İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Optimal Aşamada Dondurularak Saklanması

Xinyue Bai; Ting Zhang; Xinyue Zhu; Xianyu Huang; Haiyun Liu; Xiaoyan Ding; Mei Jiang; Xiaodong Sun

doi:10.3791/65888

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Optimal Aşamada Dondurularak Saklanması

1.4K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/65888

⸱

3 Kasım 2023

Xinyue Bai^*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Ting Zhang^*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Xinyue Zhu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Xianyu Huang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Haiyun Liu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Xiaoyan Ding⁸ , Mei Jiang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷ , Xiaodong Sun¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷

¹Department of Ophthalmology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ²National Clinical Research Center for Eye Diseases, ³Shanghai Clinical Research Center for Eye Diseases, ⁴Shanghai Key Clinical Specialty, ⁵Shanghai Key Laboratory of Ocular Fundus Diseases, ⁶Shanghai Engineering Center for Visual Science and Photomedicine, ⁷Shanghai Engineering Center for Precise Diagnosis and Treatment of Eye Diseases, ⁸Stem Cell Core Facility, CAS Center for Excellence in Molecular Cell Science, Chinese Academy of Sciences

^* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu çalışma, insan kök hücresinden türetilmiş retina pigment epitel hücrelerinin etkili bir şekilde dondurularak saklanması için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır.

Özet

İnsan embriyonik kök hücrelerinden (hESC'ler) türetilen retinal pigment epitel (RPE) hücreleri, retinal dejeneratif hastalıkları olan bireylerde hücre replasman tedavisi için üstün hücre kaynaklarıdır; Bununla birlikte, bu terapötik hücrelerin istikrarlı ve güvenli bankacılığı ile ilgili çalışmalar azdır. Kriyoprezervasyon sonrası RPE hücrelerinin oldukça değişken hücre canlılığı ve fonksiyonel geri kazanımı en sık karşılaşılan sorunlardır. Bu protokolde, orijinal deney koşullarına dayalı olarak dondurma için en uygun hücre fazını seçerek çözdürme işleminden sonra en iyi hücre geri kazanım oranını elde etmeyi amaçladık. Hücreler, çözüldükten sonra hücre canlılığını ve geri kazanım oranını artıran 5-etinil-2'-deoksiüridin etiketleme testi kullanılarak belirlenen üstel fazda donduruldu. Stabil ve fonksiyonel hücreler, uzun bir farklılaşma sürecinden bağımsız olarak, çözülmeden kısa bir süre sonra elde edildi. Burada açıklanan yöntemler, hESC'den türetilen RPE hücrelerinin basit, verimli ve ucuz bir şekilde korunmasına ve çözülmesine izin verir. Bu protokol RPE hücrelerine odaklansa da, bu dondurma stratejisi diğer birçok farklılaşmış hücre tipine uygulanabilir.

Giriş

Retina pigment epiteli (RPE), retinanın düzgün işlevini sürdürmek için gerekli olan pigmentli bir tek hücre tabakasıdır¹. RPE disfonksiyonu ve ölümü, yaşa bağlı makula dejenerasyonu, retinitis pigmentosa ve Stargardt hastalığı ^2,3 dahil olmak üzere birçok retinal dejeneratif hastalıkla yakından ilişkilidir. RPE replasman tedavisi, bu hastalıklar için en umut verici tedavi rejimlerinden biridir 4,5,6,7. Donör RPE hücrelerinin stabil bir şekilde tedarik edilmesi....