Method Article

Doğal Kaynaklardan Protein Sentezi İnhibitörlerinin Ön Taraması için Flüoresans Tabanlı Protokol

DOI:

10.3791/68481

⸱

January 27th, 2026

 ,  , 
1Louisiana State University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, protein sentezinin doğal ürün/küçük molekül inhibitörlerini belirlemek için optimize edilmiş bir florometrik tarama metodolojisi tanıtmaktadır. Pratikliği, hem ilaç keşif teknikleri lisans eğitimi için hem de tıbbi kimya kampanyalarında uygulanması için uygun hale getirir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doğal ürünler, özellikle kanser olmak üzere birçok hastalıkta uygulanan zengin bir terapötik bileşik kaynağıdır. Bu biyomolekülleri ilaç keşfinde yapısal şablon olarak kullanarak, araştırmacılar hem daha hızlı geliştirme zaman çizelgeleri hem de tam sentetik bileşiklere kıyasla daha iyi biyolojik etkinlik sağlamışlardır. Protein sentezi yolu, özellikle tedavisi zor kanserlerde rol oynadığı göz önüne alındığında, doğal ürünler için cazip bir hedef haline gelmiştir. Streptomyces griseus'tan türetilen güçlü protein sentezi inhibitörü cycloheximid, bu alandaki doğal bileşiklerin potansiyelini örneklemektedir. Bu doğal ürün türevleri ilaç benzeri moleküllere dönüştürülürken, protein sentezi inhibitör aktivitelerinin doğrulanması kritik bir doğrulama adımı olmaya devam ediyor. Ana amaç, bileşik inhibisyon aktivitesinin hızlı değerlendirilmesi için lisans düzeyine uygun bir protokol sağlamaktır. Protokol, bu doğal ürünlerin inhibitör yeteneklerini sistematik olarak tespit etmek ve ölçmek için floresan bir alt ve gelişmiş floresan mikroskopi teknikleri kullanır. Çalışma, Pinus sylvestris ve Psoralea corylifolia olmak üzere iki bitki türünden türetilen bileşikleri inceledi. Referans inhibitörü olarak sikloheksimidi kullanarak, her iki doğal ürün de protein sentezi inhibisyonunda farklı seviyelerde bulundu.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protein sentezi, transkripsiyon ve çeviri gibi yüksek derecede düzenlenmiş süreçleri içerir. Transkripsiyon sırasında, genlerin DNA dizileri kopyalanır ve haberci RNA (mRNA) üretilir. RNA polimeraz enzimi, DNA çift sarmalını ayırmak için çalışır ve bir ipliği rehber olarak kullanarak uyumlu bir mRNA molekülü oluşturur. mRNA tam olarak oluştuktan sonra, çekirdeğinden sitoplazmaya doğru translasyon için ilerler. Çeviri ribozomda gerçekleşir; burada mRNA, amino asitleri polipeptid zincirine monte etmek için şablon olarak kullanılır. Bu polipeptid zinciri, ribozomun çıkış tünelinden ayrıldıktan sonra fonksiyonel bir proteine katlanır. Transkripsiyon öncelikle transkripsiyon faktörleri, kromatin modifikasyonları ve düzenleyici RNA'lar tarafından düzenlenirken, çeviri başlatma faktörleri, sinyal yolları ve RNA stabilite mekanizmalarıyla düzenlenir. Bu düzenleyici sistemler, hücrelerin hücresel işlevlerini sürdürmesini ve stres veya hasara etkili şekilde yanıtvermesini sağlar 1.

İnsan kanserlerinin büyük çoğunluğu—yaklaşık %85—katı tümörler olarak ortayaçıkar 2. Bu tümörler özgün özellikleri ve davranışları açısından büyük farklılıklar gösterebilse de, etiyolojileri veya anatomik konumları ne olursa olsun protein sentezinin regulasyonunu artırması gibi belirli ortak fizyolojik özellikler ve desenleripaylaşma eğilimindedirler 3. Kanser hücreleri, yüksek enerji taleplerini ve kontrolsüz büyümelerini desteklemek için translasyon mekanizmalarını ele geçirerek protein sentezini düzensizleştirir. Bu yeniden programlama, neredeyse tüm ana onkojenik sinyal yollarının düzensizliğinin bir sonucudur; bu da hücre hayatta kalmasını, çoğalmasını ve metastazını desteklerken, hücre ölüm yollarınıbastırır. Tümör hücrelerinde, ribozom üretim mekanizması aşırı hıza geçer, bu da protein üretimini artırır ve hücre bölünmesinin hızlı olmasını sağlar. Bu gelişmiş protein sentezi kanserin hayatta kalması için kritik olduğundan, bu süreci hedefleyen ve engelleyen tedaviler potansiyel tedaviler olarak umut vaat ediyor5. Bu nedenle, kansere özgü translasyon faktörleri, benzersiz ribozomal bileşimler veya protein sentezini düzenleyen değişmiş sinyal yolları üzerine odaklanan araştırmalar, daha iyi terapötik pencerelere sahip daha hedefli inhibitörler ortaya çıkarabilir.

Doğal ürünler (NP'ler) geniş biyolojik etkinlik yelpazesiyle bilindiğinden, iskeleleri kullanarak kanser tedavisinde seçici protein sentezi inhibitörlerinin geliştirilmesi umut vericibir yaklaşımdır 6,7. NP'ler, protein sentezi mekanizmasının farklı bileşenlerini hedefleyebilir; ribozom bağlanmasından başlatma faktörlerine veya uzatma süreçlerine girişime, katı tümörlerde protein sentezi inhibitörleri için ilaç geliştirmede paha biçilmez başlangıç noktalarıhaline gelir 6. İstenilen aktivite için bileşikleri hızlıca tarama kapasitesi, NP izlerini etkili şekilde tespit etmek isteyen ilaç keşif platformları için kritik bir giriş noktasıdır. Genellikle, yüksek verimli bileşiklerin taraması, floresan testleri kullanılarak lead aday molekülleri hızladaraltılır 8.

Dünya çapındaki bilim insanları, biyolojik sistemleri analiz etmek için temel araçlar olarak floresan tabanlı tekniklere güvenmektedir. Bu yaklaşımlar, hücresel süreçleri incelemek için yaygın olarak kullanılır ve araştırmacıların biyomoleküler etkileşimleri gerçek zamanlı olarak takipetmesini sağlar 9. Biyo-ortogonal tık-kimya reaksiyonlarıyla birleştirildiğinde, bu yöntemler proteinsentezinin hassas görselleştirilmesini sağlayabilir 10. Sunulan floresan protein sentezi testi, hücre geçirgen alkin içeren puromisin analoji olan O-propargyl-puromicin (OPP) kullanan, protein sentezini değerlendirmek için radyoaktif olmayan bir tekniktir. Hücresel tedaviden sonra, OPP uzamayan polipeptid zincirlerinin C-terminalinde entegre olur ve bu da translasyon sonlanmasına neden olur. Bu alkin etiketli kesilen proteinler, bakır katalizli klik kimyası ve 5 FAM-azid ile birlikte tespit edilir.

Bu florometrik test, lisans öğrencilerini eğitmek için değerli bir araştırma aracı ve erişilebilir bir kimyasal biyoloji yöntemidir. Minimum veri işleme ile erişilebilir ve verimli bir protokol sunarak, öğrencilere modern ilaç keşfi tekniklerinde uygulamalı deneyim kazandırır ve ilaç keşif sürecini hızlandırır. Yeni protein sentez inhibitörlerine olan talep arttıkça, bu yaklaşım lisans öğrencilerine anlamlı araştırma fırsatları sunarken kanser tedavilerindeki ilerlemelere katkıda bulunur.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Setten reaktif hazırlamak

NOT: Yeterince karıştırın, spin yapın ve tüm reaktifleri kullanıma kadar buzda tutun.

  1. Protein sentezi inhibisyon kiti, PBS tamponu, hücre kültürü ortamı, hücre kültürü ile işlenmiş plakalar, 15 mL konik steril polipropilen santrifüj tüpleri, 2 mL santrifüj tüpleri, p10, p20, p200 ve p1000 pipetleri ve uygun uçları organize edin ve elde edinin.
  2. Yıkama tamponu hazırlayın.
    1. 10x yıkama tamponunu 37 °C'de şişeni elde fincanla çözerek çöz. Ellerdeki vücut ısısını kullanarak eritme için ve sık sık çözülmenin tamamlanıp tamamlanmadığını kontrol edin.
    2. 10x yıkama tamponu stoklarını 1:10 oranında deiyonize suda bir santrifüj tüpünde seyreltin. Ters ters veya yeniden süspansiyon ile yukarı ve aşağı pipetle karıştırın. Kullanana kadar buzda sakla.
  3. Oda sıcaklığında eritici çözeltiyi erit. Kullanana kadar buzda sakla.
  4. Geçirimlilik tamponunu hazırlayın.
    1. 10x permeabilizasyon tamponunu 37 °C'de şişenin elinde kavga ile eritin. Ellerdeki vücut ısısını kullanarak eritme için ve sık sık çözülmenin tamamlanıp tamamlanmadığını kontrol edin.
    2. 10x stok kısmını 1:10 oranında deiyonize suda santrifüj tüpünde seyreltin. Bileşenleri ters ters veya yukarı aşağı pipetle yeniden süspansiyon ile karıştırın. Kullanana kadar buzda sakla.
  5. Oda sıcaklığında 400x protein etiketi, 100x floresan azid, 100x sikloheksimid, DNA boyama ve 20x indirgetici madde. Kullanırken karanlık bir ortamda buz üzerinde kalın. Boyaları folyo ile örtün veya kullanılmadığında 2 °C bir buzdolabında sakla.

2. Kontrol ve deneysel hücrelerin etiketlenmesi

NOT: Bu protokol, stabil yapışkan, epitel meme kanseri MDA-MB-231 hücreleri kullanılarak geliştirilmiştir. Herhangi bir yapışkan hücre hattı kullanılabilir. Aşağıda listelenen tüm adımlar 96 kuyu plakası kullanır ve tüm hacimler ve konsantrasyonlar, 100 μL çalışma hacmi olan iki test bileşiği ve iki kontrol için hesaplanır.

  1. Yapışkan memeli hücrelerinin kültürlenmesi
    NOT: Hücreler, sağlıklı, üstel büyümeyi sürdürmek ve temas inhibitisiyonunu veya farklılaşmasını önlemek için %80-90 birleşmeye ulaşmadan önce geçirilmelidir.
  2. Kriyokonserve hücrelerden oluşan bir şişeyi oda sıcaklığına eritin, ardından uygun ortamla seyreltin.
  3. Süspansiyonu santrifüjlenerek hücreleri pellet ve süpernatantı aspire et. Pelleti taze ortamda tekrar askıya alın ve uygun hücre yoğunluğunda yeni bir şişeye aktarın.
  4. Hücreler %80 birleştiğinde, matonun içindeki ortamı çıkarıp eski büyüme ortamını aspire edin. Sonra, hücreleri steril PBS ile durulayarak tripsin inhibe eden kalıntı serumu çıkarabilirsiniz. Hücre tabakasını kapatmak için tripsin-EDTA çözeltisi ekleyin ve hücreler 37 °C'de ayrılana kadar 3-5 dakika kuluçka yapın.
  5. Tripsini inaktive etmek için serum içeren tam ortam ekleyin, ardından hücre süspansiyonunu bir tüpe aktarın, nazikçe karıştırın ve hücreleri sayın.
  6. Tarama plakalarındaki tohum hücreleri, uygun bölünme oranında (örneğin, 1:3 veya 1:5) hücreleri yeni ortamda taze şişelere seyreltir ve istenen hücre konsantrasyonu elde etmek için kuluçka (genellikle 37 °C, %5CO 2) alınır.
    NOT: Burada anlatılan deneyde, hücre hattı her kuyu başına 2 × 104 (96 kuyu plakası) kaplanmış ve 37 °C'de 12 saat kuluçka yapılmıştır.

3. Bileşik eklemesi

  1. Ana karışım A'yı hazırlayın.
    1. Santrifüj tüpünü "A" olarak etiketleyin. 598,5 μL kültür ortamı ve 1,5 μL protein etiketi "A"ya pipet yapın. Karışımı tekrar askıya alın, homojenliği sağlamak için pipetle yukarı aşağı indirin.
  2. Ana karışım B'yi hazırla.
    1. Santrifüj tüpünü "B" olarak etiketleyin. 1,5 μL protein etiketi, 6,6 μL sikloheksimid ve 591,9 μL kültür ortamı "B"ye pipet yapın. Karışımı tekrar askıya alın, homojenliği sağlamak için pipetle yukarı aşağı indirin.
  3. Hücreleri istenen bileşiklerle (Şekil 1), pozitif ve negatif kontrollerle tedavi edin.
    1. Hücreleri kuluçka makinesinden çıkarır ve büyüme ortamını aspirasyon yoluyla çıkarır. Plakayı eğip hücrelerin rahatsız olmasını önlemek için merkez yerine kuyunun kenarından aspirasyon yapın.
    2. 1 μL test bileşiğini bir kuyuya, 1 μL test bileşiği aracını (%0,1 v/v DMSO) bir kuyuya pipet yapın. Tekrarlanan çalışmalar için, her örneği ikinci bir kuyuya ekleyin ve bu işlemi tekrarlayın. Bu kuyruklara 99 μL master mix A ekleyin. Kuyunun yanına açılı olarak pipetleyin, böylece hücrelerin kinetik bozulmasını önleyin.
      NOT: Bileşik taraması için maksimum DMSO konsantrasyonu hücre tipine ve teste bağlıdır, ancak genel yönergeler şunlardır: %0,1-0,5 DMSO-genellikle minimum toksisiteye sahip hücre bazlı testler için güvenlidir ve kısa süreli testlerde birçok hücre tipi için %1 DMSO yaygın olarak kullanılan maksimum ve kabul edilebilir seviyedir.
    3. 100 μL master mix B pipetini iki kuyuya koyun. Kuyunun kenarına açı ile pipet yapın, böylece hücrelerin bozulmasını önleyin.
    4. İstenilen bileşenleri hücrelerle birleştirerek plakaya hafifçe dokunun. Hücreleri 37 °C'de 0,5-2 saat kuluçka edin.

4. Deneyin sonlandırılması ve hücrelerin yıkanması

  1. Kültür ortamını aspirasyon yoluyla çıkarın. Plakayı eğip hücrelerin rahatsız olmasını önlemek için merkez yerine kuyunun kenarından aspirasyon yapın.
  2. Her kuyuya 100 μL PBS tamponu ekleyin ve plakayı 900 × g ile 5 dakika boyunca santrifüj edin.
  3. PBS tamponunu aspirasyon yoluyla çıkarın.

5. Sabitleme ve permeabilizasyon

  1. Her kuyuya 100 μL fiksatif çözelti ekleyin. Hücreleri oda sıcaklığında karanlık bir ortamda 15 dakika kuluçka altına alın.
  2. Fiksatif çözeltiyi aspirasyon yoluyla çıkarın. Plakayı eğip kuyunun kenarından aspirasyon yapın, ortasından değil.
  3. Hücreleri 100 μL yıkama tamponu ile yıkayın ve aspirasyon yoluyla tamponu çıkarın. Bu adımı 2 kez tekrarlayın.
  4. Her kuyuya 100 μL permeabilizasyon tamponu ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika kuluçka yapın.
  5. Geçirimlilik tamponunu aspirasyon yoluyla kaldırın. Plakayı eğip kuyunun kenarından aspirasyon yapın, ortasından değil.

6. Protein reaksiyonu ve boyama

  1. Reaksiyon kokteyl master karışımını hazırlayın.
    1. 651 μL PBS tamponu ekleyin, 7,0 μL 100x bakır reaktif, 7 μL floresan azid ve son olarak 35 μL indirgeme maddesi santrifüj tüpüne eklenin. Bu karışımı homojenliği sağlamak için tekrar askıya alın.
      NOT: Reaktifleri eklerken tam olarak bu sırayı takip edin. Hazırlıktan sonra 15 dakika içinde kullanın.
  2. Her kuyuya 100 μL reaksiyon kokteyli ekleyin. Hücreleri oda sıcaklığında karanlık bir ortamda 30 dakika kuluçka altına alın, böylece foto ağartmayı önleyin.
  3. Santrifüj hücrelerini 900 × g 5 dakika boyunca koyun. Santrifüjü dengeleyerek boş plakalar ekleyerek ağırlığı eşit dağıtın. Karışımı aspirasyon yoluyla çıkarın.
  4. Hücreleri 100 μL yıkama tamponu ile yıkayın ve aspirasyon yoluyla tamponu çıkarın. Bu adımı 2 kez tekrarlayın.

7. DNA boyama

  1. Toplam DNA boyasından 1x seyrelme hazırlayın ve her kuyuya 100 μL ekleyin. Hücreleri oda sıcaklığında karanlık bir ortamda 20 dakika kuluçka altına geçirerek fotobeyazlamayı önleyin.
  2. Plakayı 900 × g ile 5 dakika santrifüjle yapın. Santrifüjü dengeleyerek boş plakalar ekleyerek ağırlığı eşit dağıtın. Karışımı aspirasyon yoluyla çıkarın.
  3. Hücreleri 100 μL yıkama tamponu ile yıkayın ve aspirasyon yoluyla tamponu çıkarın. Bu adımı 2 kez tekrarlayın.
  4. Hücreleri görüntülemeye hazırlamak için 100 μL soğuttulan PBS tamponu ile yeniden süzülün.

8. Görüntüleme

  1. Plakayı plaka okuyucuya yerleştirin.
  2. Büyütmeyi 20x olarak ayarlayın.
  3. GFP 469/525 nm kanalıyla çekirdek boyama analizi yapın. Görüntüleme sonuçlarını artırmak için otomatik binleme ve otomatik odaklama kullanın.
  4. Texas Red 586/647nm kanalıyla aktif protein sentezini analiz edin. Görüntüleme sonuçlarını artırmak için otomatik binleme ve otomatik odaklama kullanın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu test, farklı doğal ürünlerin protein sentezini engelleme yeteneğini görselleştirmek ve nicelik göstermek için floresans kullandı. Cycloheximid (CHX), etki şekli uzamak11 sırasında translokasyon sürecine müdahale etmeyi içeren bilinen bir protein sentezi inhibitörüdür. Bu çalışmada, canlı hücreler yeşil, floresan bir nükleer boyayla tespit edildi. OPP, puromisin'in bir türevidir ve yeni başlayanproteinlere kovalent olarak bağlanır. 12. MD...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, doğal ürünlerin ve küçük moleküllerin protein sentezini inhibe etme yeteneklerini değerlendirmek için florometrik tarama metodolojisi sağlar. Bu protokolün basitliği, lisans öğrencilerinin bunu doğru şekilde uygulamasını sağlar ve bilimsel bilgiye önemli katkılar yapmalarını sağlar. Protokol, biyolojik yöntemler ve tekniklerin temel bir anlaşılmasını gerektirir ve doğru ve güvenilir sonuçlar için dikkatli adımlar uygulanmasını gerektirir.

Örneğin,...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların beyan edecek çıkar çatışmaları yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma, NIGMS R15GM148983 numaralı hibe birimi, Louisiana Yönetim Kurulu LEQSF(2021-25)-RD-A-05 ve ABD Ulusal Bilim Vakfı'nın bir kısmı tarafından OIA-1946231 numaralı f.r.'ye kadar desteklenmiştir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Agilent Biotek Cytation 1 Hücre Görüntüleme Çok Modlu OkuyucuAgilent BTCYT1V
Bileşik 1 (Dehidroabietilamin, CAS 1446-61-3)EnaminEN300-7409771
Bileşik 2 (Bakuchiol, CAS 10309-37-2)ChemFacesCFN99047
Heraeus Megafuge 16RTermo Bilimci 75004271
Ibidi Gmbh-slide 96-kuyu plakasıİbidi80826
MDA-MB-231 Hücre HatlarıATCCATCC HTB-26
Fosfatla tamponlu tuzlu pH 7.4ATCCATCC 30-2200
Protein Sentezi Test Kiti (Yeşil)AbcamAb239725

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Merrick, W. C. Mechanism and regulation of eukaryotic protein synthesis. Microbiol Rev. 56, 291-315 (1992).
  2. Ng, L., Navarro, A., Law, W. -L. Editorial: evolving roles of piRNAs in solid tumors. Front Oncol. 13, 1178634(2023).
  3. Brown, J. M., Giaccia, A. J. The unique physiology of solid tumors: opportunities (and problems) for cancer therapy. Cancer Res. 58 (7), 1408-1416 (1998).
  4. Kovalski, J. R., Kuzuoglu-Ozturk, D., Ruggero, D. Protein synthesis control in cancer: selectivity and therapeutic targeting. EMBO J. 41 (8), e109823(2022).
  5. Liu, T., et al. Synthetic silvestrol analogues as potent and selective protein synthesis inhibitors. J Med Chem. 55 (20), 8859-8878 (2012).
  6. Liu, L., Li, Z., Wu, W. Harnessing natural inhibitors of protein synthesis for cancer therapy: a comprehensive review. Pharmacol Res. 209, 107449(2024).
  7. Dias, D. A., Urban, S., Roessner, U. A historical overview of natural products in drug discovery. Metabolites. 2 (2), 303-336 (2012).
  8. Broach, J. R., Thorner, J. High-throughput screening for drug discovery. Nature. 384 (6604 Suppl), 14-16 (1996).
  9. Fang, X., Zheng, Y., Duan, Y., Liu, Y., Zhong, W. Recent advances in design of fluorescence-based assays for high-throughput screening. Anal Chem. 91 (1), 482-504 (2019).
  10. McKay, C. S., Finn, M. G. Click chemistry in complex mixtures: bioorthogonal bioconjugation. Chem Biol. 21 (9), 1075-1101 (2014).
  11. Schneider-Poetsch, T., et al. Inhibition of eukaryotic translation elongation by cycloheximide and lactimidomycin. Nat Chem Biol. 6 (3), 209-217 (2010).
  12. Liu, J., Xu, Y., Stoleru, D., Salic, A. Imaging protein synthesis in cells and tissues with an alkyne analog of puromycin. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (2), 413-418 (2012).
  13. Liu, K., et al. Evaluating cell lines as models for metastatic breast cancer through integrative analysis of genomic data. Nat Commun. 10, 2138(2019).
  14. Ma, J., et al. Dehydroabietylamine exerts antitumor effects by affecting nucleotide metabolism in gastric cancer. Carcinogenesis. 45 (10), 759-772 (2024).
  15. Shinde, A., et al. A review of single-cell adhesion force kinetics and applications. Cells. 10 (3), 577(2021).
  16. Vargas-Accarino, E., Herrera-Montávez, C., Ramón y Cajal, s, Aasen, T. Spontaneous cell detachment and reattachment in cancer cell lines: an in vitro model of metastasis and malignancy. Int J Mol Sci. 22 (9), 4929(2021).
  17. Song, L., Hennink, E. J., Young, I. T., Tanke, H. J. Photobleaching kinetics of fluorescein in quantitative fluorescence microscopy. Biophys J. 68 (6), 2588-2600 (1995).
  18. Ling, T., et al. Dehydroabietylamine derivatives target triple-negative breast cancer. Eur J Med Chem. 102, 9-13 (2015).
  19. Gautam, L. N., Ling, T., Lang, W., Rivas, F. Anti-proliferative evaluation of monoterpene derivatives against leukemia. Eur J Med Chem. 113, 75-80 (2016).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Protein Synthesis InhibitorsFluorescence AssayNatural Products ScreeningCycloheximide ReferenceFluorescence MicroscopyCancer TherapeuticsProtein Synthesis PathwayCytotoxicity AssayDose ResponsePhotobleaching Prevention

Related Articles