, klinik öncesi kanser araştırmaları ve terapötik geliştirme için önemli bir darboğaz olmaya devam etmektedir. Bu sorunun üstesinden gelmek için, karmaşık insan tümör mikroçevresini gerçekçi bir şekilde modelleyen mikrofizyolojik bir sistem olan vaskülarize mikrotümörü (VMT) veya tümör çipini geliştirdik. VMT, dinamik, fizyolojik akış koşulları altında birden fazla insan hücresi tipinin birlikte kültürlenmesiyle mikroakışkan bir platform içinde de novo oluşturur. Bu doku mühendisliği mikro-tümör yapısı, tıpkı yeni oluşan damarların in vivo olarak yaptığı gibi, büyüyen tümör kitlesini destekleyen canlı bir perfüze vasküler ağ içerir. Daha da önemlisi, ilaçlar ve bağışıklık hücreleri, tümöre ulaşmak için endotel tabakasını geçmeli, terapötik uygulama ve etkinlik için in vivo fizyolojik engelleri modellemelidir. VMT platformu optik olarak şeffaf olduğundan, doku içindeki floresan etiketli hücrelerin doğrudan görüntülenmesi ile immün hücre ekstravazasyonu ve metastaz gibi dinamik süreçlerin yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi sağlanabilir. Ayrıca, VMT in vivo tümör heterojenliğini, gen ekspresyon imzalarını ve ilaç yanıtlarını korur. Hemen hemen her tümör tipi platforma uyarlanabilir ve taze cerrahi dokulardan elde edilen birincil hücreler büyür ve VMT'de ilaç tedavisine yanıt vererek gerçekten kişiselleştirilmiş tıbbın yolunu açar. Burada, VMT'yi kurma ve onkoloji araştırmaları için kullanma yöntemleri özetlenmiştir. Bu yenilikçi yaklaşım, tümörleri ve ilaç yanıtlarını incelemek için yeni olanaklar sunarak araştırmacılara kanser araştırmalarını ilerletmek için güçlü bir araç sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kanser dünya çapında önemli bir sağlık sorunu olmaya devam etmektedir ve Amerika Birleşik Devletleri'nde ikinci önde gelen ölüm nedenidir. Ulusal Sağlık İstatistikleri Merkezi, yalnızca 2023 yılı için ABD'de 1,9 milyondan fazla yeni kanser vakası ve 600.000'den fazla kanser ölümünün meydana gelmesini öngörüyor1 ve etkili tedavi yaklaşımlarına olan acil ihtiyacı vurguluyor. Bununla birlikte, şu anda, klinik araştırmalara giren anti-kanser terapötiklerinin yalnızca% 5.1'i nihayetinde FDA onayı almaktadır. Gelecek vaat eden adayların klinik çalışmalarda başarılı bir şekilde ilerleyememesi, kısmen klinik öncesi ilaç geliştirme sırasında 2D ve sferoid kültürler gibi fizyolojik olmayan model sistemlerinin kullanılmasına bağlanabilir2. Bu klasik kanser modelleri, terapötik direnç ve hastalık ilerlemesinin temel belirleyicileri olan stromal niş, ilişkili bağışıklık hücreleri ve perfüze damar sistemi gibi tümör mikroçevresinin temel bileşenlerinden yoksundur. Bu nedenle, klinik öncesi bulguların klinik translasyonunu iyileştirmek için insan in vivo tümör mikroçevresini daha iyi taklit eden yeni bir model sistem gereklidir.

Doku mühendisliği alanı hızla ilerlemekte ve laboratuvar ortamlarında insan hastalıklarını incelemek için gelişmiş yöntemler sunmaktadır. Önemli bir gelişme, sağlıklı veya hastalıklı koşulları kopyalayabilen işlevsel, minyatür insan organları olan organ çipleri veya doku çipleri olarak da bilinen mikrofizyolojik sistemlerin (MPS) ortaya çıkmasıdır 3,4,5. Bu kapsamda, onkoloji araştırmaları için üç boyutlu mikroakışkan tabanlı in vitro insan tümör modelleri olan tümör çipleri geliştirilmiştir 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13 . Bu gelişmiş modeller, dinamik bir tümör mikro ortamı içinde biyokimyasal ve biyofiziksel ipuçlarını bir araya getirerek, araştırmacıların tümör davranışını ve tedavilere verilen yanıtları fizyolojik olarak daha ilgili bir bağlamda incelemelerine olanak tanır. Bununla birlikte, bu gelişmelere rağmen, çok az sayıda grup, özellikle fizyolojik akışa yanıt olarak kendi kendine patern oluşturan canlı, fonksiyonel bir damar sistemini başarılı bir şekilde dahil etmiştir 3,4,5,6. İşlevsel bir vasküler ağın dahil edilmesi, ilaç veya hücre dağıtımını etkileyen fiziksel engellerin modellenmesine, farklı mikro ortamlara hücre hedeflemesine ve tümör, stromal ve immün hücrelerin transendotelyal göçüne izin verdiği için çok önemlidir. Bu özelliği dahil ederek, tümör çipi, in vivo tümör mikroçevresinde gözlemlenen karmaşıklıkları daha iyi temsil edebilir.

Bu karşılanmamış ihtiyacı karşılamak için, mikro damar ağlarının bir mikroakışkan cihaz içinde oluşmasını sağlayan yeni bir ilaç tarama platformu geliştirdik 8,9,10,11,12,13,14,15,16. Vaskülarize mikro organ (VMO) olarak adlandırılan bu temel organ çipi platformu, hastalık modellemesi, ilaç taraması ve kişiselleştirilmiş tıp uygulamaları için orijinal doku fizyolojisini çoğaltmak için hemen hemen her organ sistemine uyarlanabilir. VMO'lar, endotelyal koloni oluşturan hücre kaynaklı endotel hücreleri (ECFC-EC), HUVEC veya iPSC-EC (bundan sonra EC olarak anılacaktır) ve matrisi yeniden şekillendiren normal insan akciğer fibroblastları (NHLF) ve damarları saran ve stabilize eden perisitler dahil olmak üzere odadaki çoklu stromal hücrelerin birlikte kültürlenmesiyle oluşturulur. VMO, vaskülarize bir mikro tümör (VMT)8,9,10,11,12,13 veya tümör çipi modeli oluşturmak için tümör hücrelerini ilişkili stroma ile birlikte kültürleyerek bir kanser modeli sistemi olarak da kurulabilir. Dinamik bir akış ortamında çoklu hücre tiplerinin birlikte kültürü yoluyla, perfüze mikrovasküler ağlar, vaskülogenezin interstisyel akış hızları14,15 tarafından yakından düzenlendiği cihazın doku odalarında de novo oluşturur. Ortam, kılcal damarlar için görülene benzer şekilde, 1.2 x 10-7 cm/s'lik bir geçirgenlik katsayısına sahip, doku odasının çevresindeki hücrelere yalnızca mikro damarlar aracılığıyla besin sağlayan bir hidrostatik basınç başlığı tarafından cihazın mikroakışkan kanallarından geçirilir in vivo8.

Kendi kendini organize eden mikro damarların VMT modeline dahil edilmesi önemli bir atılımı temsil eder, çünkü: 1) vaskülarize tümör kitlelerinin yapısını ve işlevini in vivo olarak taklit eder; 2) tümör-endotelyal ve stromal hücre etkileşimleri dahil olmak üzere metastazın temel basamaklarını modelleyebilir; 3) Besin ve ilaç dağıtımı için fizyolojik olarak seçici engeller oluşturur, farmasötik taramayı iyileştirir; ve 4) anti-anjiyojenik ve anti-metastatik yeteneklere sahip ilaçların doğrudan değerlendirilmesine izin verir. VMO/VMT platformu, karmaşık bir 3D mikro ortamda besinlerin, ilaçların ve bağışıklık hücrelerinin in vivo dağıtımını çoğaltarak, ilaç taraması yapmak ve kanser, vasküler veya organa özgü biyolojiyi incelemek için kullanılabilecek fizyolojik olarak ilgili bir modeldir. Daha da önemlisi, VMT, kolon kanseri, melanom, meme kanseri, glioblastom, akciğer kanseri, periton karsinomatozu, yumurtalık kanseri ve pankreas kanseri dahil olmak üzere çeşitli tümör türlerinin büyümesini destekler 8,9,10,11,12,13. Düşük maliyetli, kolay kurulabilen ve yüksek verimli deneyler için dizilebilen mikroakışkan platform, tümör-stromal etkileşimlerin gerçek zamanlı görüntü analizi ve uyaranlara veya terapötiklere yanıt için tamamen optik olarak uyumludur. Sistemdeki her hücre tipi, tüm deney boyunca hücre davranışının doğrudan görselleştirilmesine ve izlenmesine izin vermek için farklı bir floresan işaretleyici ile etiketlenir ve dinamik tümör mikro ortamına bir pencere oluşturur. VMT'nin in vivo tümör büyümesini, mimarisini, heterojenliğini, gen ekspresyon imzalarını ve ilaç yanıtlarını standart kültür modalitelerinden daha sadık bir şekilde modellediğini daha önce göstermiştik10. Daha da önemlisi, VMT, ana tümörlerin patolojisini standart sferoid kültürlerden daha iyi modelleyen ve kişiselleştirilmiş tıp çabalarını daha da ilerleten kanser hücreleri de dahil olmak üzere hasta kaynaklı hücrelerin büyümesini ve çalışmasını destekler11. Bu el yazması, VMT'yi kurma yöntemlerini özetlemekte ve insan kanserlerini incelemek için faydasını göstermektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Tasarım ve imalat

  1. Cihaz tasarımı
    1. Mikroakışkan cihaz üretimi için, bir Si-gofret (RCA-8 temizlenmiş ve% 200 hidrojen florür (HF) ile muamele edilmiş) üzerine 2 μm spin kaplı SU-1 tabakası kullanarak bir SU-2 kalıbı oluşturun,ardından daha önce açıklandığı gibi tek bir maske fotolitografi adımı 8,9.
    2. Sonraki imalat adımları için dayanıklı bir poliüretan kalıp oluşturmak için SU-8 kalıbından 4 mm kalınlığında bir polidimetilsiloksan (PDMS) replikası dökün. Çeşitli tasarım yinelemelerikullanılabilir 8,9,10,11,12,13,14,15.
    3. Mevcut yinelemede, mikroakışkan cihazı, standart bir 96 oyuklu plaka formatına özel olarak takılacak ve altta ince (1/16 inç) şeffaf bir polimer membran tabakası ile çevrelenmiş 12 mikroakışkan cihaz ünitesine sahip 2 mm kalınlığında bir PDMS özellik katmanından oluşacak şekilde tasarlayın (Şekil 1A).
    4. Bireysel doku ünitelerinin, jel yükleme girişi (L1) ve çıkışı (L2) ile çevrili bir doku odasından, bir basınç regülatöründen (PR)16 ve her iki taraftaki 2 ortam giriş ve çıkışına bağlı ayrılmış mikroakışkan kanallardan (M1-M2, M3-M4; Şekil 1B).
    5. Her bir giriş ve çıkışı, mikroakışkan kanal boyunca hidrostatik basınç (10 mmH2O) oluşturmak için orta rezervuar görevi gören tek bir kuyu içine yerleştirin. Dış kanallarla vasküler ağ anastomozlarına izin vermek için, mikroakışkan kanalları 50 μm genişliğinde iletişim gözenekleri (6 üstte, 6 altta) aracılığıyla doku odasına bağlayın.
      NOT: Mikroakışkan dirençler, vasküler ağ tamamen oluştuğunda intraluminal hale gelen doku odası boyunca 5 mmH2Ointerstisyel basınç gradyanı oluşturur 8,10. Sonraki prosedürler, tamamen monte edilmiş yüksek verimli bir plaka ile başlar.

figure-protocol-1
Şekil 1. Mikroakışkan platform tasarımı. (A) Platform düzeneğinin şeması, dipsiz 96 oyuklu bir plakaya bağlanmış ve ince şeffaf bir polimer membran ile kapatılmış 12 cihaz ünitesine sahip PDMS özellik katmanını gösterir. Her cihaz ünitesi, plaka üzerinde bir kuyu sütunu kaplar. Kırmızı ile özetlenen tek cihaz birimi, (B)'deki ayrıntılarla birlikte gösterilmiştir. (B) Bir cihaz ünitesinin şeması, 96 oyuklu plakanın bir kuyucuğuna yerleştirilmiş tek bir doku odasını ve hücre-matris karışımının sokulmasına izin vermek için delinmiş giriş ve çıkış (L1-L2) deliğine sahip iki yükleme portunu gösterir. Ortam girişleri ve çıkışları (M1-M2, M3-M4) delinir ve ortam rezervuarı görevi gören kuyuların içine yerleştirilir. Farklı hacimlerde ortam, ayrıştırılmış mikroakışkan kanallar aracılığıyla doku odası boyunca hidrostatik bir basınç gradyanı oluşturur. Basınç regülatörü (PR) ünitesi, yükleme kolaylığını artırmak için bir jel patlama valfi görevi görür. Cihazın 200 μm derinliğinde ve doku odasının 2 mm x 6 mm olduğuna dikkat edin. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

2. Yükleme öncesi hazırlıklar

  1. Hücre kültürü
    1. Hücreleri, nemlendirilmiş 37 °C ve %5CO2 inkübatörde üreticinin tavsiyelerine göre koruyun.
    2. Yüklemeden 3-4 gün önce üretici ve kullanıcı protokolleri tarafından bildirilen bir yoğunlukta transdüksiyona tabi EC, NHLF veya diğer fibroblast/stromal hücre ve istenen kanser hücrelerinin plaka T75 şişeleri. Bu protokol için, her hücre tipi için şişe başına 1 x 106 hücre plaka. Endotelyal Büyüme Ortamı 2 (EGM2) tam ortamında kültür EC, FBS ile Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamında (DMEM) NHLF ve hücre tipine bağlı olarak uygun ortamda kanser hücreleri.






figure-protocol-2









figure-protocol-3

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada özetlenen protokolleri takiben, VMO'lar ve VMT'ler, ticari olarak satın alınan EC, NHLF ve VMT için üçlü negatif meme kanseri hücre hattı MDA-MB-231 kullanılarak oluşturulmuştur. Yerleşik VMO'lar ayrıca metastazı taklit etmek için kanser hücreleri ile perfüze edildi. Her modelde, ko-kültürün 5. gününde, bir vasküler ağ, doku odası boyunca yerçekimi güdümlü akışa yanıt olarak kendi kendine toplanır ve in vivo olarak besinlerin, terapötiklerin ve kanser veya bağışıklık hücrelerinin stromal nişe verilmesi iç...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vücuttaki hemen hemen her doku, damar sistemi yoluyla besin ve oksijen alır, bu da onu gerçekçi hastalık modellemesi ve in vitro ilaç taraması için kritik bir bileşen haline getirir. Ayrıca, çeşitli maligniteler ve hastalık durumları vasküler endotel disfonksiyonu ve hiperpermeabilite ile tanımlanır3. Özellikle, kanserde, tümörle ilişkili damar sistemi genellikle kötü perfüze edilir, bozulur ve sızdırır, bu nedenle tümöre terapötik ve bağışıklık hücresi iletimine karşı bir bariyer görevi ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CCWH, bu yazıda açıklanan teknolojinin bir versiyonunu ticarileştiren Aracari Biosciences, Inc.'de hisse senedi payına sahiptir. Bu düzenlemenin şartları, çıkar çatışması politikalarına uygun olarak Kaliforniya Üniversitesi, Irvine tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. Başka bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dr. Christopher Hughes'un laboratuvarının üyelerine, açıklanan prosedürlere değerli katkıları için ve Dr. Abraham Lee'nin laboratuvarındaki işbirlikçilerimize platform tasarımı ve üretimi konusundaki yardımları için teşekkür ederiz. Bu çalışma aşağıdaki hibelerle desteklenmiştir: UG3/UH3 TR002137, R61/R33 HL154307, 1R01CA244571, 1R01 HL149748, U54 CA217378 (CCWH) ve TL1 TR001415 ve W81XWH2110393 (SJH).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Fabrikasyon< / güçlü >
(3-Merkaptopropil) trimetoksisilan,% 95 & nbsp;Sigma-Aldrich175617-100G
Greiner Bio-One  μ Şeffaf Alt 96 oyuklu Polistiren MikroplakalarGreiner Bio-One655096
Metanol & ge; % 99,8 ACSVWR Kimyasalları BDHBDH1135-1LP
MILTEX Pistonlu Steril Tek Kullanımlık Biyopsi Punch, 1mm çap,Integra Miltex33-31AA-P / 25
PDMS membranPAX IndustriesHT-6240
Plazma Temizleyici PDC-001Harrick Plazma N/A
Pürüzsüz Döküm 385Pürüzsüz Yok
SP Bel-Art Lab Companion Şeffaf Polikarbonat Dolap Stili Vakum KurutucuBel-ArtF42400-4031
Yoğuşma Halkalı Standart Kapaklar, 96 oyuklu plakaVWR82050-827
SYLGARD 184 Silikon Elastomer Kiti (PDMS)Dow4019862
Hücre kültürü / Yükleme< / güçlü >
BioTek Lionheart FX Otomatik MikroskopAgilent 
CELLvo İnsan Endotelyal Progenitör HücreleriStemBioSysN/A
Kollajen I, sıçan kuyruğuEnzo Yaşam Bilimleri
Kollajenaz Clostridium histolyticum (tip 4)Sigma-AldrichC5138
Corning Hank' s Dengeli Tuz Çözeltisi, 1X kalsiyum ve magnezyum içermezCorning21-021-CV
Corning  L-Glutamin, 4.5g/L Glikoz ve Sodyum Pirüvat içeren DMEMCorning10013CV
DAPISigma-AldrichD9542
DPBS, kalsiyum yok, magnezyum yokGibco14190144
EGM-2 Endotel Hücre Büyüme Ortamı-2 BulletKitLonzaCC-3162
Sığır plazmasından fibrinojenNeta ScientificSIAL-341573
Fibronektin insan plazmasıSigma-AldrichF0895
Floresein izotiyosiyanat – dekstran (70kDa)Sigma-AldrichFD70S-1G
Domuz derisinden jelatinSigma-AldrichG1890
Koyun testislerinden hyaluronidaz (tip 4)Sigma-AldrichH6254
Laminin Fare ProteiniGibco23017015
Leica TCS SP8LeicaN/A
MDA-MB-231ATCCHTB-26
NHLF & ndash; Normal İnsan Akciğer FibroblastlarıLonzaCC-2512
Nikon Eclipse TiNikonN/A
Paraformaldehit 4% içinde 0.1M Fosfat TamponSalin, pH 7.4Elektron Mikroskobu Bilimleri 15735-90-1L
PBMC'ler - Periferik kan mononükleer hücreleriLonzaCC-2702
PBS, pH 7.4Gibco10010049
Birinci Sınıf Fetal Sığır Serumu (FBS), Isıyla EtkisizAvantor Seradigm97068-091
ProLong Altın Antifade MountantInvitrogenP10144
Hızlı RNA Mikro HazırlıkKiti Zymo SığırR1051
TrombinSigma-AldrichT4648
Triton X-100 (Elektroforez),Fisher BioReagentsBP151-100
TrypLE Express Enzim (1X), fenol kırmızısıGibco12605028
Tripsin-EDTA (% 0.05), fenol kırmızısıGibco25300062
VasculifeYaşam Hattı Hücresi TeknolojiLL-0003
CYT5MFAW plazmasından

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Wagle, N. S., Jemal, A. Cancer statistics, 2023. CA Cancer J Clin. 73 (1), 17-48 (2023).
  2. Hachey, S. J., Hughes, C. C. W. Applications of tumor chip technology. Lab Chip. 18 (19), 2893-2912 (2018).
  3. Ewald, M. L., Chen, Y. H., Lee, A. P., Hughes, C. C. W. The vascular niche in next generation microphysiological systems. Lab Chip. 21 (17), 3615-3616 (2021).
  4. Osaki, T., Sivathanu, V., Kamm, R. D. Vascularized microfluidic organ-chips for drug screening, disease models and tissue engineering. Curr Opin Biotechnol. 52, 116-123 (2018).
  5. Shirure, V. S., Hughes, C. C. W., George, S. C. Engineering vascularized organoid-on-a-chip models. Annu Rev Biomed Eng. 23, 141-167 (2021).
  6. Del Piccolo, N., et al. Tumor-on-chip modeling of organ-specific cancer and metastasis. Adv Drug Deliv Rev. 175, 113798(2021).
  7. Sontheimer-Phelps, A., Hassell, B. A., Ingber, D. E. Modelling cancer in microfluidic human organs-on-chips. Nat Rev Cancer. 19 (2), 65-81 (2019).
  8. Sobrino, A., et al. 3D microtumors in vitro supported by perfused vascular networks. Sci Rep. 6, 31589(2016).
  9. Phan, D. T. T., et al. A vascularized and perfused organ-on-a-chip platform for large-scale drug screening applications. Lab Chip. 17 (3), 511-520 (2017).
  10. Hachey, S. J., et al. An in vitro vascularized micro-tumor model of human colorectal cancer recapitulates in vivo responses to standard-of-care therapy. Lab Chip. 21 (7), 1333-1351 (2021).
  11. Hachey, S. J., et al. A Human Vascularized Micro-Tumor Model of Patient-Derived Colorectal Cancer Recapitulates Clinical Disease. Transl Res. 255, 97-108 (2023).
  12. Liu, Y., et al. Human in vitro vascularized micro-organ and micro-tumor models are reproducible organ-on-a-chip platforms for studies of anticancer drugs. Toxicology. 445, 152601(2020).
  13. Jahid, S., et al. Structure-based Design of CDC42 Effector Interaction Inhibitors for the Treatment of Cancer. Cell Rep. 39 (4), 110760(2022).
  14. Hsu, Y. H., Moya, M. L., Hughes, C. C. W., George, S. C., Lee, A. P. A microfluidic platform for generating large-scale nearly identical human microphysiological vascularized tissue arrays. Lab Chip. 13 (15), 2990-2998 (2013).
  15. Moya, M. L., Hsu, Y. H., Lee, A. P., Christopher, C. W. H., George, S. C. In vitro perfused human capillary networks. Tissue Eng - Part C: Methods. 19 (9), 730-737 (2013).
  16. Wang, X., et al. An on-chip microfluidic pressure regulator that facilitates reproducible loading of cells and hydrogels into microphysiological system platforms. Lab Chip. 16 (5), 868-876 (2016).
  17. Phan, D. T., et al. Blood-brain barrier-on-a-chip: Microphysiological systems that capture the complexity of the blood-central nervous system interface. Exp Biol Med. 242 (17), 1669-1678 (2017).
  18. Kurokawa, Y. K., et al. Human induced pluripotent stem cell-derived endothelial cells for three-dimensional microphysiological systems. Tissue Eng Part C: Methods. 23 (8), 474-484 (2017).
  19. Romero-López, M., et al. Recapitulating the human tumor microenvironment: Colon tumor-derived extracellular matrix promotes angiogenesis and tumor cell growth. Biomaterials. 116, 118-129 (2017).
  20. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  21. Carpenter, A. E., et al. CellProfiler: Image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes. Genome Biol. 7 (10), R100(2006).
  22. Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. A computational tool for quantitative analysis of vascular networks. PLoS one. 6 (11), e27385(2011).
  23. Corliss, B. A., et al. REAVER: A program for improved analysis of high-resolution vascular network images. Microcirculation. 27 (5), e12618(2020).
  24. Urban, G., et al. Deep learning for drug discovery and cancer research: Automated analysis of vascularization images. IEEE/ACM Trans Comput Biol Bioinform. 16 (3), 1029-1035 (2019).
  25. COMSOL Multiphysics. , Stockholm, Sweden. www.comsol.com (2023).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Vask larize Mikrot m rT m r Mikro evresiMikroak kan PlatformT m r ipiDinamik AkEndotelyal H crelermm n H cre EkstravazasyonuKi iselle tirilmi T pT m r HeterojenitesiY ksek z n rl kl G r nt leme

İlgili makaleler