Yöntem makalesi

Gelişim Evrelerinde Özelleştirilebilir Genişletilebilir Bir Beyin Matrisi Üretimi

DOI:

10.3791/68638

⸱

20 Şubat 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Spinal Cord and Brain Injury Research Center, Department of Physiology, College of Medicine, University of Kentucky, 2Department of Biomedical Engineering, College of Engineering, University of Kentucky, 3Department of Neurosurgery, University of Kentucky

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yenidoğan domuz yavrularına uygulanmak üzere genişletilebilir beyin matrisleri inşa etmenin yenilikçi bir yöntemi, koronal veya sagital dilimleri kesmek üzere tanımlanmıştır. Bu bütçe dostu yaklaşım, agaroz jel beyin kalıplama şablonlarıyla oyulmuş akrilik plakalar kullanır, birden fazla türe uygulanır ve beyin büyümesini karşılamak için genişlemeye olanak tanır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yeni doğan domuz yavrularını yenidoğan gelişim ve patoloji için çalışma modeli olarak kullanmaya olan artan ilgi, histolojik kesitleri doğru şekilde elde etmek için bir beyin matrisine olan ihtiyacı artırmıştır. Ancak, yenidoğan beyninin hızlı büyümesi, ticari olarak mevcut matrislerin kullanımını dar bir gelişim penceresi ile sınırlar. Bu nedenle, ayarlanabilir bir beyin matrisi oluşturma yöntemi geliştirildi. İlk olarak, ıslak buz üzerine cam bir kap kondu ve altına %4 agaroz jel tabakası serildi. Sonrasında bu tabakaya formalin sabitli bir beyin yerleştirildi ve %4 agaroz jeli ile gömüldü. Jel katılaştıktan sonra, beynin üzerindeki jel dikkatlice çıkarıldı ve beyin çıkarıldı. Boşluğu %4 agaroz jeli ve %2 Hint mürekkebi ile dolduruldu. Katılaşmadan sonra, jel bloğu çıkarıldı ve istenen kalınlığa (2 mm veya 5 mm) ve yönelime (koronal veya sagital) kesilerek beyin şablonları ölçekli kağıda basıldı. Şablonlar, 2 mm veya 5 mm kalınlığında bir dizi şeffaf akrilik plakaya kopyalanıp bir bant testeresinde buna göre kesiliyordu. Son olarak, plakalar monte edilip üç set cıvata ve somunla önceden delinmiş hizalama deliklerinden sabitlenerek özelleştirilmiş bir beyin matrisi oluşturuldu. Hem koronal hem de sagital matrislerin yapısı, 2 mm adımlı neonatal 5. gün domuz bebeği beyni ve doğum sonrası 32-38 yaş beyinleri için 5 mm adımlarla koronal matris için gösterilmiştir. Uygun akrilik plakalar eklenip çıkarılarak, matris, domuzcuk beyinlerinin farklı boyutlarına uyacak şekilde ayarlandı. Böylece, büyük hayvanların farklı boyutlarındaki beyin matrislerini özelleştirmenin basit ve maliyet etkin bir yöntemi nörolojik araştırma topluluğuna tanıtılır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Domuzcuk beyni gelişimi insanlarınkiyle yakındanbenzerdir 1,2,3,4. Bu nedenle, domuzcukların nörogelişimsel bozukluklar, yenidoğan ve pediatrik hastalıklar ile yaralanma preklinik çalışmaları için kullanılmasına artan ilgi vardır (Şekil 1A,B)5,6,7,8,9,10. Şekil 1'de de görüldüğü gibi, yeni doğumlu domuzcuk, büyük bir hayvan modeli olarak, erken doğulmuş bir insan fetüsüne daha yakın kafatası ve beyin büyüklüğüne sahiptir (Şekil 1A,B), yetişkin fare ve fare kafataları ise en az iki büyüklük daha küçüktür.

Ancak, biyomedikal araştırmalarda daha büyük memelilerin daha yaygın kullanılan fare modellerine kıyasla kullanımı zorluklar yaşamaktadır. Yenidoğan domuz yavrusu beyinleri doğumdan sonraki ilk 3 ay içinde hızla büyür. Hayatın ilk 5 haftasında, domuzcuk beyni neredeyse iki katına çıkar ve hacmi üç katına çıkar (Şekil 1C)4,11,12,13. p5'ten p38'e kadar olan dönemde beyin büyümesi ve gyrus ile sulkus gelişimi dikkat çekiciydi (Şekil 1C). P5 domuz yavrusu beyninin ağırlığı ve hacmi 29,5 g ve 18,9 mL iken, iki p32 beyninin ağırlığı sırasıyla 51,4 ve 52,6 g ve 49,6 ve 53,5 mL idi. 38 günlük yaşta beyin 53,7 g ve 52,5 mL'ye ulaştı; bu da p5'e göre %80 ağırlık artışı ve hacimde %170 artışı temsil ediyordu. Neonatal domuz beyninin bu hızlı büyümesi, farklı yaş, suş veya cinsiyetten domuz yavrularından beyinlerin tek bir matriks kullanılarak doğru histolojik kesimlenme için bir zorluk yaratmaktadır.

Domuzcuk yavrusu için ticari beyin matrislerinin maliyeti yaklaşık 1.000 ile 3.600 dolar arasında değişir ve sadece 2 haftalık veya daha küçük domuz yavruları için tasarlanmış tek bir boyut seçeneği olarak mevcuttur. Zebrafish, fareler ve kuşlar için çeşitli beyin matrisleri oluşturmak için 3D tarama ve 3D baskı tekniğinikullanan birkaç yayın olsa da bu matrisler nispeten küçük ölçektedir. Özellikle 2 hafta ve daha küçük olanlar için, yenidoğan domuzcukların beyinleri için yerleşik bir MRI görüntüleme serisi veya ayrıntılı büyüme tablosu bulunmamaktadır. Bu nedenle, 5. gün ile 38. gün arasında toplanan beyinleri kullanarak ayarlanabilir bir beyin matrisi sistemi oluşturulan birkaç beyin dilimi şablonu oluşturduk.

Bu protokol, yenidoğan domuzcuk beyni şablonlarının oluşturulması ve akrilik plaka bazlı, özelleştirilebilir beyin matrisi yapısının geliştirilmesi için yenilikçi bir yöntem tanımlar; bu yapı, beyinlerin koronal veya sagital kesitlenmesi için çeşitli boyutlarda kullanılabiliyor.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede, dört domuz yavrusu beyni, Kentucky Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından ayrı bir çalışma için onaylanan bir protokole uygun olarak, insancıl ötenazi sonrası histolojik boyama için alındı ve hazırlandı. Hayvan deneklerde yapılan tüm işlemler onaylandı ve tedaviler veya ötenazi ile ilişkili stres veya ağrıyı en aza indirmek için hayvanlara uygun bakım sağlandı.

1. Hayvanlar

  1. Genetik geçmişi %62,5 Landrace, %25 Büyük Beyaz ve %12,5 Yorkshire olan dört naif erkek yenidoğan (doğum sonrası 4. gün, p4) domuz yavrusu (vücut ağırlığı 1,5-1,8 kg) edinin.
  2. Hayvanları, bir ısı lambası ve havlu kaplı zeminin desteğiyle bir domuz ahırında özel bir odada barındırın. İlk hafta boyunca onları süt yerine getirici ile imkansız olarak besleyin ve 2-3 haftada kademeli olarak pelet mamaya geçin.
  3. Fizyolojik aktivite ve vücut ağırlığını takip edin ve izoflüoran anestezi altında haftalık MRG taramaları yapın.
  4. Pentobarbital aşırı doz ile ötanazi, heparinize tuzlu su ile transkardiyal perfüze ve %10 nötr tamponlu formalin uygulanır.
  5. Kafatasından beyindisseksiye 17, gece boyunca formalin ile sabitlen, ardından 3 gün boyunca kriyokonserasyon için %30 sakaroza PBS ile koyun.

2. Agaroz jel kalıplama

  1. Cam bir kabı yarı yüksekliğine kadar ıslak buz dolu bir kovaya batırın (Şekil 2A).
  2. Kabın astarı olarak ağır hizmet için plastik bir şerit kullanın ve alt ile yan duvarların tamamen kapalı olduğundan emin olun, her iki ucu da üst kenarın en az 5 cm üzerinde bırakın.
  3. Bir cam kabada 150 mL PBS'yi mıknatıslı karıştırıcı ile karıştıran sıcak plakada 90 °C'ye kadar ısıtın ve yavaş yavaş 6 g agaroz ekleyip çözerek %4 agaroz jeli elde edin.
  4. Cam kaba 0,5-1 cm kalınlığında bir tabaka dökün (Şekil 2B) ve katılaşana kadar bekleyin.
  5. Beyne topikal olarak ince bir mineral yağ tabakası uygulayın (Şekil 2C) ve beyni jel tabakasının üzerine yerleştirin (Şekil 2D).
  6. Agaroz çözeltisini 50 °C'ye kadar soğutun. Beyni soğutmuş agaroz jeli ile gömülüp (Şekil 2E) ve katılaşmasına izin verin (Şekil 2F), bu genellikle ıslak buzda ~10 dakika sürer.
  7. Beynin üzerindeki agaroz jelinin üst tabakasını (Şekil 2G) cerrahi bir probla dikkatlice çıkarın ve beyni katılaşmış küften çıkarın (Şekil 2H,I).
  8. Başka bir cam kabında 98 mL PBS'yi 90 °C'ye kadar mıknatıslı karıştırıcı ile karıştıran sıcak plakada ısıtın, 4 g agaroz ve 2 ml Hindistan mürekkebi ekleyin, iyi karıştırıp karıştırın. Çıkarılmış beynin bıraktığı boşluğa (Şekil 2J) 4% agaroz ve %2 Hindistan mürekkebi dökün ve 15 dakika boyunca ıslak buzda katılaşmasına izin verin (Şekil 2K).
  9. Plastik şeridin sarkıntılı kısımlarını kullanarak, plastik şeridi kaldırarak tüm agaroz bloğunu kaptan çıkarın (Şekil 2L).

3. Agarose blok dilimleme ve ölçekli kağıda şablon kopyalama

  1. Dilimleme işlemi sırasında kağıdı nemden korumak için, iki 0,76 mm (0,03") kalınlığında şeffaf akrilik plakanın arasına bir ölçekli kağıt parçası yerleştirin (Şekil 3A) ve lamine edilmiş kağıt-akrilik plakayı tezgahın kenarına yakın yerleştirin.
  2. Köşe kareleri, iki 5 mm kalınlığında akrilik plakanın ayakta kalmasını ve jel bloğunu arada sıkıca tutmasını sağlamak için uygun konumda kılepçelerle sabitleyin ( Şekil 3'te sagital). Her dikey akrilik plakanın kenarının, jel bloğunun dilimlenmesi için referans olarak kullanılmak üzere ölçek kağıdında aynı çizgiye hizalandığından emin olun. Jel bloğunu, kesmenin yapılacağı yerin tam tersi ucuna bir ağırlık ile sabitleyin (Şekil 3B).
  3. Alttaki pulcuk kağıdını rehber olarak kullanarak, jel bloğunu akrilik plakaların arasından istenen adımda (2 mm veya 5 mm) öne doğru hareket ettirin, mikrotom bıçağını iki elinizle tutun ve akrilik plakanın ön kenarının ötesinde olan kısmı kesin (Şekil 3B).
  4. Her dilimi toplayın (Şekil 3C), ayrı bir ölçekli kağıda yerleştirin (Şekil 3D), Hindistan mürekkebi boyalı alıntı kısmını nazikçe basarak konturu aktarın (Şekil 3E), jel kesiminin tamamını kalemle çizin, jel bölümünü çıkarın ve Hindistan mürekkebi baskısını kalemle çizin (Şekil 3F). Her dilimin ve kopyalanan şablonun yönelimini tutarlı tutmaya dikkat edin.
  5. 2.3 ve 2.4 adımlarını tekrarlayın, tüm jel parçaları ölçek kağıdına kopyalanıp sıralı olarak numaralandırılana kadar. Dilimleri ve izlerini tekrar kontrol edin (Şekil 3G,H'deki koronal dilimlerin ve izlerin temsilci görüntüleri).

4. Akrilik plaka oyma

  1. Büyük akrilik plakada Plexiglass kesme bıçağıyla oluklar kesin ve büyük plakaları 10 x 8,5 cm parçalara ayırın.
    NOT: Toplam parça sayısı beynin büyüklüğüne, istenen dilim kalınlığına ve dilimleme yönüne bağlıdır. Genellikle, yenidoğan domuzcuk beyinleri için koronal veya sagital matriks için 25 parça 2 mm akrilik plaka, daha büyük beyinler için ise daha kolay kullanım için 15 adet 5 mm plaka hazırlıyoruz.
  2. Akrilik plakada sol alt köşeden ölçülen x ve y koordinatlarında üç sabitleme deliği işareti (mm cinsinden): (11, 42); (45, 15); ve (88, 42).
  3. Akrilik plakaları, matkap makinesinin platformundaki köşe kareleri ve kelepçelerle sabitleyin. Bahsi geçen koordinatlarda akrilik plaka matkap ucuyla üç sabitleme deliği açın (Şekil 4A). Tüm plakaların sağ tarafına yönü göstermek için bir renk çizgisi çizin.
  4. Koruyucu filmi akrilik plakadan çıkarın ve ölçekli kağıda şablonun üstüne yerleştirin; akrilik plakanın üst kenarını, ölçekli kağıda kopyalanan şablonun üst çizgileriyle hizalasın. Beynin konturunu kalıcı bir marker kalemle akrilik plakaya çizin (Şekil 4B). Plakayı şablondaki gibi sıralı olarak etiketleyin.
  5. Bant testeresinin akrilik plakasını şablon çizgileri boyunca kesin (Şekil 4C). Alternatif olarak, istenmeyen bölgeleri kaldırmak için çok amaçlı kesme kiti ve ahşap oyma ucu olan döner bir alet kullanın.
  6. Kesim kenarını, kesici aletin bıraktığı kenarları düzeltmek için döner aletle parlatma zımparalama ucu ile parlatın (Şekil 4D).
  7. Akrilik plakalardaki kesikleri ölçek kağıdındaki şablona karşı tekrar kontrol edin (Şekil 4E). Gerekirse kesin ve cilala.
  8. Matrisi kesilmiş plakaları sıralı olarak üst üste koyarak önceden monte edin ve plakaların hizalanmasını kontrol edin (Şekil 4F).

5. Beyin matrisinin montajı ve genişletilmesi

  1. Akrilik plakaların arasına üç yıkama makinesi yerleştirin, her biri bir ankraj deliğine merkezlenmiş (Şekil 5A). Montaj süresini azaltmak için tüm akrilik plakaların aynı tarafına süper yapıştırıcı ile sabitleme deliklerinin etrafına yapıştırın (Şekil 5A).
  2. Akrilik plakaları sıralı olarak üst üste koyun, her ankraj deliğinden paslanmaz cıvatalar yerleştirerek matrisi monte edin ve somunları sıkın sabitleyin (Şekil 5A).
  3. Kesilmiş kenarların son parlatmasını uygulayın; bu kısım beyinlere temas edecek ve plakalar üzerinde pürüzsüzleşecek.
  4. Dilimleme sırasında adımları tanımlamaya yardımcı olmak için matrisin üst kısmını renk kodlaması yapın. Plakanın üst kenarlarını sırayla siyah, kırmızı ve ardından boş renklerle boyayarak bir desen oluşturun. Bu adımı tekrarlayın, tüm plakalar aynı desenle renk kodlanana kadar (Şekil 5).
  5. Geometriyi ayarlamak veya boşluk boyutunu belirli beyinlere daha iyi uyacak şekilde değiştirmek için, farklı beyin boyutlarına uyum sağlamak için seçilmiş akrilik plakaları çıkarın veya ekleyin (Şekil 5B), bu da bu matrislerin esnekliğini büyük ölçüde artırır ve malzeme ile çaba tasarrufu sağlar.

6. Beyinlerin koronal veya sagital kesilmesi

  1. Yüksek profilli kriyostat bıçağının bir ucunu en az 2 cm uzunluğunda laboratuvar bandıyla sararak kullanıcının elini koruyun. Beyni matris boşluğuna güvenli bir şekilde yerleştirin. Bıçak ucunu tutarak, bıçağı dikkatlice matriksin akrilik plakalarının arasına yerleştirin ve ardından beyinleri koronal veya sagital dilimlere ayırın, beyin diğer elle desteklenip sabitlenecek şekilde (Şekil 6A,B).
    NOT: Dikkat: 1) Formalin fiksasyonundan sonra beyin parçalarının her bir kısmı farklı dokulara sahip olduğundan, bıçak üzerinde eşit baskı uygulamak için dikkatli olunmalıdır. 2) Ayrıca, domuzcuk beyni büyüktür, bu yüzden beyni kesmek için doğrudan "aşağı itme" hareketinden ziyade kesme hareketi kullanmak daha iyidir. 3) Kesim sırasında beynin, diğer elin desteğiyle matrikse sıkıca oturmasını sağlamak kritik öneme sahiptir, böylece eğilme veya yönelim değişikliği önlenir. Beyne matrikse karşı aşırı baskı her zaman kaçınılmalıdır.
  2. Tüm dilimleri PBS dolu 6 yuvalı bir tabağa veya paslanmaz tepsiye koyun. Dilimleri dikkatlice aynı konumda dizin (Şekil 6C,D) ve gerekirse koruyun veya devam edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir domuz yavrusu, p5 yaşında pentobarbital aşırı doz nedeniyle ötenazi edildi. Diğer üç hayvan normal fizyolojik aktiviteler ve benzer vücut kilosu artışı gösterdi (7,44-8,4 kg'a ulaştı). İki domuz yavrusu, p32 ile ötenazi edilene kadar izofluran anestezisi altında haftalık MRI taraması aldı. Dördüncü domuzcuk, ötanazi yapılana kadar p38'de saf kaldı.

Domuzcuk ve insan fetüsü arasındaki baş boyutu benzerliği, kemirgenlerden en az iki mertebe daha büyük,

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, domuz yavrusu beyninin veya diğer büyük hayvan türlerinin istenen yön ve kalınlıkta dilimlenmesine yardımcı olabilecek uygun fiyatlı ve kolay oluşturulabilir beyin matrisleri oluşturma metodolojisini sunmaktadır. Önemli olarak, sınırlı beyin boyutlarıyla çalışan ticari "sabit boyutlu" matrislerin aksine, bu yaklaşım matrisin geniş bir beyin boyut aralığına uyacak şekilde kolayca ayarlanmasına veya genişletilmesine olanak tanır. Bu raporda, 30 g'lık bir domuz yavrusu beyni iç...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklamak zorunda kalacak bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) #R21-NS114771 (K.E.S.), #R56-NS117587, #R01-EB028792, #R01-HD101508, #R21-HD091118, #R41-NS122722, #R42-MH135825 (G. Y.), Amerikan Kalp Derneği (AHA) #16GRNT30820006 (G.Y.) ve #14SDG20480186 (L.C.) ile Kentucky Üniversitesi Sinirbilim Araştırma Öncelik Alanı (L.C.) tarafından desteklendi. Saf erkek yenidoğan domuzlar, Kentucky Üniversitesi Tarım Fakültesi Domuz Merkezi'nden Laboratuvar Hayvan Kaynakları Bölümü (DLAR) aracılığıyla satın alındı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1/4"-20 x 3-1/2" paslanmaz Phillips Truss Başlı Makine Vidası, (25 pc), kaba dişli, 18-8 (304) paslanmaz çelik, cıvata damlası ileBolt Dropperhttps://www.amazon.com/
Paslanmaz Phillips-Machine
-Bolt-Dropper/dp/B07D1L8
7VB/ref=sr_1_2?crid=38M
PNERXG39Q3& anahtar kelimeler
=1%2F4%22+3.5+inch+
paslanmaz +cıvatalar& qid=16427
82626& s=Endüstriyel& sprefix
=1%2F4+3.5+inch+stainless
+bolts%2Cindustrial%2C62
& sr=1-2
10 adet 8 x 10" paket PET Levha/Pleksiglas Paneller 0.03" Kalın KALPALMYhttps://www.amazon.com/dp
/B084P4YSST/?coliid=I1S59
82XD9P6CB& colid=XJ78FAX
D85BF& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
3 paket 3/16" (4.5mm) şeffaf akrilik levha 8" x 12" dökme pleksiglas (0.177") Kalın, Nominal Boyut AZMAZM Ekranlarıhttps://www.amazon.com/4-5mm
-Akrilik-Pleksiglas-Nominal-AZM
/dp/B082CGYSCK/ref=sr_1_12?
dchild=1& anahtar kelimeler=akrilik+levha
%2C+4.5mm& qid=1617572206& sr=8-12
3  Omuz Kısaltma Şim Düz   Çamaşır makinesi, 18-8 paslanmaz çelik, 1/2" cıvat boyutu, 0.501" ID, .750" OD, 0.016" kalınlığı (50 kişilik paket)Küçük Parçalarhttps://www.amazon.com/Shoulder-
Kısaltma-Yıkama-Paslanmaz Stee
l-0-251/dp/B004K1FFZA/ref=sr_1_
3?crid=1K8LO0VN4GLE& dchild=1
& anahtar kelimeler=Yıkamacılar& pd_rd_r=
0ffe510e-abe5-4eae-b975-ed945
08ac71a& pd_rd_w=HuED5& pd_r
d_wg=fixK7& pf_rd_p=b4950e17-f
2f6-494c-bba5-69a9d0aa3887& pf
_rd_r=BRVGS2378CHD1WBC2E
4P& pid=3tntl8w& qid=1617573484
& refinements=p_n_feature_twenty
_browse-bin%3A17420898011%2
Cp_n_feature_twenty-one_browse
-bin%3A19047154011& s=industria
l& sprefix=washer%2Bfor%2C
aps%2C202& sr=1-3& th=1
6 kuyu plakasıAvantor76520-650
8-32 altıgen somun, kaba dişli altıgen somun, 18-8 paslanmaz çelik altıgen somun, gümüş ton, ?100 pcs?Fullerkreghttps://www.amazon.com/Fullerkreg
-Machine-Stainless-Bright-Quantity/
dp/B078S3J765/ref=sr_1_4?crid=4
VSSI5B9MJ2D& anahtar kelimeler=1%2F4
%22-20+İnç+Paslanmaz +Çelik+
Hex+nut+kaba+iplik& qid=1
642782823& s=Endüstriyel& sprefix
=1%2F4+-20+inch+stainless+ste
el+hex+nut+coarse+thread%2Cin
dustrial%2C61& sr=1-4
90 Derece Konumlandırma Kareleri Alüminyum AlaşımıHINMAYhttps://www.amazon.com/Positioni
ng-Alüminyum-Ahşap İşi-Sazan
enter-Clepping/dp/B08294FZ7L/r
ef=sr_1_6?crid=1I97TLVRYREPQ
& dchild=1& anahtar kelimeler=köşe+squ
are& qid=1625683905& sprefix=co
rner+squ%2Caps%2C182& sr=8-6
agarozAvantor97062-244
bant testereSKILL
Doğuştan Doğru Süt Yerine Geçici (Pipestone)PipestoneSKU  8229https://pipevet.com/birthright-baby-pig-milk-replacer
kovaAvantor89233-340
Dremel 4300-5/40 Yüksek Performanslı Döner Takım TakımıDremelhttps://www.amazon.com/dp/B0
1M1SJNVU/?coliid=IMLRI62ZL
JTSJ& colid=2XZ304Y9M7PV7
& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
Plastik için matkap uçları (akrilik, pleksiglas, ABS, lexan, polikarbonat, PVC)FTMhttps://www.amazon.com/dp/B
07D1B3B51/?coliid=I26RS6UP
UJ3P1Y& colid=2XZ304Y9M7P
V7& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
Cam Kabak X 2Avantor470335-854
cam kapWheaton boyama tabaklarıWHEATON®   900303
Grafik Kağıt Defteri: 1 mm ince ve 10 mm daha kalın, açık gri ızgara çizgileri (metrik, 120 sayfa):https://www.amazon.com/
Graf-Kağıt-Defter-
çift taraflı-deliksiz
/dp/154319026X/ref=sr_1_13?
dchild=1& anahtar kelimeler=milimetre
+kağıt& qid=1617634163& sr=8-13
HACKER ALETLERI MIKROTOM BIÇAK BIÇAĞIHACKER ALETLERI
Ağır hizmet plastik şeridiAvantor89072-136
Hindistan Mürekkepspeedball SUPER BLACK
IRWIN QUICK-GRIP Klempler, Tek El, Mini Bar, 6 inç, 4 paket (1964758)IRWINhttps://www.amazon.com/IRWIN
-QUICK-GRIP-1964758-One-
Handed-Clamp/dp/B001DSY4
QO/ref=sr_1_5?crid=3NJ320
86LJCS6& dchild=1& Anahtar kelimeler
=kelepçeler+for+ahşap işi& qid
=1617634545& prefix=clamp%
2Caps%2C184& sr=8-5
Kreg KHC-Premium Yüz Klempörü Kreghttps://www.amazon.com/KREG
-KHC-PREMIUM-Kreg-Face-
Clamp/dp/B001DC9UR8/ref=sxin
_11?ascsubtag=amzn1.osa.27
eddff2-544b-4c29-9242-220b3f
760cb0. ATVPDKIKX0DER.en_
ABD& creativeASIN=B001DC9UR
8& crid=3NJ32086LJCS6& cv_ct_
cx=kelepçeler+for+ahşap işi& cv
_ct_id=amzn1.osa.27eddff2-544b
-4c29-9242-220b3f760cb0. ATVP
DKIKX0DER.en_US& cv_ct_pg=
arama & cv_ct_we=asin& cv_ct_wn
=osp-tek-kaynak-kazanır-comm&
dchild=1& anahtar kelimeler=kelepçeler+for+
ahşap işleme& linkCode=oas& pd_r
d_i=B001DC9UR8& pd_rd_r=eeaf7
178-eee3-4399-862a-479fffb6cfc3&
pd_rd_w=W3Inj& pd_rd_wg=PKPUl&
pf_rd_p=e666d5aa-04ca-46aa-86b0-
07ac28e037d4& pf_rd_r=22RKP4S4S
SS5PYDM2ZFD& qid=1617634545& s
önek=clamp%2Caps%2C184& sr=1-
2-64f3a41a-73ca-403a-923c-8152c4
5485fe& tag=thisoldhouse05-20
Laboratuvar bandiAvantor76276-016
Loctite 1363589 4 Gramlık Şişe Süper Yapıştırıcı Ultra Jel Kontrol Yapıştırıcısı, 3 PaketLoctitehttps://www.amazon.com/Loctite-
1363589-4-Gram-Control-Adhesive/
dp/B01HPT0AWQ/ref=sr_1_13?
anahtar kelimeler=süper yapıştırıcı+güç+yapıştırıcı
+for+plastik& qid=1642782991& s
önek=süper yapıştırıcı%2Caps%2C83& sr=8-13
Microtome Yüksek Profilli Tek Kullanımlık BıçaklarOptimal Bilimselhttps://www.amazon.com/Optimal
-Bilimsel-Mikrotom-Yüksek Profil
-Tek kullanımlık/dp/B08MCSN6SL/ref
=sr_1_1?dchild=1& anahtar kelimeler=hig
h+profil+kriyostat+bıçak& qid=16
17592221& sr=8-1
Mineral yağSigma-AldrichM8410-100ml
PBSAvantor97062-818
Parlatma zımpara ucu20 adet karbid burr uçları 1/8" şaft
Ön Başlatma Pellet Tıp Dışı - #50 (Pipestone)PipestoneSKU  8228https://pipevet.com/pre-starter-pellet-non-med-50-hubbard
Red Devil 1170 PLEXIGLASS Kesme ALETI KARTLIKızıl Şeytanhttps://www.amazon.com/dp
/B000BZZ1D0/?coliid=I3C0K3
AKD3TS75& colid=XJ78FAXD8
5BF& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
Sharpie Kalıcı İşaler | Keski Uç İşabercileriSharpiehttps://www.amazon.com/
Sharpie-Permanent-Markers
-Chisel-Classic/dp/B00006IFI
A/ref=sr_1_8?crid=2GD78WJ5COF
NN& anahtar kelimeler=kalıcı+marker
s+çeşitli+renkler& qid=16427831
06& prefix=permanent+markers%
2Caps%2C129& sr=8-8
Sıcak plaka karıştırmaCorning100493-718
Karıştıran MagentVWR58948-138
STYLEZONE 10 Parça Şeffaf Akrilik Levhalar 8 x 10 İnç 0.08 inç 2 mm kalınlığında Akrilik LevhaStylezonehttps://www.amazon.com/dp/
B08GJYS4TT/?coliid=I11RLE
V42BKEFB& colid=XJ78FAX
D85BF& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
cerrahi tepsiAvantor10193-194
ıslak buzlaboratuvarda üretildi
Ahşap Carvig UcuDöner Aletler İçin Ahşap Oyma Aletlerihttps://www.amazon.com/
mağazalar/sayfa/28E50A85-D8C
1-4669-8272-D5D435EA126F

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jelsing, J., et al. The postnatal development of neocortical neurons and glial cells in the Gottingen minipig and the domestic pig brain. J Exp Biol. 209 (Pt 8), 1454-1462 (2006).
  2. Conrad, M. S., Dilger, R. N., Johnson, R. W. Brain growth of the domestic pig (Sus scrofa) from 2 to 24 weeks of age: a longitudinal MRI study. Dev Neurosci. 34 (4), 291-298 (2012).
  3. Conrad, M. S., Dilger, R. N., Nickolls, A., Johnson, R. W. Magnetic resonance imaging of the neonatal piglet brain. Pediatr Res. 71 (2), 179-184 (2012).
  4. Dobbing, J. The later growth of the brain and its vulnerability. Pediatrics. 53 (1), 2-6 (1974).
  5. Sorby-Adams, A. J., Vink, R., Turner, R. J. Large animal models of stroke and traumatic brain injury as translational tools. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 315 (2), R165-R190 (2018).
  6. Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. H. The pig model in brain imaging and neurosurgery. Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).
  7. Huang, C., et al. Speckle contrast diffuse correlation tomography of cerebral blood flow in perinatal disease model of neonatal piglets. J Biophotonics. 14 (4), 2021(2021).
  8. Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch Dis Child. 48 (10), 757-767 (1973).
  9. Lossi, L., D'Angelo, L., De Girolamo, P., Merighi, A. Anatomical features for an adequate choice of experimental animal model in biomedicine: II. small laboratory rodents, rabbit, and pig. Ann Anat. 204, 11-28 (2016).
  10. Lind, N. M., et al. The use of pigs in neuroscience: modeling brain disorders. Neurosci Biobehav Rev. 31 (5), 728-751 (2007).
  11. Andersen, A. D., et al. Delayed growth, motor function and learning in preterm pigs during early postnatal life. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 310 (6), R481-R492 (2016).
  12. Desantis, S., Minervini, S., Zallocco, L., Cozzi, B., Pirone, A. Age-related changes in the primary motor cortex of newborn to adult domestic pig Sus scrofa domesticus. Animals (Basel). 11 (7), 2019(2021).
  13. Pond, W. G., et al. Perinatal ontogeny of brain growth in the domestic pig. Proc Soc Exp Biol Med. 223 (1), 102-108 (2000).
  14. Huang, C. C., Chen, Y. Y., Fang, Y. T., Chen, Y. C., Hung, C. M. Generating brain matrices for zebra finch brain sectioning using three-dimensional printing technology. J Neurosci Methods. 327, 108399(2019).
  15. Yamazaki, Y., Yuguchi, M., Honjo, B., Isokawa, K. Design and fabrication of customized brain slice matrices using CAD and 3D printing technology. PLoS One. 20 (1), e0317616(2025).
  16. Lattin, C. R., et al. A 3D-printed modular device for imaging the brain of small birds. J Neurosci Methods. 293, 183-190 (2018).
  17. Fleming, S. A., Monaikul, S., Mudd, A. T., Jacob, R., Dilger, R. N. Extraction and dissection of the domesticated pig brain. J Vis Exp. (170), e62030(2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Beyin Matrisi Haz rlamaDomuz Yavrusu Beyin Kesitlerizelle tirilebilir Beyin MatrisiAkrilik Plaka MatrisiAgaroz Beyin Kal bKoronal Beyin DilimlemeSagittal Beyin DilimlemeB y k Hayvan N robilimiGeli imsel Beyin Modeli

İlgili makaleler