Bu protokol, hidroksisafflor sarı A'nın (HSYA) zebra balıklarında LPS'nin neden olduğu nörotoksisiteyi azaltıp azaltmadığını test etmeyi amaçlar. Motor fonksiyon bir Görsel Görme sistemi kullanılarak değerlendirildi. Dopaminerjik sinir yaralanması immünohistokimya ile incelendi. TLR4/NF-κB yolağında yer alan moleküller Western blot kullanılarak analiz edildi.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Araştırma makalesi
Hydroxysafflor Yellow A, TLR4/NF-ĸB Sinyal Yolunu Düzenleyerek Zebra Balıklarının Dopaminerjik Nöronlarında LPS'nin İndüklediği Toksisiteyi Azaltır
Bu makalede
Özet
Özet
Lipopolisakkarit (LPS) ile indüklenen inflamasyon, Parkinson hastalığı (PH) dahil olmak üzere nörodejeneratif hastalıkların tetiklenmesinde ve sürdürülmesinde çok önemli bir rol oynar. Hydroxysafflor yellow A (HSYA), Carthamus tinctorius L.'nin ana bileşenidir. Bu çalışma, HSYA'nın zebra balıklarının dopaminerjik nöronlarında LPS'nin neden olduğu toksisiteyi iyileştirip iyileştiremeyeceğini gözlemlemeyi amaçlamaktadır. Zebra balığı LPS'ye maruz bırakıldı ve daha sonra HSYA ile tedavi edildi. Zebra balığının motor fonksiyonunu değerlendirmek için davranış testleri yapılmıştır. Dopaminerjik nöronal yaralanma ve dopamin düzeyi incelendi. TLR4, NF-κB, IL-1β ve TNF-α da ölçüldü. LPS'nin (60 μg/mL, nihai konsantrasyon) zebra balıklarında toksisiteye neden olduğunu ve motor disfonksiyona ve tirozin hidroksilaz (TH) pozitif nöronlarda hasara neden olduğunu gösterdi. LPS maruziyeti sadece dopamin içeriğini azaltmakla kalmadı, aynı zamanda IL-1β, TNF-α seviyelerini ve TLR4 ve NF-κB ekspresyonunu da artırdı. HSYA, LPS'nin neden olduğu motor disfonksiyonu iyileştirdi. Ek olarak, HSYA, dopamin içeriğinde bir artışın eşlik ettiği TH-pozitif nöronların kaybını azalttı. HSYA tedavisi ayrıca TLR4, NF-κB ekspresyonunu ve IL-1β, TNF-α üretimini inhibe etti. Sonuç olarak, bu çalışma, HSYA'nın zebra balıklarının dopaminerjik nöronlarında inflamasyona bağlı hasarı, PH'de inflamatuar hasarın önlenmesi için deneysel bir temel sağlayan TLR4/NF-κB yolağını düzenleyerek azalttığını göstermektedir.
Giriş
Parkinson hastalığının (PH) patogenezi beyindeki dopaminerjik nöronların yaralanmasına bağlı motor aktivitenin bozulmasıdır. PH'nin belirtileri arasında istirahat tremoru, bradikinezi, postüral instabilite ve kas tonusu dahil olmak üzere motor disfonksiyon bulunur. Enflamasyon, PH'nin belirgin bir patolojik özelliğidir. PH'li bireylerin beyin omurilik sıvısı ve ölüm sonrası nigrostriatal beyin bölgelerindeki sitokin seviyeleri, yaşa uygun sağlıklı kontrollere kıyasla yüksektir1. Dopaminerjik nöronal hasarın inflamasyondan kaynaklandığı mekanizmalar iyi bilinmektedir. PH'de, orta beyin dopaminerjik nöronları, tümör nekroz faktörü (TNF)-ɑ2 gibi sitokinlere duyarlıdır. Lipopolisakkarit (LPS), bakterilerin bir bileşenidir. LPS, Toll benzeri reseptör 4'ün (TLR-4) bir ligandı olarak tanımlanır. TLR-4'e bağlandıktan sonra, LPS inflamatuar bir yanıta yol açar ve dokuya toksisite gösterir. TLR-4, merkezi sinir sistemindeki mikroglia üzerinde bulunur. LPS, TLR-4'ü aktive eder ve bu nedenle TNF-α ve IL-1β üretir. LPS'ye merkezi veya periferik maruz kalma, merkezi sinir sisteminde toksisiteye neden olacaktır. LPS'nin neden olduğu toksisitenin, PD 3,4,5 dahil olmak üzere nörodejeneratif hastalıkların tetiklenmesinde ve sürdürülmesinde rol oynadığını gösteren kanıtlar vardır.
Son zamanlarda, zebra balığı sinir sistemi hastalıklarını incelemek için bir model olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Zebra balığı ve insanlar %80 genetik homolojiye sahiptir. Ve zebra balığı neredeyse insanlarla aynı sayıda kromozoma sahiptir. Ayrıca, zebra balığının beyninin ana yapısı ve sinyal yolları memelilerinkine benzer. Zebra balığı ayrıca çok sayıda şeffaf embriyo üretebilir, hızla gelişebilir ve genetik manipülasyona eğilimlidir6. Bu avantajlar, zebra balığını PH'nin patogenezini araştırmak ve PH'de yüksek verimli ilaç taraması geliştirmek için mükemmel bir model haline getirir.
Hidroksisafflor sarı A (HSYA), Carthamus tinctorius L'nin ana bileşenidir. Önceki çalışmalar, HSYA'nın anti-inflamatuar özelliklere sahip olduğunu göstermiştir. Primer mezensefalik kültürlerde, 20 μM ila 640 μM'de HSYA herhangi bir toksisite göstermedi. Ve 40 μM ila 640 μM arasında değişen HSYA konsantrasyonu, LPS'nin neden olduğu dopaminerjik nöronal hasarı azalttı7. C57BL / 6J fareleri, bir PD modelini indüklemek için 6-hidroksidopamine maruz bırakıldı. HSYA sadece bozulmuş nörolojik fonksiyonu azaltmakla kalmaz, aynı zamanda beyindeki dopaminerjik nöronları da korur. Ayrıca, HSYA, substantia nigra8'de siklooksijenaz-2, indüklenebilir nitrik oksit sentaz ve NF-κB ekspresyonunu azalttı.
Bugüne kadar, in vivo olarak LPS'nin toksisitesini azaltmak için HSYA'nın özelliğini gösteren hiçbir rapor bulunmamaktadır. HSYA'nın LPS'nin neden olduğu toksisiteyi in vitro7 oranında azalttığını gösterdi. Bununla birlikte, hücre bazlı değerlendirme, karmaşık nörotoksisite sürecinin tüm adımlarını temsil etmemektedir. Zebra balığı, toksisite mekanizmasını çözmek için özellikle değerlidir. Son yıllarda, HSYA'nın protein kinaz B'nin ekspresyonunu azaltarak NF-κB inflamatuar yol aktivasyonunu inhibe edebildiği, böylece inflamatuar yanıtı iyileştirdiği ve HSYA'nın ayrıca hücre proliferasyonunu ve tümör nekroz faktörü α kaynaklı inflamatuar hasarı etkileyen aktivatör protein 1 ile ilişkili inflamatuar sinyal yolunu inhibe ettiği gösterilmiştir9, 10. Bu çalışma, HYSA'nın zebra balıklarının dopaminerjik nöronlarında LPS'nin neden olduğu toksisiteyi iyileştirip iyileştiremeyeceğini araştırmayı amaçlamaktadır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Deneyler, Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Kullanımı Kılavuzu'na (Yayın 86-23, 1986'da revize edilmiştir) uygun olarak yürütülmüştür. Ve bu çalışma Yantai Üniversitesi (YTDX20220623) Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı. Bu çalışmada kullanılan reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
1. Zebra balığının bakımı
AB suşu zebra balığı (Danio rerio), 27-28.5 °C (pH 7.0) su sıcaklığında, 14/10 saatlik aydınlık/karanlık döngüsünde devridaim su sisteminde tutuldu. Zebra balığı günde iki kez karidesle beslendi. Doğal çiftleşmeden sonra, döllenmiş embriyolar deiyonize su ile E3 besiyeri, KCl, NaCl, MgSO4·7H2Ove CaCl2 içeren Petri kaplarında toplandı.
2. Zebra balıklarında LPS'nin neden olduğu toksisite
Döllenmeden 24 saat sonra (hpf) zebra balığı embriyoları hasat edildi ve her grupta 60 embriyo olacak şekilde kontrol ve LPS gruplarına atandı. LPS tozu tartıldı ve çözünme için belirli bir miktarda PBS (pH = 7.4) çözeltisine ilave edildi, 2 mg / mL LPS stok çözeltisi olarak hazırlandı, depolama ve bekleme için -20 ° C'ye yerleştirildi. Deney sırasında, LPS rezerv çözeltisi 30 μg/mL, 60 μg/mL ve 90 μg/mL LPS çözeltisine seyreltildi. 30 μg / mL, 60 μg / mL veya 90 μg / mL'lik bir nihai konsantrasyonda LPS çözeltisi, 24 hpf zebra balığı embriyosu içeren Petri kaplarına eklendi; her deney kuyusu için çözelti hacmi 3 mL idi. Kontrol grubunda, zebra balığı embriyoları LPS olmadan E3 besiyerinde kültürlendi. Petri kapları, 28 ° C'de sabit sıcaklıktaki bir inkübasyon odasına yerleştirildi. LPS'ye maruz kalma, yukarıda belirtilen aynı prosedürü takiben art arda beş gün boyunca tekrarlandı.
3. TLR4 inhibitörünün zebra balıklarında LPS'nin neden olduğu toksisite üzerindeki etkisi
24 hpf'deki zebra balığı embriyoları kontrol, LPS ve TAK-242 gruplarına atandı. TAK-242'nin TLR4 sinyal yolunun düzenlenmesi üzerinde 1 μM'lik bir nihai konsantrasyonda düzenleyici etkisini doğrulamak için bir dizi çalışma yapılmıştır, bunlar arasında bazı çalışmalar TAK-242'nin LPS'nin neden olduğu hücre proliferasyonunu ve enflamatuar faktörlerin salınımını inhibe ederek, postoperatif dönemde glokomun azalması ile ilgili sorunları çözmenin yeni bir yolunu sağladığını göstermiştir11. TAK-242 grubunda, 24 hpf zebra balığı embriyosu içeren bir Petri kabına TAK-242 (1 μM, nihai konsantrasyon) eklendi; her deney kuyusu için çözelti hacmi 3 mL idi. 30 dakika sonra, toksisiteyi indüklemek için LPS (60 μg / mL, nihai konsantrasyon) eklendi ve LPS konsantrasyonları zebra balığı ölümlerine neden olmadı. Kontrol grubundaki embriyolar sadece E3 besiyerinde tutuldu. Petri kapları, 28 ° C'de sabit sıcaklıktaki bir inkübasyon odasına yerleştirildi. Yukarıdaki prosedür art arda beş gün boyunca tekrarlandı.
4. HSYA'nın zebra balıklarında LPS'nin neden olduğu toksisite üzerindeki etkisi
24 hpf'deki zebra balığı embriyoları kontrol, LPS ve HSYA gruplarına atandı. 20 μM, 40 μM veya 80 μM'lik bir nihai konsantrasyonda HSYA, 24 hpf zebra balığı embriyosu içeren Petri kaplarına eklendi; her deney kuyusu için çözelti hacmi 3 mL idi. 30 dakika sonra, LPS (60 μg / mL, son konsantrasyon) eklendi. Kontrol grubundaki embriyolar sadece E3 besiyerinde tutuldu. Petri kapları, 28 ° C'de sabit sıcaklıktaki bir inkübasyon odasına yerleştirildi. Yukarıdaki prosedür art arda beş gün boyunca tekrarlandı.
5. Davranışsal değerlendirme
Zebra balıkları, her kuyu için bir zebra balığı larvası olacak şekilde 96 oyuklu bir plakanın ortadaki 60 kuyusuna aktarıldı. Serbest yüzmeye izin vermek için her oyuğa E3 kültür ortamı (250 μL) eklendi. Lokomotor aktivite bir görüş sistemi kullanılarak kaydedildi. Karanlık kutuya (30 cm × 40 cm × 60 cm) saf su ilave edildi ve sıcaklık 28 °C'ye ayarlanarak ısıtma durumuna getirildi.
Karanlık kutu sıcaklığı 28 °C'ye ulaştığında, zebra balığı içeren 96 oyuklu plaka içine yerleştirildi ve lokomotor aktiviteyi kaydetmek için Görsel Görüş sistemi etkinleştirildi. Verileri depolamak için yeni bir klasör oluşturuldu. Deneysel ayarlar arayüzüne girmek için video kaynağı olarak Ev Yapımı Video Dosyası seçildi. Deney Ayarları bölümünde, gözlem bölgelerinin sayısı 60 olarak ayarlandı ve 60 zebra balığının aynı anda gözlemlenmesine izin verildi. Arena Ayarları'nda, lens tarafından yakalanan 96 oyuklu plakanın görüntüsü, konumlandırma daireleriyle birlikte ekranda belirdi. Arenaları Düzenle arayüzündeki modüller, lens yakalama alanı her bir kuyucukla aynı hizada olacak şekilde ayarlandı. Arena Donanım Eşlemesi'nde, karanlık kutu ışığı Açık olarak ayarlandı.
Deneme Kontrol Ayarları'nda, 10 dk hazırlık periyodu ve 10 dk tespit periyodu ile yeni bir program oluşturuldu ve bu program daha sonra tüm paralel deneylere uygulandı. Algılama Ayarları, lens yakalama işlevinin normal şekilde çalıştığını doğrulamak için kullanıldı. Deneme Listesinde, her gruptaki 60 zebra balığından elde edilen veriler görüntülendi. Araç çubuğundaki deneme sayısı, tüm deney gruplarını içeren bir veri tablosu oluşturmak için kullanıldı ve verilerin eksiksiz olması sağlandı.
Tüm ayarlar onaylandı ve karanlık kutu sıcaklığı 28 °C'de tutuldu. Her kuyucuğun hayati belirtileri olan bir zebra balığı içerdiğini doğruladıktan sonra deney başlatıldı. Deney sırasında, davranışsal enstrümanın merceği hareket yörüngesini, süresini ve ilgili parametreleri kaydetti. İlk kayıttan 20 dakika sonra sistem otomatik olarak sona erdi ve bir sonraki deneme için hazırlandı. Karanlık kutu açıldı ve 96 oyuklu plaka, sonraki deney için zebra balığı içeren yeni bir plaka ile değiştirildi.
Deney sonunda Analiz modülünden Sonuçlar seçilmiştir. Ortalama hız, mesafe, maksimum ivme ve mutlak direksiyon açısı gibi deneysel parametreler sonuçlar modülünden çıkarıldı ve dışa aktarıldı. Veriler daha sonra zebra balığı grupları arasındaki davranışsal farklılıkların analizi için derlenmiştir12.
6. Proinflamatuar sitokinlerin ölçümü
Zebra balığı toplandı. Örnekler tartıldı ve 1:9 gravimetrik oranda PBS (0.01 M, pH = 7.4) ilave edildi ve 4 °C'de homojenize edildi (5000 dev/dak, 30 sn). Homojenatlar 4 °C, 5000 x g, 20 dk'da santrifüjlendi ve süpernatanlar hasat edildi. IL-1β ve TNF-α, üretici tarafından sağlanan talimatlara göre balık ELISA kitleri ile test edildi.
7. İmmünohistokimya
Zebra balıkları 5 mL %4 (h/h) paraformaldehit ile tespit edildi. Parafine gömülü ve 5 μm kalınlığında bölümler kesin. Kesitler sitrat tamponu (200 μL) ile mikrodalgada 10 dakika inkübe edildi. Endojen peroksidazları bloke etmek için% 0.3 hidrojen peroksit ve metanol çözeltisi içinde 30 dakika inkübe edildi. PBS ile 3 kez, her seferinde 5 dakika yıkandı. İmmün olmayan serum 37 ºC'de 30 dakika inkübe edildi. Primer anti-TH antikoru (1:100) 37 ºC'de 30 dakika inkübe edildi. PBS ile 3 kez yıkandı. Yaban turpu peroksidaz (1:200) ile bağlantılı ikincil antikor ile 37 ºC'de 30 dakika inkübe edildi. Daha sonra 3,3'-diaminodbenzidin ilave edildi. Kesitler parlak alan mikroskobu kullanılarak görüntülendi.
8. Nörotransmiterler
Dopamin seviyesini test etmek için HPLC-ECD kullanıldı. Dopamin hidroklorür, 3.90625 ng/mL, 7.8125 ng/mL, 15.625 ng/mL, 31.25 ng/mL, 62.5 ng/mL ve 125 ng/mL'de bir konsantrasyon gradyan çözeltisi elde etmek için 0.1 M perklorik asit (HClO4) içinde çözüldü. Bir dizi dopamin standart çözeltisi HPLC-ECD ile analiz edildi. Dopamin konsantrasyonu ve dopamin tepe alanı kullanılarak doğrusal regresyon yapıldı. Standart bir eğri çizildi. Zebra balığı dokuları 0.1 M HClO413 ile homojenize edildi. Homojenatlar 4 °C, 20.000 x g, 15 dakikada santrifüjlendi. Daha sonra, numuneler bir ODS2 sütunu (E2118047; 4.6 × 250 mm, 5 μm) üzerinde ayrıldı. Tampon hazırlandı: 25 mmol/L sodyum asetat, 25 mmol/L sitrik asit, 0.01 mmol/L etilendiamintetraasetik asit disodyum tuzu, 1 mmol/L sodyum 1-oktansülfonat ve asetik asit, pH 3.35'e ayarlandı. Mobil faz asetonitril: tampon (1:9, h/v) idi. 0.22 μm'lik bir filtre membranı ile vakumlu filtrasyondan sonra, numune 10 dakika boyunca ultrasonik gaz giderme ile gazdan arındırıldı. Kolon fırınının sıcaklığı 30 °C idi. Akış hızı 1 mL / dak idi. Numune 20 μL'lik bir hacimde enjekte edildi. Elektrokimyasal dedektör, 10 μA aralığında 1000 mV'luk bir voltajda çalıştırıldı. Zebra balığı dokularındaki dopamin miktarı regresyon denklemine göre hesaplandı.
9. Batı lekesi
Proteinler zebra balığı dokusundan ekstrakte edildi ve konsantrasyon test edildi (son konsantrasyon: 10 mg / mL). Proteinler (50 μg/5 μL) %8'lik sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezine tabi tutuldu. Transfer membranı 1 saat boyunca 110 V'ta gerçekleştirildi. Membranlar 1 saat boyunca %5'lik süt ile bloke edildi. Birincil antikorlarla 4 ° C'de inkübe edildi: tavşan anti-TLR4 (1:1000), tavşan anti-NF-κB (1:2000), tavşan anti-lamin B1 (1:2000) veya tavşan anti-GAPDH (1:1000). TBST ile yıkandıktan sonra (her biri 5 dakika boyunca 3 kez), membranlar 1 saat boyunca ikincil antikor ile inkübe edildi. Bantlar, bir ECL Kemilüminesan Substrat Kiti kullanılarak görselleştirildi ve bir jel görüntüleme sistemi kullanılarak nicelleştirildi. Yükleme kontrolleri olarak Lamin B1 ve GAPDH kullanıldı.
10. İstatistiksel analiz
Tüm veriler ortalama ± SD olarak ifade edildi ve istatistiksel yazılımlarla analiz edildi. İstatistiksel analizler tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve ardından Tukey testi kullanılarak yapılmıştır. P değerinin <0.05 olması istatistiksel olarak anlamlıydı.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
LPS'nin zebra balığının motor fonksiyonu üzerindeki etkileri
LPS (60 μg/mL ve 90 μg/mL) gruplarındaki zebra balıklarının ortalama hızı, toplam mesafesi ve maksimum ivmesi kontrol grubuna göre azaldı (P < 0.01). Motor disfonksiyon ayrıca hareket yönünde sık sık değişiklikler olarak ortaya çıktı. LPS 60 μg/mL ve LPS 90 μg/mL gruplarında zebra balıklarının mutlak yüzme açısı, kontrol grubuna göre önemli ölçüde artmıştır (P < 0.01) (
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Tıbbi bitkiler, anti-enflamatuar ve nöroprotektif uygulamalar konusunda uzun bir geçmişe sahiptir14. Önceki çalışmalarımız, HSYA'nın nörotoksik ajan kaynaklı PD hayvan modellerinde koruyucu bir etkiye sahip olduğunu göstermiştir. Zebra balıklarında LPS'nin neden olduğu toksisiteyi kullanan bu çalışma, HSYA'nın TLR4/NF-κB sinyal yolunu düzenleyerek zebra balığının dopaminerjik nöronlarında iltihaplanmaya bağlı hasarı azalttığını göstermektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.
YAZAR KATKISI:
Kavramsallaştırma: Guirong Zhang, Bing Han. Finansman alımı: Guirong Zhang, Bing Han. Soruşturma: Huilin Zhang. Metodoloji: Huilin Zhang, Mingyue Li, Xiaohan Zhang, Yang Li. Denetim: Guirong Zhang, Bing Han. Yazım- orijinal taslak: Mingyue Li, Xiaohan Zhang, Yang Li. Yazım-inceleme ve düzenleme: Huilin Zhang, Guirong Zhang, Bing Han.
Teşekkürler
Bu el yazmasını düzenlediği için Rachel James'e teşekkür ederiz. Bu araştırma, Shandong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı tarafından finanse edilmiştir (Hibe No. ZR2020MH377).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| BCA Protein Konsantrasyonu Ölçüm Kiti | Beyotime Biyoteknoloji | P0012S | |
| Kemilüminesan görüntüleme sistemi | Beijing Sage Venture Technology Co. | ChampChemi 910 | |
| Dopamin hidroklorür | Sigma– Aldrich | PHR1090 | |
| Elektronik denge | Şangay OHAUS Instrument Co. | IL-1 ve beta için AR-2140 | |
| ELISA kitleri; | COIBO Biyoteknoloji | CB10018-FI | |
| ELISA kitleri; | COIBO Biyoteknoloji | CB10148-FI | |
| GAPDH antikoru | Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi | 5174S | |
| GraphPad Prism 5.0 | GraphPad istatistik Yazılımı, Boston, MA, ABD, www.graphpad.com | Prism 5.0 | |
| Yüksek performanslı sıvı kromatografisi; elektrokimyasal tespiti (HPLC– ECD) | GL Sciences, Ibaraki, Japonya | ED723 | |
| Yüksek hızlı dondurma santrifüjü | Pekin Dalong Xingchuang Deneysel Enstrüman A.Ş. | D3024R | |
| HPLC ve ndash; ECD | GL Bilimleri | ED723 | |
| HSYA | Luye İlaç Grubu Ltd. | ||
| Image Quant | GE Healthcare, Tokyo, Japonya | LAS 4000 | |
| Lamin B1 antikor | Hücre Sinyalleme Teknolojisi | 13435S | |
| LPS Sigma– Aldrich | L2630 | ||
| Mikroskop | Leica, Wetzlar | DM1000LED | |
| Mikroskobu | Leica, Almanya | DM1000LED | |
| Çok Fonksiyonlu Enzim Etiketleyici | Shanghai Meigu Molecular Instrument Co. | SpectraMax Paradigması | |
| NF-κ B antikoru | Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi | 8242S | |
| Noldus Görsel Vizyon XT sistemi | Beijing Noldus Biotechnology Co., Ltd. | EthoVision XT15 | |
| Nükleer ve Sitoplazmik Protein Ekstraksiyon Kiti | Beyotime Biyoteknoloji | P0028 | |
| PMSF | Beyotime Biyoteknoloji | ST506 | |
| TAK-242 | Merck | 614316 | |
| Termostatı | Shenzhen Galaxy Instrumentation Co. | ||
| TLR4 antikoru | Abcam | ab13556 | |
| Zebra Balığı | Kuzey Ulusal Zebra Balığı Model Hayvanlar Merkezi | AB suşu | |
| Zebra balığı devridaim su sistemi | Beijing Aisheng Biotechnology Co., Ltd. | ESEN-AW-S1 |
Kaynaklar
- Lazdon, E., Stolero, N., Frenkel, D. Microglia and Parkinson's disease: Footprints to pathology. J Neural Transm. 127 (2), 149-158 (2020).
- Block, M. L., Zecca, L., Hong, J. S. Microglia-mediated neurotoxicity: Uncovering the molecular mechanisms. Nat Rev Neurosci. 8 (1), 57-69 (2007).
- Wang, A., et al. Inhibition of NLRP3 inflammasome ameliorates LPS-induced neuroinflammatory injury in mice via PINK1/Parkin pathway. Neuropharmacology. 257, 110063(2024).
- Dhureja, M., Deshmukh, R. Impact of alogliptin on lipopolysaccharide-induced experimental Parkinson's disease: Unrevealing neurochemical and histopathological alterations in rodents. Eur J Pharmacol. 975, 176635(2024).
- Jiang, S. Y., et al. Mefloquine targets NLRP3 to reduce lipopolysaccharide-induced systemic inflammation and neural injury. EMBO Rep. 24 (10), e57101(2023).
- Lal, R., et al. Experimental models of Parkinson's disease: Challenges and Opportunities. Eur J Pharmacol. 980, Article 176819 (2024).
- Wang, T., et al. Hydroxysafflor Yellow A attenuates lipopolysaccharide-induced neurotoxicity and neuroinflammation in primary mesencephalic cultures. Molecules. 23 (5), 1210(2018).
- Yang, X., et al. Protective effect of hydroxysafflor yellow A on dopaminergic neurons against 6-hydroxydopamine, activating anti-apoptotic and anti-neuroinflammatory pathways. Pharm Biol. 58 (1), 686-694 (2020).
- Feng, X., et al. Hydroxysafflor yellow A regulates lymphangiogenesis and inflammation via the inhibition of PI3K on regulating AKT/mTOR and NF-κB pathway in macrophages to reduce atherosclerosis in ApoE-/- mice. Phytomedicine. 112, 154684(2023).
- Liu, S., et al. Hydroxysafflor yellow A inhibits TNF-α-induced inflammation of human fetal lung fibroblasts via NF-κB signaling pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2019, 4050327(2019).
- Liang, L., et al. Inhibitive effect of TAK-242 on Tenon's capsule fibroblasts proliferation in rat eyes. Int J Ophthalmol. 12 (11), 1699-1707 (2019).
- Zhao, Y., et al. Rosmarinic acid protects against MPTP-induced dopaminergic neurotoxicity in zebrafish embryos. Toxicol In Vitro. 65, 104823(2020).
- Monje, M. L., Toda, H., Palmer, T. D. Inflammatory blockade restores adult hippocampal neurogenesis. Science. 302 (5651), 1760-1765 (2003).
- Batiha, G. E., et al. Commiphora myrrh: A phytochemical and pharmacological update. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 396 (3), 405-420 (2023).
- Al-Kuraishy, H. M., et al. Sleep disorders cause Parkinson's disease or the reverse is true: Good GABA good night. CNS Neurosci Ther. 30 (3), e14521(2024).
- Alrouji, M., et al. Role of uric acid in neurodegenerative diseases, focusing on Alzheimer and Parkinson disease: A new perspective. Neuropsychopharmacol Rep. 44 (3), 639-649 (2024).
- Jankovic, J. Parkinson's disease: Clinical features and diagnosis. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 79, 368-376 (2008).
- Al-Kuraishy, H. M., et al. Parkinson's disease risk and hyperhomocysteinemia: The possible link. Cell Mol Neurobiol. 43 (6), 2743-2759 (2023).
- Al-Kuraishy, H. M., et al. The classical and non-classical axes of renin-angiotensin system in Parkinson disease: The bright and dark side of the moon. Ageing Res Rev. 94, 102200(2024).
- Hou, S., et al. Dopamine is produced in the rat spinal cord and regulates micturition reflex after spinal cord injury. Exp Neurol. 285, 136-146 (2016).
- Kalia, L. V., Lang, A. E. Parkinson's disease. Lancet. 386, 896-912 (2015).
- Hirsch, E. C., Standaert, D. G. Ten unsolved questions about neuroinflammation in Parkinson's disease. Mov Disord. 36, 16-24 (2021).
- Hussey, S. E., et al. TAK-242, a small-molecule inhibitor of Toll-like receptor 4 signalling, unveils similarities and differences in lipopolysaccharide- and lipid-induced inflammation and insulin resistance in muscle cells. Biosci Rep. 33, e00098(2012).
- Heidari, A., Yazdanpanah, N., Rezaei, N. The role of Toll-like receptors and neuroinflammation in Parkinson's disease. J Neuroinflamm. 19, 135(2022).
- Zhao, Z., et al. Fecal microbiota transplantation protects rotenone-induced Parkinson's disease mice via suppressing inflammation mediated by the lipopolysaccharide-TLR4 signaling pathway through the microbiota-gut-brain axis. Microbiome. 9, 226(2021).
- Sun, M. F., Shen, Y. Q. Dysbiosis of gut microbiota and microbial metabolites in Parkinson's disease. Ageing Res Rev. 45, 53-61 (2018).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
